专利名称：一种提高猪瘟活疫苗产品效价的生产工艺的制作方法
技术领域：
本发明涉及兽用医药生物领域，特别涉及一种提高猪瘟活疫苗产品效价的生产工艺。
背景技术：
猪瘟是由猪瘟病毒引起的一种高度接触性、致死性的猪传染病，在世界上很多国家和地区均有发生，是养猪业的一种毁灭性传染病，给畜牧业生产带来了严重的经济损失。世界动物卫生组织将猪瘟列为法定通报性疫病，我国将其划为一类动物传染病。20世纪50年代中国首创了举世闻名的猪瘟兔化弱毒疫苗(C株)，该疫苗毒株系猪瘟石门系强毒通过兔子体内传代400多代而筛选出来。C株是一株非常安全的弱毒疫苗，对各种年龄和品种的猪都没有副作用，并且有良好的免疫效力，它能同时诱导体液免疫和细胞免疫应答，对不同 基因型的猪瘟病毒株均能提供有效的免疫保护。免疫母猪通过母乳可对仔猪提供被动免疫保护，但过高水平的母源抗体会影响仔猪对C株疫苗的主动免疫应答。随后创制了不同的疫苗制造工艺，如猪瘟家兔脾淋组织疫苗、乳兔组织苗、牛体反应组织苗和细胞培养苗等。由于家兔脾淋组织疫苗保持了 C株的安全性、免疫原性和遗传稳定性的优点备受广大养猪户的青睐。但由于其成本高、产量低，受到外界影响因素多。所以在上个世纪主要用于其它猪瘟疫苗生产工艺的种毒制备，对脾淋组织疫苗的产业化生产工艺研究相对比较少。目前的生产工艺还是停留在19世纪60代时的生产工艺。这种生产工艺主要存在以下两方面的问题1)半成品保存的时间短，在_15°C时，保存期不超过15天并且病毒效价的损耗大，特别是夏季大兔存栏量少，长途运输热应激大，影响产品品质，生产困难；2)目前的产品效价只能达到150个兔体感染量。临床使用往往加大头份，造成副反应大。
发明内容
本发明的目的在于通过接种时采用猪瘟病毒专用保护剂来稀释种毒，种毒进入兔体能够快速在靶细胞定植和扩繁，提高毒价；通过用专用的脾淋组织保护剂来降低猪瘟病毒的损耗，延长半成品的保存期，从而提闻广品的效价和品质，提供一种提闻猪痕活疫苗广品效价的生产工艺。为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案一种提高猪瘟活疫苗产品效价的生产工艺，其包括以下步骤I)选兔选用体重I. 5-3. Okg的健康家兔，接种前测温观察3天以上，需体温正常；2)生产毒种繁殖a.接种将猪瘟兔化弱毒冻干毒种用猪瘟病毒专用保护剂制成20-50倍稀释的乳齐U，每兔耳静脉注射0. 5-2mL ；b.测温兔接种24h后，每隔6_8h测体温一次；c.生产毒种收获选择定型热反应兔，体温下降开始24h内剖杀，以无菌操作采取脾脏，_15°C冷冻保存脾脏作为生产毒种；d.生产毒种鉴定按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行鉴定；3)猪瘟活疫苗的制备a.接种将生产毒种用猪瘟病毒专用保护剂制成20-50倍稀释的乳剂，每兔耳静脉注射ImL ；b.测温操作同步骤2)中的b ;c.半成品收获选择定型热或轻型热反应兔，体温下降开始24h内剖杀，以无菌操作采取脾脏和淋巴，即得半成品；d.半成品保存在半成品中按每千克加入200_300mL脾淋组织专用保护剂后，于-15°C以下冷冻保存；保存时间不超过60天； 4)配苗、分装及冻干在无菌操作下，将半成品称重、剪碎后，加入5%蔗糖牛奶保护剂，于同一容器内混合研磨，过滤除去残渣，加入稳定剂和抗生素，充分搅匀，置2-8°C处理2-3h后，定量分装；每头份含脾脏和淋巴组织毒不少于0. Olg，分装后迅速进行冷冻真空干燥后即得成品。5)成品检测按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行检测。进一步，所述的猪瘟病毒专用保护剂为甘氨酸2. 5-4%，精氨酸0. 5-1. 25%，谷氨酸I. 25-2. 5%，其余为水。进一步，所述的脾淋组织专用保护剂为鹿糖5-10%，蛋白胨5-6%，硫脲4%，明胶0. 5-0. 8%，谷氨酸2. 5-5%，其余为水。本发明采用以上技术方案，通过接种时采用猪瘟病毒专用保护剂来稀释种毒，种毒进入兔体能够快速在靶细胞定植和扩繁，提高毒价；通过用专用的脾淋组织保护剂来降低猪瘟病毒的损耗，延长半成品的保存期，从而提高产品的效价和品质，使半成品的保存期从原来的15天，延长到了 60天，成品的效价从原来的150个兔体感染量提高到900个兔体
感染量。
具体实施例方式本发明的技术方案为一种提高猪瘟活疫苗产品效价的生产工艺，其包括以下步骤I)选兔选用体重I. 5-3. Okg的健康家兔，接种前测温观察3天以上，需体温正常；2)生产毒种繁殖a.接种将猪瘟兔化弱毒冻干毒种用猪瘟病毒专用保护剂制成20-50倍稀释的乳齐U，每兔耳静脉注射0. 5-2mL ；b.测温兔接种24h后，每隔6_8h测体温一次；c.生产毒种收获选择定型热反应兔，体温下降开始24h内剖杀，以无菌操作采取脾脏，_15°C冷冻保存脾脏作为生产毒种；d.生产毒种鉴定按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行鉴定；3)猪瘟活疫苗的制备a.接种将生产毒种用猪瘟病毒专用保护剂制成20-50倍稀释的乳剂，每兔耳静脉注射ImL ；b.测温操作同步骤2)中的b ;c.半成品收获选择定型热或轻型热反应兔，体温下降开始24h内剖杀，以无菌操作采取脾脏和淋巴，即得半成品；d.半成品保存在半成品中按每千克加入200_300mL脾淋组织专用保护剂后，于-15°C以下冷冻保存；保存时间不超过60天； 4)配苗、分装及冻干在无菌操作下，将半成品称重、剪碎后，加入5%蔗糖牛奶保护剂，于同一容器内混合研磨，过滤除去残渣，加入稳定剂和抗生素，充分搅匀，置2-8°C处理2-3h后，定量分装；每头份含脾脏和淋巴组织毒不少于0. Olg，分装后迅速进行冷冻真空干燥后即得成品。5)成品检测按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行检测。进一步，所述的猪瘟病毒专用保护剂为甘氨酸2. 5-4%，精氨酸0. 5-1. 25%，谷氨酸I. 25-2. 5%，其余为水。进一步，所述的脾淋组织专用保护剂为鹿糖5-10%，蛋白胨5-6%，硫脲4%，明胶
0.5-0. 8%，谷氨酸2. 5-5%，其余为水。下面将结合具体实施例对本发明进一步说明实施例I一种提高猪瘟活疫苗产品效价的生产工艺，其包括以下步骤I)选兔选用体重I. 5-3. Okg的健康家兔，接种前测温观察3天以上，需体温正常；2)生产毒种繁殖a.接种将猪瘟兔化弱毒冻干毒种用猪瘟病毒专用保护剂制成20倍稀释的乳剂，每兔耳静脉注射0. 5mL ；b.测温兔接种24h后，每隔6h测体温一次；c.生产毒种收获选择定型热反应兔，体温下降开始24h内剖杀，以无菌操作采取脾脏，_15°C冷冻保存脾脏作为生产毒种；d.生产毒种鉴定按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行鉴定；3)猪瘟活疫苗的制备a.接种将生产毒种用猪瘟病毒专用保护剂制成20倍稀释的乳剂，每兔耳静脉注射 ImL ；b.测温操作同步骤2)中的b ;c.半成品收获选择定型热或轻型热反应兔，体温下降开始24h内剖杀，以无菌操作采取脾脏和淋巴，即得半成品；表I为将半成品稀释一定的倍数后，检测其猪瘟兔化弱毒病毒含量，采用同样的方法，不同之处在于猪瘟兔化弱毒冻干毒种和生产种毒用生理盐水稀释，比较用两种溶剂稀释种毒对半成品效价的影响。表I猪瘟病毒专用保护剂组与生理盐水组半成品效检结果
权利要求
1.一种提高猪瘟活疫苗产品效价的生产工艺，其特征在于其包括以下步骤 1)选兔选用体重I.5-3. Okg的健康家兔，接种前测温观察3天以上，需体温正常； 2)生产毒种繁殖 a.接种将猪瘟兔化弱毒冻干毒种用猪瘟病毒专用保护剂制成20-50倍稀释的乳剂，每兔耳静脉注射0. 5-2mL ； b.测温兔接种24h后，每隔6-8h测体温一次； c.生产毒种收获选择定型热反应兔，体温下降开始24h内剖杀，以无菌操作采取脾脏，_15°C冷冻保存脾脏作为生产毒种； d.生产毒种鉴定按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行鉴定； 3)猪瘟活疫苗的制备 a.接种将生产毒种用猪瘟病毒专用保护剂制成20-50倍稀释的乳剂，每兔耳静脉注射ImL ；b.测温操作同步骤2)中的b ; c.半成品收获选择定型热或轻型热反应的兔子，体温下降开始24h内剖杀，以无菌操作采取脾脏和淋巴，即得半成品； d.半成品保存在半成品中按每千克加入200-300mL脾淋组织专用保护剂后，于-15°C以下冷冻保存；保存时间不超过60天； 4)配苗、分装及冻干在无菌操作下，将半成品称重、剪碎后，加入5%蔗糖牛奶保护齐U，于同一容器内混合研磨，过滤除去残渣，加入稳定剂和抗生素，充分搅匀，置2-8°C处理2-3h后，定量分装；每头份含脾脏和淋巴组织毒不少于0. Olg,分装后迅速进行冷冻真空干燥后即得成品。
5)成品检测按照《中华人民共和国兽用生物制品规程》的要求进行检测。
2.根据权利要求I所述的一种提高猪瘟活疫苗产品效价的生产工艺，其特征在于所述的猪瘟病毒专用保护剂为甘氨酸2. 5-4%，精氨酸0. 5-1. 25%，谷氨酸I. 25-2. 5%，其余为水。
3.根据权利要求I所述的一种提高猪瘟活疫苗产品效价的生产工艺，其特征在于所述的脾淋组织专用保护剂为蔗糖5-10%，蛋白胨5-6%，硫脲4%，明胶0. 5-0. 8%，谷氨酸2. 5-5%，其余为水。
全文摘要
本发明涉及一种提高猪瘟活疫苗产品效价的生产工艺，包括选兔，生产毒种繁殖，猪瘟活疫苗的制备，配苗、分装及冻干和成品检验几个步骤。通过接种时采用猪瘟病毒专用保护剂来稀释种毒，种毒进入兔体能够快速在靶细胞定植和扩繁，提高毒价；通过用专用的脾淋组织保护剂来降低猪瘟病毒的损耗，延长半成品的保存期，从而提高产品的效价和品质，使半成品的保存期从原来的15天，延长到了60天，成品的效价从原来的150个兔体感染量提高到900个兔体感染量。
文档编号A61K39/187GK102973931SQ20121047441
公开日2013年3月20日 申请日期2012年11月21日 优先权日2012年11月21日
发明者林志坤, 吴润生, 江兴华 申请人:福州大北农生物技术有限公司