专利名称：一种鸡球虫病疫苗助悬剂的使用方法及悬浮液的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种鸡球虫病疫苗助悬剂的使用方法及悬浮液的制备方法，特别是一种用于饮水免疫的鸡球虫病活卵囊疫苗的助悬剂的使用方法及用于饮水免疫的鸡球虫病疫苗悬浮液的 制备方法。该助悬剂既能快速溶解；又能减缓疫苗卵囊的下沉达8小时，并使鸡群的不停水免疫或停水免疫都能得以实现，并且两种情况下都能降低疫苗的副反应。
背景技术：
鸡球虫病是一种原生动物寄生虫病，由柔嫩艾美尔球虫、堆形艾美尔球虫、巨型艾美尔球虫、毒害艾美尔球虫、和缓艾美尔球虫、布氏艾美尔球虫、早熟艾美尔球虫的一种或一种以上引起。它们在鸡的肠道各部位寄生，引起肠道的炎症、出血和鸡的死亡，给养鸡业造成巨大的经济损失。长期以来，该病的防治以药物为主。由于药物残留影响食品安全和人类健康，加上球虫对药物很容易产生抗药性，该病的防治越来越依靠免疫手段。目前使用的鸡球虫病疫苗主要是活卵囊疫苗，例如先灵葆雅的PARAC0X和C0CCIVAC、加拿大维泰克的IMMUC0X、梅里亚的LIVAC0X。其中C0CCIVAC已有近60年的历史(R. B. Williams, Avian disease46:775—802, 2002, Historical article—Fifty yearsof Anticoccidial vaccines for poultry(1952—2002))。鸡球虫病疫苗可以以多种方式接种给鸡，如喷雾、喷料、拌料、滴口、口服凝胶、饮水等。所有上述方法都无法彻底解决免疫均匀性和副反应的问题，即每只鸡摄入的卵囊数量多少不一，产生的免疫力也高低不一，当鸡从垫料中吃到所免疫球虫疫苗的后代卵囊时，那些免疫力较低而摄入卵囊较多的鸡就容易出现疫苗免疫的副反应，出现粪便异常、血便、死亡等异常情况，影响养鸡生产和球虫疫苗的使用。饮水免疫具有混合较均匀、疫苗活力保存较好等优点。饮水免疫可分为停水免疫和不停水免疫两种方式。停水免疫是指在免疫之前给鸡断绝水源，使鸡在一段时间内喝不到水，当开始饮水免疫时，所有鸡同时开始喝水，停水免疫能使整个免疫操作时间缩短；但对鸡会产生一定程度的应激。不停水免疫是指不给鸡断绝水源，可减少停水应激，但整个免疫过程持续时间较长，时间加长能影响疫苗的活力。现代养鸡生产中，饲养和管理人员效率很高，非常繁忙，以上两种方式各有优点，都被养鸡生产所采用。以往报道的助悬剂，例如羧甲基纤维素，溶解过程很长。王江清等报道过羧甲基纤维素作为鸡球虫疫苗助悬剂的应用效果(王江清等.柔嫩艾美尔球虫早熟减毒株饮水免疫方法的研究.山东畜牧兽医，1999,04)。但羧甲基纤维素在水中溶解速度较慢，需要在水中长时间浸泡才能溶解，如在人工多次捏碎的情况下，需要十几个小时才能溶解。故该纤维素醚不是一种理想的鸡球虫病疫苗助悬剂。专利号为CN1724073的专利提到一种助悬剂，其组成成分为羧甲基纤维素、低聚糖、吹干粉，其中低聚糖、吹干粉起到了分散作用，以利于羧甲基纤维素的溶解。该专利能够提高鸡球虫疫苗助悬剂的溶解速度，是一个较好的解决方案，但快速加入水中就会形成胶块。如何提高助悬剂溶解速度，是一个急待解决的问题。在现代化养鸡业中，每个饲养员要喂养的鸡很多，劳动强度很大、工作繁忙，球虫活卵囊疫苗的助悬剂必须快速溶解才能符合高效率的现代化养鸡生产的要求。饮水免疫时，混合后的疫苗卵囊容易沉淀，这样鸡在饮水免疫时获得的疫苗卵囊就会出现较大差异，均匀性较差。纤维素醚是由纤维素制成的具有醚结构的高分子化合物。是纤维素高分子中羟基的氢被烃基取代的生成物。纤维素大分子中每个葡萄糖基环含有三个羟基，第六碳原子上的伯羟基、第二、三个碳原子上的仲羟基，羟基中的氢被烃基取代而生成纤维素醚类衍生物。有一类纤维素醚的水溶液具有最低临界溶解温度(lower critical solutiontemperature, LCST),在温度低于该最低临界溶解温度时纤维素醚溶入水,升高温度，达到和超过其最低临界溶解温度，纤维素醚从水溶液中分离、沉淀；降低温度，低于其最低临界溶解温度后，该类纤维素又可溶入水中。具备LCST性质的纤维素醚作为一种化工原料广泛用于石油工业、建筑与涂料工业等领域。在引用到球虫疫苗助悬剂这一新的领域时，首先必须解决下面的问题。I、所用悬浮剂对鸡没有毒害作用；2、所用悬浮剂对球虫卵囊没有杀伤作用；3、所用悬浮剂对球虫卵囊释放出的有感染性的子孢子没有伤害作用；4、所用悬浮剂不堵塞水线。
发明内容
本发明的目的是为克服上述现有技术的不足，提供一种鸡球虫病疫苗助悬剂的使用方法。本发明的另一目的是提供一种鸡球虫病疫苗悬浮液的制备方法。为实现上述目的，本发明采用下述技术方案一种鸡球虫病疫苗助悬剂的使用方法，将一种、两种或两种以上的具备最低临界溶解温度(lower critical solution temperature)的纤维素醚或组成的混合物与高温水混合，然后将含有纤维素醚的高温水倒入低温水中并搅动，纤维素醚或其混合物迅速溶解，作为鸡球虫病疫苗悬浮液使用。高温水的温度应高于其最低临界溶解温度，低温水及混合后的水的温度应低于其最低临界溶解温度。高温水指的是高温水的温度应高于其最低临界溶解温度 100°C低温水指的是低温水的温度应低于其最低临界溶解温度。纤维素醚在水(包括高温水和低温水的总量)中的用量(重量比)可以是
0.0001 4%，特别是0. 001 3%，更特别是0. 01 2%，尤其是0. I 0. 75%，最优选0. 25%。纤维素醚在高温水中的比例(重量比)可以是0. 25% 50%，优选5% 10%。混合后温度低于其最低临界溶解温度的任何比例皆可。高温水和低温水的比例，优选混合后温度为15 35°C，特别是2(T30°C。此过程中所用高温水、低温水的温度、体积、两种水的比例依照每种纤维素醚的最低临界溶解温度的不同而变化，而每种纤维素的取代度不同也会导致其最低临界溶解温度发生变化；但最低临界溶解温度可经简单的试验确定，将一种纤维素醚混合到100°c的水中并搅拌，水温会自然下降，当发现该纤维素醚开始溶解时，粘度增加时，此时的水的温度即为最低临界溶解温度。高温水的温度应高于该最低临界溶解温度，使纤维素醚不溶；低温水的温度和高、低温水混合后的温度应低于该最低临界溶解温度，使纤维素醚溶解；能使纤维素醚溶解的两种水的任何比例都可以。当由两种或两种以上的具备最低临界溶解温度的纤维素醚组成的混合物时，高温水的温度应高于最低临界溶解温度最高的纤维素醚的最低临界溶解温度，低温水应低于最低临界溶解温度最低的纤维素醚的最低临界溶解温度；高温水、低温水混合后的温度应低于最低临界溶解温度最低的纤维素醚的最低临界溶解温度。例如，某公司生产的甲基纤维素，其最低临界溶解温度为58°C。选用58 100°C的热水；低温水选用(T58°C ;高温水和低温水的比例，只要混合后低于58°C皆可。优选7(T95°C的热水；优选15 35°C的低温水；高温水和低温水的比例，优选混合后温度为15 35 °C，特别是20 30°C。例如，某公司生产的羟丙基甲基纤维素，其最低临界溶解温度为60°C。温度高于其 最低临界溶解温度60°C时不溶解。选用6(Tl00°C的高温水；选用(T60°C低温水；高温水和低温水的比例，只要混合后低于60°C皆可。优选7(T95°C的热水；优选15 35°C的低温水；高温水和低温水的比例，优选混合后温度为15 35°C，特别是2(T30°C。例如，某公司生产的羟丙基甲基纤维素，其最低临界溶解温度为70°C，温度高于其最低临界溶解温度70°C时不溶解。选用7(Tl00°C的热水；选用(T70°C低温水；高温水和低温水的比例，只要混合后低于70 0C皆可。优选80、5 °C的热水；优选15 35 °C的低温水；高温水和低温水的比例，优选混合后温度为15 35°C，特别是2(T30°C。例如，某公司生产的羟乙基甲基纤维素，其最低临界溶解温度为65°C，温度高于其最低临界溶解温度65°C时不溶解。选用65 100°C的高温水；选用(T65°C低温水；高温水和低温水的比例，只要混合后低于65°C皆可。优选7(T95°C的热水；优选15 35°C的低温水；高温水和低温水的比例，优选混合后温度为15 35°C，特别是2(T30°C。例如，某公司生产的高取代度羟丙基纤维素，其最低临界溶解温度为42°C，温度高于最低临界溶解温度42°C时不溶解。选用42 100°C的高温水；选用(T42°C低温水；高温水和低温水的比例，只要混合后低于42°C皆可。优选7(T95°C的热水；优选15 35°C的低温水；高温水和低温水的比例，优选混合后温度为15 35°C，特别是2(T30°C。所述纤维素醚包括但不限于甲基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丁基甲基纤维、羟丙基纤维素。所述纤维素醚优选食品级、药物级纤维素醚。本发明还提供了一种鸡球虫病疫苗悬浮液的制备方法，向将上述的鸡球虫病疫苗助悬剂制备的悬浮液中加入鸡球虫病四价活疫苗混合即得。具备最低临界溶解温度(lower critical solution temperature)的纤维素醚包括但不限于甲基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丁基甲基纤维、羟丙基纤维素等。特别是羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素。本发明尤其适用于鸡球虫病活卵囊疫苗饮水免疫的助悬剂，其为由具有最低临界溶解温度(lower critical solution temperature, LCST)的纤维素醚类的一种或它们两种或两种以上的混合物组成；该类纤维素醚及它们两种或两种以上的纤维素醚组成的混合物，在温度低于该最低临界溶解温度时纤维素醚溶入水，升高温度，达到和超过其最低临界溶解温度，纤维素醚从水溶液中分离、沉淀；降低温度，低于其最低临界溶解温度后，该类纤维素又可溶入水中。具备该性 质的纤维素醚包括但不限于甲基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丁基甲基纤维、羟丙基纤维素等。特别是羟丙基甲基纤维素、甲基纤维素。具备该性质的纤维素醚类的一种或它们两种或两种以上的混合物在全部免疫球虫疫苗的水中的用量可以是0. 000r4%,特别是0. OOf 3%，更特别是0. Of 2%，尤其是
0.I 0. 75%，最优选 0. 25%。具备该性质的纤维素醚类的一种或它们两种或两种以上的混合物可以与其它物质混合而具备其它物质相应的功能。优选能达到食品级、药物级的具备该性质的纤维素醚类。本发明的有益效果是一、本发明助悬剂能快速溶解入水。二、制备的悬浮液能维持鸡球虫活疫苗的卵囊在水中8小时不沉降，提高鸡饮入疫苗卵囊数量的均匀度。三、可以不停水免疫鸡群，减少停水应激。四、也可以停水免疫鸡群，缩短免疫时间。五、能降低疫苗的副反应。
具体实施例方式下面通过具体实例对本发明进行进一步的阐述，应该说明的是，下述说明仅是为了解释本发明，并不对其内容进行限定。一、该发明的助悬剂无毒害作用、不堵塞水线。经过反复研究，本发明人发现该发明的助悬剂对鸡、鸡球虫卵囊、鸡球虫子孢子没有毒害作用并且不堵塞水线。水线是指在养鸡生产中给鸡输送水的管道、乳头式饮水器等，它们很容易被脱落的生物膜碎片、饮水使用的治疗药物的杂质堵塞，并且不容易清理。经试验，本发明的助悬剂不会出现堵塞水线的现象。虽然鸡球虫卵囊具有较厚的卵囊壁，能够阻挡很多化学物质的杀灭作用；但是，当球虫卵囊进入鸡体内后，卵囊中的子孢子会释放出来。按照专业常识，失去卵囊壁的保护作用后，子孢子会与鸡喝入的悬浮剂直接接触，子孢子有可能受到鸡喝入的助悬剂的伤害。实施例I.含有4种鸡球虫孢子化卵囊液6毫升(共含鸡球虫孢子化卵囊6万个)，摇匀，均分成6份各I毫升。4日龄鸡60只，均分成6组各10只。取该发明提到的纤维素醚的其中5种(甲基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丁基甲基纤维、羟丙基纤维素)，分别加高温水搅拌后倒入低温水中配成0. 25%的溶液，取各溶液9毫升各与I份鸡球虫孢子化卵囊液混合，按每只鸡I毫升的量各接种给I组鸡；余下的第6组鸡不加纤维素醚溶液，用9毫升水与I份鸡球虫孢子化卵囊液混合，按每只鸡I毫升的量接种给鸡。收集6组鸡的含卵囊粪便，计算粪便中的卵囊总数。结果如表I.(毒害作用试验)。各组鸡的粪便中卵囊总数基本相同。依照上述方法，对本发明中的各纤维素醚进行试验，证明本发明中的各纤维素醚对球虫卵囊及其子孢子没有毒害作用。表I.毒害作用试验
权利要求
1.一种鸡球虫病疫苗助悬剂的使用方法，其特征是，将一种、两种或两种以上的具备最低临界溶解温度的纤维素醚或组成的混合物与高温水混合，然后将含有纤维素醚的高温水倒入低温水中并搅动，纤维素醚或其混合物迅速溶解，作为鸡球虫病疫苗悬浮液使用；所述高温水和低温水混合的比例应使高、低温水混合后的温度低于该最低临界溶解温度；所述高温水的温度应高于该最低临界溶解温度；当应用两种或两种以上具备不同最低临界溶解温度的混合物时，所述高温水和低温水混合的比例应使高、低温水混合后的温度低于该混合物中最低的最低临界溶解温度；所述高温水的温度应高于该混合物中最高的最低临界溶解温度。
2.如权利要求I所述的使用方法，其特征是，所述纤维素醚为甲基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丁基甲基纤维或羟丙基纤维素。
3.如权利要求2所述的使用方法，其特征是，所述纤维素醚为食品级或药物级纤维素醚。
4.如权利要求I所述的使用方法，其特征是，所述具备最低临界溶解温度的纤维素醚或组成的混合物的用量占高温水和低温水混合后的重量为0. OOOf 4%。
5.如权利要求I所述的使用方法，其特征是，所述具备最低临界溶解温度的纤维素醚或组成的混合物的用量占高温水和低温水混合后的重量0. Of 2%。
6.如权利要求I所述的使用方法，其特征是，所述具备最低临界溶解温度的纤维素醚或组成的混合物的用量占高温水和低温水混合后的重量为0. 25%。
7.—种鸡球虫病疫苗悬浮液的制备方法,其特征是，向将权利要求1-6任一项所述的鸡球虫病疫苗助悬剂制备的悬浮液中加入鸡球虫病四价活疫苗混合即得。
全文摘要
本发明公开了一种鸡球虫病疫苗助悬剂的使用方法及悬浮液的制备方法，使用方法是将一种、两种或两种以上的具备最低临界溶解温度的纤维素醚或组成的混合物与高温水混合，然后将含有纤维素醚的高温水倒入低温水中并搅动，纤维素醚或其混合物迅速溶解，作为鸡球虫病疫苗悬浮液使用。制备方法是向将上述的鸡球虫病疫苗助悬剂制备的悬浮液中加入鸡球虫病四价活疫苗混合即得。本发明的有益效果是一、本发明助悬剂能快速溶解入水。二、制备的悬浮液能维持鸡球虫活疫苗的卵囊在水中8小时不沉降，提高鸡饮入疫苗卵囊数量的均匀度。三、可以不停水免疫鸡群，减少停水应激。四、也可以停水免疫鸡群，缩短免疫时间。五、能降低疫苗的副反应。
文档编号A61K39/012GK102727902SQ20121023108
公开日2012年10月17日 申请日期2012年7月5日 优先权日2012年7月5日
发明者郝言芝 申请人:烟台青大生物制药有限公司