抗egfl7抗体用于治疗的给药的制作方法
【专利摘要】本发明涉及抗EGFL7抗体用于癌症疗法的剂量给药。
【专利说明】抗EGFL7抗体用于治疗的给药
[0001]发明优先权
[0002]本申请依据35U.S.C.§ 119 (e)要求2011年2月2日提交的美国临时申请Νο.61/438，944、2011年6月2日提交的美国临时申请N0.61/492，743、和2012年I月17日提交的美国临时申请N0.61/587，382的优先权。
发明领域 [0003]本发明涉及癌症治疗。更具体地，本发明关注使用抗EGFL7抗体特异性治疗对癌症易感的或诊断有癌症的人患者。
[0004]发明背景
[0005]现在完全确立了涉及自已有的内皮形成新血管的血管发生参与多种病症的发病机理。这些包括实体瘤和转移、动脉粥样硬化、晶状体后纤维组织增生、血管瘤、慢性炎症、眼内新血管综合征诸如增殖性视网膜病例如糖尿病性视网膜病、老年性黄斑变性(AMD)、新生血管性青光眼、移植角膜组织和其它组织的免疫排斥、类风湿性关节炎、和银屑病。Folkman et al., J.Biol.Chem., 267:10931-10934(1992);Klagsbrun et al., Annu.Rev.Physiol.，53:217-239(1991);及 Garner A.，"Vascular diseases^, In:Pathobiology ofOcular Disease.A Dynamic Approach, Garner A., Klintworth GK, eds., 2nd Edition(Marcel Dekker, NY, 1994)，ppl625_1710。在肿瘤生长的情况中，血管发生对于自增生至瘤形成的转换，及为肿瘤的生长和转移提供营养似乎是至关重要的。Folkman etal., Nature, 339:58(1989)。新血管形成(neovascularization)让肿瘤细胞获得了与正常细胞相比的生长优势和增殖自治。
[0006]血管发育过程受到严密调节。迄今为止，多种分子，多为由周围细胞生成的分泌性因子，已显示出调节EC分化、增殖、迁移和接合成索样结构。例如，血管内皮生长因子(VEGF)已鉴定为涉及刺激血管发生和诱导血管通透性的关键因子。Ferrara etal., Endocr.Rev.，18:4-25(1997)。还正在阐明其它分子在此过程中的作用，包括表皮生长因子样域7(EGFL7 ;参见例如2005年4月14日提交的W02005/117968)。抑制EGFL7已经显示出有效抑制血管发生和治疗肿瘤(参见例如2007年3月16日提交的W02007/106915和 2010 年 5 月 7 日提交的 US-2010-0285009-A1)。
[0007]鉴于脉管发生(vasculogenesis)和血管发生(angiogenesis)在许多疾病和病症中的作用及EGFL7在此过程中的作用，希望有降低或抑制一种或多种引起这些过程的生物学效应的手段。通过述及完整收录本文中引用的所有参考文献，包括专利申请和出版物。
[0008]发明概述
[0009]靶向EGFL7代表癌症治疗的一种重要且有利的治疗模态，尤其是与其它抗血管发生剂，例如抗VEGF剂组合。本发明部分基于抗EGFL7抗体用于治疗癌症的最有效剂量的鉴定和最佳剂量显著低于最大耐受剂量的令人惊讶的发现。因而，本发明提供与之相关的方法、组合物、试剂盒和制品。
[0010]例如，在一些实施方案中，本发明提供一种用于治疗人患者中的癌症的方法，包括施用抗EGFL7抗体,该方法包括以介于lmg/kg和15mg/kg之间的剂量施用该抗体。在一些实施方案中，该剂量介于约5mg/kg和约7.5mg/kg之间。在一些实施方案中，该剂量为约5mg/kg。在一些实施方案中，该剂量为约7.5mg/kg。
[0011]在一些实施方案中，本发明提供一种用于治疗人患者中的癌症的方法，包括施用抗EGFL7抗体,该方法包括以选自下组的固定剂量(flat dose)施用该抗体:(a)每两周375-400mg和(b)每三周550_600mg。在一些实施方案中，该固定剂量为每两周375_400mg。在一些实施方案中，该固定剂量为每三周550-600mg。在一些实施方案中，该固定剂量为400mg每两周。在一些实施方案中，该固定剂量为600mg每三周。
[0012]在一些实施方案中，本发明提供一种用于治疗人患者中的癌症的方法，包括施用抗EGFL7抗体，该方法包括对该患者施用第一剂该抗EGFL7抗体和对该患者施用第二剂该抗EGFL7抗体,其中该第一剂和该第二剂均介于lmg/kg和15mg/kg之间且该第二剂在该第一剂之后1-4周。在一些实施方案中，该第一剂和该第二剂均介于5mg/kg和7.5mg/kg之间且该第二剂在该第一剂之后2-3周。在一些实施方案中，该第一剂和该第二剂均为5mg/kg且该第二剂在该第一剂之后2周。在一些实施方案中，该第一剂和该第二剂均为7.5mg/kg且该第二剂在该第一剂之后3周。
[0013]在一些实施方案中，该抗EGFL7抗体包含可变域，该可变域包含下述HVR序列:(i) HVR-Ll，其包含 KASQSVDYS⑶SYMS (SEQ ID NO:1) ； (ii)HVR_L2，其包含 GASYRES (SEQID NO:2) ； (iii)HVR-L3,其包含 QQNNEEPYT (SEQ ID NO:3) ； (iv) HVR-Hl,其包含GHTFTTYGMS (SEQID NO:4) ； (v)HVR_H2，其包含 GWINTHSGVPTYADDFKG (SEQ ID NO:5)；和
(vi)HVR-H3，其包含LGSYAVDY (SEQ ID NO:6)。在一些实施方案中，该抗EGFL7抗体包含下述重链可变区序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGHTFTTYGMSWVRQAPGKGLEWVGWINTHSGVPTYADDFKGRFTISLDNSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGSYAVDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:7)。在一些实施方案中，该抗EGFL7抗体包含下述重链可变区序列:EIQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGHTFTTYGMSWVRQAPGKGLEWMGWINTHSGVPTYADDFKGRFTISLDNSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYFCARLGSYAVDYWGQGTLVTVSS (SEQ ID NO:8)。在一些实施方案中，该抗EGFL7抗体包含下述轻链可变区序列:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYS⑶SYMSWYQQKPGKAPKLLIYGASYRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQNNEEPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:9)。
[0014]在一些实施方案中，该抗EGFL7抗体包含可变域，该可变域包含下述HVR序列:(i) HVR-Ll，其包含 RTSQSLVHINGITYLH (SEQ ID NO:10) ; (ii) HVR-L2，其包含 RVSNRFS (SEQID NO:11) ； (iii)HVR-L3,其包含 GQSTHVPLT(SEQ ID NO:12) ； (iv)HVR-Hl,其包含GYTFIDYYMN (SEQID NO:13) ; (v) HVR-H2，其包含 GDINLDNGGTHYNQKFKG (SEQ ID NO:14);和(vi) HVR-H3,其包含 AREGVYHDYDDYAMDY (SEQ ID NO: 15)。在一些实施方案中，该抗 EGFL7抗体包含下述重链可变区序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFIDYYMNWVRQAPGKGLEWVGDINLDNGGTHYNQKFKGRFTISRDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGVYHDYDDYAMDYWGQGTLVTVSS(SEQID NO:16)。在一些实施方案中，该抗EGFL7抗体包含下述轻链可变区序列:DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSLVHINGITYLHWYQQKPGKAPKLLIYRVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCGQSTHVPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:17)。
[0015]在一些实施方案中，该抗EGFL7抗体包含可变域，该可变域包含下述HVR序列:(i) HVR-Ll，其包含 RTSQSLVHINAITYLH (SEQ ID NO:18) ; (ii) HVR-L2，其包含 RVSNRFS (SEQID NO:11) ； (iii)HVR-L3,其包含 GQSTHVPLT (SEQ ID NO:12) ； (iv) HVR-Hl,其包含GYTFIDYYMN (SEQ ID NO:13) ; (v) HVR-H2，其包含⑶INLDNSGTHYNQKFKG (SEQ ID NO:19);和
(vi)HVR-H3,其包含 AREGVYHDYDDYAMDY (SEQ ID NO: 15)。在一些实施方案中，该抗 EGFL7抗体包含下述重链可变区序列:EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFIDYYMNWVRQAPGKGLEWVGDINLDNSGTHYNQKFKGRFTISRDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGVYHDYDDYAMDYWGQGTLVTVSS(SEQID NO:20)。在一些实施方案中，该抗EGFL7抗体包含下述轻链可变区序列:DIQMTQSPSSLSASV⑶RVTITCRTSQSLVHINAITYLHWYQQKPGKAPKLLIYRVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCGQSTHVPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:21)。
[0016]在一些实施方案中，该抗体在10、20或30分钟的输注中施用。
[0017]在一些实施方案中，该方法进一步包括施用另一种抗血管发生剂的步骤。在一些实施方案中，该另一种抗血管发生剂是抗血管内皮生长因子(VEGF)拮抗剂。在一些实施方案中，该抗VEGF拮抗剂是抗VEGF抗体。在一些实施方案中，该抗VEGF抗体是贝伐单抗。
[0018]在一些实施方案中，该抗EGFL7抗体是双特异性抗体。在一些实施方案中，该双特异性抗体结合VEGF。在一些实施方案中，该双特异性抗体与贝伐单抗结合相同VEGF表位。
[0019]在一些实施方案中，该癌症选自下组:乳腺癌，白血病，鳞状细胞癌，小细胞肺癌，非小细胞肺癌，胃肠癌，胰腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝瘤，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜癌，唾液腺癌，肾癌，肝癌，前列腺癌，外阴癌，甲状腺癌，肝癌瘤和各种类型的头和颈癌。在一些实施方案中，该癌症是乳腺癌、NSCLC或CRC。
[0020]在一些实施方案中，该方法进一步包括施用有效量的化疗剂。
[0021]本发明提供一种用于治疗人患者中的NSCLC的方法，其包括剂量给药方案，该剂量给药方案包含多个治疗周期，其中每个周期的第I天对该患者施用200mg/m2帕利他赛、卡钼(AUC6mg/ml min)、15mg/kg贝伐单抗、和600mg抗EGFL7抗体,每21天重复每个周期。在一些实施方案中，施用帕利他赛和卡钼直至疾病进展或长达6个周期。在一些实施方案中，施用贝伐单抗和抗EGFL7抗体直至疾病进展或长达34个周期。该抗EGFL7抗体可以是本文所述抗EGFL7抗体任一。
[0022]本发明还提供一种用于治疗人患者中的结肠直肠癌的方法，其包括剂量给药方案，该剂量给药方案包含多个治疗周期，其中第一个周期的第I天对该患者施用85mg/m2奥沙利钼、400mg/m25-氟尿卩密唳(5-FU)、400mg/m2亚叶酸、5mg/kg贝伐单抗、和400mg抗EGFL7抗体，且其中每个后续周期的第I天对该患者施用85mg/m2奥沙利钼、2400mg/m25_FU、400mg/m2亚叶酸、5mg/kg贝伐单抗、和400mg抗EGFL7抗体,每14天重复每个周期。在一些实施方案中，施用奥沙利钼长达8个周期。在一些实施方案中，施用5-FU、亚叶酸、贝伐单抗和抗EGFL7抗体直至疾病进展或长达52个周期。该抗EGFL7抗体可以是本文所述抗EGFL7抗体任一。
[0023]在一些实施方案中，本发明提供一种制品，其包括容器、该容器内的组合物、和标签或包装插页，该组合物包含抗EGFL7抗体,该标签或包装插页印有以介于lmg/kg和15mg/kg之间的剂量施用该抗体的用法说明书。
[0024]在一些实施方案中，本发明提供一种制品，其包括容器、该容器内的组合物、和标签或包装插页，该组合物包含抗EGFL7抗体,该标签或包装插页印有对患者施用第一剂抗EGFL7抗体和对患者施用第二剂抗EGFL7抗体的用法说明书，其中该第一剂和该第二剂均介于lmg/kg和15mg/kg之间且该第二剂在该第一剂之后1_4周。在一些实施方案中，该第一剂和该第二剂均介于5mg/kg和7.5mg/kg之间且该第二剂在该第一剂之后2_3周。在一些实施方案中，该第一剂和该第二剂均为5mg/kg且该第二剂在该第一剂之后2周。在一些实施方案中，该第一剂和该第二剂均为7.5mg/kg且该第二剂在该第一剂之后3周。
[0025]在一些实施方案中，本发明提供一种制品，其包括容器、该容器内的组合物、和标签或包装插页，该组合物包含抗EGFL7抗体,该标签或包装插页印有以选自下组的固定剂量施用该抗体的用法说明书:(a)每两周375-400mg和(b)每三周550_600mg。在一些实施方案中，该固定剂量为每两周375-400mg。在一些实施方案中，该固定剂量为每三周550-600mg。在一些实施方案中，该固定剂量为每两周400mg。在一些实施方案中，该固定剂量为每三周600mg。
[0026]附图简述
[0027]图1描绘Ia期和Ib期临床试验的设计。
[0028]图2描绘来自Ia期的H)生物标志物(CPC)。
[0029]图3描绘来自Ib期的H)生物标志物(CPC)。
[0030]发明详述
[0031]本发明提供涉及抗EGFL7抗体的方法、组合物、试剂盒和制品及癌症治疗。
[0032]本文中提供这些方法、组合物、试剂盒和制品的详情。
[0033]通用技术
[0034]本文中描述或提到的技术和规程一般得到了本领域技术人员的充分理解，而且通常利用常规方法得以采用，诸如例如下列文献中记载的广泛应用的方法:SambiOOket al., Molecular Cloning:A Laboratory Manual3rd.edition (2001)Cold SpringHarbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y ;CURRENT PROTOCOLS IN MOLECULARBIOLOGY(F.M.Ausubel, et al.eds., (2003))；丛书 METHODS IN ENZYM0L0GY(AcademicPress, Inc.): PCR2:A PRACTICAL APPROACH (M.J.MacPherson, B.D.Hames and G.R.Tayloreds.(1995)) ；Harlow and Lane, eds.(1988)ANTIBODIES, A LABORATORY MANUAL ;及ANIMALCELL CULTURE (R.1.Freshney, ed.(1987))。
[0035]定义
[0036]术语“EGFL7”(可互换地称为“表皮生长因子样域7”)，在用于本文时，除非另有明确说明或者上下文另有说明，指任何天然的或变异的(无论是天然的或合成的)EGFL7多肽。术语“天然序列”明确涵盖天然存在的截短或分泌形式(例如胞外结构域序列)、天然存在的变异形式(例如可变剪接形式)和天然存在的等位变体。
[0037]术语“抗EGFL7抗体”或“结合EGFL7的抗体”指能够以足够亲和力结合EGFL7，使得该抗体可用作靶向EGFL7的诊断剂和/或治疗剂的抗体。在某些实施方案中，结合EGFL7的抗体具有≤I μ M、≤IOOnM, ≤ IOnM, ≤ InM、或≤0.1nM的解离常数(Kd)。抗EGFL7抗体具体包括2007年3月16日提交的W02007/106915和2010年5月7日提交的US-2010-0285009-A1 中记载的抗 EGFL7 抗体。
[0038]“结合亲和力”通常指分子(例如抗体)的单一结合位点与其结合配偶体(例如抗原)之间全部非共价相互作用总和的强度。除非另有说明，在用于本文时，“结合亲和力”指反映结合对的成员(例如抗体与抗原)之间1:1相互作用的内在结合亲和力。分子X对其配偶体Y的亲和力通常可用解离常数(Kd)来表述。亲和力可通过本领域知道的常用方法来测量，包括本文中所描述的。低亲和力抗体通常缓慢的结合抗原且趋于容易解离，而高亲和力抗体通常更快速的结合抗原且趋于保持更长时间的结合。本领域知道测量结合亲和力的多种方法，其中任一种都可用于本发明的目的。下文描述了具体的示例性实施方案。
[0039]在一个实施方案中，依照本发明的“Kd”或“Kd值”是通过如下测定法所述使用Fab型式的感兴趣抗体及其抗原进行的放射性标记抗原结合测定法(RIA)来测量的:通过在存在未标记抗原的滴定系列的条件下，用最小浓度的1251标记抗原平衡，然后用抗Fab抗体包被的平板捕捉结合的抗原来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(Chen，et al.，(1999)J.Mol Biol293:865-881)。为了确定测定条件，用50mM碳酸钠(pH9.6)中的5 μ g/ml捕捉用抗Fab抗体(Cappel Labs)包被微量滴定板(Dynex)过夜，随后用PBS中的2%(w/v)牛血清清蛋白在室温(约23°C)封闭2-5小时。在非吸附平板(Nunc#269620)中，将IOOpM或26pM[125I]_抗原与连续稀释的目的Fab混合(例如与Presta et al., (1997)CancerRes.57:4593-4599中抗VEGF抗体，Fab-12的评估一致)。然后将目的Fab保温过夜；不过，保温可持续更长时间(例如65个小时)以保证达到平衡。此后，将混合物转移至捕捉板以进行室温保温(例如I小时)。然后除去溶液，并用含0.l%Tween?-20的PBS洗板8次。平板干燥后，加入150 μ I/孔闪烁液(MicroScint?_20; Packard),然后在TopCount伽马计数器(Packard)上对平板计数10分钟。选择各Fab给出小于或等于最大结合之20%的浓度用于竞争性结合测定法。依照另一实施方案，Kd或Kd值是通过表面等离振子共振测定法使用 BIAcore?-2000 或 BIAcore?-3000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ)在 25 °C 使用固定化抗原CM5芯片在约10个响应单位(RU)测量的。简而言之，依照供应商的说明书用盐酸N-乙基-N’-(3-二甲基氨基丙基)-碳化二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)活化羧甲基化右旋糖苷生物传感器芯片(CM5，BIAcore Inc.)。用IOmM乙酸钠pH4.8将抗原稀释至5 μ g/ml (约0.2 μ Μ)，然后以5 μ I/分钟的流速注入至获得约10个响应单位(RU)的偶联蛋白质。注入抗原后，注入IM乙醇胺以封闭未反应基团。为了进行动力学测量，在25°C以约25 μ I/分钟的流速注入在含0.05%Tween?-20的PBS(PBST)中两倍连续稀释的Fab(0.78nM至 500nM)。使用简单一对一朗格缪尔(Langmuir)结合模型(BIAcore?EvaluationSoftware version3.2)通过同时拟合结合和解离传感图计算结合速率(kon)和解离速率(koff)。平衡解离常数(Kd)以比率koff/kon计算。参见例如Chen, Y.，et al., (1999)J.Mol.Biol.293:865-881。如果根据上文表面等离振子共振测定法，结合速率超过106M-1S-1，那么结合速率可使用荧光淬灭技术来测定，即根据分光计诸如配备了断流装置的分光光度计(astop-flow equipped spectrophometer) (Aviv Instruments)或 8000 系列SLM-Aminco分光光度计(ThermoSpectronic)中用搅拌比色杯的测量,在存在浓度渐增的抗原的条件下，测量PBS，pH7.2中的20nM抗抗原抗体(Fab形式)在25°C的荧光发射强度(激发=295nm ;发射=340nm, 16nm带通)的升高或降低。
[0040]术语“抗体”和“免疫球蛋白”以最广义互换使用，包括单克隆抗体(例如全长或完整单克隆抗体)、多克隆抗体、多价抗体、多特异性抗体(例如双特异性抗体，只要它们展现出期望的生物学活性)，而且还可以包括某些抗体片段(如本文中更为详细描述的)。抗体可以是人的、人源化的和/或亲和力成熟的。
[0041]“分离的”抗体指已经鉴定且自其天然环境的一种成分分开和/或回收的抗体。其、天然环境的污染性成分指将会干扰该抗体的诊断或治疗用途的物质，可包括酶、激素、和其它蛋白质性质或非蛋白质性质的溶质。在优选的实施方案中，将抗体纯化至(I)根据Lowry法的测定，抗体重量超过95%，最优选重量超过99%，(2)足以通过使用转杯式测序仪获得至少15个残基的N-末端或内部氨基酸序列的程度，或(3)根据还原性或非还原性条件下的SDS-PAGE及使用考马斯蓝或优选银染色，达到同质。既然抗体天然环境的至少一种成分不会存在，那么分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体。然而，分离的抗体通常将通过至少一个纯化步骤来制备。
[0042]“可变的”指可变域中的某些部分在抗体序列间差异广泛且用于每种特定抗体对其特定抗原的结合和特异性的实情。然而，变异性并非均匀分布于抗体的整个可变域。它集中于轻链和重链可变域中称作互补决定区或高变区(CDR或HVR，在本文中可互换使用)的三个区段。可变域中较保守的部分称作框架区(FR)。天然重链和轻链的可变域各自包含四个FR，它们大多采取β_折叠片构象，通过形成环状连接且在有些情况中形成β_折叠片结构一部分的三个HVR连接。每条链中的HVR通过FR非常接近的保持在一起，并与另一条链的HVR —起促成抗体的抗原结合位点的形成(参见Kabat et al.，序列of Proteinsof Immunological Interest,第 5 版，National Institute of Health, Bethesda, MD.(1991))。恒定域不直接参与抗体与抗原的结合，但展现出多种效应器功能，诸如抗体依赖性细胞的(细胞)毒性中抗体的参与。
[0043]用木瓜蛋白酶消化抗体产生两个相同的抗原结合片段，称为“Fab”片段，各自具有一个抗原结合位点，及一个剩余的“Fe”片段，其名称反映了它易于结晶的能力。胃蛋白酶处理产生一个F (ab’)2片段，它具有两个抗原结合位点且仍能够交联抗原。
[0044]“Fv”是包含完整抗原识别和结合位点的最小抗体片段。在双链Fv种类中，此区由紧密、非共价结合的一个重链可变域和一个轻链可变域的二聚体组成。在单链Fv种类中，一个重链可变域和一个轻链可变域可以通过柔性肽接头共价相连，使得轻链和重链在与双链Fv种类类似的“二聚体”结构中相结合。正是在这种构造中，各可变域的三个HVR相互作用而在VH-VL 二聚体表面上确定了抗原结合位点。六个HVR共同赋予抗体以抗原结合特异性。然而，即使是单个可变域(或只包含对抗原特异的三个HVR的半个Fv)也具有识别和结合抗原的能力，只是亲和力低于完整结合位点。
[0045]Fab片段还包含轻链的恒定域和重链的第一恒定域(CHl)。Fab’片段与Fab片段的不同之处在于重链CHl结构域的羧基末端增加了少数残基，包括来自抗体铰链区的一个或多个半胱氨酸。Fab’ -SH是本文中对其中恒定域半胱氨酸残基携带游离硫醇基的Fab’的称谓。F (ab’)2抗体片段最初是作为在Fab’片段之间有铰链半胱氨酸的成对Fab’片段生成的。还知道抗体片段的其它化学偶联。
[0046]根据其恒定域的氨基酸序列，来自任何脊椎动物物种的抗体(免疫球蛋白)的“轻链”可归入两种截然不同的型中的一种，称作卡帕(K)和拉姆达(λ)。
[0047]根据其重链恒定域的氨基酸序列，免疫球蛋白可归入不同的类。免疫球蛋白有五大类:IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中有些可进一步分为亚类(同种型)，例如IgGU IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。将与不同类的免疫球蛋白对应的重链恒定域分别称作α、δ、ε、Y和μ。不同类的免疫球蛋白的亚基结构和三维构造是众所周知的。
[0048]“抗体片段”只包含完整抗体的一部分，其中所述部分优选保留该部分存在于完整抗体中时通常与之有关的至少一项、优选大多数或所有功能。抗体片段的例子包括Fab、Fab’、F(ab’)2和Fv片段；双抗体；线性抗体；单链抗体分子；及由抗体片段形成的多特异性抗体。在一个实施方案中，抗体片段包含完整抗体的抗原结合位点，如此保留结合抗原的能力。在另一个实施方案中，抗体片段，例如包含Fe区的抗体片段，保留通常与Fe区存在于完整抗体中时通常与之有关的至少一项生物学功能，诸如FcRn结合、抗体半衰期调控、ADCC功能和补体结合。在一个实施方案中，抗体片段是体内半衰期与完整抗体基本上相似的单价抗体。例如，这样的抗体片段可包含一个抗原结合臂且其与能够赋予该片段以体内稳定性的Fe序列相连。
[0049]术语“高变区”、“HVR”或“HV”在用于本文时指抗体可变域中序列上高度可变和/或形成结构上定义的环的区域。通常，抗体包含六个HVR:三个在VH中(H1、H2、H3)，三个在VL中(L1、L2、L3)。在天然抗体中，H3和L3展示这六个HVR的最大多样性，而且认为特别是H3在赋予抗体以精密特异性中发挥独特作用。参见例如Xu et al.,Immunityl3:37-45(2000);Johnson and Wu, in Methods in Molecular Biology248:1-25(Lo, ed., HumanPress, Totowa, NJ, 2003)。事实上，仅由重链组成的天然存在camelid抗体在缺乏轻链时是有功能的且稳定的。参见例如Hamers-Casterman et al., Nature363:446-448(1993);Sheriff et al., Nature Struct.Biol.3:733-736 (1996)。
[0050]本文中使用且涵盖许多HVR的叙述。Kabat互补决定区(OTR)是以序列变异性为基础的，而且是最常用的(Kabat et al.，序列 of Proteins of Immunological Interest, 5thEd.Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD.(1991))。Chothia 改为指结构环的位置(Chothia and Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。AbMHVR代表Kabat HVR与Chothia结构环之间的折衷，而且得到Oxford Molecular的AbM抗体建模软件的使用。“接触(contact)” HVR是以对可获得的复合物晶体结构的分析为基础的。下文记录了这些HVR中每一个的残基。
[0051]
【权利要求】
1.一种用于治疗人患者中的癌症的方法，包括施用抗EGFL7抗体，该方法包括以介于lmg/kg和15mg/kg之间的剂量施用该抗体。
2.一种用于治疗人患者中的癌症的方法，包括施用抗EGFL7抗体，该方法包括以选自下组的固定剂量施用该抗体:(a)每两周375-400mg和(b)每三周550_600mg。
3.权利要求2的方法，其中该固定剂量为每两周375-400mg。
4.权利要求2的方法，其中该固定剂量为每三周550-600mg。
5.一种用于治疗人患者中的癌症的方法，包括施用抗EGFL7抗体，该方法包括对该患者施用第一剂抗EGFL7抗体和对该患者施用第二剂抗EGFL7抗体，其中该第一剂和该第二剂均介于lmg/kg和15mg/kg之间且该第二剂在该第一剂之后1_4周。
6.权利要求5的方法,其中该第一剂和该第二剂均介于5mg/kg和7.5mg/kg之间且该第二剂在该第一剂之后2-3周。
7.权利要求6的方法,其中该第一剂和该第二剂均为5mg/kg且该第二剂在该第一剂之后2周。
8.权利要求6的方法,其中该第一剂和该第二剂均为7.5mg/kg且该第二剂在该第一剂之后3周。
9.权利要求1-8任一项的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含可变域，该可变域包含下述HVR序列:
(i)HVR-Ll，其包含 KASQSVDYS ⑶ SYMS (SEQ ID NO:1)；
(ii)HVR-L2，其包含GASYRES (SEQ ID NO:2)；
(iii)HVR-L3，其包含 QQNNEEPYT (SEQ ID NO:3)；
(iv)HVR-Hl，其包含 GHTFTTYGMS (SEQ ID NO:4)；
(V) HVR-H2，其包含 GWINTHSGVPTYADDFKG (SEQ ID NO:5);和
(vi) HVR-H3，其包含 LGSYAVDY (SEQ ID NO:6)。
10.权利要求9的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含下述重链可变区序列: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGHTFTTYGMSWVRQAPGKGLEWVGWINTHSGVPTYADDFKGRFTISLDNSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGSYAVDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:7)。
11.权利要求9的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含下述重链可变区序列: EIQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGHTFTTYGMSWVRQAPGKGLEWMGWINTHSGVPTYADDFKGRFTISLDNSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYFCARLGSYAVDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:8)。
12.权利要求9-11任一项的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含下述轻链可变区序列: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYS⑶SYMSWYQQKPGKAPKLLIYGASYRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQNNEEPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:9)。
13.权利要求1-8任一项的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含可变域，该可 变域包含下述HVR序列:
(i)HVR-Ll，其包含 RTSQSLVHINGITYLH (SEQ ID NO: 10)；
(ii)HVR-L2，其包含RVSNRFS (SEQ ID NO:11)；
(iii)HVR-L3，其包含GQSTHVPLT(SEQ ID NO:12)；
(iv)HVR-Hl，其包含 GYTFIDYYMN (SEQ ID NO:13)；
(v)HVR-H2，其包含⑶INLDNGGTHYNQKFKG(SEQID NO:14)；和
(vi)HVR-H3，其包含 AREGVYHDYDDYAMDY(SEQ ID NO:15)。
14.权利要求13的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含下述重链可变区序列: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFIDYYMNWVRQAPGKGLEWV⑶INLDNGGTHYNQKFKGRFTISRDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGVYHDYDDYAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:16)。
15.权利要求13或14的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含下述轻链可变区序列: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSLVHINGITYLHWYQQKPGKAPKLLIYRVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCGQSTHVPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:17)。
16.权利要求1-8任一项的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含可变域，该可 变域包含下述HVR序列:
(i)HVR-Ll，其包含 RTSQSLVHINAITYLH (SEQ ID NO: 18)；
(ii)HVR-L2，其包含RVSNRFS (SEQ ID NO:11)；
(iii)HVR-L3，其包含GQSTHVPLT(SEQ ID NO:12)；
(iv)HVR-Hl，其包含 GYTFIDYYMN (SEQ ID NO:13)；
(V) HVR-H2，其包含⑶INLDNSGTHYNQKFKG (SEQ ID NO:19)； 和
(vi)HVR-H3，其包含 AREGVYHDYDDYAMDY(SEQ ID NO:15)。
17.权利要求16的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含下述重链可变区序列: VQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFIDYYMNWVRQAPGKGLEWV⑶INLDNSGTHYNQKFKGRFTISRDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGVYHDYDDYAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:20)。
18.权利要求16或17的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含下述轻链可变区序列: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSLVHINAITYLHWYQQKPGKAPKLLIYRVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCGQSTHVPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:21)。
19.权利要求1-18任一项的方法，其中该抗体在10、20或30分钟的输注中施用。
20.权利要求1-19任一项的方法，其进一步包括施用另一种抗血管发生剂的步骤。
21.权利要求20的方法，其中该另一种抗血管发生剂是抗血管内皮生长因子(VEGF)拮抗剂。
22.权利要求21的方法，其中所述抗VEGF拮抗剂是抗VEGF抗体。
23.权利要求22的方法，其中所述抗VEGF抗体是贝伐单抗。
24.权利要求1-19任一项的方法，其中所述抗EGFL7抗体是双特异性抗体。
25.权利要求24的方法，其中所述双特异性抗体结合VEGF。
26.权利要求24的方法，其中所述双特异性抗体与贝伐单抗结合相同VEGF表位。
27.权利要求1-26任一项的方法，其中所述癌症选自下组:乳腺癌，白血病，鳞状细胞癌，小细胞肺癌，非小细胞肺癌，胃肠癌，胰腺癌，成胶质细胞瘤，宫颈癌，卵巢癌，肝癌，膀胱癌，肝瘤，结肠癌，结肠直肠癌，子宫内膜癌，唾液腺癌，肾癌，肝癌，前列腺癌，外阴癌，甲状腺癌，肝癌瘤和各种类型的头和颈癌。
28.权利要求27的方法，其中所述癌症是乳腺癌、NSCLC或CRC。
29.权利要求1-28任一项的方法，其进一步包括施用有效量的化疗剂。
30.一种制品，其包括容器、该容器内的组合物、和标签或包装插页，该组合物包含抗EGFL7抗体,该标签或包装插页印有以介于lmg/kg和15mg/kg之间的剂量施用该抗体的用法说明书。
31.一种制品，其包括容器、该容器内的组合物、和标签或包装插页，该组合物包含抗EGFL7抗体，该标签或包装插页印有对患者施用第一剂抗EGFL7抗体和对患者施用第二剂抗EGFL7抗体的用法说明书,其中该第一剂和该第二剂均介于lmg/kg和15mg/kg之间，且该第二剂在该第一剂之后1-4周。
32.权利要求31的制品,其中该第一剂和该第二剂均介于5mg/kg和7.5mg/kg之间且该第二剂在该第一剂之后2-3周。
33.权利要求32的制品，其中该第一剂和该第二剂均为5mg/kg且该第二剂在该第一剂之后2周。
34.权利要求32的制品，其中该第一剂和该第二剂均为7.5mg/kg且该第二剂在该第一剂之后3周。
35.一种制品，其包括容器、该容器内的组合物、和标签或包装插页，该组合物包含抗EGFL7抗体，该标签或包装插页印有以选自下组的固定剂量施用该抗体的用法说明书:(a)每两周 375_400mg 和(b)每三周 550_600mg。
36.权利要求35的 制品，其中该固定剂量为每两周375-400mg。
37.权利要求35的制品，其中该固定剂量为每三周550-600mg。
38.一种用于治疗人患者中的NSCLC的方法，其包括剂量给药方案，该剂量给药方案包含多个治疗周期，其中每个周期的第I天对该患者施用200mg/m2帕利他赛、卡钼(AUC6mg/ml min)、15mg/kg贝伐单抗、和600mg抗EGFL7抗体,每21天重复每个周期。
39.权利要求38的方法，其中施用帕利他赛和卡钼直至疾病进展或长达6个周期。
40.权利要求38的方法，其中施用贝伐单抗和抗EGFL7抗体直至疾病进展或长达34个周期。
41.一种用于治疗人患者中的结肠直肠癌的方法，其包括剂量给药方案，该剂量给药方案包含多个治疗周期，其中第一个周期的第I天对该患者施用85mg/m2奥沙利钼、400mg/m25-氟尿卩密唳(5-FU)、400mg/m2亚叶酸、5mg/kg贝伐单抗、和400mg抗EGFL7抗体,且其中每个后续周期的第I天对该患者施用85mg/m2奥沙利钼、2400mg/m25-FU、400mg/m2亚叶酸、5mg/kg贝伐单抗、和400mg抗EGFL7抗体,每14天重复每个周期。
42.权利要求41的方法，其中施用奥沙利钼长达8个周期。
43.权利要求41的方法，其中施用5-FU、亚叶酸、贝伐单抗和抗EGFL7抗体直至疾病进展或长达52个周期。
44.权利要求38-43任一项的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含可变域，该可变域包含下述HVR序列:
(i)HVR-Ll，其包含 KASQSVDYSGDSYMS (SEQ ID NO:1)；
(ii)HVR-L2，其包含GASYRES (SEQ ID NO:2)；
(iii)HVR-L3，其包含 QQNNEEPYT (SEQ ID NO:3)；
(iv)HVR-Hl，其包含 GHTFTTYGMS (SEQ ID NO:4)；
(V) HVR-H2，其包含 GWINTHSGVPTYADDFKG (SEQ ID NO:5);和
(vi) HVR-H3，其包含 LGSYAVDY (SEQ ID NO:6)。
45.权利要求44的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含下述重链可变区序列: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGHTFTTYGMSWVRQAPGKGLEWVGWINTHSGVPTYADDFKGRFTISLDNSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARLGSYAVDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:7)。
46.权利要求44的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含下述重链可变区序列: EIQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGHTFTTYGMSWVRQAPGKGLEWMGWINTHSGVPTYADDFKGRFTISLDNSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYFCARLGSYAVDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:8)。
47.权利要求44-46任一项的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含下述轻链可变区序列: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCKASQSVDYS⑶SYMSWYQQKPGKAPKLLIYGASYRESGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQNNEEPYTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:9)。
48.权利要求38-43任一项的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含可变域，该可变域包含下述HVR序列:
(i)HVR-Ll，其包含 RTSQSLVHINGITYLH (SEQ ID NO:10)；
(ii)HVR-L2，其包含RVSNRFS (SEQ ID NO:11)；
(iii)HVR-L3，其包含GQSTHVPLT(SEQ ID NO:12)；
(iv)HVR-Hl，其包含 GYTFIDYYMN (SEQ ID NO:13)；
(v)HVR-H2，其包含⑶INLDNGGTHYNQKFKG(SEQID NO:14)； 和
(vi)HVR-H3，其包含 AREGVYHDYDDYAMDY (SEQ ID NO: 15)。
49.权利要求48的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含下述重链可变区序列: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFIDYYMNWVRQAPGKGLEWV⑶INLDNGGTHYNQKFKGRFTISRDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGVYHDYDDYAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:16)。
50.权利要求48或49的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含下述轻链可变区序列: DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRTSQSLVHINGITYLHWYQQKPGKAPKLLIYRVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCGQSTHVPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:17)。
51.权利要求38-43任一项的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含可变域，该可变域包含下述HVR序列:
(i)HVR-Ll，其包含 RTSQSLVHINAITYLH (SEQ ID NO:18)；
(ii)HVR-L2，其包含RVSNRFS (SEQ ID NO:11)；
(iii)HVR-L3，其包含GQSTHVPLT(SEQ ID NO:12)；
(iv)HVR-Hl，其包含 GYTFIDYYMN (SEQ ID NO:13)；
(V) HVR-H2，其包含⑶INLDNSGTHYNQKFKG (SEQ ID NO:19)； 和
(vi)HVR-H3，其包含 AREGVYHDYDDYAMDY (SEQ ID NO:15)。
52.权利要求51的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含下述重链可变区序列: EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFIDYYMNWVRQAPGKGLEWVGDINLDNSGTHYNQKFKGRFTISRDKSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGVYHDYDDYAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:20)。
53.权利要求51或52的方法，其中所述抗EGFL7抗体包含下述轻链可变区序列: DIQMTQSPSSLSASV⑶RVTITCRTSQSLVHINAITYLHWYQQKPGKAPKLLIYRVSNRFSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCGQSTHVPLTFGQGTKVEIKR(SEQ ID NO:21)。
【文档编号】A61P35/00GK103476430SQ201280015110
【公开日】2013年12月25日 申请日期:2012年2月1日 优先权日:2011年2月2日
【发明者】S.白, D.S.陈, R.方克, P.赫格德, L.瑙莫夫斯基 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司