适于治疗或预防结核的脂质体制剂的制作方法

适于治疗或预防结核的脂质体制剂的制作方法
【专利摘要】本发明提供了包含结核分枝杆菌复合群菌株之片段的脂质体制剂，还提供了结核分枝杆菌复合群菌株，其片段可掺入选定的所述脂质体制剂的实施方案中。本发明还提供了包含所述脂质体制剂的悬液和药物组合物。此外，公开了脂质体制剂的用途，其用于治疗人或动物体的方法，特别是用于治疗或预防结核的方法，例如预防潜伏期结核或预防结核，并任选地用于联合治疗中。本发明的制剂含有蔗糖并且/或者平均粒度低于结核治疗的基于脂质体的常规药剂，导致更高的生物利用度和效力。
【专利说明】适于治疗或预防结核的脂质体制剂
[0001]引言和【背景技术】【技术领域】
[0002]本发明提供了包含来自结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)复合菌株的脂质体制剂，以及包含这些制剂的悬液和药物组合物及其在治疗方法(特别是治疗或预防结核)中的相应用途。本发明的制剂含有蔗糖和/或平均颗粒尺寸低于结核治疗的基于脂质体的常规药剂，导致更高的生物利用度和效力。
【背景技术】 [0003]结核是由结核分枝杆菌复合群(Mycobacteriumtuberculosis-complex, MTB-C,其包括分枝杆菌M.tuberculosis、M.bovis、M.microti和M.africanum)杆菌导致的慢性感染性疾病。分枝杆菌细胞包膜的主要独特特征是厚且为蜡质的细胞壁。细胞壁屏障的特性还促进该生物的胞内存活，这是通过作为宿主与MTB-C杆菌之间免疫反应的直接调节剂来实现的。包膜由两个不同部分组成:质膜，及其周围的壁。细胞壁是由共价连接的肽聚糖结构形成的骨架，具有通过磷酸二酯键附着的支链多糖——阿拉伯半乳聚糖。阿拉伯半乳聚糖的远端被高分子量脂肪酸(分枝菌酸，具有分枝菌的独特大小和结构)酯化。
[0004]据世界卫生组织称，全世界每年有9，000, 000例人感染该疾病的新病例记录在案，约2，000, 000人死亡。全世界的感染人数被认为超过2，700, 000, 000，每年又产生九百万至一千万的新感染。
[0005]本领域中已经描述了多种基于有毒力或无毒力分枝杆菌菌株细胞壁片段的针对结核的疫苗。目前用于对结核进行预防性处理的疫苗是基于称为BCG (卡介苗，M.bovis的一种减毒变体)菌株的细菌。还已知，疫苗组合物中使用的佐剂能极大地影响其有效性。
[0006]海藻糖分枝菌酸酯(特别是海藻糖二分枝菌酸酯)是结核分枝杆菌提取物中最具生物活性的脂质，其诱导影响肉芽肿形成的促炎性级联。应该指出，关于结核分枝杆菌细胞壁中这些化合物的存在量，并没有生物学数据。来自该物种的任何样品都具有高度生物复杂性。因此，为了实施定量分析，将需要激进的、复杂的并且漫长的纯化步骤，导致用于进行进一步结构分析的纯化化合物的量过低。这正是没有关于结核分枝杆菌细胞壁中每种化合物确切百分比的已公开数据的原因。一些糖脂是MTB-C细胞的典型组分，例如脂阿拉伯甘露聚糖。脂阿拉伯甘露聚糖与MTB-C毒力有关。
[0007]E.Ribi et al.，Naturel963, 198，1214-1215 页描述了用包含无毒力卡介苗(BCG)菌株细胞壁片段和矿物油的组合物进行的免疫测定。所述片段通过在矿物油中对所述菌株的培养物进行匀浆而获得。该组合物比常规疫苗(BCG)更有效。尽管如此，同一文章中还描述了所述细胞壁片段当在水中匀浆并且不存在矿物油时不诱导免疫应答。
[0008]D.P.Pal et al., Indian J.Med.Res.1977，65，340-345 页描述了用有毒力的H37Rv菌株的细胞壁片段和矿物油制备的疫苗。在这种情况下，细胞壁片段通过在水相中对死细胞进行匀浆而获得，然后向组合物中加入矿物油。还描述了，在水相中匀浆的细胞壁片段无免疫原性，必须存在矿物油才能使疫苗有效。
[0009]G.K.Khuller et al.，Folia Microbiol.，1992，37，407-412 页描述了结核分枝杆菌的无毒力H37Ra菌株的细胞壁的不同级分的保护性效力，所述级分与弗氏不完全佐剂(也包括矿物油)配制在一起。
[0010]E.M.Agger et al.，Scand.J.1mmunol.，2OO2, 56，443_447 页描述了包含有毒力的H37Rv菌株的细胞壁片段的疫苗，其在包含阳离子型表面活性剂二甲基双十八烷基溴化铵作为佐剂的情况下有效。还描述了，用不包含所述佐剂的匀浆结核分枝杆菌进行的测定在小鼠模型中不产生针对结核的抗性水平。
[0011]1.M.0rme Vaccine，2006，24，2-19页是一篇结核疫苗的综述文章，其描述了，基于常规卡介苗(BCG)的疫苗在为成年人提供针对结核的保护中基本无效。
[0012]可能受益于涉及结核的治疗或预防的个体可分为以下亚组:
[0013](I)未接触该疾病的个体。预防性疫苗接种可防止这些个体发生感染。
[0014](II)已接触该疾病但尚未感染的个体。皮肤结核菌素测试(TST)为阴性。初级预防(primary prophylaxis)能防止这些个体发生感染。
[0015](III)具有潜伏期结核的未发病的个体。可通过施用化学治疗来降低疾病爆发的风险。化学治疗还提供了使这些个体基本停止作为高风险感染源的优点。
[0016](IV)患病个体，即患有该疾病，通常是该疾病的原发形式，但没有或基本没有传染性。化学治疗避免这些个体变成传染性。
[0017]感染开始后，本领域描述了多种用于在感染个体(即具有潜伏期结核的个体)中防止发生活动性结核的治疗。
[0018]例如，在专利申请EP2196473A1中描述了，为了治疗感染个体中的结核可以在长至数月的时间中向尚未发病以及已经发病的个体施用多种药物，包括异烟肼。
[0019]在专利申请ES2231037A1中描述了免疫治疗剂，其包含结核分枝杆菌复合群(MTB-C)的有毒力菌株的细胞片段，用于制备与其他药物(如异烟肼或利福霉素)联合用于治疗感染个体中的结核的药物。该专利申请还描述了用于制备包含MTB-C菌株之细胞壁片段的免疫治疗剂的方法。
[0020]如W02010/031883A1所指出，潜伏期结核感染的传播主要通过吸入被结核分枝杆菌感染的气溶胶而发生。因此，与患肺结核并因此能够散播感染气溶胶的患者直接接触的人(例如与他们住在一起或者有任何类型的充分或频繁接触的人)被认为是风险群体。
[0021]因此，通常向1组个体(见上文)施用的感染初级预防是基于每天施用5mg/kg剂量的异烟肼(不超过300mg/天)的初级化学预防。该处理适用于与感染个体住在一起和/或任何类型密切接触的任何年龄的所有TST阴性个体。在这种情况下，化学预防需要在停止接触感染源后或感染源不具感染性后维持三个月。然而，化学预防在一些情况下可导致继发性的不良效果，如 Martinez et al., Arch.Bronchoneumo1., 2005, 41 (I), 27-33 所述。
[0022]包含有毒力结核分枝杆菌复合群(MTB-C)片段的药物已经描述于例如EP1690549BUEP2090318A1 和 PCT/ES2009/000436。EP2090318A1 和 PCT/ES2009/000436 描述了包含有毒力结核分枝杆菌复合群(MTB-C)片段的药物组合物，其作为适于预防性防止结核(任选地与其他药物组合)的药物。另一方面，EP1690549B1描述了适于治疗结核的药物组合物，其包含任选地与其他药物组合的MTB-C片段。[0023]专利申请EP2090318A1中报道，施用包含基于有毒力MTB-C菌株细胞壁片段之药剂的药物能够诱导针对结核分枝杆菌特异性抗原的产生干扰素-Y的Thl型应答。所述抗原包括Ag85B和Ag85A，它们是复合体Ag85的部分，后者由一系列低分子量蛋白组成，这些蛋白在细胞壁的生物合成中发挥决定作用，并且在细菌培养处于指数生长(log)期时以可观的量产生。EP2090318A1还报道了，基于常规卡介苗(BCG)的疫苗不产生针对复合体Ag85的免疫保护应答。特定淋巴细胞产生的干扰素-Y发挥关键作用:它使得感染的巨噬细胞能够终止杆菌的生长(North&Young, Ann.Rev.Tmmunol., 2004, 22:599-623)。
[0024]世界卫生组织认识到，与无HIV感染的人相比，患有HIV的人发生结核(TB)的风险估计要高 20-37 倍。“Guidelines for intensifiedtuberculosis case-finding andisoniazid preventive therapy for people living withHIV in resource-constrainedsettings^ffHO Guidelines2011, ISBN:9789241500708)中给出了概况。然而，异烟肼预防性治疗不是会为HIV阳性个体提供持久保护的疫苗接种。相反，异烟肼必须定期施用，并且异烟肼抗性也降低了该疗法。因此，仍然需要提供用于HIV阳性人受试者的强有力的预防和治疗性处理。
[0025]发明目的
[0026]本发明的目的是提供改进的药剂，其在HIV阳性和HIV阴性人受试者中都适于预防或治疗结核，例如预防潜伏期结核、初级预防和/或治疗潜伏期或活动性结核。另一个目的是提供适于制备所述药剂的MTB-C菌株。制备该药剂的方法是本发明的另一个目的。
[0027]定义
[0028]“FCMtb”代表来自结核分枝杆菌复合群(MTB-C)菌株的片段。
[0029]如果没有另外指明，则“颗粒尺寸”(亦称“粒度”)指颗粒的直径。当颗粒尺寸无法准确测定时，则指近似颗粒尺寸。
[0030]“z-平均”是如“材料和方法”章节中所述测定的平均颗粒尺寸。
[0031]缠H
[0032]AIDS 获得性免疫缺陷综合征
[0033]BCG卡介苗
[0034]CFU 集落形成单位
[0035]DP药物产品
[0036]DS药物物质
[0037]ELISA 酶联免疫吸附测定
[0038]ELISP0T酶联免疫点测定
[0039]EMEA 欧洲药品管理局
[0040]FCMtb 结核分枝杆菌细胞的片段
[0041]FIM 首次在人中
[0042]HIV 人免疫缺陷病毒
[0043]IFN- Y 干扰素 Y
[0044]IGTIP Germ ans Trias i Pujol 的卫生科学研究所
[0045]IMP 研究性药物产品
[0046]IPC过程控制(In process controls)[0047]LCS 脂质体浓缩物悬液
[0048]LTBI潜伏期结核感染
[0049]LPS脂多糖
[0050]Mtb结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)
[0051]Mtb结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis-complex)
[0052]NZB新西兰黑
[0053]NZff新西兰白
[0054]PPD蛋白纯化衍生物
[0055]q.s.适量
[0056]TB结核
[0057]TST结核皮肤测试
[0058]WHO世界卫生组织
[0059]w/v重量/体积
[0060]w/w重量/重量`
【发明内容】

[0061]本发明提供了脂质体制剂，其包含来自结核分枝杆菌复合群(MTB-C)菌株的片段(FCMtb)和脂质体形成剂。
[0062]在一个具体实施方案中，颗粒的Z-平均尺寸(通过动态光散射测定)为120nm或更小，优选IlOnm或更小,更优选95nm或更小,最优选80nm或更小。在一个备选实施方案中，所述脂质体制剂包含1-20% (w/v)的鹿糖,优选2-12% (w/v)的鹿糖,更优选3-8% (w/v)的鹿糖，最优选4-6%(w/v)的蔗糖。重要的是要注意，尽管这两个实施方案的每一个都可以独立实现，但这些实施方案不视为互斥的，而是完全可以组合。
[0063]在一个具体实施方案中，上述脂质体制剂的Z-平均颗粒尺寸为40_120nm，优选50-1 IOnm,更优选 55_95nm,最优选 55_80nm。
[0064]在另一个具体实施方案中，上述脂质体制剂的平均颗粒尺寸可以更小，使得该脂质体制剂为乳剂，即，该具体实施方案中颗粒的Z-平均尺寸优选小于40nm。
[0065]在上述实施方案中任何一种或更多种的优选实施方案中，所述脂质体制剂是颗粒多分散性指数为0.4或更小(优选0.3或更小)的脂质体制剂。
[0066]在任何上述实施方案的一个更优选实施方案中，所述结核分枝杆菌复合群(MTB-C)菌株是有毒力的结核分枝杆菌复合群(MTB-C)菌株。
[0067]在任何上述实施方案中，还优选(a)所述来自结核分枝杆菌复合群(MTB-C)菌株的片段与(b)所述脂质体形成剂之间的比例为0.01:1至1:1，优选0.06:1至0.1:1。
[0068]在任何上述实施方案的一个更优选实施方案中，所述脂质体制剂还包含:(d)表面活性物质(tensioactive agent)。在一个甚至更优选的实施方案中，包含(d)表面活性物质的脂质体制剂是这样的脂质体制剂，其中(a)与(d)的比值为0.1:1至10:1 (w/w)，优选 0.5:1 至 2:1 (w/w),最优选 0.6:1 至 0.8:1 (w/w)。
[0069]在上述实施方案的一个具体实施方案中，所述脂质体制剂中的脂质体形成剂是磷月旨，优选卵磷脂，更优选选自蛋卵磷脂或大豆卵磷脂，最优选大豆卵磷脂，其中每一种都可以是氢化的，部分氢化的或非氢化的。
[0070]在含有表面活性剂的脂质体制剂的一个优选实施方案中，所述表面活性物质选自胆酸盐、脱氧胆酸盐、胆固醇和胆固醇琥拍酸单酯(cholesterol hemisuccinate)。
[0071]在一个更优选的实施方案中，上述脂质体制剂是这样的脂质体制剂，其中MTB-C细胞的片段是细胞壁片段或者包含细胞壁片段。
[0072]在另一个更优选的实施方案中，上述脂质体制剂包含MTB-C菌株NCTC13536的片段，该菌株在2010年保藏于伦敦的NCTC。该菌株也称为511，因此NCTC13536和511这两种名称可互换使用。
[0073]在一个甚至更优选的实施方案中，上述脂质体制剂包含以下的至少两项，优选三项，更优选四项，最优选全部:
[0074](i)第一多肽，其分子量为约70kDa，与结核分枝杆菌HSP70蛋白(Rv0350)的质量指纹图谱相似，
[0075](ii)第二多肽，其分子量为约38kDa，与结核分枝杆菌38kDa蛋白(Rv0934)的质量指纹图谱相似，
[0076](iii)第三多肽，其分子量为约30kDa，与结核分枝杆菌Ag85B蛋白(Rvl866c)的质量指纹图谱相似，和
[0077](iv)第四多肽，其分子量为约IOkDa,与结核分枝杆菌CFPlO蛋白(Rv3874)的质量指纹图谱相似，和
[0078](V)第五多妝,其分子量为约6kDa,与结核分枝杆菌ESAT-6蛋白(Rv3875)的质量指纹图谱相似。`
[0079]在另一个更优选的实施方案中，所述脂质体制剂包含分子量约19kDa的脂多肽，其与与结核分枝杆菌19kDa脂蛋白抗原前体LpqH (Rv3763)的质量指纹图谱相似。
[0080]甚至更优选地，上述脂质体的特征还在于存在以下结核分枝杆菌抗原的至少一种或其片段:HSP70、38kDa蛋白和Ag85B。这里的“片段”是指任何这些多肽的任何部分，例如降解产物。
[0081]在一个更优选的实施方案中，上述脂质体制剂包含通常可见于结核分枝杆菌中的脂质或其衍生物，例如缀合产物如糖缀合脂质。还优选的是，包含一种或更多种分枝菌酸，优选1、III或IV型中的任何一种或更多种。作为替代或补充，该制剂中可包含糖缀合的分枝菌酸酯，优选海藻糖二分枝菌酸酯。作为替代或补充，还优选的是，本发明的脂质体制剂中存在至少一种MTB-C衍生糖脂，一种优选的糖脂是脂阿拉伯甘露聚糖。
[0082]上述脂质体制剂还可包含一种或更多种表面活性剂，其优选来自非离子型表面活性剂组。
[0083]在另一个优选的实施方案中，前述任一权利要求的脂质体制剂还包含一种或更多种盐或其溶液，其中优选的盐是氯化钠。
[0084]在任何上述实施方案的一个甚至更优选的实施方案中，本发明的脂质体制剂是冻干的。
[0085]本发明还提供悬液，其中任一前述权利要求的脂质体制剂重构于溶剂中。在一个优选的实施方案中，该悬液的的溶剂是含水溶剂，优选是生理血清或者包含生理血清。
[0086]本发明还提供药物组合物，其包含上述任何一个或更多个实施方案所述的脂质体制剂或者上述任何一个或更多个实施方案所述的悬液，以及可药用载体或稀释剂或赋形剂，其中可以施用任何适于作为载体、稀释剂或赋形剂的物质。在其一个优选实施方案中，该药物组合物还包含可药用佐剂。
[0087]本发明还提供用于治疗人或动物体的方法中的产品。即，提供上述任何一个或更多个实施方案的脂质体制剂、上述任何一个或更多个实施方案的悬液或上述任何一个或更多个实施方案的药物组合物，其用于治疗人或动物体的方法中。在一个具体实施方案中，本发明提供用于注射的该脂质体制剂、悬液或药物组合物。在另一具体实施方案中，本发明提供用于结核治疗或预防方法中的该脂质体制剂、悬液或药物组合物。这些具体实施方案可以单独或组合实现。
[0088]在一个更具体的实施方案中，本发明提供上文就其在人体治疗方法中的用途描述的脂质体制剂、悬液或药物组合物，其特征还在于，其用于以包含I至1000、优选3至250、更优选4至80、最优选约5、约25或约50 μ g/剂FCMtb的剂量施用于人体。
[0089]在又三个具体实施方案中(a)至(C)中，上文就其在人体治疗方法中的用途描述的脂质体制剂、悬液或药物组合物是(a)用于在具有潜伏期结核感染的个体中预防活动性结核的方法中，(b)用于结核初级预防方法中，以防止已接触疾病单尚未感染的个体发生感染，或(C)用于治疗或预防潜伏期结核的方法中。
[0090]上述脂质体制剂、悬液或药物组合物用于人或动物体治疗方法的一个优选实施方案是其用于联合治疗或辅助治疗(adjunctive therapy)中。辅助治疗是与首要治疗(primary treatment)结合的额外治疗或第二治疗,其提高治疗疾病的有效性。联合治疗的一个具体实施方案是这样的，其中所述联合治疗包含抗生素，优选异烟肼和利福霉素中的一种或更多种，其中安沙霉素是最优选的利福霉素。在本发明的一个具体实施方案中，辅助治疗适用于HIV阳性人受试 者，优选25 μ g FCMtb的单剂量。
[0091]本发明还提供用于制备任何所述药剂(所述脂质体制剂、悬液或药物组合物)的方法。
[0092]本发明还提供2010年保藏于伦敦NCTC的MTB-C菌株NCTC13536。
[0093]发明详沭
[0094]本发明提供脂质体制剂，其包含来自结核分枝杆菌复合群(MTB-C)菌株的片段(FCMtb)和脂质体形成剂。
[0095]除非另外指明，否则本申请上下位中使用的术语“包含”均表示除了以“包含”引入的成员列表之外还可任选地包含其他成员。但是，作为本发明的一个具体实施方案，术语“包含”也包括不存在其他成员的可能性，即对于该实施方案而言，“包含”应理解成具有“由……组成”的含义。
[0096]本发明详述公开了本发明各个特征的具体和/或优选变化方案。作为特别优选的实施方案，本发明还考虑通过将针对本发明两个或更多特征描述的两个或更多个具体和/或优选变化方案组合而产生的那些实施方案。
[0097]公认的是,脂质体形成(Iiposoformation)过程产生脂质环境,提高溶解度并产生物质(如FCMtb)的悬液。本发明意义上的脂质体可以是单层的、多层的或其组合。
[0098]FCMtb可以是来自MTB-C菌株的任何类型的物质，其中来自蛋白质和/或脂质的片段是优选的。本申请意义上的FCMtb通常是来自MTB-C细胞的不同蛋白质抗原和脂质的混合物。细胞片段可通过本领域技术人员已知的任何适于破碎微生物或细菌细胞(例如特别是MTB-C细胞)的方法(如匀浆)来获得。匀浆可通过超声处理来进行，或通过将直径约0.1mm的小珠(例如二氧化硅或氧化锆/ 二氧化硅珠)与机械匀浆机一起使用来进行。可以使用的机械匀浆机例如BioSpec BeadBeater?型。通过这种匀浆过程破碎mtb-c细胞，从而获得小的细胞片段，通常包括小细胞壁片段。细胞片段制造中的特别重要的特征是通过脱脂作用对细胞壁片段进行“脱毒”，脱脂作用是本领域技术人员熟知的允许除去内毒素样分子的方法。因此，优选对FCMtb进行脱毒和巴氏消毒，其后所得的脂质体制剂是无菌并无内毒素的。细胞片段在缓冲液中的分散体可以任选地冻干，以利于其保存。为此，将分散体分配到瓶中并在约-15°C至-120°c的温度(例如-45°c)下以真空(例如0.1至0.5mbar)冻干。
[0099]本发明的脂质体的尺寸分布通常为至少99.9% (以数量计)小于I μ m。在一个具体实施方案中，颗粒的Z-平均尺寸(通过动态光散射测定的)为120nm或更小,优选IlOnm,更优选IlOnm或更小,更优选95nm或更小,最优选80nm或更小。在动态光散射中，z_平均参数被认为是可通过该技术获得的稳定且重要的数字，以及优选用于质量控制目的的尺寸数字。优选地，本发明制剂中的脂质体是单峰(monomodal)的，即，它们在动态光散射测定中仅显示一个峰。更优选地，本发明制剂中的脂质体是球状的，这可通过对该脂质体制剂的冷冻破碎制备物进行电子显微术来测试，如实施例9所示。由此，球状是指对于至少90%的脂质体颗粒(以数目计)而言，各个颗粒的所有表面点距离脂质体的中心都具有相似或相同的距离，即，这种颗粒的最小半径与同一颗粒的最大半径相比关系为0.6或更高，0.7或更高，0.8或更高或0.9或更高。本发明的脂质体制剂可包含多层或单层脂质体或其混合物。与本领域技术人员的标准知识一致，动态光散射测量应在合适的缓冲液(即本身不导致脂质体破碎、崩解或融合以任何方式使它们显著不稳定的缓冲液)中进行。根据经验，任何缓冲液都可以是合适的，只要离子强度和PH值都与形成所述脂质体的缓冲液相当。优选地，使用与形成所述脂质体的缓冲液在组成上相似或相同的缓冲液。
[0100]在另一实施方案中，脂质体制剂还包含1-20%(w/v)的蔗糖，优选2-12%(w/v)的蔗糖，更优选3-8%(w/v)的鹿糖 ,最优选4-6%(w/v)的鹿糖。约5%的鹿糖是特别优选的。
[0101]重要的是要注意，尽管这些实施方案(一个涉及具体的颗粒尺寸，另一个涉及蔗糖的存在情况)的每一个都可以独立实现，但这些实施方案不视为互斥的，而是完全可以组
口 O
[0102]在一个具体实施方案中，上述脂质体制剂的Z-平均颗粒尺寸为40_120nm，优选50-1 IOnm,更优选55_95nm,最优选55_80nm。z_平均颗粒尺寸优选通过动态光散射测定,如上文的一般描述和下文“材料和方法”章节中的详细描述。
[0103]在另一个具体实施方案中，上述脂质体制剂的Z-平均颗粒尺寸可以更小，使得该脂质体制剂为乳剂，即，该具体实施方案中颗粒的Z-平均尺寸优选小于40nm。
[0104]在上述实施方案中任何一种或更多种的优选实施方案中，本发明制剂中的脂质体还是单分散的，这意味着观察不到显著的尺寸分布宽度。这在技术上通过以动态光散射测定的低多分散性指数(PDI)来测试，如0.4或更小，优选0.3或更小。因此，所述脂质体制剂是这样的脂质体制剂，其中通过动态光散射测定的颗粒多分散性指数为0.4或更小，优选0.3或更小，最优选0.25或更小。[0105]来自结核分枝杆菌复合群(MTB-C)菌株的片段可通过包含上游方法和下游方法的方法获得。出于举例目的，本文简要描述了五个主要步骤，实施该方法的具体模式在下文实施例2和3给出。
[0106]上游方法(实施例2):
[0107]步骤1:培养结核分枝杆菌，
[0108]步骤2:收获结核分枝杆菌并冷冻粗提取物。
[0109]下游方法(实施例3):
[0110]步骤3:细胞破碎和脱脂，
[0111]步骤4:巴氏消毒，
[0112]步骤5:冻干(任选的)。
[0113]在任何上述实施方案的一个更优选实施方案中，所述结核分枝杆菌复合群(MTB-C)菌株是有毒力的结核分枝杆菌复合群(MTB-C)菌株。毒力是指致病性和/或杆菌侵入宿主组织的能力。所述有毒力菌株可以是属于MTB-C物种的任何有毒力菌株，但属于结核分枝杆菌的菌株是优选的。本发明的MTB-C菌株可通过接种在本领域技术人员熟知的培养基(如Middlebrook7H10或7H11琼脂、Sauton’ s培养基或Proskauer-Beck培养基)中来进行培养。所述有毒力菌株的培养优选在长时间中进行，例如等于或大于3周的时间，优选3周至4周。培养温度优选维持在34°C至38°C。培养结束后，使用本领域技术人员熟知的技术(如专利申请ES2231037-A1中描述的那些)收获和分离细胞。
[0114]脂质体制剂中的脂质体剂优选是氢化的、部分氢化的或非氢化的磷脂。所用磷脂可以是(或包含)例如磷脂酰胆碱、磷脂酰丝`氨酸和磷脂酰肌醇。最典型的是磷脂酰胆碱，它可以是合成的或分离自多种天然来源。优选地，所述脂质体形成剂是(或包含)卵磷脂(lecithin),其选自蛋卵磷脂(egg lecithin)和大豆卵磷脂(soy lecithin)。大豆卵磷脂是磷脂(尤其是包括磷脂酰胆碱)的混合物，并且是特别优选的。还可包含在所述制剂中(作为脂质体形成剂本身或者作为其他组分)的典型脂质是磷酸二鲸蜡酯(DCP)、二肉豆蘧酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二肉豆蘧酰磷脂酰甘油(DMPG)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPc)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二油酰磷脂酰丝氨酸(DOPS)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、磷脂酰胆碱(PC)和/或磷脂酰丝氨酸(PS)，其中每种脂质可以是氢化的，部分氢化的或者非氢化的。所述脂质体可使用本领域技术人员熟知的辅助脂质(auxiliary lipids)和技术(如专利申请ES2231037-A1中所述)形成。
[0115]还优选的是，在任何上述实施方案中，(a)结核分枝杆菌复合群(MTB-C)菌株的片段与(b)脂质体形成剂的比值为0.01:1至1:1，优选0.06:1至0.1:1。
[0116]在任何上述实施方案的一个更优选实施方案中，所述脂质体制剂还包含:(d)表面活性物质。通常，所有类型的能够改变表面张力值的试剂都可用作本发明意义上的表面活性物质，但要排除的是落入上文给出的脂质体形成剂定义之中的化合物。有多种类型的表面活性物质为本领域技术人员所知，并可用于本发明的脂质体制剂中。如本领域技术人员所知，表面活性物质通常是具有极性-非极性结构的化合物。不希望受限于任何特定理论，表面活性物质通常具有定位于颗粒表面的倾向，由此在界面上产生降低表面张力值的单分子层。在含有表面活性剂的脂质体制剂的一个优选实施方案，表面活性物质选自固醇及其衍生物，例如胆固醇，和或胆汁盐(biIe salt),例如胆酸盐(cholate)。特别优选的实施方案是其中表面活性物质选自胆酸盐、脱氧胆酸盐、胆固醇和胆固醇琥珀酸单酯。实施本发明的一个优良(但非限制性)的模式是其中制剂的脂质体同时包含大豆衍生的卵磷脂和胆酸钠。
[0117]在一个甚至更优选的实施方案中，包含(d)表面活性物质的脂质体制剂是这样的脂质体制剂，其中(a)与(d)之间的比值为0.05:1至3:5(?/?)。如本领域技术人员所熟知，可以使用多种类型的脂质体形成剂。
[0118]脂质体可任选地含有提高其稳定性的添加剂，例如维生素E，其据信发挥脂质体抗氧化剂作用。
[0119]在一个更优选的实施方案中，上述脂质体制剂是这样的脂质体制剂，其中MTB-C细胞的片段是(或包括)细胞壁片段。 [0120]可以使用任何属于MTBC的菌株,优选任何属于结核分枝杆菌(Mycobacteriumtuberculosis)的菌株。在另一个更优选的实施方案中，上述脂质体制剂包含2010年保藏于伦敦NCTC的MTB-C菌株NCTC13536的片段(实施例1)。另一个可以使用(因此在脂质体制剂中包含其片段)的菌株称为H37Rv，其可得自例如英国伦敦国家典型培养物中心(NCTC)(保藏号NC007416)，并且经常为本领域研究者使用。还可以使用多于一种菌株，即，脂质体制剂包含多种(例如两种、三种或多于三种)菌株的片段。
[0121]考虑到结核分枝杆菌包含约4000种推定抗原，针对全部这些蛋白来分析药物物质是不可能的。尽管如此，某些MTB-C蛋白已经显示出与期望的免疫应答相关。它们是近似大小为6、10、30、38和70kDa的五个蛋白质条带(Renshaw, et al.，2005，EMBOJournal24, 2491-2498;Singh, et al., 2005, Clin.Diagn.Lab.Tmmunol.12(2), 354-358)。因此，在一个甚至更优选的实施方案中，上述脂质体制剂包含以下的至少两项，优选三项，更优选四项，最优选全部:
[0122](i)第一多肽，其在十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳后测量的分子量为约70kDa,其中所述第一多肽的质量指纹图谱(massfingerprint)与结核分枝杆菌HSP70蛋白(Rv0350)的质量指纹图谱相似，
[0123](ii)第二多肽，其在十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳后测量的分子量为约38kDa，其中所述第二多肽的质量指纹图谱与结核分枝杆菌38kDa蛋白(Rv0934)的质量指纹图谱相似，
[0124](iii)第三多肽，其在十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳后测量的分子量为约30kDa，其中所述第三多肽的质量指纹图谱与结核分枝杆菌Ag85B蛋白(Rvl866c)的质量指纹图谱相似，和
[0125](iv)第四多肽，其在十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳后测量的分子量为约IOkDa,其中所述第四多肽的质量指纹图谱与结核分枝杆菌CFPlO蛋白(Rv3874)的质量指纹图谱相似，和
[0126](V)第五多肽，其在十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳后测量的分子量为约6kDa，其中所述第五多肽的质量指纹图谱与结核分枝杆菌ESAT-6蛋白(Rv3875)的质量指纹图谱相似。
[0127]在另一个更优选的实施方案中，所述脂质体制剂还包含分子量(在十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳后测量)约19kDa的脂多肽，其中所述脂多肽与结核分枝杆菌19kDa脂蛋白抗原前体LpqH (Rv3763)的质量指纹图谱相似。相应条带可通过本领域已知方法(如银染)来显现。本发明的研究者意想不到地发现，该多肽诱导高全IgG体液应答，其可以是制剂的全部抗原中最高的体液应答。
[0128]如何鉴定多肽或脂多肽的实例在实施例4中给出。
[0129]甚至更优选地，上述脂质体制剂的特征还在于存在以下结核分枝杆菌抗原的至少一种或其片段:HSP70、38kDa蛋白和Ag85B，最优选HSP70、38kDa和Ag85B中至少之一。这里的“片段”是指任何这些多肽的任何部分，例如降解产物。可以使用多种方法获得这些片段，例如化学或酶水解，由此，破碎是否有意发生、在脂质体形成之前或之后发生并不重要。优选的是，相应片段可以归因于其相应来源，例如由于氨基酸序列显著重叠，例如至少5、至少10、至少20个连续氨基酸。
[0130]本发明的片段优选得自在饥饿、低氧和低pH胁迫条件下培养的杆菌。低氧是由于在培养期(例如21天)中密封在气密袋中的平板上细菌的生长，导致微氧环境。低pH的解释如下:培养开始时PH值为7.0-6.8，结束时(通常在培养21天后)，pH值为6.4-6.5。在这些条件下，细菌的代谢较慢，导致稳定生长。应该理解，这使得杆菌对胁迫的抗性更高。在这些条件下，培养的杆菌产生与LTBI (潜伏期结核感染)中体内潜伏期杆菌相似的特征。因此，预计FCMtb中存在的抗原会触发针对潜伏期杆菌之抗原(所谓的“结构”抗原)以及胁迫应答相关的抗原的新免疫应答。
[0131]分枝杆菌糖脂长期以来就被认为具有免疫调节活性，特别是诱导肉芽肿应答和发挥强佐剂样效应。因此，在另一个优选的实施方案中，上述脂质体制剂包含通常可见于结核分枝杆菌中的脂质或其衍生物，例如缀合脂质如糖缀合脂质。已经在结核分枝杆菌样品中鉴定出一些免疫原性脂质组分(Brennan, Tuberculosis (Edinburgh), 2003, 83 (1-3), 91-97)，并开发了用于其测定的分析方法(电泳、SDS-PAGE、薄层层析)。尽管每种脂质组分的分离将需要如此激进的处理以致于很难获得MTB-C提取物或脂质体制剂中每种可检测组分的定量数据或百分比，但定量表征将用于表征本发明的更优选实施方案。根据这一优选实施方案，包含一种或更多种分枝菌酸，优选属于1、III或IV型中的任何一种或更多种。作为替代或补充，制剂中可包含糖缀合分枝菌酸酯，优选海藻糖二分枝菌酸酯。作为替代或补充，制剂中可包含脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)这种糖脂。此外，相信所述片段的多抗原性性质(多抗原性蛋白质混合物加脂质，而不是仅有纯化的抗原)是有利的，因此本领域技术人员能够改动细胞破碎过程以允许获得最佳细胞抗原混合物。
[0132]MTB-C细胞的匀浆在一种或更多种表面活性剂(优选非离子型表面活性剂)存在下进行。因此，上述脂质体制剂还可包含一种或更多种这些表面活性剂。大量这种表面活性剂在本领域技术人员的标准知识中。优选地，所用的非离子型表面活性剂选自乙氧基化烷基酚和乙氧基化山梨糖醇酯。更优选地，所述非离子型表面活性剂选自乙氧基化辛基酚。甚至更优选地，使用具有包含7至8摩尔环氧乙烷含量的乙氧基辛基酚，该表面活性剂以Triton X-114?这一名称销售。对含有细胞壁片段的匀浆物进行常规处理以分离并移除未破碎细胞和溶解组分。ES223 1037-A1描述了例如可以使用不同速度的离心和用缓冲液进行的洗涤。进行上述纯化过程后获得含有细胞壁片段的沉淀。将所述沉淀分散在磷酸盐缓冲液(PBS)中并进行常规处理，以确保在破碎和纯化过程后可能仍保留活力的MTB-C细胞完全失活。所述处理可以是化学处理，例如用甲醛处理，或者是物理处理，例如高压灭菌或巴氏消毒处理。下文实施例5给出了脂质表征的实例。
[0133]在另一优选实施方案中，上述脂质体制剂还包含一种或多种盐或其溶液，其中优选的盐是氯化钠。
[0134]在任何上述实施方案的一个甚至更优选的实施方案中，所述脂质体制剂是冻干的。可以对所述脂质体进行冻干以由此获得冻干脂质体形式的免疫治疗剂。为此，可将分散体分配到瓶中并在低温(如约_15°C至_120°C的温度，例如_45°C)下以真空(例如0.1至0.5mbar)冻干。冻干后得到的瓶中含有适于作为免疫治疗剂的脂质体制剂，它们优选保存在极低的温度下，例如_70°C。
[0135]本发明还提供悬液，其中任一前述权利要求的脂质体制剂重构在溶剂中。在一个优选的实施方案中，该悬液的溶剂是含水溶剂，更优选并且最优选是(或包含)生理血清。将脂质体制剂悬浮在溶剂中的方法为本领域技术人员所熟知。本发明制剂的一个特别有利的特性是，其能够比包含MTB-C片段的常规脂质体制剂更快地悬浮(见实施例9)。
[0136]本发明的一个目的是提供用于制备药物组合物的包含MTB-C菌株细胞壁片段的药剂，其中所述药剂是(或包含)上文任何所述实施方案中所述的脂质体制剂或其组合。药物物质的药物制剂/盖伦制剂(galenic formulation)的主要范围是获得悬液,其有效性和稳定性足以被细胞充分识别，并具有在人或动物体中触发相关细胞免疫应答的潜力。为此，本发明还提供药物组合物，其包含上述任何一个或更多个实施方案中描述的脂质体制剂或悬液，以及可药用载体、赋形剂或稀释剂。多种这样的载体、赋形剂和稀释剂为本领域技术人员所知，它们绝不受限于本公开内容。相反，任何适于作为载体、赋形剂或稀释剂的物质均可使用。在一个优选的实施方案中，该药物组合物还包含可药用佐剂。由此，佐剂应理解为本发明该实施方案中包含的一种物质，其中所述佐剂是能够在适用于人或动物体时刺激免疫系统应答于靶抗原的物质，其中所述佐剂本身不赋予免疫力。不限于任何具体的佐剂物质，优选的实施方案是其中佐剂是铝盐例如氯化铝，或者矿物油或含有矿物油的组合物例如弗氏不完全佐剂(IFA)或弗氏完全佐剂(CFA)，或者卤化铵如溴化烷基铵，例如溴化二甲基双十八烷基铵。
[0137]本发明还提供用于人或动物体治疗方法的产品。即，提供用于人或动物体治疗方法的任何上述一个或更多个实施方案的脂质体制剂、任何所述一个或更多个实施方案的悬液或任何上述一个或更多个实施方案的药物组合物。
[0138]所述药物可在粘膜中施用，例如眼、鼻内、口、胃、肠、阴道或尿道的粘膜，或者肠胃外施用，例如皮下、皮内、肌内、静脉内或腹膜内施用。优选肠胃外施用。在一个具体实施方案中，本发明提供用于注射的该脂质体制剂、悬液或药物组合物。
[0139]在另一具体实施方案中，本发明提供用于结核治疗或预防方法中的该脂质体制剂、悬液或药物组合物。这些具体实施方案可以单独或组合实现。本研究的发明人发现，本发明的制剂导致提高的细胞免疫应答，还控制常见的再感染过程(否则这可在潜伏期结核感染中发生)，这是通过加强针对生长中杆菌的免疫力和诱导针对非复制杆菌的免疫力来实现的。
[0140]上文就其在人或动物体治疗方法中的用途描述的脂质体制剂、悬液或药物组合物的合适剂量取决于若干参数，包括施用方法和受治者。在一个优选实施方案中，其用于对人体施用。在其一个优选实施方案中，这以I至1000、优选3至250、更优选4至80、最优选约5、约25或约50 μ g/剂FCMtb的剂量实现。特别优选25 μ g的剂量。
[0141]在又三个具体实施方案中(a)至(C)中，上文就其在人或动物体治疗方法中的用途描述的脂质体制剂、悬液或药物组合物是(a)用于在具有潜伏期结核感染的个体中预防活动性结核的方法中。在另一更优选的实施方案中，(b)用于结核初级预防方法中，以防止已接触疾病单尚未感染的个体发生感染，或(C)用于治疗或预防潜伏期结核的方法中。
[0142]用于人或动物体治疗方法中的脂质体制剂、悬液或药物组合物可以单剂量形式施用，或者同以某时间间隔重复而以多剂量(如2、3、4、5或多于5)施用。优选地，以2至5周(优选3至4周)的间隔分开使用两剂。
[0143]实施例8、10和12是怎样将本发明脂质体制剂施用于人或动物受试者的实例。
[0144]上述物质的一个优选实施方案是用于联合治疗或辅助治疗的脂质体制剂、悬液或药物组合物。医学从业者经常使用辅助治疗以获得更好的治愈率或针对首要治疗更快的应答。联合治疗或辅助治疗包括使用多于一种药物来治疗人或动物体。联合治疗的第一个具体实施方案是其中所述联合治疗包含抗生素，优选异烟肼和安沙霉素，其中所述安沙霉素最优选是利福霉素。其第二个具体实施方案是其中所述联合治疗包含其他针对结核的预防性疫苗，例如 S.H.E.Kaufmann, Nature Rev.Tmmunol., 2006, 6, 699-704 页中提到的那些,例如卡介苗(BCG)疫苗、亚单位疫苗或重组BCG疫苗。第一个和第二个具体实施方案可以组
八 [0145]在联合治疗或辅助治疗中，这两种(或更多种)物质的施用可以是同时的，或者可以以在时间上分开的两次(或更多次)接种中完成。接种之间的时间甚至可以是若干年。在联合治疗的情况中，接种在时间上分开进行，首先优选施用针对结核的预防性疫苗，随后施用包含有毒力MTB-C菌株之细胞壁片段的药物，其作为先接种疫苗的再刺激剂(加强剂)。在一个实施方案中，仅对人受试者施用单剂量，该剂量优选为25 μ g FCMtb。
[0146]或者，在辅助治疗中同时使用若干不同治疗策略或处置类型。在本发明的一个具体实施方案中，将辅助治疗施用于免疫系统受损的人受试者(例如患HIV的个体),或者任何由于其他原因而易于感染结核和/或需要这种治疗的个体。辅助治疗中也可以施用异烟肼。此外，辅助治疗可包括施用治疗受损免疫系统(例如治疗HIV感染)的任何药物或药物组合。治疗HIV感染的典型药物是抗病毒药,其非限制性综述可见于“Antiretroviraltherapy for HIV infection in adults and adolescents Recommendations for apublic health approach:2010 年版”，作者:World Health Organization, ISBN:9789241599764。
[0147]因此，本发明人为向HIV阳性人受试者提供有效结核保护(如疫苗接种)的需求提供了解决方案。
[0148]可以通过允许检测待测个体体液中人免疫缺陷病毒(HIV)——导致获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的病毒一存在情况的任何测试来测试个体是被认为HIV阳性或否(SPHIV阴性)，其中体液通常是选自血清、唾液或尿中的任何一种。这种测试可检测抗体、抗原或 RNA。合适的筛查测试的概况在 Chou et al., Ann.1ntern.Med.2005Jul5; 143 (I): 55-73中给出。
[0149]本发明的发明人意想不到地发现，对HIV阳性人受试者施用的25 μ gFCMtb单剂量提供了强应答。[0150]25 μ g FCMtb单剂量在施用于HIV阴性人受试者时也是强有力的。本发明人显示，这在患有潜伏期结核的受试者中特别有用(实施例12)。因此，本发明的一个优选实施方案是要向HIV阳性或HIV阴性个体施用的25 μ g FCMtb单剂量。
[0151]本发明还提供制造方法，其特征在于，该方法适于获得任何上述一个或更多个实施方案的脂质体制剂以及悬液和包含它们的药物组合物。一个非限制性实例在下文实施例11中给出。
[0152]本发明还提供2010年保藏于伦敦NCTC的MTB-C菌株NCTC13536。该菌株具有低遗传多态性。因此，包含NCTC13536之片段的制剂由于这种低遗传多态性而具有可重复性极闻的优点。
[0153]实施本发明的优选模式
[0154]优选的是，使用50 μ g FCMtb/剂或25 μ g FCMtb/剂或5 μ g FCMtb/剂的具体剂量。例如，剂量为50 μ g FCMtb时，在一瓶制剂中存在表1中给出的量/物质:
[0155]
【权利要求】
1.脂质体制剂，其包含: (a)来自结核分枝杆菌复合群(MTB-C)菌株的片段， (b)脂质体形成剂， I至20% (w/v)的鹿糖,优选2至12% (w/v)的鹿糖,更优选3至8% (w/v)的鹿糖,最优选4至6% (w/v)的鹿糖,其中颗粒的Z-平均尺寸为120nm或更小。
2.权利要求1的脂质体制剂，其中所述颗粒的Z-平均尺寸为40至llOnm，更优选55至 95nm。
3.权利要求1或2中任一项的脂质体制剂，其中所述脂质体制剂为乳剂，并且其中颗粒的Z-平均尺寸优选小于40nm。
4.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其中颗粒的多分散性指数为0.4或更小，优选 0.3。
5.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其中所述结核分枝杆菌复合群(MTB-C)菌株是有毒力的结核分枝杆菌复合群(MTB-C)菌株，优选为2010年保藏于伦敦NCTC的MTB-C菌株 NCTC13536。
6.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其还包含 Cd)表面活性物质， 和/或 Ce) 一种或更多种非离子型表面活性剂。`
7.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其中所述MTB-C细胞的片段是细胞壁片段或者包含细胞壁片段。
8.权利要求6的脂质体制剂，其中(a)与(d)的比值为0.05:1至l:5(w/w)。
9.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其中所述脂质体形成剂是氢化的、部分氢化的或非氢化的磷脂，优选卵磷脂，最优选大豆卵磷脂。
10.权利要求10至12中任一项的脂质体制剂，其中所述表面活性物质选自胆酸盐、脱氧胆酸盐、胆固醇和胆固醇琥珀酸单酯。
11.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其中所述MTB-C细胞的片段是细胞壁片段或者包含细胞壁片段。
12.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其包含2010年保藏于伦敦NCTC的MTB-C菌株NCTC13536的片段。
13.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其包含以下的至少两项，优选三项，更优选四项，最优选全部: (i)第一多肽，其在十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳后测量的分子量为约70kDa，其中所述第一多肽的质量指纹图谱与结核分枝杆菌HSP70蛋白(Rv0350)的质量指纹图谱相似， (ii)第二多肽，其在十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳后测量的分子量为约38kDa，其中所述第二多肽的质量指纹图谱与结核分枝杆菌38kDa蛋白(Rv0934)的质量指纹图谱相似， (iii)第三多肽，其在十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳后测量的分子量为约30kDa，其中所述第三多肽的质量指纹图谱与结核分枝杆菌Ag85B蛋白(Rvl866c)的质量指纹图谱相似，和 (iv)第四多肽，其在十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳后测量的分子量为约IOkDa,其中所述第四多肽的质量指纹图谱与结核分枝杆菌CFPlO蛋白(Rv3874)的质量指纹图谱相似，和 (i)第五多肽，其在十二烷基硫酸钠(SDS)聚丙烯酰胺凝胶电泳后测量的分子量为约6kDa，其中所述第五多肽的质量指纹图谱与结核分枝杆菌ESAT-6蛋白(Rv3875)的质量指纹图谱相似。
14.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其中存在以下结核分枝杆菌抗原的至少一种或其片段:HSP70、38kDa蛋白和Ag85B。
15.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其包含一种或更多种分枝菌酸和/或糖缀合分枝菌酸酯优选海藻糖二分枝菌酸酯，和/或糖脂优选脂阿拉伯甘露聚糖。
16.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其还包含一种或更多种非离子型表面活性剂。
17.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其还包含一种或更多种盐或其溶液，其中所述盐优选为氯化钠。
18.前述权利要求中任一项的脂质体制剂，其中所述脂质体制剂是冻干的。
19.悬液，其中前述权利要求中任一项的脂质体制剂重构于溶剂中，其中所述溶剂优选为含水溶剂，更优选为生理血清或包含生理血清。
20.药物组合物，其包含权利要求1至18中任一项的制剂或权利要求19的悬液，以及可药用载体或稀释剂，和/或可药用佐剂。
21.权利要求1至18中任一项的脂质体制剂、权利要求19的悬液或权利要求20的药物组合物，其用于治疗人或动物体的方法中。
22.权利要求21的脂质体制剂、悬液或药物组合物，其用于治疗或预防结核的方法中。
23.权利要求22的脂质体制剂、悬液或药物组合物，其选自以下: a)用于在具有潜伏期结核感染的个体中预防活动性结核的方法中； b)用于结核的初级预防方法中，以防止接触过该疾病但尚未感染的个体发生感染，或 c)用于治疗或预防潜伏期结核的方法中。
24.权利要求21至23中任一项的脂质体制剂、悬液或药物组合物，其用于以包含I至1000、优选3至250、更优选4至80、最优选约5、约25或约50 μ g/剂FCMtb的剂量施用于人体。
25.权利要求21至23中任一项的脂质体制剂、悬液或药物组合物，其用于以25μ gFCMtb的单次接种剂量施用于人体。
26.权利要求21至25中任一项的脂质体制剂、悬液或药物组合物，其用于联合治疗中，所述联合治疗优选包含抗生素，更优选异烟肼和安沙霉素中的一种或更多种，其中所述安沙霉素最优选是利福霉素。
27.权利要求125的脂质体制剂、悬液或药物组合物，其用于辅助治疗中。
28.权利要求27的脂质体制剂、悬液或药物组合物，其用于在辅助治疗中施用于HIV阳性人受试者。
29.权利要求25的脂质体制剂、悬液或药物组合物，其用于施用于HIV阴性人受试者。
【文档编号】A61K31/06GK103796640SQ201280011787
【公开日】2014年5月14日 申请日期:2012年1月4日 优先权日:2011年1月4日
【发明者】佩尔·乔娜·卡唐娜·伊杰勒塞斯, 伊莎贝尔·艾玛特·里拉, 布兰卡·雷耶斯, 艾瑞德纳·瑟格, 梅尔斯·艾玛特 申请人:阿尔西维尔法尔玛公司