Bcma和cd3的结合分子的制作方法

Bcma和cd3的结合分子的制作方法
【专利摘要】本发明涉及包含第一和第二结合结构域的至少双特异性的结合分子，其中第一结合结构域能够结合至BCMA的表位簇3，且第二结合结构域能够结合至T细胞CD3受体复合物。此外，本发明提供编码所述结合分子的核酸序列，包含所述核酸序列的载体以及用所述载体转化或转染的宿主细胞。更进一步地，本发明提供用于生产本发明所述结合分子的方法，所述结合分子的医学用途以及包含所述结合分子的试剂盒。
【专利说明】BCMA和CD3的结合分子 【技术领域】
[〇〇〇1] 本发明涉及包含第一和第二结合结构域的至少双特异性的结合分子，其中第一结 合结构域能够与BCMA的表位簇3结合，且第二结合结构域能够与T细胞CD3受体复合物结 合。此外，本发明提供编码所述结合分子的核酸序列，包含所述核酸序列的载体以及用所述 载体转化或转染的宿主细胞。更进一步地，本发明提供生产本发明所述结合分子的方法，所 述结合分子的医学用途以及包含所述结合分子的试剂盒。 【背景技术】
[0002] BCMA(B-细胞成熟抗原，TNFRSF17, CD269)是一种属于TNF受体超家族的跨膜蛋 白。BCMA最初报道为人成熟B淋巴细胞的高尔基体内的整合膜蛋白，S卩，作为细胞内蛋白 (Gras 等，（1995) International Immunol 7(7) :1093-1105)，其表明 BCMA 看起来在 B-细 胞发育和稳态中具有重要作用。Gras等的发现可能与这样的事实有关，即Gras等描述的 BCMA蛋白由于染色体易位是一种BCMA与IL-2之间的融合蛋白。同时，由于其与也称为 TALL-1或TNFSF13B的配体BAFF(B细胞活化因子）和APRIL (增殖诱导配体）推测的必须 相互作用，BCMA也被设定为对B-细胞的发育和稳态所必须的B-细胞标记物（Schliemann 等，（2001) Science293 (5537) :2111-2114)。
[0003] BCMA的表达限于B-细胞谱系且主要存在于浆细胞和浆母细胞上，并在一定程度 上存在于记忆B-细胞上，但是实际上不存在于外周和纯真B-细胞上。BCMA也在多发性骨 髓瘤（MM)细胞上表达。BCMA与其家族成员跨膜激活剂及亲环蛋白配体作用因子（TACI)和 TNF家族受体（BAFF-R)的B细胞活化因子一起调节体液免疫、B-细胞发育和稳态的不同方 面。BCMA的表达出现在B-细胞分化作用的较后期并有利于浆母细胞和浆细胞在骨髓中的 长期存活。小鼠中BCMA基因的靶向缺失不会影响成熟B-细胞的产生、体液免疫应答的质 量和幅度、生发中心的形成以及短暂寿命的浆细胞的生成。然而，这种小鼠骨髓中长寿命浆 细胞的数量显著降低，这表明了 BCMA对其存活的重要性（O' Connor等，2004)。
[0004] 根据这一发现，BCMA也支持多发性骨髓瘤（MM)细胞的生长和存活。Novak等发现 MM细胞系和最新分离的MM细胞在其细胞表面表达BCMA和TACI蛋白并且在其细胞表面具 有 BAFF-R 蛋白的可变表达（Novak 等，（2004)Bloodl03(2) :689-694)。
[0005] 多发性骨髓瘤（MM)是第二大常见恶性血液病且其占所有癌症死亡例的2%。MM 是一种异质性疾病并且多数是由t(ll ;14)、t(4 ;14)、t(8 ;14)、del(13)、del(17)(除其 他外）的染色体易位引起的（Drach 等，（1998)Blood92(3) :802-809 ;Gertz 等，（2005) Bloodl06 (8) :2837-2840 ;Facon 等·，（2001) Blood97 (6) :1566-1571)。MM 受累患者可能经 历因骨髓浸润、骨质破坏、肾衰竭、免疫缺陷以及癌症诊断的心理负担而经历多种与疾病相 关的症状。截至2006年，MM的5年相对生存率约为34%，这表明MM是一种至今无治愈先 例的难以治疗的疾病。
[0006] 令人振奋的新疗法，如化疗和干细胞移植的方法，已可供使用并且其能提高生存 率，但是常常伴有有害的副作用，因此MM仍然难以治疗（Lee等，（2004) J Natl Compr Cane Netw8 (4) :379-383)。迄今为止，对于多发性骨髓瘤患者而言两种最常用的治疗选择是类固 醇、沙利度胺、来那度胺、硼替佐米或多种细胞毒素试剂的组合，和对于较年轻的患者采用 高剂量化疗理念配合自体干细胞移植。
[0007] 多数的移植为自体型，即使用患者自身的细胞。这种移植，尽管不具有治愈性，但 其显示延长选定患者的生命。其可在新诊断的患者中作为初始疗法或在复发时进行。有时 为了适当的控制疾病，可能会建议选定患者采用一种以上的移植。
[0008] 用于治疗该疾病的化疗试剂是环磷酰胺、多柔比星、长春新碱和美法仑，与免疫调 节剂如沙利度胺（Thalomid? )、来那度胺（Revlimid? )、硼替佐米（Velcade? )和 皮质类固醇（如地塞米松）的组合疗法已经成为用于治疗新确诊患者和化疗或移植失败的 疾病晚期患者中骨髓瘤的重要选择。
[0009] 目前所用疗法通常是非治愈性的。因为高龄、其它严重疾病的存在或其它身体上 的限制，干细胞移植可能不是用于多数患者的选择。化疗仅能部分控制多发性骨髓瘤，且极 少达到完全缓解。因此，迫切需要新的创新疗法。
[0010] Bellucci等（Blood，2005 ;105(10))在已接受供者淋巴细胞输注（DLI)的多发 性骨髓瘤患者中鉴别出了 BCMA-特异性抗体。这些患者的血清能够介导由ADCC和CDC对 BCMA-特异性细胞裂解并且仅在具有抗肿瘤应答的患者中检测到（4/9)，而未在非应答患 者中检测到（0/6)。作者推测，BCMA-特异性抗体的诱导作用有利于消除骨髓瘤细胞的消除 和患者的长期缓解。
[0011] Ryan 等（Mol. Cancer Ther. 2007 ;6 (11))报道了 一 种拮抗型 BCMA-特异性抗 体的产生，其阻止与在正常和恶性B-细胞中强效促存活信号转导通路有关的NF- κ B活 化。另外，该抗体在体外给多发性骨髓瘤细胞系赋予强效的抗体依赖细胞介导的细胞毒性 (ADCC)，这由Fc-工程化显著增强。
[0012] 在对抗血源性肿瘤或自身免疫性障碍方面的其它方法专注于BAFF和APRIL(即 TNF配体超家族的配体）与其由BAFF和/或APRIL活化的受体TACI、BAFF-R和BCMA之间 的相互作用。例如，通过将人免疫球蛋白的Fc-结构域与Zymogenetics公司的TACI融合 产生了阿塞西普（TACI-Ig)，来中和这两种配体并阻止受体的活化。阿塞西普目前正处于 用于治疗系统性红斑狼疮（SLE，第III期）多发性硬化症（MS，第II期）及类风湿性关节 炎（RA，第II期）的临床试验中，以及处于用于治疗B细胞恶性肿瘤慢性淋巴细胞白血病 (CLL)、非霍奇金氏淋巴瘤（NHL)及MM的第I期临床试验中。在临床前研究中，阿塞西普在 体外（Moreaux 等，Blood，2004,103)和体内（Yaccoby 等，Leukemia，2008, 22,406-13)降低 了初始丽细胞和丽细胞系的生长和存活，这表明了 TACI配体对于丽细胞的相关性。由于 多数MM细胞及其衍生的细胞系都表达BCMA和TACI，两者的受体可能有利于配体介导的生 长与存活。这些数据表明，对BCMA和TACI的拮抗作用可能有益于浆细胞障碍的治疗。另 夕卜，已经描述了与TACI交叉反应的BCMA-特异性抗体（W002/066516)。
[0013] 人类基因组科学公司和葛兰素史克已经开发出一种称为贝利木单抗的靶向BAFF 的抗体。贝利木单抗阻断可溶性BAFF与其受体BAFF-R、BCMA及TACI在B细胞上的结合。 贝利木单抗不直接结合B细胞，但是通过结合BAFF，贝利木单抗抑制包括自体反应性B细胞 的B细胞的存活，并减少B细胞分化为产生免疫球蛋白的浆细胞。
[0014] 然而，尽管存在BCMA、BAFF-R和TACI (即属于TNF受体超家族的B细胞受体）及 其配体BAFF和APRIL服从在对抗癌症和/或自身免疫性障碍中的治疗方案这一事实，仍然 需要具有用于治疗这种医学病症的其它可用选择。
【发明内容】

[0015] 因此，本文提供了一种结合分子形式的用于解决这一问题的手段和方法，该结合 分子为至少双特异性的，具有一个与细胞毒性细胞（即细胞毒性T细胞）结合的结合结构 域和与BCMA结合的第二结合结构域。
[0016] 因此，本发明的第一个方面提供一种包含第一和第二结合结构域的至少双特异性 的结合分子，其中
[0017] (a)第一结合结构域能够结合至BCMA的表位簇3 (CQLRCSSNTPPLTCQRYC) (SEQ ID NO :1016);和
[0018] (b)第二结合结构域能够结合至T细胞⑶3受体复合物；和其中BCMA的表位簇3 对应于如SEQ ID NO :1002所示序列的氨基酸残基24至41。
[0019] 需要注意的是，除非本文另有明确说明，本文所用单数形式"一种"、"一个"和"该" 包含所提及的复数形式。因而，例如，提到"一种试剂"包括此类不同试剂的一种或多种，及 提到"该方法"包括提到本领域普通技术人员已知的能够修饰或取代本文所述方法的等同 步骤和方法。
[0020] 除非本文另有说明，一系列要素前的术语"至少"应理解为是指这一系列的每个要 素。本领域技术人员采用不超出常规实验即能认识到或确定许多与本文描述的本发明具体 实施方案的等同情况。本发明旨在涵盖这些等同情况。
[0021] 本文所用术语"和/或"包括"和"、"或"及"所述术语连接的要素的所有或任意其 它组合"的含义。
[0022] 本文所用术语"大约"或"接近"表示在给出值或范围的±20%内，优选在±15% 内，更优选在± 10 %内，最优选在± 5 %内。
[0023] 在本文整个说明书及以下的权利要求书中，除非上下文另有所指，词语"包含 (comprise) "及其变形如"包含（comprises) "和"包含（comprising) "应理解为意指包 括所述整数或步骤或者整数或步骤的组，但不排除任意其它整数或步骤或者整数或步骤的 组。本文所用术语"包含"又可用术语"含有"或"包括"替代，或本文所用术语有时可用术 语"具有"替代。
[0024] 本文所用"由....组成"排除未在要求保护的要素中具体提到的任一要素、步骤 或成分。当本文使用"基本上由....组成"时不排除对权利要求的基本和新特征没有重大 影响的材料或步骤。
[0025] 在本文每个实例中任一术语"包含"、"基本上由...组成"和"由...组成"可用 其它二词中任一取代。
[0026] 表位簇3是由BCMA的胞外结构域组成。"BCMA的胞外结构域"或"BCMA E⑶"是 指基本上不合BCMA跨膜结构域及胞质结构域的BCMA的一种形式。技术人员可以理解，鉴 定的本发明所述BCMA多肽的跨膜结构域是根据本领域用于识别这种疏水结构域的常规采 用标准进行鉴别的。跨膜结构域的精确边界可以变化，但最可能在本文具体提及的结构域 的任一末端处变化不超过约5个氨基酸。优选的BCMA E⑶示于SEQ ID N0 :1007。
[0027] T细胞CD3受体复合物是一种蛋白质复合物，由四个不同的链组成。在哺乳动物 中，该复合物包含一个⑶3 γ链、一个⑶3 δ链及两个⑶3 ε (印sil〇n)链。这些链与称为 T细胞受体（TCR)的分子和ζ链结合从而在T淋巴细胞中产生活化信号。
[0028] 由双特异性分子通过募集Τ细胞导致的靶细胞的重新定向裂解涉及溶细胞突 触的形成和穿孔素及颗粒酶的传递。参与的Τ细胞能够进行连续的靶细胞裂解，且不 会受到干扰肽抗原处理及传递的免疫逃逸机制或克隆Τ细胞分化的影响；参见，例如， W02007/042261。
[0029] 从本发明公开的意义上说，术语"结合分子"表示能够（特异性地）与靶分子BCMA 和CD3结合、相互作用或识别的任意分子。根据本发明所述，优选的结合分子是多肽。该种 多肽可包括蛋白质性部分和非蛋白质性部分（如化学连接基或化学交联剂，如戊二醛）。
[0030] 如此说来，结合分子为所述一种或多种结合结构域提供了支架，从而使所述结合 结构域能与靶分子BCMA和CD3结合/相互作用。例如，这种支架可以由蛋白质Α提供， 特别是其Z-结构域（亲和体）、ImmE7 (免疫蛋白）、BPTI/APPI (库尼茨结构域）、Ras-结 合蛋白AF-6 (PDZ-结构域）、卡律布德蝎毒素（蝎毒素）、CTLA-4、Min-23 (打结素）、脂质 运载蛋白（anticalin)、新制癌菌素、纤连蛋白结构域、锚蛋白共有重复结构域或硫氧还原 蛋白（Skerra，Curr.Opin.Biotechnol. 18,295-304(2005) ;Hosse 等，Protein Sci. 15， 14-27(2006) ;Nicaise 等，Protein Sci. 13,1882-1891 (2004) ;Nygren 和诎1611，（：111·!·· Opin. Struc. Biol. 7,463-469(1997))。优选的结合分子是抗体。设想到，结合分子由噬菌 体展示或文库筛选方法产生（或可得到），而不是通过将CDR序列从预先存在的（单克隆） 抗体嫁接到支架中，所述支架例如本文所公开的支架。
[0031] 本文所用术语"双特异性"是指包含至少第一和第二结合结构域的结合分子，其 中第一结合结构域能够与一个抗原或靶标结合，第二结合结构域能够与另一抗原或靶标结 合。本发明所述"结合分子"也包含多特异性结合分子，如三特异性结合分子，后者包含三 个结合结构域。
[0032] 也设想到，本发明所述结合分子除其与靶分子BCMA和CD3结合的功能外还具有其 它功能。在这种情况下，结合分子是三-或多功能结合分子，其通过与BCMA结合靶向浆细 胞，通过与CD3结合介导细胞毒性T细胞的活性并提供进一步的功能，如功能完整的Fc恒 定结构域通过募集效应细胞如NK细胞、标记（荧光等）、治疗剂如毒素或放射性核素和/或 增强血清半衰期等方法来介导抗体-依赖性的细胞毒性。
[0033] 术语"结合结构域"与本发明联合表征这样的结构域，该结构域能够特异性与靶分 子BCMA和CD3上给定的靶表位或给定靶位点结合/相互作用。
[0034] 结合结构域可源自结合结构域供体，如抗体、蛋白质A、ImmE7(免疫蛋白）、BPTI/ APPI(库尼茨结构域）、Ras-结合蛋白AF-6(H)Z-结构域）、卡律布德蝎毒素（蝎毒素）、 CTLA-4、Min-23(打结素）、脂质运载蛋白（anticalin)、新制癌菌素、纤连蛋白域、锚蛋白 共有重复结构域或硫氧还原蛋白（Skerra，Curr.Opin.Biotechnol. 18,295-304(2005); Hosse 等，Protein Sci. 15,14-27 (2006) ;Nicaise 等，Protein Sci. 13,1882-1891 (2004); Nygren 和 Uhlen，Curr. Opin. Struc. Biol. 7,463-469 (1997))。优选的结合结构域源自抗 体。设想到，本发明所述结合结构域包括至少前述结合结构域的任一的所述部分，要求该部 分与靶分子BCMA和CD3上给定的靶表位或给定靶位点结合/相互作用。
[0035] 设想到，前述结合结构域供体的结合结构域以这些供体的这一部分为特征，该部 分负责结合相应的靶标，即当这一部分从结合结构域供体移除时，所述供体就失去了其结 合能力。"失去"是指与结合供体相比结合能力至少下降50%。绘制这些结合位点的图谱 的方法为本领域熟知的--因此，其在本领域技术人员定位/绘制结合结构域供体的结合 位点且由此从相应的结合结构域供体"衍生"出所述结合结构域的标准知识范围内。
[0036] 术语"表位"是指与结合结构域特异性结合的抗原上的位点，如抗体或免疫球蛋白 或者抗体或免疫球蛋白的衍生物或片段。"表位"为抗原性的，因此本文所述术语表位有时 也指"抗原性结构"或"抗原决定簇"。因此，所述结合结构域为"抗原-相互作用-位点"。 所述结合/相互作用也可理解为定义"特异性识别"。在一个实例中，所述与靶分子BCMA和 CD3上给定的靶表位或给定靶位点（特异性）结合/相互作用的结合结构域是抗体或免疫 球蛋白，且所述结合结构域为抗体或免疫球蛋白的VH和/或VL区。
[〇〇37] "表位"既可由邻接氨基酸也可由蛋白质的三级折叠而并列的非邻接氨基酸形成。 "线性表位"是其中氨基酸一级序列含有识别表位的表位。在一个特定的序列中，线性表位 通常包括至少3个或至少4个、更通常至少5个或6个或至少7个、例如约8个至约10个 氨基酸。
[0038] 与线性表位相比，"构象表位"是这样的表位，其中包含所述表位的氨基酸一级序 列不是识别的表位的唯一定义部件（如，其中氨基酸的一级序列不一定被结合结构域识别 的表位）。典型的构象表位相对于线性表位包含数量增加的氨基酸。关于构象表位的识别， 所述结合结构域识别抗原、优选多肽或蛋白质或其片段的三维结构（在本发明的上下文 中，任一结合结构域的抗原包含在BCMA蛋白内）。例如，当蛋白分子折叠形成三维结构时， 形成构象表位的某些氨基酸和/或多肽骨架成为并列形式，从而使该抗体能够识别所述表 位。确定表位构象的方法包括、但不限于，X-射线晶体学、二维核磁共振（2D-NMR)谱和定 点自旋标记法及电子顺磁共振（EPR)光谱。另外，本文提供的实例描述了检测给定结合结 构域是否与给定蛋白、特别是BCMA的一个或多个表位簇结合的进一步的方法。
[0039] 一方面，本发明所述第一结合结构域能够结合至人BCMA、优选人BCMA E⑶的表位 簇3。因此，当人BCMA蛋白中的相应表位簇与鼠 BCMA蛋白中的相应表位簇交换时（产生 包含人BCMA的构建体，其中人表位簇3由鼠表位簇3替代；参见SEQ ID NO :1011)，会出现 结合结构域的结合降低。与人BCMA蛋白中的相应表位簇相比，并将与人BCMA蛋白中相应 表位结合设定为100 %，则所述降低优选为至少10 %、20 %、30 %、40 %、50 %;更优选为至少 60%、70%、80%、90%、95%或甚至100%。设想到前述人此嫩/鼠此嫩嵌合体在010细胞 中表达。还可设想到人BCMA/鼠 BCMA嵌合体与跨膜结构域和/或不同膜结合蛋白如EpCAM 的胞质结构域融合；参见图2a。
[0040] 一种测试这种由于与非人（如鼠）BCMA抗原的相应表位簇交换导致的结合损失 的方法描述于所附实施例中，具体在实施例1-3中。另一种测定靶抗原的特异性残基对 于被给定的结合分子或结合结构域识别的贡献的方法是丙氨酸扫描（如参见，Morrison KL&Weiss GA. Cur Opin Chem Biol. 2001Jun;5 (3) :302-7)，其中每个待分析的残基例如通 过定点诱变被丙氨酸替代。采用丙氨酸的原因在于其体积小、化学惰性、甲基官能团，仍然 能够模拟其它多种氨基酸所具有的二级结构参照。在希望保留突变残基尺寸的情况下，有 时可使用大体积的氨基酸如缬氨酸或亮氨酸。丙氨酸扫描法是一种已经使用很长时间的成 熟技术。
[0041] 本文所用术语"表位簇"表示位于抗原的限定邻接部分中的表位的整体。表位簇 可以包含一个、两个或更多个表位。在本文中本发明所定义的在BCMA胞外结构域中的表位 簇如上所述并示于表1。
[〇〇42] 术语"（能够）与...结合"、"特异性识别"、"指向"和"与...相互作用"是指与 依照本发明所述结合结构域能够特异性与表位的一个或多个、优选至少两个、更优选至少 三个且最优选至少四个氨基酸结合。
[〇〇43] 本文所用术语"特异性相互作用"、"特异性结合"或"特异性的结合"是指结合结 构域对特定蛋白或抗原表现出可估量的亲和性，并且通常不会对除BCMA或CD3之外的蛋白 质或抗原表现出显著的反应性。"可估量的亲和性"包括以约l〇_6M(KD)或更强的亲和性结 合。优选地，当结合亲和性为约ΚΓ 12至1(Γ8Μ、1(Γ12至1(Γ9Μ、1(Γ 12至lO-MUCT11至1(Γ8Μ、优 选为约ΚΓ11至1(Γ 9Μ时，所述结合被认为是特异性的。尤其是通过将所述结合结构域与靶蛋 白或抗原的反应与所述结合结构域与除BCMA或CD3之外的蛋白质或抗原的反应进行比较， 可以测定结合结构域是否特异性与靶标反应或结合。优选地，本发明所述结合结构域基本 上不结合或不能结合除BCMA或CD3以外的蛋白质或抗原（S卩，第一结合结构域不能与BCMA 以外的蛋白质结合且第二结合结构域不能与CD3以外的蛋白质结合）。
[0044] 术语"基本上不结合"或"不能结合"是指本发明所述结合结构域不结合除BCMA或 CD3之外的另一蛋白质或抗原，即当与BCMA或CD3的结合分别设定为100%时，该结合结构 域与除BCMA或CD3以外的蛋白或抗原表现出的反应性不超过30%，优选不超过20%，更优 选不超过10%，特别优选不超过9%、8%、7%、6%或5%。
[0045] 人们认为特异性结合受到结合结构域和抗原的氨基酸序列中的特异性基序的影 响。因此，结合的发生是由于其一级二级和/或三级结构以及所述结构的二级修饰的结果。 抗原-相互作用-位点与其特异性抗原之间的特异性相互作用可能导致所述位点与抗原的 单一结合。另外，作为另外一种选择或除此之外，抗原-相互作用-位点与其特异性抗原的 特异性相互作用可能导致信号的启动，如由于抗原构象的改变、抗原寡聚化等的诱导等。
[0046] -方面，本发明的第一结合结构域结合至人BCMA的表位簇3并且还能够结合至 称猴（macaque)BCMA(如来自恒河称猴（Macaca mulatta)(SEQ ID NO :1017)或马来猴 (Macaca fascicularis) (SEQ ID NO :1017)的BCMA)的表位簇3。设想第一结合结构域结 合或不能结合鼠 BCMA。
[0047] 因此，在一个实施方案中，结合至人BCMA、特别是与BCMA胞外蛋白结构域的表位 簇3(由示于SEQ ID NO :1002的人序列的氨基酸残基24至41形成）的结合结构域也与猕 猴BCMA、特别是与BCMA胞外蛋白结构域的表位簇3 (由示于SEQ ID NO :1006的猕猴BCMA 序列的氨基酸残基24至41形成）结合。
[0048] 在一个实施方案中，结合分子的第一结合结构域能够结合至BCMA的表位簇3,其 中BCMA的表位簇3对应于SEQ ID NO :1002所示序列（人BCMA全长多肽）的氨基酸残基 24 至 41 或 SEQ ID NO :1007(人 BCMA 胞外结构域：SEQ ID NO :1002 的氨基酸 1-54)。
[0049] 本发明的一方面，作为另外一种选择或除此之外，结合分子的第一结合结构域能 够结合至白鬓狨（Calithrix jacchus)、绒顶柽柳猴（Saguinus oedipus)和/或松鼠猴 (Saimiri sciureus)BCMA 的表位族 3。
[0050] 蛋白质（包含其片段，优选生物活性片段，以及通常具有少于30个氨基酸的肽） 包含通过共价肽键彼此相连的一个或多个氨基酸（从而产生一个氨基酸链）。本文所用术 语"多肽"描述了一组由超过30个氨基酸组成的分子。多肽可更进一步形成多聚体如二聚 体、三聚体及更高的低聚体，即由多于一个多肽分子组成。形成此类二聚体或三聚体等的多 肽分子可以相同或不同。这种多聚体对应的较高阶结构因此称为同源二聚体或异源二聚 体，同源三聚体或异源三聚体等。一个异源多聚体的实例是抗体分子，在其天然存在的形式 中由两个相同的轻多肽链和两个相同的重多肽链组成。术语"多肽"和"蛋白质"也指经天 然修饰的多肽/蛋白，其中所述修饰由如蛋白质翻译后修饰（如糖基化、乙酰化、磷酸化等） 产生。本文所提到的"多肽"也指经化学修饰，如经聚乙二醇化。这些修饰是本领域熟知的。
[0051] 本发明的另一方面，第二结合结构域能够结合至⑶3 ε。在本发明的又一方面，第 二结合结构域能够结合至人CD3和猕猴CD3,优选能够结合至人CD3 ε和猕猴CD3 ε。作 为另外一种选择或除此之外，第二结合结构域能够结合至白鬓狨、绒顶柽柳猴和/或松鼠 猴的CD3e。依据这些实施方案，本发明所述结合分子的一个或两个结合结构域优选地对 灵长类动物哺乳动物目成员具有跨物种特异性。跨物种特异性CD3结合结构域描述于如 W02008/119567 中。
[0052] 对本发明的结合分子特别优选的是：能够结合至T细胞CD3受体复合物的第二结 合结构域包含VL区，所述VL区含有选自下列的⑶R-L1、⑶R-L2以及⑶R-L3 :
[0053] (a)如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :27 中所示的 CDR-L1、如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :28 中所示的 CDR-L2 以及如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :29 中所示的 CDR-L3 ;
[0054] (b)如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :117 中所示的 CDR-L1、如 W02008/119567 的 SEQ ID N0:118 中所示的 CDR-L2 以及如 TO2008/119567 的 SEQ ID N0:119 中所示的 CDR-L3 ;以及
[0055] (c)如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :153 中所示的 CDR-L1、如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :154 中所示的 CDR-L2 以及如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :155 中所示的 CDR-L3。
[0056] 在本发明的结合分子的一个可选择的优选实施方案中，能够与T细胞CD3受体复 合物结合的第二结合结构域包含VH区，所述VH区含有选自下列的CDR-H1、CDR-H2以及 CDR-H3 :
[0057] (a)如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :12 中所示的 CDR-H1、如 W02008/119567 的 SEQ ID N0:13 中所示的 CDR-H2 以及如 W02008/119567 的 SEQ ID N0:14 中所示的 CDR-H3;
[0058] (b)如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :30 中所示的 CDR-H1、如 W02008/119567 的 SEQ ID N0:31 中所示的 CDR-H2 以及如 W02008/119567 的 SEQ ID N0:32 中所示的 CDR-H3;
[0059] (c)如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :48 中所示的 CDR-H1、如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :49 中所示的 CDR-H2 以及如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :50 中所示的 CDR-H3 ;
[0060] (d)如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :66 中所示的 CDR-H1、如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :67 中所示的 CDR-H2 以及如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :68 中所示的 CDR-H3 ;
[0061] (e)如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :84 中所示的 CDR-H1、如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :85 中所示的 CDR-H2 以及如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :86 中所示的 CDR-H3 ;
[0062] (f)如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :102 中所示的 CDR-H1、如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :103 中所示的 CDR-H2 以及如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :104 中所示的 CDR-H3 ;
[0063] (g)如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :120 中所示的 CDR-H1、如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :121 中所示的 CDR-H2 以及如 TO2008/119567 的 SEQ ID NO :122 中所示的 CDR-H3 ;
[0064] (h)如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :138 中所示的 CDR-H1、如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :139 中所示的 CDR-H2 以及如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :140 中所示的 CDR-H3 ;
[0065] (i)如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :156 中所示的 CDR-H1、如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :157 中所示的 CDR-H2 以及如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :158 中所示的 CDR-H3 ;以及
[0066] (j)如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :174 中所示的 CDR-H1、如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :175 中所示的 CDR-H2 以及如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :176 中所示的 CDR-H3。
[〇〇67] 本发明的结合分子进一步优选的是，能够结合至T细胞CD3受体复合物的第二结 合结构域包含VL区，所述VL区选自如W02008/119567的SEQ ID N0:35、SEQ ID N0:39、 SEQ ID NO :125、SEQ ID NO :129、SEQ ID NO :161 或 SEQ ID NO :165 中所示的 VL 区。
[0068] 可选择地优选的是，能够结合至T细胞⑶3受体复合物的第二结合结构域包含VH 区，所述 VH 区选自如 TO2008/119567 的 SEQ ID N0:15、SEQ ID N0:19、SEQ ID N0:33、SEQ ID NO ：37, SEQ ID NO ：5U SEQ ID NO ：55, SEQ ID NO ：69, SEQ ID NO ：73, SEQ ID NO ：87, SEQ ID N0:91、SEQ ID N0:105、SEQ ID N0:109、SEQ ID N0:123、SEQ ID N0:127、SEQ ID N0:141、SEQIDN0:145、SEQIDN0:159、SEQIDN0 :163、SEQIDN0:177*SEQIDN0: 181中所示的VH区。
[0069] 更优选地，本发明的结合分子的特征在于能够结合至T细胞CD3受体复合物的第 二结合结构域，所述第二结合结构域包含选自下列的VL区和VH区：
[0070] (a)如 W02008/119567 的 SEQ ID Ν0 :17 或 SEQ ID Ν0 :21 中所示的 VL 区以及如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :15 或 SEQ ID N0 :19 中所示的 VH 区；
[0071] (b)如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :35 或 SEQ ID N0 :39 中所示的 VL 区以及如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :33 或 SEQ ID N0 :37 中所示的 VH 区；
[0072] (c)如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :53 或 SEQ ID N0 :57 中所示的 VL 区以及如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :51 或 SEQ ID N0 :55 中所示的 VH 区；
[0073] (d)如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :71 或 SEQ ID N0 :75 中所示的 VL 区以及如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :69 或 SEQ ID N0 :73 中所示的 VH 区；
[0074] (e)如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :89 或 SEQ ID N0 :93 中所示的 VL 区以及如 W02008/119567 的 SEQ ID N0 :87 或 SEQ ID N0 :91 中所示的 VH 区；
[0075] (f)如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :107 或 SEQ ID NO :111 中所示的 VL 区以及 如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :105 或 SEQ ID NO :109 中所示的 VH 区；
[0076] (g)如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :125 或 SEQ ID NO :129 中所示的 VL 区以及 如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :123 或 SEQ ID NO :127 中所示的 VH 区；
[0077] (h)如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :143 或 SEQ ID NO :147 中所示的 VL 区以及 如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :141 或 SEQ ID NO :145 中所示的 VH 区；
[0078] (i)如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :161 或 SEQ ID NO :165 中所示的 VL 区以及 如TO2008/119567 的SEQIDN0:159或SEQIDN0:163中所示的VH区；以及
[0079] (j)如 W02008/119567 的 SEQ ID NO :179 或 SEQ ID NO :183 中所示的 VL 区以及 如TO2008/119567 的SEQIDN0:177或SEQIDN0:181中所示的VH区。
[0080] 根据本发明的结合分子的一个优选的实施方案，特别是在结合至T细胞CD3受体 复合物的第二结合结构域中，成对的VH-区和VL-区呈单链抗体（scFv)的形式。该VH和VL 区以VH-VL或VL-VH的次序排列。优选地，该VH-区的N-端被定位到连接序列。该VL-区 的C-端被定位到连接序列。
[0081] 本发明的如上所述的结合分子的一个优选实施方案的特征在于：能够结合至T细 胞CD3受体复合物的第二结合结构域，所述第二结合结构域包含选自如W02008/119567的 SEQ ID N0：23,SEQ ID N0：25,SEQ ID NO ：4U SEQ ID N0：43,SEQ ID N0：59,SEQ ID NO： 61、SEQ ID N0:77、SEQ ID N0:79、SEQ ID N0:95、SEQ ID N0:97、SEQ ID N0:113、SEQ ID N0:115、SEQ ID N0:131、SEQ ID N0:133、SEQ ID N0:149、SEQ ID N0:151、SEQ ID N0:167、 SEQ ID NO :169、SEQ ID NO :185 或 SEQ ID NO :187 的氨基酸序列。
[0082] 第一结合结构域对于人BCMA的亲和性优选< 15nM，更优选< 10nM，甚至更优选 彡5nM，甚至更优选彡InM，甚至更优选彡0. 5nM，甚至更优选彡0. InM，最优选彡0. 05nM。 第一结合结构域对于猕猴BCMA的亲和性优选彡15nM，更优选彡10nM，甚至更优选彡5nM， 甚至更优选彡InM，甚至更优选彡0. 5nM，甚至更优选50. InM，最优选的彡0. 05nM或甚 至彡0. OlnM。亲和性的测定可以采用如实施例中描述的Biacore分析法或Scatchard 分析法。结合至猕猴BCMA相对于结合至人BCMA的亲和性差距优选为[1 : 10-1 : 5] 或[5 : 1-10 : 1]，更优选为[1 : 5-5 : 1]，以及最优选为[1 : 2-3 : 1]或甚至 [1 : 1-3 : 1]。其它测定亲和性的方法是本领域技术人员熟知的。
[0083] 由BCMA/CD3双特异性结合分子介导的细胞毒性可以采用多种方法测定。效应细 胞可以是例如经刺激富集了（人）CD8的阳性T细胞或未经刺激的（人）外周血单核细胞 (PBMC)。如果靶细胞是源自猕猴或表达猕猴BCMA或用猕猴BCMA转染的，则效应细胞也应 当是源自猕猴的，如猕猴T细胞系，例如4119LnPx。靶细胞应当表达BCMA(至少应当表达 BCMA的胞外域），如人或猕猴的BCMA。靶细胞可以是用BCMA (如人或猕猴BCMA)稳定地或 瞬时地转染的细胞系（如CH0)。或者，靶细胞也可以是BCMA阳性天然表达细胞系，如人多 发性骨髓瘤细胞系L363或NCI-H929。通常，靶细胞系在细胞表面表达BCMA水平越高，预期 EC5Q值则越小。效应物与靶细胞比（E : T)通常为约10 : 1，但是也可以发生变化。BCMA/ CD3双特异性结合分子的细胞毒性活性可以通过51-铬释出分析法（培养时间约为18小 时）或基于FACS的细胞毒性分析法（培养时间约为48小时）测定。也可以修改分析方法 的培养时间（即细胞毒性反应）。其它测定细胞毒性的方法是本领域技术人员所熟知的，包 括MTT或MTS分析法、包含生物发光分析法的基于ATP的分析法、硫酸若丹明B (SRB)分析 法、WST分析法、克隆生成实验及ECIS技术。
[0084] 由本发明的BCMA/CD3双特异性结合分子介导的细胞毒性活性的测定优选采用基 于细胞毒性的分析法。细胞毒性活性用对应于半数最大有效浓度（是指诱导细胞毒性反应 在基线浓度与最大浓度之间的一半的结合分子的浓度）的EC5(I值表示。BCMA/CD3双特异性 结合分子的EC5(I值优选是;^20. OOOpg/ml，更优选是;^5000pg/ml，甚至更优选是< lOOOpg/ ml,甚至更优选是< 500pg/ml，甚至更优选是< 350pg/ml，甚至更优选是< 320pg/ml，甚至 更优选是< 250pg/ml，甚至更优选是< 100pg/ml，甚至更优选是;^ 50pg/ml，甚至更优选是 彡10pg/ml，最优选是彡5pg/ml。
[0085] 上述给出的任一 EC5(I值都能与基于细胞的细胞毒性分析法所示的任一方案组合。 例如，当（人）CD8阳性T细胞或猕猴T细胞系用作效应细胞时，BCMA/CD3双特异性结合分子 的EC 5(I值优选是< 1000pg/ml，更优选是;^ 500pg/ml，甚至更优选是< 250pg/ml，甚至更优 选是< 100pg/ml，甚至更优选是;^ 50pg/ml，甚至更优选是< 10pg/ml，最优选的是;^ 5pg/ ml。如果在此分析法中靶细胞为（人或猕猴）BCMA转染细胞如CH0细胞，BCMA/CD3双特异 性结合分子的EC5(I值优选是;^ 150pg/ml，更优选是< 100pg/ml，甚至更优选是;^ 50pg/ml， 甚至更优选是< 30pg/ml，甚至更优选是< 10pg/ml，最优选是;^ 5pg/ml。
[0086] 如果靶细胞为BCMA阳性天然表达细胞系，则EC5(I值优选是彡350pg/ml，更优 选是;^ 320pg/ml，甚至更优选是< 250pg/ml，甚至更优选是< 200pg/ml，甚至更优选是 < 100pg/ml，甚至更优选是< 150pg/ml，甚至更优选是< 100pg/ml，最优选是;^50pg/ml或 更小。
[〇〇87] 当（人）PBMC用作效应细胞时，BCMA/⑶3双特异性结合分子的EC5(I值优选是 < 1000pg/ml，更优选是;^ 750pg/ml，更优选是;^ 500pg/ml，甚至更优选是< 350pg/ml，甚 至更优选是< 320pg/ml,甚至更优选是< 250pg/ml,甚至更优选是< 100pg/ml,最优选的 是彡50pg/ml或更小。
[0088] 在一个特别优选的实施方案中，本发明的BCMA/CD3双特异性结合分子的特征在 于EC 5(I值为彡350pg/ml或更小，更优选为彡320pg/ml或更小。在这一实施方案中靶细胞 为L363细胞，效应细胞为未经刺激的人PBMC。本领域技术人员无需再费周折即可知道EC m 值的测定方法。另外，本说明书教导了一种如何测定EC5(i值的具体说明；参见例如下文的实 施例8. 3。适宜的操作程序如下：
[0089] a)通过Ficoll密度梯度离心法从富集了淋巴细胞的制备物（血沉棕黄层）中制 备人外周血单核细胞（PBMC)
[0090] b)可选地用 Dulbecco' s PBS (Gibco)洗漆
[0091] c)通过用红细胞裂解缓冲液（155mM NH4Cl，10mM ΚΗΟ)3，100μΜ EDTA)培养从 PBMC中移除残留的红细胞
[0092] d)耗竭CD 14+细胞和NK细胞
[0093] e)使用如 LS 柱（Miltenyi Biotec，#130-042-401)分离 CD14/CD56 阴性细胞
[0094] f)在不具有⑶14+/⑶56+细胞的情况下，采用如RPMI完全培养基，在37°C培养箱 中培养PBMC直至使用，所述RPMI完全培养基即增加了 10%FBS(Biochrom AG，#S0115)、 lx 非必需氨基酸（Biochrom AG，#K0293)、10mM Hepes 缓冲液（Biochrom AG，#L1613)、lmM 丙酮酸钠 （Biochrom AG，#L0473)和 lOOU/mL 青霉素 / 链霉素 （Biochrom AG，#A2213)的 RPMI1640(Biochrom AG, #FG1215)〇
[0095] g)标记靶细胞
[0096] h)效应细胞与靶细胞混合，优选以等体积混合，从而得到E : T细胞比为10 : 1
[0097] i)添加结合分子，优选在一系列稀释溶液中添加
[0098] j)在C02浓度为7%的加湿培养箱中培养48小时
[0099] k)如通过添加最终浓度为1 μ g/mL碘化丙啶（PI)，采用如流式细胞术监测靶细胞 膜的完整性
[0100] 1)如依据如下公式计算EC50 :
[0101]
【权利要求】
1. 一种至少双特异性的结合分子，所述结合分子包含第一结合结构域和第二结合结构 域，其中： (a) 所述第一结合结构域能够结合至BCMA的表位簇3(CQLRCSSNT PPLTCQRYC);和 (b) 所述第二结合结构域能够结合至T细胞CD3受体复合物；且 其中BCMA的表位簇3对应于如SEQ ID NO :1002中所示序列的氨基酸残基24至41。
2. 根据权利要求1所述的结合分子，其中所述第一结合结构域还能够结合至猕猴BCMA 的表位簇 3 (CQLRCSSTPPLTCQRYC)。
3. 根据权利要求1或2所述的结合分子，其中所述第二结合结构域能够结合至CD3e。
4. 根据前述权利要求中任一项所述的结合分子，其中所述第二结合结构域能够结合至 人⑶3和猕猴⑶3。
5. 根据前述权利要求中任一项所述的结合分子，其中所述第一结合结构域和/或所述 第二结合结构域源自抗体。
6. 根据权利要求5所述的结合分子，其选自（scFv)2、（单结构域mAb)2、scFv-单结构 域mAb、双链抗体和它们的寡聚体。
7. 根据前述权利要求中任一项所述的结合分子，其中所述第一结合结构域包含VH区 和VL区，所述VH区含有选自下列的⑶R-H1、⑶R-H2以及⑶R-H3,所述VL区含有选自下列 的 CDR-L1、CDR-L2 以及 CDR-L3 : (1) 如 SEQ ID N0:1 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID N0:2 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO: 3中所示的CDR-H3、如SEQ ID NO :4中所示的CDR-L1、如SEQ ID NO :5中所示的CDR-L2以 及如SEQ ID NO :6中所示的CDR-L3 ; (2) 如 SEQ ID NO :11 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :12 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :13中所示的CDR-H3、如SEQ ID NO :14中所示的CDR-L1、如SEQ ID NO :15中所示的 CDR-L2 以及如 SEQ ID NO :16 中所示的 CDR-L3 ; (3) 如 SEQ ID NO :21 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :22 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :23中所示的CDR-H3、如SEQ ID NO :24中所示的CDR-L1、如SEQ ID NO :25中所示的 CDR-L2 以及如 SEQ ID NO :26 中所示的 CDR-L3 ; (4) 如 SEQ ID NO :31 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :32 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :33中所示的CDR-H3、如SEQ ID NO :34中所示的CDR-L1、如SEQ ID NO :35中所示的 CDR-L2 以及如 SEQ ID NO :36 中所示的 CDR-L3 ; (5) 如 SEQ ID NO :41 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :42 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :43中所示的CDR-H3、如SEQ ID NO :44中所示的CDR-L1、如SEQ ID NO :45中所示的 CDR-L2 以及如 SEQ ID NO :46 中所示的 CDR-L3 ; (6) 如 SEQ ID NO :51 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :52 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :53中所示的CDR-H3、如SEQ ID NO :54中所示的CDR-L1、如SEQ ID NO :55中所示的 CDR-L2 以及如 SEQ ID NO :56 中所示的 CDR-L3 ; (7) 如 SEQ ID NO :61 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :62 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :63中所示的CDR-H3、如SEQ ID NO :64中所示的CDR-L1、如SEQ ID NO :65中所示的 CDR-L2 以及如 SEQ ID NO :66 中所示的 CDR-L3 ; (8) 如 SEQ ID NO :71 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :72 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID N0:73中所示的CDR-H3、如SEQIDN0:74中所示的CDR-L1、如SEQIDN0 :75中所示的 CDR-L2 以及如 SEQ ID NO :76 中所示的 CDR-L3 ; (9) 如 SEQ ID NO :161 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :162 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :163 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :164 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :165 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :166中所示的CDR-L3 ; (10) 如 SEQ ID NO :171 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :172 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :173 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :174 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :175 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :176中所示的CDR-L3 ; (11) 如 SEQ ID NO :181 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :182 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :183 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :184 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :185 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :186中所示的CDR-L3 ; (12) 如 SEQ ID NO :191 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :192 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :193 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :194 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :195 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :196中所示的CDR-L3 ; (13) 如 SEQ ID NO :201 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :202 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :203 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :204 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :205 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :206中所示的CDR-L3 ; (14) 如 SEQ ID NO :211 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :212 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :213 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :214 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :215 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :216中所示的CDR-L3 ; (15) 如 SEQ ID NO :221 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :222 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :223 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :224 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :225 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :226中所示的CDR-L3 ; (16) 如 SEQ ID NO :311 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :312 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :313 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :314 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :315 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :316中所示的CDR-L3 ; (17) 如 SEQ ID NO :321 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :322 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :323 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :324 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :325 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :326中所示的CDR-L3 ; (18) 如 SEQ ID NO :331 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :332 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :333 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :334 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :335 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :336中所示的CDR-L3 ; (19) 如 SEQ ID NO :341 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :342 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :343 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :344 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :345 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :346中所示的CDR-L3 ; (20) 如 SEQ ID NO :351 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :352 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :353 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :354 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :355 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :356中所示的CDR-L3 ; (21) 如 SEQ ID NO :361 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :362 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :363 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :364 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :365 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :366中所示的CDR-L3 ; (22) 如 SEQ ID NO :371 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :372 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :373 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :374 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :375 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :376中所示的CDR-L3 ; (23) 如 SEQ ID NO :381 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :382 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :383 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :384 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :385 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :386中所示的CDR-L3 ; (24) 如 SEQ ID NO :581 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :582 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :583 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :584 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :585 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :586中所示的CDR-L3 ; (25) 如 SEQ ID NO :591 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :592 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :593 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :594 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :595 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :596中所示的CDR-L3 ; (26) 如 SEQ ID NO :601 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :602 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :603 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :604 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :605 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :606中所示的CDR-L3 ; (27) 如 SEQ ID NO :611 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :612 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :613 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :614 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :615 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :616中所示的CDR-L3 ; (28) 如 SEQ ID NO :621 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :622 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :623 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :624 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :625 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :626中所示的CDR-L3 ; (29) 如 SEQ ID NO :631 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :632 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :633 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :634 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :635 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :636中所示的CDR-L3 ; (30) 如 SEQ ID NO :641 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :642 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :643 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :644 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :645 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :646中所示的CDR-L3 ; (31) 如 SEQ ID NO :651 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :652 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :653 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :654 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :655 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :656中所示的CDR-L3 ; (32) 如 SEQ ID NO :661 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :662 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :663 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :664 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :665 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :666中所示的CDR-L3 ; (33) 如 SEQ ID NO :671 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :672 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :673 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :674 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :675 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :676中所示的CDR-L3 ; (34 如 SEQ ID NO :681 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :682 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :683 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :684 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :685 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :686中所示的CDR-L3 ; (35) 如 SEQ ID NO :691 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :692 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :693 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :694 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :695 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :696中所示的CDR-L3 ; (36) 如 SEQ ID NO :701 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :702 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :703 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :704 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :705 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :706中所示的CDR-L3 ; (37) 如 SEQ ID NO :711 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :712 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :713 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :714 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :715 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :716中所示的CDR-L3 ; (38) 如 SEQ ID NO :721 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :722 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :723 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :724 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NQ :725 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :726中所示的CDR-L3 ; (39) 如 SEQ ID NO :731 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :732 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :733 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :734 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :735 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :736中所示的CDR-L3 ; (40) 如 SEQ ID NO :741 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :742 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :743 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :744 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :745 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :746中所示的CDR-L3 ; (41) 如 SEQ ID NO :751 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :752 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :753 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :754 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :755 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :756中所示的CDR-L3 ; (42) 如 SEQ ID NO :761 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :762 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :763 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :764 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :765 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :766中所示的CDR-L3 ; (43) 如 SEQ ID NO :771 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :772 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :773 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :774 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :775 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :776中所示的CDR-L3 ; (44) 如 SEQ ID NO :781 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :782 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :783 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :784 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :785 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :786中所示的CDR-L3 ; (45) 如 SEQ ID NO :791 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :792 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :793 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :794 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :795 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :796中所示的CDR-L3 ; (46) 如 SEQ ID NO :801 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :802 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :803 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :804 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :805 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :806中所示的CDR-L3 ; (47) 如 SEQ ID NO :811 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :812 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :813 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :814 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :815 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :816中所示的CDR-L3 ; (48) 如 SEQ ID NO :821 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :822 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :823 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :824 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :825 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :826中所示的CDR-L3 ; (49) 如 SEQ ID NO :831 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :832 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :833 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :834 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :835 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :836中所示的CDR-L3 ; (50) 如 SEQ ID NO :961 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :962 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :963 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :964 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :965 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :966中所示的CDR-L3 ; (51) 如 SEQ ID NO :971 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :972 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :973 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :974 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :975 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :976中所示的CDR-L3 ; (52) 如 SEQ ID NO :981 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :982 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :983 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :984 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :985 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :986中所示的CDR-L3 ;和 (53) 如 SEQ ID NO :991 中所示的 CDR-H1、如 SEQ ID NO :992 中所示的 CDR-H2、如 SEQ ID NO :993 中所示的 CDR-H3、如 SEQ ID NO :994 中所示的 CDR-L1、如 SEQ ID NO :995 中所 示的CDR-L2以及如SEQ ID NO :996中所示的CDR-L3。
8. 根据前述权利要求中任一项所述的结合分子，其中所述第一结合结构域包含VH区， 所述VH区选自如以下序列中所示的VH区：SEQ ID N0:7、SEQ ID N0:17、SEQ ID N0:27、 SEQ ID NO ：37, SEQ ID N0：47,SEQ ID N0：57,SEQ ID N0：67,SEQ ID N0：77,SEQ ID NO： 167、 SEQ ID NO : 177、SEQ ID NO : 187、SEQ ID NO : 197、SEQ ID NO :207、SEQ ID NO :217、 SEQ ID NO ：227,SEQ ID NO ：317,SEQ ID NO ：327,SEQ ID NO ：337,SEQ ID NO ：347,SEQ ID NO :357、SEQ ID NO :367、SEQ ID NO :377、SEQ ID NO :387、SEQ ID NO :587、SEQ ID NO : 597、 SEQ ID NO :607、SEQ ID NO :617、SEQ ID NO :627、SEQ ID NO :637、SEQ ID NO :647、 SEQ ID N0:657、SEQ ID N0:667、SEQ ID N0:677、SEQ ID N0:687、SEQ ID N0:697、SEQ ID NO ：707, SEQ ID NO ：717, SEQ ID NO ：727, SEQ ID NO ：737, SEQ ID NO ：747, SEQ ID NO ： 757, SEQ ID NO ：767, SEQ ID NO ：777, SEQ ID NO ：787, SEQ ID NO ：797, SEQ ID NO ：807, SEQ ID N0:817、SEQ ID N0:827、SEQ ID N0:837、SEQ ID N0:967、SEQ ID N0:977、SEQ ID NO :987、和 SEQ ID NO :997。
9. 根据前述权利要求中任一项所述的结合分子，其中所述第一结合结构域包含VL区， 所述VL区选自如以下序列中所示的VL区：SEQ ID N0:8、SEQ ID N0:18、SEQ ID N0:28、 SEQ ID NO ：38, SEQ ID N0：48,SEQ ID N0：58,SEQ ID N0：68,SEQ ID N0：78,SEQ ID NO： 168、 SEQ ID NO : 178、SEQ ID NO : 188、SEQ ID NO : 198、SEQ ID NO :208、SEQ ID NO :218、 SEQ ID NO ：228,SEQ ID NO ：318,SEQ ID NO ：328,SEQ ID NO ：338,SEQ ID NO ：348,SEQ ID NO :358、SEQ ID NO :368、SEQ ID NO :378、SEQ ID NO :388、SEQ ID NO :588、SEQ ID NO : 598、 SEQ ID NO :608、SEQ ID NO :618、SEQ ID NO :628、SEQ ID NO :638、SEQ ID NO :648、 SEQ ID N0:658、SEQ ID N0:668、SEQ ID N0:678、SEQ ID N0:688、SEQ ID N0:698、SEQ ID NO ：708, SEQ ID NO ：718, SEQ ID NO ：728, SEQ ID NO ：738, SEQ ID NO ：748, SEQ ID NO ： 758, SEQ ID NO ：768, SEQ ID NO ：778, SEQ ID NO ：788, SEQ ID NO ：798, SEQ ID NO ：808, SEQ ID N0:818、SEQ ID N0:828、SEQ ID N0:838、SEQ ID N0:968、SEQ ID N0:978、SEQ ID NO :988、和 SEQ ID NO :998。
10.根据前述权利要求中任一项所述的结合分子，其中所述第一结合结构域包含选自 下列的VH区和VL区： (1) 如SEQ ID NO :7中所示的VH区，和如SEQ ID NO :8中所示的VL区； (2) 如SEQ ID NO :17中所示的VH区，和如SEQ ID NO :18中所示的VL区； (3) 如SEQ ID NO :27中所示的VH区，和如SEQ ID NO :28中所示的VL区； (4) 如SEQ ID NO :37中所示的VH区，和如SEQ ID NO :38中所示的VL区； (5) 如SEQ ID NO :47中所示的VH区，和如SEQ ID NO :48中所示的VL区； (6) 如SEQ ID NO :57中所示的VH区，和如SEQ ID NO :58中所示的VL区； (7) 如SEQ ID NO :67中所示的VH区，和如SEQ ID NO :68中所示的VL区； (8) 如SEQ ID NO :77中所示的VH区，和如SEQ ID NO :78中所示的VL区； (9) 如SEQ ID NO :167中所示的VH区，和如SEQ ID NO :168中所示的VL区； (10) 如SEQ ID NO :177中所示的VH区，和如SEQ ID NO :178中所示的VL区； (11) 如SEQ ID NO :187中所示的VH区，和如SEQ ID NO :188中所示的VL区； (12) 如SEQ ID NO :197中所示的VH区，和如SEQ ID NO :198中所示的VL区； (13) 如SEQ ID NO :207中所示的VH区，和如SEQ ID NO :208中所示的VL区； (14) 如SEQ ID NO :217中所示的VH区，和如SEQ ID NO :218中所示的VL区； (15) 如SEQ ID NO :227中所示的VH区，和如SEQ ID NO :228中所示的VL区； (16) 如SEQ ID NO :317中所示的VH区，和如SEQ ID NO :318中所示的VL区； (17) 如SEQ ID NO :327中所示的VH区，和如SEQ ID NO :328中所示的VL区； (18) 如SEQ ID NO :337中所示的VH区，和如SEQ ID NO :338中所示的VL区； (19) 如SEQ ID NO :347中所示的VH区，和如SEQ ID NO :348中所示的VL区； (20) 如SEQ ID NO :357中所示的VH区，和如SEQ ID NO :358中所示的VL区； (21) 如SEQ ID NO :367中所示的VH区，和如SEQ ID NO :368中所示的VL区； (22) 如SEQ ID NO :377中所示的VH区，和如SEQ ID NO :378中所示的VL区； (23) 如SEQ ID NO :387中所示的VH区，和如SEQ ID NO :388中所示的VL区； (24) 如SEQ ID NO :587中所示的VH区，和如SEQ ID NO :588中所示的VL区； (25) 如SEQ ID NO :597中所示的VH区，和如SEQ ID NO :598中所示的VL区； (26) 如SEQ ID NO :607中所示的VH区，和如SEQ ID NO :608中所示的VL区； (27) 如SEQ ID NO :617中所示的VH区，和如SEQ ID NO :618中所示的VL区； (28) 如SEQ ID NO :627中所示的VH区，和如SEQ ID NO :628中所示的VL区； (29) 如SEQ ID NO :637中所示的VH区，和如SEQ ID NO :638中所示的VL区； (30) 如SEQ ID NO :647中所示的VH区，和如SEQ ID NO :648中所示的VL区； (31) 如SEQ ID NO :657中所示的VH区，和如SEQ ID NO :658中所示的VL区； (32) 如SEQ ID NO :667中所示的VH区，和如SEQ ID NO :668中所示的VL区； (33) 如SEQ ID NO :677中所示的VH区，和如SEQ ID NO :678中所示的VL区； (34) 如SEQ ID NO :687中所示的VH区，和如SEQ ID NO :688中所示的VL区； (35) 如SEQ ID NO :697中所示的VH区，和如SEQ ID NO :698中所示的VL区； (36) 如SEQ ID NO :707中所示的VH区，和如SEQ ID NO :708中所示的VL区； (37) 如SEQ ID NO :717中所示的VH区，和如SEQ ID NO :718中所示的VL区； (38) 如SEQ ID NO :727中所示的VH区，和如SEQ ID NO :728中所示的VL区； (39) 如SEQ ID NO :737中所示的VH区，和如SEQ ID NO :738中所示的VL区； (40) 如SEQ ID NO :747中所示的VH区，和如SEQ ID NO :748中所示的VL区； (41) 如SEQ ID NO :757中所示的VH区，和如SEQ ID NO :758中所示的VL区； (42) 如SEQ ID NO :767中所示的VH区，和如SEQ ID NO :768中所示的VL区； (43) 如SEQ ID NO :777中所示的VH区，和如SEQ ID NO :778中所示的VL区； (44) 如SEQ ID NO :787中所示的VH区，和如SEQ ID NO :788中所示的VL区； (45) 如SEQ ID NO :797中所示的VH区，和如SEQ ID NO :798中所示的VL区； (46) 如SEQ ID NO :807中所示的VH区，和如SEQ ID NO :808中所示的VL区； (47) 如SEQ ID NO :817中所示的VH区，和如SEQ ID NO :818中所示的VL区； (48) 如SEQ ID NO :827中所示的VH区，和如SEQ ID NO :828中所示的VL区； (49) 如SEQ ID NO :837中所示的VH区，和如SEQ ID NO :838中所示的VL区； (50) 如SEQ ID NO :967中所示的VH区，和如SEQ ID NO :968中所示的VL区； (51) 如SEQ ID NO :977中所示的VH区，和如SEQ ID NO :978中所示的VL区； (52) 如SEQ ID NO :987中所示的VH区，和如SEQ ID NO :988中所示的VL区；和 (53) 如SEQ ID NO :997中所示的VH区，和如SEQ ID NO :998中所示的VL区。
11. 根据权利要求10所述的结合分子，其中所述第一结合结构域包含氨基酸序列，所 述氨基酸序列选自：SEQ ID NO :9、SEQ ID NO :19、SEQ ID NO :29、SEQ ID NO :39、SEQ ID N0:49、SEQ ID N0:59、SEQ ID N0:69、SEQ ID N0:79、SEQ ID N0:169、SEQ ID N0:179、SEQ ID NO ：189,SEQ ID NO ： 199,SEQ ID NO ： 209,SEQ ID NO ：219,SEQ ID NO ： 229,SEQ ID NO： 319,SEQ ID NO ：329,SEQ ID NO ：339,SEQ ID NO ：349,SEQ ID NO ：359,SEQ ID NO ：369,SEQ ID NO ：379,SEQ ID NO ： 389,SEQ ID NO ： 589,SEQ ID NO ： 599,SEQ ID NO ：609,SEQ ID NO： 619、SEQ ID N0:629、SEQ ID N0:639、SEQ ID N0:649、SEQ ID N0:659、SEQ ID N0:669、SEQ ID NO ：679,SEQ ID NO ： 689,SEQ ID NO ： 699,SEQ ID NO ： 709,SEQ ID NO ：719,SEQ ID NO： 729、SEQ ID NO :739、SEQ ID NO :749、SEQ ID NO :759、SEQ ID NO :769、SEQ ID NO :779、 SEQ ID NO ：789,SEQ ID NO ：799,SEQ ID NO ：809,SEQ ID NO ：819,SEQ ID NO ：829,SEQ ID N0:839、SEQIDN0:969、SEQIDN0:979、SEQIDN0 :989JPSEQIDN0:999。
12. 根据权利要求1-6中任一项所述的结合分子，其具有示于SEQ ID NO :340或SEQ ID NO :980的氨基酸序列。
13. 根据前述权利要求中任一项所述的结合分子，其特征在于EC50(pg/ml)为350或更 小，优选为320或更小。
14. 根据前述权利要求中任一项所述的结合分子，其特征在于EC50(pg/ml)相当于 BC E533-B11-B8、BC5G992-E10、BC5G991-D2-B10、BCB1233-A4-B2、BC3A437-A11-G1、BC A7-27C4-G7、BC C333-D7-B1、BC C333-F8-E6B1 中任一个的 EC50(pg/ml)。
15. -种编码根据权利要求1至14中任一项所定义的结合分子的核酸序列。
16. -种包含根据权利要求15所定义的核酸序列的载体。
17. -种采用根据权利要求15所定义的核酸序列或根据权利要求16所定义的载体转 化或转染的宿主细胞。
18. -种用于生产根据权利要求1至14中任一项所述的结合分子的方法，所述方法包 括在允许根据权利要求1至14中任一项所定义的结合分子表达的条件下培养根据权利要 求17所定义的宿主细胞并从所述培养物中回收产生的结合分子。
19. 一种药物组合物，所述药物组合物包含根据权利要求1至14中任一项所述的结合 分子或根据权利要求18所述方法生产的结合分子。
20. 根据权利要求1至14中任一项所述的结合分子或根据权利要求18所述方法生产 的结合分子，其用于预防、治疗或改善选自浆细胞障碍、其它与BCMA表达有关的B细胞障碍 和自身免疫性疾病的疾病。
21. -种用于治疗或改善选自浆细胞障碍、其它与BCMA表达有关的B细胞障碍和自身 免疫性疾病的疾病的方法，所述方法包括给有此需要的受试者施用根据权利要求1至14中 任一项所述的结合分子或根据权利要求18所述方法生产的结合分子的步骤。
22. 根据权利要求21所述的方法，其中所述浆细胞障碍选自：多发性骨髓瘤、浆细胞 瘤、浆细胞白血病、巨球蛋白血症、淀粉样变性、华氏巨球蛋白血症、孤立性骨浆细胞瘤、髓 外浆细胞瘤、骨硬化性骨髓瘤、重链病、意义不明确的单克隆丙种球蛋白病以及郁积型多发 性骨髓瘤。
23. 根据权利要求21所述的方法，其中所述自身免疫性疾病是全身性红斑狼疮。
24. -种试剂盒，所述试剂盒包含根据权利要求1至14中任一项所定义的结合分子、根 据权利要求15所定义的核酸分子、根据权利要求16所定义的载体和/或根据权利要求17 所定义的宿主细胞。 25. BCMA的表位簇3在结合分子生产中的用途，所述结合分子优选为能够结合至BCMA 的抗体，其中BCMA的表位簇3对应于如SEQ ID NO :1002中所示序列的氨基酸残基24至 41。
26. -种用于生产抗体的方法，所述抗体优选为能够结合至BCMA的双特异性结合分 子，所述方法包括： (a) 用包含BCMA的表位簇3的多肽免疫动物，其中BCMA的表位簇3对应于如SEQ ID NO :1002中所示序列的氨基酸残基24至41， (b) 获得所述抗体，和 (c) 可选地，将所述抗体转化为能够结合至人BCMA且优选结合至T细胞CD3受体复合 物的双特异性结合分子。
【文档编号】A61P35/02GK104114578SQ201280056357
【公开日】2014年10月22日 申请日期:2012年11月15日 优先权日:2011年11月15日
【发明者】彼得·库菲, 托拜厄斯·劳姆, 帕特里克·霍夫曼, 罗曼·基谢尔, 拉尔夫·鲁特布瑟, 桃瑞丝·芳, 保罗·亚当, E·伯格斯, B·赫比斯, 苏珊娜·希普 申请人:安进研发（慕尼黑）股份有限公司, 贝林格尔·英格海姆国际有限公司