可防治流感的siRNA及其药物组合物、医药用途
【专利摘要】本发明公开了一种可防治流感的靶向ST6GAL1和ST3GAL4基因的siRNA，所述siRNA为以下至少一种：siST6GAL1_001，siST6GAL1_002，siST3GAL4_001，siST3GAL4_002。本发明还提供活性成份为所述siRNA的药物组合物；本发明还提供了所述siRNA在制备可防治流感病毒的药物组合物、药物以及预防制剂中的应用。采用本发明，可以抑制人呼吸道上皮细胞表面的人源甲型流感病毒唾液酸受体以及禽源甲型流感病毒唾液酸受体的表达，从而可以有效地减少人源及禽源甲型流感病毒的吸附与感染。且在呼吸道上皮细胞系，所述siRNA有效率达80%以上。
【专利说明】可防治流感的siRNA及其药物组合物、医药用途
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药【技术领域】，尤其涉及一种可防治流感的siRNA及其药物组合物、医药用途。
【背景技术】
[0002]流行性感冒病毒简称流感病毒，是一种造成人类及动物患流行性感冒的RNA病毒；流感病毒可依据其中的核蛋白(NP)和基质蛋白(M)分为四个属:甲型(A)、乙型(B)、丙型(C)和类托高土病毒属。甲型流感广泛存在于人类及其他动物中，其感染范围广，呈流行形式出现，危害也最严重；乙型仅存在于人类，常引起流感的局部爆发；丙型流感存在于人类和猪中，极少流行。
[0003]流感病毒主要通 过感染人类呼吸道上皮细胞而进入宿主体内，导致各种全身症状，甚至严重的并发症！呼吸道上皮细胞表面的唾液酸分子则作为流感病毒吸附的受体而与流感病毒感染密切相关。人源的流感病毒偏向于识别α 2，6唾液酸链接作为受体，而禽源的流感病毒则偏向于α 2，3唾液酸链接作为受体。
[0004]唾液酸分子链接在细胞表面的糖蛋白和糖脂的末端，在各组生物学进程(如免疫原识别、病毒感染和细胞吸附等)中起重要作用。唾液酸转移酶是一类主要的调节细胞表面的唾液酸分子含量的酶类。人类基因组编码大约20多种涉及糖蛋白和糖脂唾液酸化的唾液酸转移酶。最新的研究证实，β -半乳糖α 2，6唾液酸转移酶I (ST6GAL I)负责将α 2，6唾液酸加到糖蛋白类聚糖的N-链接和一些O-链接的GALi3 l-4GlcNAc (一种二糖)上；而β -半乳糖α 2，3唾液酸转移酶IV (ST3GAL IV)则主要负责α 2，3唾液酸加到糖蛋白类聚糖的N-链接和一些O-链接的GAL β l-4GlcNAc上。编码ST6GAL I和ST3GAL IV的基因在人类呼吸道高表达，这提示这两种酶与流感病毒主要感染人类呼吸道的机制相关，并有可能成为预防和治疗流感病毒的靶点。目前已公开的有关研究中，尚未见利用制备靶向ST6GAL1和ST3GAL4基因的siRNA用于抑制多种流感病毒亚型，尤其是减少流感病毒吸附而减少感染的报道。
[0005]小干扰RNA (siRNA)是一类长度约为21bp的双链RNA，当其被导入细胞后，会介导与其序列相对应的mRNA降解，从而起到特异性抑制靶基因表达，这种现象称作RNA干扰机制。近年来，RNA干扰技术飞速发展，被广泛应用于生命科学的各个领域，包括抗病毒疗法方面，例如，已有研究证实针对各类病毒的基因(包括HIV、脊髓灰质炎病毒、丙型肝炎病毒、西尼罗河病毒和流感病毒)设计特异靶向的siRNA可在体内外起到有效抗病毒作用。但是针对流感病毒感染所必需的、宿主本身的基因而设计的siRNA进行抗病毒的研究则较少报道。
[0006]目前可用于治疗和预防流感病毒的抗病毒药物主要有神经氨酸酶抑制剂(NAI)，如奥司他韦和扎那米韦；以及M2离子通道抑制剂金刚烷胺类，包括金刚烷胺和金刚乙胺。但以上两类化合药物有着各种副作用以及局限性，如易产生耐药性等，这也成为临床治疗及新药开发的重要问题。[0007]终上所述，研发新型的特异性更高、不易产生耐药性的抗流感药物成为业内亟待解决的问题。同时，针对流感病毒感染所必需的基因，设计特异性强的靶向型药物，并进行研究和应用也成为业内的迫切需要。
【发明内容】
[0008]为了解决上述技术问题，本发明设计靶向ST6GALI和ST3GAL4基因的s iRNA，明确其抗病毒效果及其作用机制，为开发新型的靶向性的siRNA抗流感病毒药物提供基础数据。
[0009]本发明的目的之一是提供一种双链siRNA，其可以抑制人呼吸道上皮细胞表面的人源甲型流感病毒唾液酸受体(SAa2，6GAL)的表达，从而减少人源甲型流感病毒的吸附与感染。
[0010]本发明的另一目的是提供一种双链siRNA，其可以抑制人呼吸道上皮细胞表面的禽源甲型流感病毒唾液酸受体(SAa2，3GAL)的表达，从而减少禽源甲型流感病毒的吸附与感染。
[0011]本发明的另一目的是提供了其活性成份为上述siRNA序列的药物组合物，用于减少多种流感病毒亚型的吸附而抑制感染。
[0012]本发明的另一目的是提供了所述siRNA的医药用途，用于制备可防治流感病毒的药物组合物、药物以及预防制剂。
[0013]针对上述发明目的，本发明提供以下技术方案:
本发明提供了靶向ST6GAL1和ST3GAL4基因的siRNA，所述siRNA为以下至少一种: siST6GALl_001:正义链碱基组成为SEQ ID N0.1，反义链碱基组成为SEQ ID N0.2; siST6GALl_002:正义链碱基组成为SEQ ID N0.3，反义链碱基组成为SEQ ID N0.4; siST3GAL4_001:正义链碱基组成为SEQ ID N0.5，反义链碱基组成为SEQ ID N0.6; siST3GAL4_002:正义链碱基组成为SEQ ID N0.7，反义链碱基组成为SEQ ID N0.8。
[0014]作为上述方案的改进，所述siRNA的每条链的3 ‘端修饰有悬垂碱基。
[0015]所述siRNA的链包括正义链和反义链。
[0016]作为上述方案的改进，所述悬垂碱基由dA、dT、dG、dC中任意一个或多个脱氧核糖核苷酸组成。
[0017]作为上述方案的改进，所述悬垂碱基由dA、dT、dG、dC中任意两个脱氧核糖核苷酸组成。
[0018]作为上述方案的改进，所述siRNA经过磷酸化、甲氧基化、硫代、胆固醇、Cy3、Cy5、生物素、维生素、叶酸、胆酸、PEG中的任意一个或多个的修饰。
[0019]作为上述方案的改进，所述siRNA还经过为2’ -O-甲基核糖核苷和/或2’ -氟代的修饰。
[0020]作为上述方案的改进，所述siRNA为siST6GALl_001和siST3GAL4_001两种的混合，siST6GALl_001 和 siST3GAL4_002 两种的混合，siST6GALl_002 和 siST3GAL4_001 两种的混合，或siST6GALl_002和siST3GAL4_002两种的混合。
[0021]相应地，本发明还提供了一种可防治流感的药物组合物，其活性成份为上述SiRNA0[0022]相应地，本发明还提供了上述siRNA的医药用途，用于制备可防治流感病毒的药物组合物、药物以及预防制剂。
[0023]实施本发明实施例，具有如下有益效果:
本发明提供了可防治流感的靶向ST6GALI和ST3GAL4基因的siRNA，可以抑制人呼吸道上皮细胞表面的人源甲型流感病毒唾液酸受体(SAa2，6GAL)以及禽源甲型流感病毒唾液酸受体(SAa2，3GAL)的表达，从而可以有效地减少人源以及禽源甲型流感病毒的吸附与感染。在呼吸道上皮细胞系(A549、HBE和HEp-2)，通过分析病毒滴度，所述siRNA有效率达80%以上。
[0024]本发明还提供了可防治流感的药物组合物，其活性成分为靶向ST6GAL1和ST3GAL4基因的siRNA，用于抑制多种流感病毒亚型的吸附而减少感染。
[0025]本发明还提供了靶向ST6GAL1和ST3GAL4基因的siRNA的应用，尤其在制备可防治流感病毒的药物组合物、药物以及预防制剂中的应用。本发明siRNA类抗流感药物组合物、药物和预防制剂具有特异性高、不易产生耐药性等特点。并可配合特殊的载体，可通过呼吸道吸入给药，在治疗呼吸道病毒感染性疾病具有独特的优势。
【专利附图】
【附图说明】
[0026]图1A和图1B是实时定量RT-PCR检测所述siRNA对ST6GAL1和ST3GAL4基因的抑制效率图；
图2A和图2B是western blot在蛋白水平检测所述siRNA对唾液酸转移酶ST6GAL I和ST3GAL IV表达的抑制效率图；
图3A、图3B、图3C、图3D、图3E和图3F是免疫荧光检测所述siRNA对细胞表面唾液酸受体分子的抑制作用效果 图；
图4A和图4B是流式细胞术检测所述siRNA对细胞表面唾液酸受体分子表达的抑制作用效果图；
图5是MTT试验检测所述siRNA对细胞正常生长曲线的影响示意图；
图6A、图6B、图6C、图6D、图6E和图6F是免疫荧光检测所述siRNA减少流感病毒吸附细胞表面的作用示意图；
图7 A、图7B是定量RT-PCR检测感染4小时内所述siRNA减少进入转染细胞内的流感病毒基因数量的示意图；
图8 A、图8B是所述siRNA对流感病毒多复制周期侵染呼吸道上皮的抑制作用示意
图；
图9 A、图9B是所述siRNA序列的药物组合物对多种流感病毒亚型感染的抑制作用示意图；
图10是ELISA检测所述siRNA在呼吸道上皮细胞系诱导INF-α表达的结果示意图。【具体实施方式】
[0027]为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合附图对本发明作进一步地详细描述。
[0028]本发明属于医药【技术领域】，具体地，本发明涉及一种可防治流感病毒的SiRNA及其药物组合物。本发明还涉及所述siRNA在制备药物组合物、抗流感病毒的药物、预防制剂的用途。本发明还涉及治疗流感病毒引起的疾病及与其并发的疾病、障碍或者病症的方法。
[0029]为设计出高效的靶向ST6GAL1和ST3GAL4基因的siRNA，我们对GenBank上ST6GAL1和ST3GAL4基因的序列进行分析，设计出候选siRNA并合成。然后应用实时定量RT-PCR (Reverse Transcription—Polymerase Chain Reaction,逆转录 PCR)、westernblot (蛋白质印迹)、免疫荧光和流式细胞术等方法优选出高效、高特异性的siRNA。
[0030]通过导入候选siRNA到呼吸道上皮细胞系，然后用人源及禽源流感病毒感染，实验结果确定所述siRNA通过抑制细胞表面的唾液酸受体分子的表达而减少病毒吸附与感染。在呼吸道上皮细胞系(A549、HBE和H印-2)，通过分析病毒滴度，所述siRNA有效率达80%以上。
[0031]本发明所述的siRNA可用于制备防治流感的药物制剂，所述药物制剂可以是脂质组合物，也可以是以纳米颗粒形式的组合物。所述药物制剂是由生物相容性分子和/或生物可降解分子组成。
[0032]本发明所述的siRNA可经胃肠外给药。所述的胃肠外给药是局部给药、支气管给药、气管内给药、鼻内给药、吸入给药或者滴注给药。
[0033]下面结合具体实施例来对本发明做进一步描述，本发明的优点和特点将会随着描述更为清楚。但是这些实施例仅是范例性的。并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或者替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围。
[0034]实施例一:靶向ST6GAL1和ST3GAL4基因siRNA的筛选
从GenBank数据库查找到ST6GAL1和ST3GAL4基因序列，并通过生物信息学技术确定合适的靶序列；针对找出的靶序列`设计siRNA，这些siRNA序列如下:
序列名称:siST6GALl_001
siRNA 正义链:5 ‘ CAGCCAACUUCCAACAAGAdTdT 3 ‘(SEQ ID N0.1)
siRNA 反义链:3 ‘ dTdT ⑶CGGUUGAAGGUUGUUCU 5 ‘(SEQ ID N0.2)
序列名称:siST6GALl_002
siRNA 正义链:5 ‘ GUACCAGAAUCCGGAUUAU dTdT 3 ‘(SEQ ID N0.3)
siRNA 反义链:3 ‘ dTdT CAUGGUCUUAGGCCUAAUA 5 ‘(SEQ ID N0.4)
序列名称:s i ST3GAL4_001
siRNA 正义链:5 ‘ GGUCAUCAGAUUGAACAAU dTdT 3 ‘(SEQ ID N0.5)
siRNA 反义链:3 ‘ dTdT CCAGUAGUCUAACUUGUUA 5 ‘(SEQ ID N0.6)
序列名称:siST3GAL4_002
siRNA 正义链:5 ‘ GCAGACCAUUCACUACUAU dTdT 3 ‘(SEQ ID N0.7)
siRNA 反义链:3 ‘ dTdT CGUCUGGUAAGUGAUGAUA 5 ‘(SEQ ID N0.8)
实施例二、所述siRNA对ST6GAL1和ST3GAL4基因表达的抑制效率这些合成并修饰的siRNA分子通过脂质体转染的方法，转染入具有代表性的呼吸道上皮细胞株A549、HBE和HEp_2细胞，转染方法简述为先分别用Opt1-MEM稀释siRNA及脂质体，然后将两者混在一起，室温静置20min，待脂质体包裹siRNA后加至细胞中完成转染。48小时后，采用实时定量RT-PCR检测和western blot在蛋白水平检测ST6GAL1和ST3GAL4基因的表达情况，从而评估不同siRNA的沉默效果(图1A和图1B、图2A和图2B)。[0035]结果显示:转染靶向siRNA的呼吸道上皮细胞的ST6GAL1和ST3GAL4的相对表达量明显降低，所述siRNA对靶基因的抑制效率都在80%以上。具体如下:
图1A是实时定量RT-PCR检测所述siRNA对ST6GAL1基因的抑制效率图。图1A显示了候选 siRNA (s1-ST6GALl-001 ；s1-ST6GALl-002 ； s1-ST6GALl-003 ； s1-ST6GALl_004)、转染无祀点siRNA (Non-specific siRNA)、以及正常对照组(Normal cells)分别在A549、HBE和HEp-2三种呼吸道上皮细胞系中对ST6GAL1基因的相对表达量。由图1A显示的结果可知，候选的转染siRNA的呼吸道上皮细胞的ST6GAL1相对表达量明显降低，所述siRNA对靶基因的抑制效率都在80%以上。
[0036]需要说明的是，图1A中的候选siRNA与转染无靶点siRNA在三种呼吸道上皮细胞系中对ST6GAL1基因的相对表达量具有显著性差异，* P < 0.05。
[0037]图1B是实时定量RT-PCR检测所述siRNA对ST3GAL4基因的抑制效率图。图1B显示了候选 siRNA(s1-ST3GAL4-001 ；s1-ST3GAL4-002 ；s1-ST3GAL4-003 ； s1-ST3GAL4_004)、转染无祀点siRNA (Non-specific siRNA)、以及正常对照组(Normal cells)分别在A549、HBE和HEp-2三种呼吸道上皮细胞系中ST3GAL4基因的相对表达量。由图1B显示的结果可知，候选的转染siRNA的呼吸道上皮细胞的ST3GAL4相对表达量明显降低，所述siRNA对靶基因的抑制效率都在80%以上。
[0038]需要说明的是，图1B中的候选siRNA与转染无靶点siRNA在三种呼吸道上皮细胞系中对ST3GAL4基因的相对表达量具有显著性差异，* P < 0.05。
[0039]图2A是western blot在蛋白水平检测所述siRNA对唾液酸转移酶ST6GAL I表达的抑制效率图。图2A显示了，以β -Actin为参照，候选siRNA (s1-ST6GALl_001 ；s1-ST6GALl-002)干扰48h时，唾液酸转移酶ST6GAL I的表达量明显降低。
[0040]其中，图2A的1、2、3、4实验组分别代表:1、空白对照(Blank control) ;2、转染无靶点 siRNA (Non-specific siRNA ) ;3、s1-ST6GALl_001 ;4、s1-ST6GALl_002。
[0041]图2B是western blot在蛋白水平检测所述siRNA对唾液酸转移酶ST3GAL IV表达的抑制效率图。图2B显示了，以β -Actin为参照，候选siRNA (s1-ST3GAL4_001 ；s1-ST3GAL4-002)干扰48h时，唾液酸转移酶ST3GAL IV的表达量明显降低。
[0042]其中，图2B的1、2、3、4实验组分别代表:1、空白对照(Blank control) ;2、转染无靶点 siRNA (Non-specific siRNA ) ;3、s1-ST3GAL4_001 ； 4、s1-ST3GAL4_002。
[0043]还需要说明的是，Opt1-MEM为改进的Eagle MEM培养基，含有HEPES (4_羟乙基哌嗪乙磺酸；N-(2-羟乙基)哌嗪-N’ -2-乙烷磺酸)和碳酸氢钠缓冲液，并添加了次黄嘌呤、胸腺嘧啶、丙酮酸钠、L-谷氨酰胺、微量元素和生长因子。酚红的浓度低至1.1 mg/L。
[0044]实施例三、所述siRNA对细胞表面唾液酸受体分子表达的抑制作用
将所述siRNA导入呼吸道上皮细胞，方法同实施例二，56小时后，免疫荧光和流式细胞术检测siRNA对细胞表面唾液酸受体分子的抑制作用。如图3A、图3B、图3C、图3D、图3E、图3F，和图4A、图4B所示，结果显示，siRNA对细胞表面唾液酸受体分子表达的有明显的抑制作用，抑制效率都在80%以上，具体如下:
图3A是免疫荧光检测未转染靶向siRNA和转染了靶向ST6GALl—siRNA分别对HBE细胞表面唾液酸受体分子SAa2，6GAL的抑制作用效果图。图3A中左侧的一列为未转染靶向siRNA对HBE细胞表面唾液酸受体分子SAa2，6GAL的抑制作用效果图，而右侧的一列为转染了靶向ST6GALl—siRNA细胞对HBE细胞表面唾液酸受体分子SAa2，6GAL的抑制作用效果图。在激光共聚焦显微镜下观察:未转染靶向siRNA的HBE细胞(左)表面见较多SAa2，6GAL的表达；而转染了靶向ST6GALl—siRNA的HBE细胞(右)表面的SAa2，6GAL明显减少。
[0045]由图3A显示的结果可知，转染了靶向ST6GALl—siRNA对HBE细胞表面唾液酸受体分子SAa2，6GAL表达的有明显的抑制作用，抑制效率都在80%以上。
[0046]图3A中各组附图采用如下的标记方式，a、SNA-FITC，b、DAPI，C、Merge ;d、SNA-FITC, e、DAPI，f、Merge。具体如下:
(l)a, d组采用荧光标记植物凝集素SNA-FITC标记，即采用特异性识别唾液酸受体的异硫氰酸荧光素标记的接骨木凝集素作用于各组细胞，通过流式细胞仪检测转染后各组细胞表面SAa2, 6GAL含量，以平均突光强度fluorescence intensity, MFI表示细胞表面SAa2, 6GAL 含量。
[0047]需要说明的是,生物凝集素Sambucus Nigra Lectin (SNA)能特异地和细胞表面的SAa2，6GAL结合，从而起到分子探针的作用，所以采用FITC标记的SNA检测经候选siRNA转染或未转染的呼吸道上皮细胞。
[0048](2)b、e组采用了 DAPI标记，DAPI即4’，6_ 二脒基_2_苯基吲哚(4’, 6-diamidino-2-pheny I indole),是一种能够与DNA强力结合的突光染料,可用于活细胞和固定细胞核的染色。
[0049](3)c、f组采用了 Merge标记，即c组荧光标记图片为a组荧光标记图片和b组荧光标记图片的合并置加，而f组灭光标记图片为d组灭光标记图片和e组灭光标记图片的合并叠加。
[0050]图3B是免疫荧光检测未转染靶向siRNA和转染了靶向ST3GAL4—siRNA分别对HBE细胞表面唾液酸受体分子SAa2，3GAL的抑制作用效果图。图3B中左侧的一列为未转染靶向siRNA对HBE细胞表面唾液酸受体分子SAa2，3GAL的抑制作用效果图，而右侧的一列为转染了靶向ST3GAL4—siRNA细胞对HBE细胞表面唾液酸受体分子SAa2，3GAL的抑制作用效果图。在激光共聚焦显微镜下观察:未转染靶向siRNA的HBE细胞(左)表面见较多SAa2, 3GAL的表达；而转染了靶向ST3GAL4—siRNA的HBE细胞(右)表面的SAa2，3GAL明显减少。
[0051]由图3B显示的结果可知，转染了靶向ST3GAL4—siRNA对HBE细胞表面唾液酸受体分子SAa2，3GAL表达的有明显的抑制作用，抑制效率都在80%以上。
[0052]图3B中各组附图采用如下的标记方式，a、MAA_FITC，b、DAPI，C、Merge ;d、MAA-FITC, e、DAPI，f、Merge。具体如下:
(I) a、d组采用荧光标记植物凝集素MAA-FITC标记，通过流式细胞仪检测转染后各组细胞表面SAa2, 3GAL含量，以平均突光强度fluorescence intensity, MFI表示细胞表面SAa2, 3GAL 含量。
[0053]需要说明的是,生物凝集素Maackia Amurensis Lectin (MAA)能特异地和细胞表面的SAa2，3GAL结合，从而起到分子探针的作用，所以采用FITC标记的MAA检测经候选siRNA转染或未转染的呼吸道上皮细胞。
[0054](2)b、e组采用了 DAPI标记，DAPI即4’，6_ 二脒基_2_苯基吲哚(4’, 6-diamidino-2-pheny I indole),是一种能够与DNA强力结合的突光染料,可用于活细胞和固定细胞核的染色。
[0055](3)c、f组采用了 Merge标记，即c组荧光标记图片为a组荧光标记图片和b组荧光标记图片的合并置加，而f组灭光标记图片为d组灭光标记图片和e组灭光标记图片的合并叠加。
[0056]图3C是免疫荧光检测未转染靶向siRNA和转染了靶向ST6GALl—siRNA分别对HEp-2细胞表面唾液酸受体分子SAa2，6GAL的抑制作用效果图。图3C中左侧的一列为未转染靶向siRNA对HEp-2细胞表面唾液酸受体分子SAa2，6GAL的抑制作用效果图，而右侧的一列为转染了靶向ST6GALl—siRNA细胞对HEp_2细胞表面唾液酸受体分子SAa2，6GAL的抑制作用效果图。在激光共聚焦显微镜下观察:未转染靶向siRNA的HEp-2细胞(左)表面见较多SAa2，6GAL1的表达；而转染了靶向ST6GALl—siRNA的HEp-2细胞(右)表面的SAa2, 6GAL明显减少。
[0057]由图3C显示的结果可知，转染了靶向ST6GALl—siRNA对HEp_2细胞表面唾液酸受体分子SAa2，6GAL表达的有明显的抑制作用，抑制效率都在80%以上。
[0058]图3C中各组附图采用如下的标记方式，a、SNA-FITC, b、DAPI，c、Merge ； d、SNA-FITC, e、DAPI，f、Merge。进一步，图3C中:a、d组，b、e组，c、f组的标记方式与图3A相同，在此不再赘述。
[0059]图3D是免疫荧光检测未转染靶向siRNA和转染了靶向ST3GAL4—siRNA分别对HEp-2细胞表面唾液酸受体分子SAa2，3GAL的抑制作用效果图。图3D中左侧的一列为未转染靶向siRNA对HEp-2细胞表面唾液酸受体分子SAa2，3GAL的抑制作用效果图，而右侧的一列为转染了靶向ST3GAL4—siRNA细胞对HEp-2细胞表面唾液酸受体分子SAa2，3GAL的抑制作用效果图。在激光共聚焦显微镜下观察:未转染靶向siRNA的HEp-2细胞(左)表面见较多SAa2，3GAL的表达；而转染了靶向ST3GAL4—siRNA的HEp-2细胞(右)表面的SAa2, 3GAL明显减少。
[0060]由图3D显示的结果可知，转染了靶向ST3GAL4—siRNA对HEp_2细胞表面唾液酸受体分子SAa2，3GAL表达的有明显的抑制作用，抑制效率都在80%以上。
[0061]图3D中各组附图采用如下的标记方式，a、MAA_FITC，b、DAPI，c、Merge; d、MAA-FITC, e、DAPI，f、Merge。进一步，图3D中:a、d组，b、e组，c、f组的标记方式与图3B相同，在此不再赘述。
[0062]图3E是免疫荧光检测未转染靶向siRNA和转染了靶向ST6GALl—siRNA分别对A549细胞表面唾液酸受体分子SAa2，6GAL的抑制作用效果图。图3E中左侧的一列为未转染靶向siRNA对A549细胞表面唾液酸受体分子SAa2，6GAL的抑制作用效果图，而右侧的一列为转染了靶向ST6GALl—siRNA细胞对A549细胞表面唾液酸受体分子SAa2，6GAL的抑制作用效果图。在激光共聚焦显微镜下观察:未转染靶向siRNA的A549细胞(左)表面见较多SAa2, 6GAL的表达；而转染了靶向ST6GALl—siRNA的A549细胞(右)表面的SAa2, 6GAL明显减少。
[0063]由图3E显示的结果可知，转染了靶向ST6GALl—siRNA对A549细胞表面唾液酸受体分子SAa2，6GAL表达的有明显的抑制作用，抑制效率都在80%以上。
[0064]图3E中各组附图采用如下的标记方式，a、SNA_FITC，b、DAPI，c、Merge; d、SNA-FITC, e、DAPI，f、Merge。进一步，图3E中:a、d组，b、e组，C、f组的标记方式与图3A相同，在此不再赘述。
[0065]图3F是免疫荧光检测未转染靶向siRNA和转染了靶向ST3GAL4—siRNA分别对A549细胞表面唾液酸受体分子SAa2，3GAL的抑制作用效果图。图3F中左侧的一列为未转染靶向siRNA对A549细胞表面唾液酸受体分子SAa2，3GAL的抑制作用效果图，而右侧的一列为转染了靶向ST3GAL4—siRNA细胞对A549细胞表面唾液酸受体分子SAa2，3GAL的抑制作用效果图。在激光共聚焦显微镜下观察:未转染靶向siRNA的A549细胞(左)表面见较多SAa2, 3GAL的表达；而转染了靶向ST3GAL4—siRNA的A549细胞(右)表面的SAa2, 3GAL明显减少。
[0066]由图3F显示的结果可知，转染了靶向ST3GAL4—siRNA对A549细胞表面唾液酸受体分子SAa2，3GAL表达的有明显的抑制作用，抑制效率都在80%以上。
[0067]图3F中各组附图采用如下的标记方式，a、MAA_FITC，b、DAPI，c、Merge ; d、MAA-FITC, e、DAPI，f、Merge。进一步，图3F中:a、d组，b、e组，c、f组的标记方式与图3B相同，在此不再赘述。
[0068]图4A是流式细胞术检测正常对照组和靶向siRNA处理组对细胞表面唾液酸受体分子SAa2，6GAL的抑制作用效果图。图4A显示了流式细胞术定量检测细胞表面的SAa2, 6GAL受体的表达，左侧为正常对照组，平均荧光强度(MFI=Il0.47 ±6.28)，而右侧靶向siRNA处理组的平均荧光强度明显减低(MFI=21.35±3.002)。
[0069]由图4A显示的结果可知，靶向siRNA处理组对细胞表面唾液酸受体分子SAa2, 6GAL具有明显的抑制作用，抑制效率都在80%以上。
[0070]需要说明的是，图4A采用荧光标记植物凝集素SNA-FITC标记。
`[0071]图4B是流式细胞术检测正常对照组和靶向siRNA处理组对细胞表面唾液酸受体分子SAa2，3GAL的抑制作用效果图。图4B显示了流式细胞术定量检测细胞表面的SAa2, 3GAL受体的表达，左侧为正常对照组，平均荧光强度(MFI=120.69±10.68)，而右侧靶向siRNA处理组的平均荧光强度明显减低(MFI=25.81 ±4.62)
由图4B显示的结果可知，靶向siRNA处理组对细胞表面唾液酸受体分子SAa2，3GAL具有明显的抑制作用，抑制效率都在80%以上。
[0072]需要说明的是，图4B采用荧光标记植物凝集素MAA-FITC标记。
[0073]综上所述，图3和图4的结果显示，靶向ST6GAL1和ST3GAL4基因的siRNA对细胞表面唾液酸受体分子表达的有明显的抑制作用，抑制效率都在80%以上。
[0074]实施例四、检测siRNA对细胞正常生长的影响
将所述siRNA导入呼吸道上皮细胞，方法同实施例二，应用MTT试验检测siRNA对细胞的生长曲线的影响(如图5所示)。结果显示，在siRNA的有效浓度(5nM)内对细胞的生长无明显影响。
[0075]实施例五、siRNA对流感病毒吸附细胞表面的影响
将所述siRNA导入呼吸道上皮细胞，方法同实施例二，转染72小时后加入人流感病毒HlNl和禽流感病毒H9N2，并以未转染细胞及转染无靶点siRNA作为对照。2小时后，免疫荧光检测结果显示:所述siRNA处理组细胞表面吸附的病毒颗粒明显减少(如图6所示)。
[0076]图6A是免疫荧光检测所述siRNA对新甲流HlNl流感病毒吸附A549细胞表面的作用示意图。图6A中左侧的一列为转染非靶向siRNA对新甲流HlNl流感病毒吸附A549细胞表面的作用示意图，而右侧的一列为转染靶向ST6GAL1基因的siRNA细胞对新甲流HlNl流感病毒吸附A549细胞表面的作用示意图。
[0077]在激光共聚焦显微镜下观察:转染非靶向siRNA的新甲流HlNl流感病毒吸附A549细胞(左)表面见大量的病毒颗粒吸附；而转染靶向ST6GAL1基因的siRNA的新甲流HlNl流感病毒吸附A549细胞(右)表面只见很少量的病毒颗粒吸附。
[0078]由图6A显示的结果可知，靶向ST6GAL1基因的siRNA对新甲流HlNl流感病毒吸附A549细胞表面具有明显的抑制作用。与未转染细胞及转染无靶点siRNA相比，靶向ST6GAL1基因的siRNA处理组细胞表面吸附的病毒颗粒明显减少。
[0079]图6A中各组附图采用如下的标记方式:a、Anti_HA, b、DAPI, c>Merge, d> Zoom ;e、Ant1-HA, f、DAPI, g、Merge, h、Zoom,具体如下:
(I )a、e组采用抗流感病毒血凝素蛋白抗体(Ant 1-HA )标记，做免疫荧光实验。Ant 1-HA为高纯度的小鼠单克隆抗体。
[0080](2)b、f组采用了 DAPI标记，DAPI即4’，6_ 二脒基_2_苯基吲哚(4’, 6-diamidino-2-pheny I indole) ,是一种能够与DNA强力结合的突光染料,可用于活细胞和固定细胞核的染色。
[0081](3)c、g组采用了 Merge标记，即c组荧光标记图片为a组荧光标记图片和b组荧光标记图片的合并置加，而g组灭光标记图片为e组灭光标记图片和f组灭光标记图片的合并叠加。
[0082](3) d、h组为分别在C、g组的基础上做图像电子放大(Zoom)处理。
[0083]图6B是免疫荧光检测所述siRNA对禽流感H9N2病毒吸附A549细胞表面的作用示意图。图6B中左侧的一列为转染非靶向siRNA对禽流感H9N2病毒吸附A549细胞表面的抑制作用示意图，而右侧的一列为转染靶向ST3GAL4基因的siRNA细胞对禽流感H9N2病毒吸附A549细胞表面的抑制作用示意图。
[0084]在激光共聚焦显微镜下观察:转染非靶向siRNA的禽流感H9N2病毒吸附A549细胞(左)表面见大量的病毒颗粒吸附；而转染靶向ST3GAL4基因的siRNA的禽流感H9N2病毒吸附A549细胞(右)表面只见很少量的病毒颗粒吸附。
[0085]由图6B显示的结果可知，靶向ST3GAL4基因的8丨1?應对禽流感!19吧病毒吸附A549细胞表面具有明显的抑制作用。与未转染细胞及转染无靶点siRNA相比，靶向ST3GAL4基因的siRNA处理组细胞表面吸附的病毒颗粒明显减少。
[0086]图6B中各组附图采用如下的标记方式:a、Anti_HA, b、DAPI, c>Merge, d> Zoom ;e、Ant1-HA, f、DAPI, g、Merge, h、Zoom,其标记方式与图6A相同,在此不再赘述。
[0087]图6C是免疫荧光检测所述siRNA对新甲流HlNl流感病毒吸附HBE细胞表面的作用示意图。图6C中左侧的一列为转染非靶向siRNA对新甲流HlNl流感病毒吸附HBE细胞表面的抑制作用示意图，而右侧的一列为转染靶向ST6GAL1基因的siRNA细胞对新甲流HlNl流感病毒吸附HBE细胞表面的抑制作用示意图。
[0088]在激光共聚焦显微镜下观察:转染非靶向siRNA的新甲流HlNl流感病毒吸附HBE细胞(左)表面见大量的病毒颗粒吸附；而转染靶向ST6GAL1基因的siRNA的新甲流HlNl流感病毒吸附HBE细胞(右)表面只见很少量的病毒颗粒吸附。[0089]由图6C显示的结果可知，靶向ST6GAL1基因的siRNA对新甲流HlNl流感病毒吸附HBE细胞表面具有明显的抑制作用。与未转染细胞及转染无靶点siRNA相比，靶向ST6GAL1基因的siRNA处理组细胞表面吸附的病毒颗粒明显减少。
[0090]图6C中各组附图采用如下的标记方式:a、Ant1-HA, b、DAPI, C、Merge, ;d、Ant1-HA, e、DAPI, f、Merge,其标记方式同图6A所述,在此不再赘述。
[0091]图6D是免疫荧光检测所述siRNA对禽流感H9N2病毒吸附HBE细胞表面的作用示意图。图6D中左侧的一列为转染非靶向siRNA对禽流感H9N2病毒吸附HBE细胞表面的抑制作用示意图，而右侧的一列为转染靶向ST3GAL4基因的siRNA细胞对禽流感H9N2病毒吸附HBE细胞表面的抑制作用示意图。
[0092]在激光共聚焦显微镜下观察:转染非靶向siRNA的禽流感H9N2病毒吸附HBE细胞(左)表面见大量的病毒颗粒吸附；而转染靶向ST3GAL4基因的siRNA的禽流感H9N2病毒吸附HBE细胞(右)表面只见很少量的病毒颗粒吸附。
[0093]由图6D显示的结果可知，靶向ST3GAL4基因的siRNA对禽流感H9N2病毒吸附HBE细胞表面具有明显的抑制作用。与未转染细胞及转染无靶点siRNA相比，靶向ST3GAL4基因的siRNA处理组细胞表面吸附的病毒颗粒明显减少。
[0094]图6D中各组附图采用如下的标记方式:a、Ant1-HA, b、DAPI, c、Merge, ;d、Ant1-HA, e、DAPI, f、Merge,其标记方式同图6A所述,在此不再赘述。
[0095]图6E是免疫荧光检测所述siRNA对新甲流HlNl流感病毒吸附HEp_2细胞表面的作用示意图。图6E中左侧的一列为转染非靶向siRNA对新甲流HlNl流感病毒吸附HEp_2细胞表面的抑制作用示意图，而右侧的一列为转染靶向ST6GAL1基因的siRNA细胞对新甲流HlNl流感病毒吸附HEp-2细胞表面的抑制作用示意图。
`[0096]在激光共聚焦显微镜下观察:转染非靶向siRNA的新甲流HlNl流感病毒吸附HEp-2细胞(左)表面见大量的病毒颗粒吸附；而转染靶向ST6GAL1基因的siRNA的新甲流HlNl流感病毒吸附HEp-2细胞(右)表面只见很少量的病毒颗粒吸附。
[0097]由图6E显示的结果可知，靶向ST6GAL1基因的siRNA对新甲流HlNl流感病毒吸附HEp-2细胞表面具有明显的抑制作用。与未转染细胞及转染无靶点siRNA相比，靶向ST6GAL1基因的siRNA处理组细胞表面吸附的病毒颗粒明显减少。
[0098]图6E中各组附图采用如下的标记方式:a、Ant1-HA, b、DAPI, c、Merge, ;d、Ant1-HA, e、DAPI, f、Merge,其标记方式同图6A所述,在此不再赘述。
[0099]图6F是免疫荧光检测所述siRNA对禽流感H9N2病毒吸附HEp_2细胞表面的作用示意图。图6F中左侧的一列为转染非靶向siRNA对禽流感H9N2病毒吸附HEp_2细胞表面的抑制作用示意图，而右侧的一列为转染靶向ST3GAL4基因的siRNA细胞对禽流感H9N2病毒吸附HEp-2细胞表面的抑制作用示意图。
[0100]在激光共聚焦显微镜下观察:转染非靶向siRNA的禽流感H9N2病毒吸附HEp_2细胞(左)表面见大量的病毒颗粒吸附；而转染靶向ST3GAL4基因的siRNA的禽流感H9N2病毒吸附HEp-2细胞(右)表面只见很少量的病毒颗粒吸附。
[0101]由图6F显示的结果可知，靶向ST3GAL4基因的siRNA对禽流感H9N2病毒吸附HEp-2细胞表面具有明显的抑制作用。与未转染细胞及转染无靶点siRNA相比，靶向ST3GAL4基因的siRNA处理组细胞表面吸附的病毒颗粒明显减少。[0102]图6F中各组附图采用如下的标记方式:a、Ant1-HA, b、DAPI, c、Merge, ;d、Ant1-HA, e、DAPI, f、Merge,其标记方式同图6A所述,在此不再赘述。
[0103]综上所述，靶向ST6GAL1和ST3GAL4基因的siRNA处理组对呼吸道上皮细胞系(A549、HBE和HEp-2细胞)的表面具有明显的抑制作用，所述细胞表面吸附的病毒颗粒明显减少。
[0104]实施例六、感染4小时内所述siRNA对流感病毒进入转染细胞内的影响 将所述siRNA导入呼吸道上皮细胞，方法同实施例二，转染72小时后加入人流感病毒
HlNl和禽流感病毒H9N2，并以未转染细胞及转染无靶点siRNA作为对照。接种病毒4小时内，定量RT-PCR检测结果显示:所述siRNA处理组细胞内的病毒基因数量明显减少(如图7A、图7B所示)。
[0105]图7A是定量RT-PCR检测感染4小时内所述siRNA进入转染细胞内的人流感病毒HlNl基因数量的示意图。图7A显示了与未转染细胞及转染无祀点siRNA相比，转染s1-ST6GALl-001和s1-ST6GALl_002的siRNA处理组的A549细胞内的病毒基因数量明显减少，其人流感病毒HlNl基因数量大致减少了 70~80%;转染s1-ST6GALl-001和s1-ST6GALl-002的siRNA处理组的HBE细胞内的病毒基因数量明显减少，其人流感病毒HlNl 基因数量大致减少了 70~80% ;转染 s1-ST6GALl-001 和 s1-ST6GALl_002 的 siRNA 处理组的HEp-2细胞内的病毒基因数量明显减少，其人流感病毒HlNl基因数量大致减少了70~80%。
[0106]由图7A显示的结果可知，靶向ST6GAL1基因的siRNA能明显减少新甲流HlNl病毒进入呼吸道上皮细胞。
[0107]需要说明的是，图7A中的转染s1-ST6GALl-001、s1-ST6GALl-002的siRNA处理组与转染无靶点siRNA处理组细胞内的HlNl基因数量具有显著性差异，* P < 0.05。
[0108]图7B是定量RT-PCR检测感染4小时内所述siRNA进入转染细胞内的禽流感病毒H9N2基因数量的示意图。由图7B可知，与未转染细胞及转染无靶点siRNA相比，转染s1-ST3GAL4-001和s1- ST3GAL4-002的siRNA处理组的A549细胞内的病毒基因数量明显减少，其禽流感病毒H9N2基因数量大致减少了 70-80%;转染s1-ST3GAL4-001和si_ST3GAL4-002的siRNA处理组的HBE细胞内的病毒基因数量明显减少，其禽流感病毒H9N2基因数量大致减少了 70~80% ;转染s1-ST3GAL4-001和s1- ST3GAL4-002的siRNA处理组的HEp-2细胞内的病毒基因数量明显减少，其禽流感病毒H9N2基因数量大致减少了 70~80%。
[0109]由图7B显示的结果可知，靶向ST3GAL4基因的siRNA能明显减少禽流感H9N2病毒进入呼吸道上皮细胞。
[0110]需要说明的是，图7B 中的转染 S1-ST3GAL4-001、s1- ST3GAL4-002 的 siRNA 处理组与转染无靶点siRNA处理组细胞内的H9N2基因数量具有显著性差异，* P < 0.05。
[0111]综上所述，靶向ST6GAL1和ST3GAL4基因的siRNA处理组细胞内的HlNl和H9N2病毒基因数量明显减少，靶向ST6GAL1和ST3GAL4基因的siRNA能明显减少感染初期HlNl和H9N2病毒进入呼吸道上皮细胞。
[0112]实施例七、所述siRNA对流感病毒多复制周期侵染呼吸道上皮的抑制作用 将所述siRNA导入呼吸道上皮细胞，方法同实施例二，转染72小时后加入人流感病毒
HlNl或禽流感病毒H9N2，并以未转染细胞及转染无靶点siRNA作为对照。分别于感染后不同时间点，收集细胞培养上清作TCID50 (Tissue culture infective dose)试验。结果显示，所述siRNA干扰目的基因后可有效抑制病毒对呼吸道上皮细胞的侵染(如图8 A、图SB所示)。
[0113]图8A是所述siRNA对人流感病毒HlNl多复制周期侵染呼吸道上皮的抑制作用示意图。图8A显示了转染s1-ST6GALl的siRNA处理组细胞在感染HlNl后不同时间点所测量的HlNl病毒滴度(Log TCID5tl),由图可知，在感染HlNl的36小时后，转染si_ST6GALl的siRNA处理组细胞的HlNl病毒滴度(Log TCID5tl)明显较未转染细胞及转染无靶点siRNA处理组低。
[0114]由图8A显示的结果可知，靶向ST6GAL1基因的siRNA对新甲流HlNl病毒有长时间抑制作用。
[0115]需要说明的是，图8A中的转染si_ST6GALl的siRNA处理组与转染无靶点siRNA处理组细胞的HlNl病毒滴度具有显著性差异，* P < 0.05。
[0116]图8B是所述siRNA对禽流感H9N2多复制周期侵染呼吸道上皮的抑制作用示意图。图8B显示了转染s1-ST3GAL4的siRNA处理组细胞在感染H9N2后不同时间点所测量的H9N2病毒滴度(Log TCID5tl),由图可知，在感染H9N2的36小时后，转染s1- ST3GAL4的siRNA处理组细胞的H9N2病毒滴度(Log TCID50)明显较未转染细胞及转染无靶点siRNA处理组低。
[0117]由图8B显示的结果可知，靶向ST3GAL4基因的siRNA对禽流感H9N2病毒有长效抑制作用。
[0118]需要说明的是，图8B中的转染si_ST3GAL4的siRNA处理组与转染无靶点siRNA处理组细胞的H9N2病毒滴度具有显著性差异，* P < 0.05。
`[0119]综上所述，靶向ST6GAL1和ST3GAL4基因的处理组可长时间、有效地抑制HlNl和H9N2病毒对呼吸道上皮细胞的侵染。
[0120]实施例八、所述siRNA序列的药物组合物抑制多种流感病毒亚型的效果
将特异性的 siRNA 联合用药(siST6GALl-001+siST3GAL4-001、siST6GALl-001+siST3GAL4-002、siST6GALl-002+siST3GAL4-001、siST6GALl-002+siST3GAL4-002)以5nM浓度转呼吸道上皮细胞，转染方法同实施例二，检测方法同实施例五、六。结果显示，联合给药组siRNA对人源和禽源流感病毒均达到明显抑制(如图9A和图9B所示)。
[0121]图9A是所述siRNA序列的药物组合物对人流感病毒HlNl亚型感染的抑制作用示意图。图9A显示了:与未转染细胞及转染无祀点siRNA相比，
(1)s1-ST6GALl-001+ s1-ST3GAL4_001 药物组合物、s1-ST6GALl_001 +s1- ST3GAL4-002 药物组合物、s1-ST6GALl-002+ s1-ST3GAL4-001 药物组合物、s1-ST6GALl-002+ s1-ST3GAL4_002药物组合物处理组的A549细胞内的人流感病毒HlNl病毒滴度(Log TCID50)明显降低；
(2)s1-ST6GALl-001+ s1-ST3GAL4_001 药物组合物、s1-ST6GALl_001 +s1- ST3GAL4-002 药物组合物、s1-ST6GALl-002+ s1-ST3GAL4-001 药物组合物、s1-ST6GALl-002+ s1- ST3GAL4-002药物组合物处理组的HBE细胞内的人流感病毒HlNl病毒滴度(Log TCID50)明显降低；(3) s1-ST6GALl-001+ s1-ST3GAL4_001 药物组合物、s1-ST6GALl_001 +s1- ST3GAL4-002 药物组合物、s1-ST6GALl-002+ s1-ST3GAL4-001 药物组合物、s1-ST6GALl-002+ s1- ST3GAL4-002药物组合物处理组的HEp-2细胞内的人流感病毒HlNl病毒滴度(Log TCID50)明显降低；
由图9A显示的结果可知，靶向ST6GAL1和ST3GAL4的siRNA组合对新甲流HlNl病毒亚型感染具有明显抑制作用。
[0122]需要说明的是，图9A中的siRNA序列的药物组合物处理组与转染无靶点siRNA处理组细胞的HlNl病毒滴度具有显著性差异，* P < 0.05。
[0123]图9B是所述siRNA序列的药物组合物对禽流感H9N2亚型感染的抑制作用示意图。图9B显示了:与未转染细胞及转染无靶点siRNA相比，
(1)s1-ST6GALl-001+s1-ST3GAL4_001 药物组合物、s1-ST6GALl_001+s1- ST3GAL4-002 药物组合物、s1-ST6GALl-002+ s1-ST3GAL4-001 药物组合物、s1-ST6GALl-002+ s1-ST3GAL4_002药物组合物处理组的A549细胞内的禽流感H9N2病毒滴度(Log TCID50)明显降低；
(2)s1-ST6GALl-001+ s1-ST3GAL4_001 药物组合物、s1-ST6GALl_001 +s1- ST3GAL4-002 药物组合物、s1-ST6GALl-002+ s1-ST3GAL4-001 药物组合物、s1-ST6GALl-002+ s1-ST3GAL4_002药物组合物处理组的HBE细胞内的禽流感H9N2病毒滴度(Log TCID50)明显降低；
(3)s1-ST6GALl-001+ s1-ST3GAL4_001 药物组合物、s1-ST6GALl_001 +s1- ST3GAL4-002 药物组合物、s1-ST6GALl-002+ s1-ST3GAL4-001 药物组合物、s1-ST6GALl-002+ s1- ST3GAL4-002药物组合物处理组的HEp-2细胞内的禽流感H9N2病毒滴度(Log TCID50)明显降低；
由图9B显示的结果可知，靶向ST6GAL1和ST3GAL4的siRNA组合物对禽流感H9N2病毒亚型感染具有明显的抑制作用。
[0124]需要说明的是，图9B中的siRNA序列的药物组合物处理组与转染无靶点siRNA处理组细胞的H9N2病毒滴度具有显著性差异，* P < 0.05。
[0125]综上所述，靶向ST6GAL1和ST3GAL4基因的的siRNA组合对HlNl和H9N2病毒亚型感染均达到明显抑制。
[0126]实施例九、所述SiRNA序列对导入细胞产生干扰素-α的影响
考虑到部分siRNA会引起细胞产生干扰素-α (INF-α )而起到非特异的抗病毒作用，因此应用ELISA法(enzyme-linked immunosorbent assay,酶联免疫吸附测定法)检测,转染方法同实施例二，转入48小时后，收集细胞上清做检测(如图10所示)。结果显示，所述siRNA均未引起非特异性的INF-α的产生。
[0127]以上所述是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本【技术领域】的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也视为本发明的保护范围。
【权利要求】
1.一种可防治流感的siRNA，其特征在于，所述SiRNA为以下至少一种: siST6GALl_001:正义链碱基组成为SEQ ID N0.1，反义链碱基组成为SEQ ID N0.2; siST6GALl_002:正义链碱基组成为SEQ ID N0.3，反义链碱基组成为SEQ ID N0.4; siST3GAL4_001:正义链碱基组成为SEQ ID N0.5，反义链碱基组成为SEQ ID N0.6; siST3GAL4_002:正 义链碱基组成为SEQ ID N0.7，反义链碱基组成为SEQ ID N0.8。
2.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于，所述siRNA的每条链的3‘端修饰有悬垂碱基。
3.根据权利要求2所述的siRNA，其特征在于，所述悬垂碱基由dA、dT、dG、dC中一个或多个脱氧核糖核苷酸组成。
4.根据权利要求2所述的siRNA,其特征在于,所述悬垂碱基由dA、dT、dG、dC中任意两个脱氧核糖核苷酸组成。
5.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于，所述siRNA经过磷酸化、甲氧基化、硫代、胆固醇、Cy3、Cy5、生物素、维生素、叶酸、胆酸、PEG中的一个或多个的修饰。
6.根据权利要求1所述的siRNA，其特征在于，所述siRNA还经过为2’_0_甲基核糖核苷和/或2’ -氟代的修饰。
7.根据权利要求1-6任一项所述的siRNA，其特征在于，所述siRNA为siST6GALl_001和 siST3GAL4_001 两种的混合，siST6GALl_001 和 siST3GAL4_002 两种的混合，siST6GALl_002 和 siST3GAL4_001 两种的混合，或 siST6GALl_002 和 siST3GAL4_002 两种的混合。
8.一种可防治流感的药物组合物，其特征在于，其活性成份为权利要求1-7任一项所述的siRNA。
9.权利要求f7任一项所述的siRNA的医药用途，其特征在于，用于制备可防治流感病毒的药物组合物、药物以及预防制剂。
【文档编号】A61P31/16GK103667285SQ201210336876
【公开日】2014年3月26日 申请日期:2012年9月12日 优先权日:2012年9月12日
【发明者】钟南山, 吴东, 杨子峰, 周荣, 关文达, 王玉涛, 李海涛, 秦笙, 李润峰, 招惠珊, 伍时冠 申请人:广州呼吸疾病研究所, 吴东