治疗人类乳头状瘤病毒相关癌症的化合物的制作方法
【专利摘要】本发明涉及用于治疗人类乳头状瘤病毒相关癌症的以式(I)的化合物表示的取代有黄酮衍生物的吡咯烷，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或非对映异构体。本发明还涉及用于治疗人类乳头状瘤病毒相关癌症的包含式(I)的化合物的药学组合物。
【专利说明】治疗人类乳头状瘤病毒相关癌症的化合物
【技术领域】[0001] 本发明涉及用于治疗人类乳头状瘤病毒相关癌症(HPV)用途的以式(I)的化合物(如同本文所述)表示的取代有黄酮衍生物的吡咯烷，或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或非对映异构体。本发明还涉及用于治疗人类乳头状瘤病毒相关癌症的包含式
[1]的化合物的药学组合物。
【背景技术】
[0002]人类乳头状瘤病毒(HPV)为感染鳞状上皮细胞的圆形、无包膜的dsDNA病毒。HPV通常经由皮肤的破裂处进入身体，然后感染皮肤层的细胞。HPV经由皮肤-皮肤接触而传播。HPV感染可经由伤口或经由与受感染者的性行为而获得。其包括亲吻或接触受感染区域的皮肤以及性交。带有生殖器HPV感染的母亲也可能在分娩期间传播病毒给婴儿。
[0003]HPV是多于120种相关病毒的组，已知其中33%感染生殖道(Microbiology andMolecular Biology Reviews, 2004，68 (2): 362-372)。某些类型的人类乳头状瘤病毒能够将正常细胞转变为可能继续形成癌症的非正常细胞。因此，这些病毒被分类为高风险类型与低风险类型。高风险HPV与癌症相关。生殖器HPV感染非常普遍并可能导致生殖器癌症。高风险HPV的持续性感染为子宫颈癌的首要原因。HPV感染也导致肛门癌、阴门癌、阴道癌以及阴茎癌(Int.J.Cancer, 2006，118(12):3030 - 44)。高风险亚型为 HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66 以及 68，最常见的为 HPV16、18、31、33 以及 45。进一步地，HPV的数个类型，特别是第16型，已被发现与HPV阳性口咽癌(头颈部癌的一种形式)相关(N.Engl.J.Med.，2007，356 (19): 1944 - 56)。
[0004]高风险HPV产生两肿瘤蛋白(oncoprotein)E6以及E7，其对于病毒复制为必需的。在人类的HPV感染期间，HPV E6蛋白质结合肿瘤抑制因子p53，并且经由降低细胞进行细胞凋亡的能力的泛素(ubiquitin)介导途径而促进肿瘤抑制因子p53的降解。HPVE7蛋白质结合并且降解视网膜母细胞瘤蛋白(PRb)，其避免它抑制转录因子E2F，这造成细胞周期调控的丧失。
[0005]据估计，HPV占全世界所有癌症的约 5%(Int.J.Cancer, 2006, 118(12):3030 - 3044)。
[0006]子宫颈癌为在全世界女性中第二普遍的癌症。约86%的病例发生于发展中国家。子宫颈癌占女性中发生的癌症的13%(World:Human Pappilomavirus and relatedcancers, summary report, November2010)。
[0007]持续性人类乳头状瘤病毒(HPV)感染现在被确认是基本上所有子宫颈癌的肇因。根据美国癌症协会(American Cancer Society)，2010年在美国约有12，000名女性诊断为此类型的癌症，并且超过4，000名将因此死亡。全世界每年近五十万名女人性诊断出子宫颈癌，每年夺去二十五万条生命。
[0008]外阴癌以及阴道癌分别占所有妇科癌症的约3至5%以及1-2%,阴莖癌占全美国所有癌症的约0.2%。仅管它们的低频繁性，但因为其对性行为的显著影响，外阴部、阴道以及阴茎癌仍然为重要的疾病。虽然没有单一致病因子，但与HPV感染有强烈的相关性。HPV被认为是约40%阴茎癌的原因。许多研究已显示在阴茎癌中HPV第16与第18型的存在(Hum.Pathol.，1991，22:908-913)。HPV 也为 65% 的阴道癌(InternationalJournal of Cancer, 2009，124(7): 1626 - 1636)以及 50% 的阴门癌(Vaccine, 2006，24 (suppl3):S11 -S25)的原因，并且HPV-16在此两种癌症的HPV阳性病例中占大多数(Obstet.Gynecol.，2009，113(4):917-24)。
[0009]HPV感染也与肛门癌相关。据估计每年美国在女性中确诊出约1，600个新病例，在男性中确诊出约900个新病例的HPV相关的肛门癌。一般来说，HPV被认为占了肛门癌的约90%(International Journal of Cancer, 2009, 124(7): 1626 - 1636)。值得注意的是HPV16似乎占了肛门癌的大部分。根据研究，在所评估的肛门癌样本中84%测得有HPV16 (NewEngland Journal of Medicine, 1997, 337(19):1350-8)。
[0010]头颈部癌通常指头颈部的鳞状细胞癌。头颈部癌占了美国所有癌症的约3%(ACancer Journal for Clinicians, 2010，60 (5): 277 - 300)。头颈部癌通过其开始的区域而被确认。它们通常分类为:口腔癌、唾液腺癌、鼻窦癌、鼻腔癌、咽喉癌、鼻咽癌、口咽癌、咽下部癌、喉头癌以及颈部上部的淋巴结癌。口腔癌(舌头的前三分的二、牙龈、颊黏膜、舌下口的底部、硬颚以及智齿后方的小区域)以及口咽癌(软颚、舌根以及扁桃腺)为最常见的由HPV引起的癌症类型。研究已显示口咽癌的约60%由HPV引起(CancerEpidemiology, Biom arkers and Prevention, 2005, 14 (2): 467 - 475)，特别是 HPV16,其为一些头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)的致病因子。
[0011]HPV也已与肺癌相关。根据已发表的文章，在肺癌中HPV的发生率为24.5%(LungCancer, 2009, 65:13-18)。在中国进行的研究显示与HPV阴性族群相比，在HPV阳性族群中肺部鳞状细胞癌的风险高出3.5倍，并且带有阳性HPV-16的患者较阴性HPV-16者为高出
16.9 倍(Oncol.Rep.，2009，21 (6):1627-32)。
[0012]人类乳头状瘤病毒的作用也在多种其它恶性肿瘤中被提出，特别是在全世界白皮肤人口中最常见的非黑色素瘤皮肤癌。皮肤癌很少是致命的并且在所有癌症死亡中不到1%。然而，其对公共健康的影响仍然是相当大的。HPV在人类皮肤癌的相关性首先于罕见遗传疾病抚状表皮发育障碍(epidermodysplasia verruciformis)的患者中被证实(Journalof National Cancer Institute Monographs, 2003，N0.31)。
[0013]HPV也与10%至80%的结膜的上皮内肿瘤形成(intraepithelial neoplasia)相关，以及与62-100%的结膜、眼睑以及泪囊的侵袭性癌相关(IARC Monographs，64:130)。HPV与结膜乳头状瘤(conjunctival papilloma)之间有强烈的相关性。HPV第6/11型为结膜乳头状瘤中最常见的HPV类型(Br.J.0phthalmol.，2001, 85:785-787)。
[0014]HPV6U1以及13通常被标记为低风险的，因为这些类型的感染具有低致癌潜力并且通常导致例如生殖器抚(技术上称为尖性湿抚(condylomata acuminata))的良性病变的生成以及子宫颈轻度发育异常(mild dysplasia of the cervix), HPV6以及11也与结膜乳头状瘤相关。
[0015]尽管生殖器HPV感染的高发生率以及其与恶性肿瘤疾病的相关性，却没有针对HPV感染的有效的抗病毒疗法。Gardasil?以及Cervarix?为现今市场上对最常见的高风险HPV(HPV16与18)的两个疫苗。然而，它们仅为预防性的类型并且不治疗存在的HPV相关的癌症。此外，高昂的花费、社会接受度的问题以及提供疫苗的卫生保健系统中的局限性限制了此疫苗对于女性的可得性，特别是在最常发现HPV相关的会阴癌(anogenital cancer,与肛门与生殖器相关)的发展中国家中尤其如此。因此仍然需要鉴别其它较廉价且更普遍可得的预防和/或治疗HPV相关的癌症的方法。
[0016]发明人已惊人地发现取代有黄酮衍生物的吡咯烷对HPV相关的癌症是有效的。
[0017]本文所描述的发明提供由式(I)(如同本文所述)表示的取代有黄酮衍生物的吡咯烷，以用于治疗人类乳头状瘤病毒相关的癌症。
【发明内容】
[0018]根据本发明的一方面，提供了式(I)的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或非对映异构体在治疗人类乳头状瘤病毒相关的癌症中的应用。
[0019]根据本发明的另一方面，提供了式(I)的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或非对映异构体在治疗HPV相关的癌症中的应用，其中该癌症为肛门癌、阴门癌、阴道癌、阴莖癌、子宫颈癌、头颈部癌(例如口咽癌以及口腔癌)、肺癌、非黑色素瘤皮肤癌或结膜癌。
[0020]根据本发明的又另一方面，提供了式⑴的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或非对映异构体在治疗子宫颈癌中的应用。
[0021]根据本发明的另一方面，提供了人类乳头状瘤病毒相关的癌症的治疗方法，所述方法包含将治疗有效量的式(I)的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或非对映异构体施用于有需要的受试者。
[0022]根据本发明的另一方面，提供了在受试者与HPV相关的癌症的治疗方法，其中该癌症选自肛门癌、阴门癌、阴道癌、阴莖癌、子宫颈癌、头颈部癌(例如口咽癌以及口腔癌)、肺癌、非黑色素瘤皮肤癌或结膜癌，所述方法包含将治疗有效量的式(I)的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或非对映异构体施用于有需要的受试者。
[0023]根据本发明的又另一方面，提供了子宫颈癌的治疗方法，所述方法包含将治疗有效量的式(I)的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或非对映异构体施用于有需要的受试者。
[0024]根据本发明的另一方面，提供了药学组合物，所述组合物包含治疗有效量的式(I)的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或非对映异构体，以及药学上可接受的载体，所述组合物用于与HPV相关的癌症的治疗。
[0025]根据本发明的另一方面，提供了药物的制造方法，所述药物包含对与HPV相相关的癌症的治疗有用的式(I)的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或非对映异构体。
[0026]本发明的其它方面与进一步可实行性的范围将通过下列的详细描述而变得明显。【专利附图】
【附图说明】
[0027]图1A图示出显示在以化合物A与化合物B处理的细胞中p53显著的上调(upregulation)的蛋白质印记复制图。
[0028]图1B图示出显示在以化合物A与化合物B处理的SiHa细胞中E6与E7表达显著的下调(downregulation)的蛋白质印记复制图。
[0029]图2图示出显示以化合物A与化合物B处理的SiHa以及HeLa细胞中E6与E7表达在转录水平显著下调的RT-PCR复制图。
[0030]图 3A 为在 SiHa 细胞中 p53 - EGFP 核易位(nuclear translocation)的图不。
[0031]图3B为在HeLa细胞中p53 - EGFP核易位的图示。
[0032]图4为在化合物A的施用后在SiHa异种移植动物中肿瘤生长概况的图示。
[0033]图5为于化合物B的施用后在SiHa异种移植动物中肿瘤生长概况的图示。
【具体实施方式】
[0034]上文与下文所使用的一般术语除非另外指明，优选在此公开内容的上下文中具有下列意义。因此，本发明的上下文所用的一般术语的定义提供于下:
[0035]除非上下文中另外清楚指明，单数形式“一个”、“一种”以及“所述”包括复数指代。
[0036]将会被理解的是取代(substitution) ”或“取代…有(substituted with) ”包括隐含的条件，即此类取代根据被取代的原子以及取代基的许可价态，以及其表示稳定的化合物，其不轻易发生例如 重排(rearrangement)、环化(cyclization)、消除(elimination)等的转变。
[0037]术语“Q-C；烷基”意指饱和脂肪族的基团，其包括包含I至4个碳原子的直链或支链。烷基基团的实例包括但不限于甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基
坐寸o
[0038]术语"C1-C4烷氧基”意指经由氧连结连接至分子的其它部分的如同上述定义的烷基基团。烷氧基的实例包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、叔丁氧基等。
[0039]术语“卤素”意指氟、氯、溴以及碘。
[0040]如同本文中所使用的术语“羟基(hydroxy或hydroxyl) ”意指-OH基团。
[0041]如同本文中所使用的术语“治疗有效量”意指由式(I)所表示的化合物、其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或非对映异构体的这样的量:其在被施用于需要此类治疗的受试者时，所述量足以抑制人类乳头状瘤病毒(HPV)的活性，从而减少、治疗或缓解经由HPV介导的疾病。
[0042]如同本文中所使用的术语“HPV”或“人类乳头状瘤病毒”意指能够感染哺乳动物的乳头状瘤病毒家族的病毒成员。除非另外指明，该术语包括高风险类型以及低风险类型HPV。
[0043]如同本文中所使用的术语“受试者(subject) ”意指对由HPV介导的疾病治疗有需要的动物，其优选为哺乳动物，最优选为人类。在本发明的上下文中该术语受试者可与术语患者(patient)互换使用。
[0044]如同本文中所使用的术语“哺乳动物”意图包含容易受到人类乳头状瘤病毒的感染的人类，以及非人类的哺乳动物。非人类的哺乳动物包括但不限于家畜，例如牛、猪、马、狗、猫、兔、大鼠以及小鼠，以及非家畜动物。
[0045]关于在受试者(优选为哺乳动物，更优选为人类)中的HPV相关的癌症的术语“治疗(treat或treatment) ”或“治疗的(treated) ”包括:(i)癌症的抑制，即阻止癌症的发展；(ii)降低癌症的回弹或减缓癌症；(iii)癌症的改善，即，降低相关于癌症的症状的严重性；(iv)在一定程度上地减轻与癌症相关的一种或多种症状。
[0046]如同本文中所使用的，术语“药学上可接受的”指的是必须兼容于该配方的其它成分的载体、稀释剂、赋形剂及/或盐，并且对其接受者是没有害的。“药学上可接受的”也指组合物或剂型在健全的医疗判断的范围内，其适用于动物或人类而无过量的毒性、刺激性、过敏反应或其它问题或并发症，这符合合理的利益/风险比率。
[0047]本发明另包含式⑴的化合物的所有溶剂化物，例如水合物，以及伴随结晶作用的其它溶剂形成的溶剂化物，例如醇、醚、醋酸乙酯、二噁烷、二甲基甲酰胺或低级烷基酮，例如丙酮，或其混合物。本发明的某些化合物可以非溶剂化以及溶剂化的形式存在，其包括水合形式。本发明的某些化合物可以以多种结晶或非结晶(amorphous)形式存在。一般而言，所有物理形式对于本发明所设想的应用是等同的，并且处于本发明的范围内。
[0048]术语“p53”意指作为肿瘤抑制因子的核磷酸化蛋白质。
[0049]术语“pRb”或“视网膜母细胞瘤(retinoblastoma)蛋白”意指在许多类型的癌症中功能异常的肿瘤抑制因子蛋白质。
[0050]术语“下调”意指部分地或全部地降低所指的活性或表达。在本发明的上下文中，该术语“癌蛋白E6与E7的下调”意指E6与E7各自表达水平的降低。该水平可经由本领域任何适合的方法测定，其包括蛋白质印记测试。
[0051]术语“P53的上调”意指肿瘤抑制因子蛋白53的表达水平的增加。
[0052]术语“衰老(senescence) ”意指细胞丧失其分裂能力的阶段。
[0053]术语“细胞凋亡(apoptosis) ”意指程序性细胞死亡的自然程序。此为自我破坏的过程，其中细胞使用特化的细胞机制以杀死自己。细胞分解为膜结合的颗粒，其接着经由吞噬作用被消除。细胞凋亡为使多细胞动物能够控制细胞数目并且消灭威胁动物生存的细胞的机制。
[0054]术语“转录”意指产生DNA序列的互补RNA拷贝的过程。
[0055]术语“细胞周期停滞(cell cycle arrest) ”意指在正常阶段(G1、S、G2、M)中的一个阶段期间停止通过细胞周期的进展的调控程序。
[0056]具有抗癌活性的化合物意指能够抑制细胞增殖或能够诱发细胞死亡的物质。适合用于本发明的组合物的抗癌剂的非限制性实例包括(i)微管破坏剂，例如紫杉烷类(taxane)以及紫杉醇(paclitaxel), (ii)激酶抑制剂,例如伊马替尼(imatinib)、厄洛替尼(erlotinib)以及 BAY-43-9006, (iii)mTOR 抑制剂，例如雷帕霉素(rapamycin),(iv)抗肿瘤药物，例如卡钼(carboplatin)、顺钼、奥沙利钼(oxaliplatin)、批喃葡醣苷(etoposide)以及氮烯咪胺(Dacarbazine),以及(V)拓朴异构酶抑制剂，例如拓扑替康(topotecan)以及伊立替康(irinotecan), (vi)抗代谢药物,例如阿糖胞苷(cytarabine)、氟尿嘧唳(fIuorouracil)、吉西他滨(gemcitabine)、拓扑替康、羟基脲(Hydroxyurea)、硫鸟嘌呤(Thioguanine)、甲胺喋呤(Methotrexate), (vii)抗生素,例如细胞毒性剂艾霉素(doxorubicin)、博来霉素(bleomycin)以及放线菌素(dactinomycin)。
[0057]根据本发明的一方面，提供了用于治疗HPV相关的癌症的式(I)的化合物或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或非对映异构体，
[0058]
【权利要求】
1.一种用于治疗人类乳头状瘤病毒(HPV)相关癌症用途的式(I)的化合物；或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或非对映立体异构体；
2.如权利要求1所述用途的式⑴的化合物，其中，Ar是取代有1、2或3个相同或不同的取代基的苯基，所述1、2或3个相同或不同的取代基选自氯、溴、氟、碘、C1-C4-烷基和三氟甲基。
3.如权利要求1或2所述用途的式(I)的化合物，其中，Ar是取代有氯的苯基。
4.如权利要求1或2所述用途的式(I)的化合物，其中，Ar是取代有氯和三氟甲基的苯基。
5.如权利要求1所述用途的式(I)的化合物，其中，所述式(I)的化合物是以式(IA)表示的(+)_反式异构体，或其药学上可接受的盐或溶剂化物；
6.如权利要求5所述用途的式(IA)的化合物，其中，所述式(IA)的化合物为(+)_反式-2- (2-氯-苯基)-5，7- 二羟基-8- (2-羟基-甲基-1-甲基-吡咯烷-3-基)-苯并吡喃-4-酮盐酸盐(化合物A)。
7.如权利要求5所述用途的式(IA)的化合物，其中，所述式(IA)的化合物为(+)_反式-3- [2 [ (2-氯-4-三氟甲基-苯基)-5，7- 二羟基-8- (2-羟基-甲基-1-甲基-吡咯烧-3-基)-苯并批喃-4-酮盐酸盐(化合物B)。
8.如权利要求1至7中任一项所述用途的式⑴的化合物，其中，所述HPV相关的癌症选自肛门癌、阴门癌、阴道癌、阴莖癌、子宫颈癌、口咽癌、口腔癌、肺癌、非黑色素瘤皮肤癌以及结膜癌。
9.如权利要求8所述用途的式(I)的化合物，其中，所述HPV相关的癌症为子宫颈癌。
10.一种用于治疗HPV相关的癌症的药学组合物，所述药学组合物包含治疗有效量的权利要求1至第7项中任一项所述的化合物、或其药学上可接受的盐、溶剂化物、立体异构体或非对映立体异构体，以及药学上可接受的载体。
11.如权利要求10所述用途的药学组合物，所述药学组合物还包含至少一种另外的药学上具有活性的化合物 ，其中所述药物活性化合物具有抗癌活性。
【文档编号】A61P35/00GK103648588SQ201280030845
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2012年6月22日 优先权日:2011年6月24日
【发明者】S·A·皮拉玛, M·帕蒂伽鲁, V·R·阿嘎沃尔, G·A·德什潘德 申请人:皮拉马尔企业有限公司