用于从蛋白质溶液中除去病毒的方法

用于从蛋白质溶液中除去病毒的方法
【专利摘要】本发明涉及一种用于从包括一种靶蛋白的溶液中选择性地除去病毒和/或病毒DNA的方法，从而将丙酮用作沉淀病毒和/或病毒DNA以及该靶蛋白的沉淀剂。
【专利说明】用于从蛋白质溶液中除去病毒的方法
发明领域
[0001]本发明涉及一种用于纯化蛋白质的方法。
[0002]发明背景
[0003]分离自动物来源的蛋白质当例如在食品或药物产品中使用这些蛋白质时易于被不需要的病毒颗粒和/或病毒DNA污染。已知用于纯化此类蛋白质还将降低病毒颗粒和/或病毒DNA的水平的方法，例如层析、过滤、离心、提取或沉淀。然而，在一些情况下，纯化一种感兴趣的蛋白质是困难的、耗时的和/或昂贵的。所以，本发明的一个目的是提供一种用于从感兴趣的蛋白质中除去任何受污染的病毒颗粒和/或病毒DNA的方法。此类方法在工业规模中应该是快速的、有用的、廉价且有效的。
[0004]胰蛋白酶(EC3.4.21.4)是一种发现于许多脊椎动物的消化系统内并在其中水解蛋白质的丝氨酸蛋白酶。胰蛋白酶在哺乳动物的胰脏中以高数量可获得，并且例如猪胰蛋白酶和牛胰蛋白酶可以相当容易地纯化。因此，胰蛋白酶已经被广泛地应用于各种生物技术工艺中。另外，将胰蛋白酶用于婴儿食品中以预消化蛋白质。
[0005]2型猪环状病毒(PCV2)是一种在真核细胞中自主复制的小的无包膜病毒。它是断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)的病原，该综合征是一种在猪中新出现的且多因素的疾病。
[0006]本发明的一个目的是提供一种用于从提取自猪胰腺的胰蛋白酶中除去PCV2病毒颗粒和/或病毒DNA的方法。
[0007]发明概述
[0008]本发明提供了一种用于从包括靶蛋白的水溶液中选择性地除去病毒和/或病毒DNA的方法，所述方法包括:
[0009]a)将丙酮以选择性地沉淀该病毒和/或病毒DNA的浓度添加至该溶液中，
[0010]b)进行一个分离步骤，以将沉淀的材料与包括该靶蛋白的溶液分开，
[0011]c)向该溶液中添加另外量的丙酮，以达到沉淀该靶蛋白的终浓度，并且
[0012]d)从该溶液中收集沉淀的靶蛋白。
[0013]发明详细说明
[0014]本发明提供了一种用于从包括靶蛋白的水溶液中选择性地除去病毒和/或病毒DNA的方法，所述方法包括:
[0015]a)将丙酮以选择性地沉淀该病毒和/或病毒DNA的浓度添加至该溶液中，
[0016]b)进行一个分离步骤，以将沉淀的材料与包括该靶蛋白的溶液分开，
[0017]c)向该溶液中添加另外量的丙酮，以达到沉淀该靶蛋白的终浓度，并且
[0018]d)从该溶液中收集沉淀的靶蛋白。
[0019]为避免任何可能的疑问:以书面顺序进行这些步骤。即，在步骤b)中进行分离，以将步骤a)的沉淀材料与包括该靶蛋白的溶液分开。在步骤c)中，向在步骤b)中获得的溶液中添加另外量的丙酮。并且在步骤d)中，从该溶液中收集步骤c)的沉淀的靶蛋白。
[0020]该靶蛋白可以是任何蛋白质。它可以是一种分离自微生物，例如分离自细菌细胞或真菌细胞的蛋白质。它可以是一种分离自植物的蛋白质。优选地，它是一种分离自动物来源的蛋白质。此类蛋白质可能易于被例如源自表达了该蛋白质的来源生物的病毒颗粒和/或病毒DNA污染。
[0021]可以从一种哺乳动物来源获得该靶蛋白。它可以获得自哺乳动物组织，例如获得自哺乳动物腺体。在一个优选实施例中，该靶蛋白获得自牛或猪胰脏。在一个更优选实施例中，该靶蛋白获得自猪胰脏。
[0022]该靶蛋白可以是一种酶，优选是一种活性酶或可以被再活化的酶。
[0023]可以获得自哺乳动物胰脏(例如获得自猪胰脏)的酶类包括但不限于:蛋白酶，包括但不限于胰蛋白酶、糜蛋白酶、糜蛋白酶B、胰肽酶E、羧肽酶A以及羧肽酶B;脂肪酶，包括但不限于甘油酯水解酶(脂肪酶)、磷脂酶Al、磷脂酶A2以及留醇酯水解酶；核酸酶，包括但不限于核糖核酸酶以及脱氧核糖核酸酶；淀粉酶，包括但不限于α-淀粉酶。
[0024]在一个优选实施例中，该靶蛋白是一种蛋白酶，优选是一种获得自哺乳动物来源的蛋白酶，例如获得自胰脏，优选获得自牛或猪胰脏，更优选获得自猪胰脏。
[0025]在一个更优选实施例中，该靶蛋白是胰蛋白酶，优选获得自胰脏的胰蛋白酶，更优选获得自牛或猪胰脏的胰蛋白酶，甚至更优选获得自猪胰脏的胰蛋白酶。
[0026]包括该靶蛋白的水溶液优选地具有一个低的导电性，例如低于3mS或低于ImS。这可以例如通过渗滤获得，例如使用具有10，OOODa的截留的膜。包括该靶蛋白的水溶液优选具有约2-5，例如约3-4，优选约3.1-3.9，如约3.5的pH。
[0027]该水溶液的 干物质浓度可以是约8% -20%，例如约8% -15%，如约10%。
[0028]在本发明的方法中，从包括靶蛋白的水溶液中选择性地除去病毒和/或病毒DNA。该病毒可以是病毒颗粒。即，在一个优选实施例中，该方法用于从包括靶蛋白的水溶液中选择性地除去病毒颗粒和/或病毒DNA。在一个更优选实施例中，该方法用于从包括靶蛋白的水溶液中选择性地除去病毒DNA。
[0029]该病毒可以是一种传染性病毒，例如一种发现于猪来源的传染性病毒。
[0030]该病毒可以是一种DNA病毒,例如单链DNA病毒,如一种具有单链DNA和环状DNA的病毒。该病毒可以是一种RNA病毒。
[0031]该病毒可以是一种无包膜病毒，例如一种小的无包膜病毒。它可以是一种无包膜DNA病毒或无包膜RNA病毒。
[0032]该病毒可以是一种在真核细胞中自主复制的病毒。
[0033]在一个优选实施例中，该病毒是一种无包膜DNA病毒,例如一种小的无包膜DNA病毒。
[0034]该病毒可以选自下组，该组由以下各项组成:PCV2(猪环状病毒2)、PCV1(猪环状病毒I)、PPV (猪细小病毒)、EMCV (猪脑心肌炎病毒)、HEV (猪戊型肝炎病毒)以及SVDV (猪水疱病病毒)。在一个优选实施例中，该病毒是PCV2。
[0035]在本发明的方法的步骤a)中，将丙酮以选择性地沉淀该病毒和/或病毒DNA的浓度添加至包括该靶蛋白的溶液中。它可以是包括沉淀的病毒DNA或与其相关的病毒颗粒。和/或它可以本身是病毒DNA，例如沉淀的游离病毒DNA。
[0036]选择性沉淀意指大部分的病毒和/或病毒DNA(即多于50% )被沉淀，同时少于50%的靶蛋白被沉淀。[0037]优选地，在步骤a)中，至少60%，例如至少70%、至少80%或至少90%的病毒DNA被沉淀。更优选地,在步骤a)中，至少95%，例如至少99%或至少99.9%的病毒DNA被沉淀。
[0038]优选地，在步骤a)中，少于40%，例如少于30%的靶蛋白被沉淀。更优选地，在步骤a)中，少于25 %，例如少于20 %、少于10 %或少于5 %的靶蛋白被沉淀。
[0039]本领域技术人员将知道如何确定有待在步骤a)中使用的丙酮的浓度。在一个优选实施例中，在步骤a)中的丙酮的浓度是约12%-40% (v/v)，优选是约12%-30% (v/V)，更优选是约14%-30% (v/v)，甚至更优选是约15%-20% (v/v)。在一个更优选实施例中，该靶蛋白是胰蛋白酶并且在步骤a)中的丙酮的浓度是约12%-40% (v/v)，优选是约12% -30% (v/v),更优选是约 14%-30% (v/v),甚至更优选是约 15%-20% (v/v)。在一个甚至更优选实施例中，该靶蛋白是胰蛋白酶，该病毒是PCV2并且在步骤a)中的丙酮的浓度是约12% -40% (v/v),优选是约12% -30% (v/v),更优选是约14% -30% (v/v),甚至更优选是约15% -20% (v/v)。
[0040]优选地，在低于15°C的温度下进行步骤a)中的选择性沉淀。
[0041]在本发明的方法中的步骤b)是一个分离步骤，其中将已经在步骤a)中沉淀的材料与包括该靶蛋白的溶液分离。可以通过本领域已知的任何方法进行这样的分离。分离可以包括过滤和/或离心。在一个优选实施例中，在步骤b)中的分离包括深层过滤。
[0042]优选地，在步骤b)中，至少50%，例如至少60%、至少70%、至少80%或至少90%的病毒DNA被分离。更优选地，在步骤b)中，至少95%，例如至少99%或至少99.9%的病毒DNA被分离。
[0043]在一个优选实施例中，在步骤b)中分离出沉淀的材料以后，在包括该靶蛋白的溶液中检测不到病毒DNA。
[0044]优选地，在步骤b)中，少于40%，例如少于30%的靶蛋白被分离。更优选地，在步骤b)中，少于25%，例如少于20%、少于10%或少于5%的靶蛋白被分离。
[0045]优选地，在步骤b)中的分离以后，在该溶液中回收多于60%，例如多于70%的靶蛋白。更优选地，在步骤b)中的分离以后，在该溶液中回收多于75%，例如多于80%、多于90%或多于95%的靶蛋白。
[0046]优选地，在步骤b)中的分离以后，在该溶液中回收多于60%，例如多于70%的处于其活性形式的靶蛋白。更优选地，在步骤b)中的分离以后，在该溶液中回收多于75%，例如多于80%、多于90%或多于95%的处于其活性形式的靶蛋白。
[0047]在步骤b)后,可以将该滤液的pH调至例如约pH4_5,如约pH4.5。可以使用任何碱，优选是一种弱碱，例如氨水。
[0048]在本发明的方法的步骤c)中，向包括该靶蛋白的溶液中添加另外量的丙酮。添加丙酮，以达到沉淀该靶蛋白的终浓度。
[0049]优选地，在步骤c)中，存在于步骤b)后的溶液中的多于60%，例如多于70%或多于80%的靶蛋白被沉淀。更优选地，在步骤c)中，存在于步骤b)后的溶液中的多于90%，例如多于95 %、多于98 %或多于99 %的靶蛋白被沉淀。
[0050]本领域技术人员将知道如何确定有待在步骤c)中使用的丙酮的浓度。在一个优选实施例中，在步骤c)中的丙酮的终浓度是45%-95%，优选是60%-70% (v/v)，更优选是约66% (v/v)。在另一个优选实施例中，在步骤a)中的丙酮的浓度是约12%-40% (v/V)，优选是约12 % -30 % (v/V),更优选是约14-30 % (v/v),甚至更优选是约15 % -20 % (v/V)，并且在步骤c)中的丙酮的终浓度是45%-95%，优选是60%-70% (v/v)，更优选是约66% (v/v)。在一个更优选实施例中，该靶蛋白是胰蛋白酶，在步骤a)中的丙酮的浓度是约12% -40% (v/v),优选是约12% -30% (v/v),更优选是约14% -30% (v/v),甚至更优选是约15%-20% (v/v)，并且在步骤c)中的丙酮的终浓度是45%-95%，优选是60%-70%(v/v)，更优选是约66% (v/v)。在一个甚至更优选实施例中，该靶蛋白是胰蛋白酶，该病毒是PCV2，在步骤a)中的丙酮的浓度是约12%-40% (v/v)，优选是约12%-30% (v/v)，更优选是约14%-30% (v/v)，甚至更优选是约15%-20% (v/v)，并且在步骤c)中的丙酮的终浓度是45% -95%,优选是60% -70% (v/v)，更优选是约66% (v/v)。
[0051]优选地，在低于15°C的温度下进行步骤c)。
[0052]在本发明的方法的步骤d)中，从该溶液中收集沉淀的靶蛋白。可以通过本领域已知的任何方法进行沉淀的靶蛋白的这样的收集。沉淀的靶蛋白的收集可以包括过滤和/或离心。
[0053]在收集以后，可以将该靶蛋白洗涤、干燥、研磨和/或标准化。
[0054]在一个优选实施例中，本发明涉及一种用于从猪胰蛋白酶的制剂(优选是猪胰腺胰蛋白酶)中选择性地除去PCV2病毒和/或PCV2病毒DNA的方法，所述方法包括: [0055]a)向包括该胰蛋白酶的水溶液中添加丙酮，以达到12% -30% (v/v)的丙酮浓度，
[0056]b)进行一个分离步骤，以将沉淀的材料与包括胰蛋白酶的溶液分开，
[0057]c)向该溶液中添加另外量的丙酮，以达到45% -95% (v/v)，优选是60% -70%(v/v)的终浓度，并且
[0058]d)从该溶液中收集沉淀的胰蛋白酶。
[0059]优选地，通过本发明的方法将至少50 %，例如至少60 %、至少70 %、至少80 %或至少90 %的病毒DNA与该靶蛋白分开。更优选地，通过本发明的方法将至少95%，例如至少99%或至少99.9%的病毒DNA与该祀蛋白分开。
[0060]优选地，与以相同方式纯化但是未使用本方法的步骤a)和b)的靶蛋白相比，通过本发明的方法纯化的靶蛋白包括少于50%病毒DNA。更优选地，与以相同方式纯化但是未使用本方法的步骤a)和b)的靶蛋白相比，通过本发明的方法纯化的靶蛋白包括少于40%，例如少于30%、少于20%或少于10%病毒DNA。甚至更优选地，与以相同方式纯化但是未使用本方法的步骤a)和b)的靶蛋白相比，通过本发明的方法纯化的靶蛋白包括少于5%，例如少于I %、少于0.5%或少于0.1 %病毒DNA。
[0061]在一个优选实施例中，在步骤d)中收集的沉淀的靶蛋白不包括可检测的病毒DNA。
[0062]可以通过本领域已知的任何方法检测或量化病毒DNA。可以使用实时PCR。
[0063]可以使用溶解孵育，随后是在相等体积的氯仿中的DNA提取来提取DNA。可以使用可商购的DNA试剂盒最后纯化并浓缩DNA。随后可以使用实时PCR检测病毒DNA的存在。
[0064]在一个优选实施例中，该病毒是PCV2并且使用可商购的PCV2检测试剂盒进行实时 PCR。
[0065]通过实时PCR量化DNA的一般原理依赖于在对数尺度上相对于循环数目绘制的荧光。将用于检测基于DNA的荧光的阈值设置地稍微高于背景并且将循环阈值(Ct)定义为荧光信号超过该阈值(即超过背景水平)所需的循环数目。在指数式扩增阶段过程中，DNA靶标的序列每个循环都加倍。例如,其Ct领先于另一个样品的Ct3个循环的DNA样品包含23 = 8倍多的模板。
[0066]在一个实施例中，当在经历40个扩增循环并且使用特异性针对该相关病毒DNA的引物的实时PCR测定中进行分析时，可以在提取自步骤d)中收集的沉淀的靶蛋白的总DNA中检测到的病毒DNA的量导致至少38，优选是至少39，更优选是40的Ct值。
[0067]Ct值为40意指在40个扩增循环后，未超过用于检测基于DNA的荧光的阈值，即从未检测到信号。此外，稍微低于40的Ct值非常可能是假阳性的并且因此不等于病毒DNA的检测。
[0068]在一个优选实施例中，该病毒是PCV2，并且当在经历40个扩增循环并且使用特异性针对PCV2 DNA的引物的实时PCR测定中进行分析时，可以在提取自步骤d)中收集的沉淀的靶蛋白的总DNA中检测到的PCV2 DNA的量导致至少38，优选是至少39，更优选是40的Ct值。
[0069]实例
[0070]实例I
[0071]来源:通过水性提取猪胰腺得到PCV2阳性胰蛋白酶批次。
[0072] 将该胰蛋白酶批次溶解于冷的自来水中，至11%溶液。通过添加盐酸将溶液的pH调节至3.5。添加丙酮至20% v/v的终浓度，随后添加1%助滤剂(Kieselguhr HyfloSuper Cel? )。在添加丙酮和助滤剂下，搅拌该溶液并且将温度保持在15°C以下。随后，在具有耐丙酮的滤布(聚丙烯)和细菌滤板(SeitzEKS)的压滤机上过滤该不澄清溶液。在过滤过程中，将压力保持在1.8巴以下。弃掉被保留在过滤器上的杂质。将澄清的滤液收集于罐中并且用氨水将PH调节至4.5。添加丙酮至66% v/v的终浓度。在添加丙酮下，搅拌该溶液并且将温度保持在15°C以下。出现沉淀物(胰蛋白酶)。通过在具有耐丙酮的滤布(聚丙烯)的压滤机上过滤来收集该沉淀物。在过滤过程中，将压力保持在3.5巴以下。最后，在一个真空干燥机中干燥该沉淀物。最终压力为0.5毫巴并且最终温度为38°C。
[0073]使用溶解孵育，随后是在相等体积的氯仿中进行DNA提取来提取DNA。使用可商购的DNA试剂盒最后纯化并浓缩DNA。随后在使用可商购的PCV2检测试剂盒的实时PCR仪器中分析PCV2 DNA的存在。发现干燥的胰蛋白酶对于PCV2而言呈阴性。
[0074]实例2
[0075]来源:通过水性提取猪胰腺得到PCV2阳性液体胰蛋白酶批次。添加助滤剂(Kieselguhr Hyflo Super Cel? )并且在具有Seitz HS9000滤板的压滤机上进行过滤。渗滤该滤液(使用具有10，OOODa的截留的膜)，直到导电性低于lmS。将浓度调节至10%干物质并且用盐酸将PH调节至3.5。将该批次分为2个相等的部分。
[0076]a)添加丙酮至15 % v/v的终浓度，随后添加I %助滤剂(KieselguhrHyfloSuper Cel? )。在添加丙酮和助滤剂下，搅拌该溶液并且将温度保持在15°C以下。随后，在具有耐丙酮的滤布(聚丙烯)和细菌滤板(SeitzEKS)的压滤机上过滤该不澄清溶液。在过滤过程中，将压力保持在1.8巴以下。弃掉被保留在过滤器上的杂质。将澄清的滤液收集于罐中并且用氨水将pH调节至4.5。添加丙酮至66% v/v的终浓度。在添加丙酮下，搅拌该溶液并且将温度保持在15°C以下。出现沉淀物(胰蛋白酶)。通过在具有耐丙酮的滤布(聚丙烯)的压滤机上过滤来收集该沉淀物。在过滤过程中，将压力保持在3.5巴以下。最后，在一个真空干燥机中干燥该沉淀物。最终压力为0.5毫巴并且最终温度为38°C。
[0077]使用溶解孵育，随后是在相等体积的氯仿中进行DNA提取来提取DNA。使用可商购的DNA试剂盒最后纯化并浓缩DNA。随后在使用可商购的PCV2检测试剂盒的实时PCR仪器中分析PCV2 DNA的存在。发现干燥的胰蛋白酶对于PCV2而言呈阴性(Ct:40)。
[0078]b)向该溶液中添加I %助滤剂(KieselguhrHyfloSuper Cel.?)。在添加助滤剂
下，搅拌该溶液并且将温度保持在15°C以下。随后，在具有耐丙酮的滤布(聚丙烯)和细菌滤板(Seitz EKS)的压滤机上过滤该不澄清溶液。在过滤过程中，将压力保持在1.8巴以下。弃掉被保留在过滤器上的杂质。将澄清的滤液收集于罐中并且用氨水将PH调节至
4.5。添加丙酮至66% v/v的终浓度。在添加丙酮下，搅拌该溶液并且将温度保持在15°C以下。出现沉淀物(胰蛋白酶)。通过在具有耐丙酮的滤布(聚丙烯)的压滤机上过滤来收集该沉淀物。在过滤过程中，将压力保持在3.5巴以下。最后，在一个真空干燥机中干燥该沉淀物。最终压力为0.5毫巴并且最终温度为38°C。
[0079]使用溶解孵育，随后是在相等体积的氯仿中进行DNA提取来提取DNA。使用可商购的DNA试剂盒最后纯化并浓缩DNA。随后在使用可商购的PCV2检测试剂盒的实时PCR仪器中分析PCV2 DNA的存在。发现干燥的胰蛋白酶对于PCV2而言呈阳性(Ct:36)。
[0080]实例3
[0081]来源:通过水性提取猪胰腺得到PCV2阳性液体胰蛋白酶批次。添加助滤剂(Kieselguhr Hyflo Super CeiK )并且在具有Seitz HS9000滤板的压滤机上进行过滤。渗滤该滤液(使用具有10，OOODa的截留的膜)，直到导电性低于lmS。将浓度调节至10%干物质并且用盐酸将PH调节至3.5。将该批次分为2个相等的部分。
[0082]a)添加丙酮至10 % v/v的终浓度，随后添加I %助滤剂(KieselguhrHyfloSuper Cel? ) ?在添加丙酮和助滤剂下，搅拌该溶液并且将温度保持在15°C以下。随后，在具有耐丙酮的滤布(聚丙烯)和细菌滤板(SeitzEKS)的压滤机上过滤该不澄清溶液。在过滤过程中，将压力保持在1.8巴以下。弃掉被保留在过滤器上的杂质。将澄清的滤液收集于罐中并且用氨水将PH调节至4.5。添加丙酮至66% v/v的终浓度。在添加丙酮下，搅拌该溶液并且将温度保持在15°C以下。出现沉淀物(胰蛋白酶)。通过在具有耐丙酮的滤布(聚丙烯)的压滤机上过滤来收集该沉淀物。在过滤过程中，将压力保持在3.5巴以下。最后，在一个真空干燥机中干燥该沉淀物。最终压力为0.5毫巴并且最终温度为38°C。
[0083]使用溶解孵育，随后是在相等体积的氯仿中进行DNA提取来提取DNA。使用可商购的DNA试剂盒最后纯化并浓缩DNA。随后在使用可商购的PCV2检测试剂盒的实时PCR仪器中分析PCV2 DNA的存在。发现干燥的胰蛋白酶对于PCV2而言呈阳性(Ct:35)。
[0084]b)向该溶液中添加1%助滤剂(KieselguhrHyflo Super Cel? )。在添加助滤剂
下，搅拌该溶液并且将温度保持在15°C以下。随后，在具有耐丙酮的滤布(聚丙烯)和细菌滤板(Seitz EKS)的压滤机上过滤该不澄清溶液。在过滤过程中，将压力保持在1.8巴以下。弃掉被保留在过滤器上的杂质。将澄清的滤液收集于罐中并且用氨水将PH调节至4.5。添加丙酮至66% v/v的终浓度。在添加丙酮下，搅拌该溶液并且将温度保持在15°C以下。出现沉淀物(胰蛋白酶)。通过在具有耐丙酮的滤布(聚丙烯)的压滤机上过滤来收集该沉淀物。在过滤过程中，将压力保持在3.5巴以下。最后，在一个真空干燥机中干燥该沉淀物。最终压力为0.5毫巴并且最终温度为38°C。
[0085]使用溶解孵育，随后是在相等体积的氯仿中进行DNA提取来提取DNA。使用可商购的DNA试剂盒最后纯化并浓缩DNA。随后在使用可商购的PCV2检测试剂盒的实时PCR仪器中分析PCV2 DNA的存 在。发现干燥的胰蛋白酶对于PCV2而言呈阳性(Ct:36)。
【权利要求】
1.一种用于从包括一种靶蛋白的水溶液中选择性地除去病毒和/或病毒DNA的方法，所述方法包括: a)将丙酮以选择性地沉淀该病毒和/或病毒DNA的浓度添加至该溶液中， b)进行一个分离步骤，以将沉淀的材料与包括该靶蛋白的溶液分开， c)向该溶液中添加另外量的丙酮，以达到沉淀该靶蛋白的终浓度，并且 d)从该溶液中收集该沉淀的靶蛋白。
2.如权利要求1所述的方法，其中在步骤a)中的丙酮的浓度是约12%-40% (v/v),优选是约12% -30% (v/v),更优选是约14% -30% (v/v),甚至更优选是约15% -20% (v/V)。
3.如权利要求1所述的方法，其中在步骤a)中的丙酮的浓度是约15%(v/v) ο
4.如以上权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤c)中的丙酮的终浓度是45%-95%，优选是 60%-70% (v/v)，更优选是约 66% (v/v)。
5.如以上权利要求中任一项所述的方法，其中该靶蛋白获得自一种哺乳动物来源。
6.如以上权利要求中任一项所述的方法，其中该靶蛋白是胰蛋白酶。
7.如以上权利要 求中任一项所述的方法，其中在低于15°C的温度下进行步骤a)中的选择性沉淀。
8.如以上权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤b)中的分离包括过滤和/或离心。
9.如以上权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤b)中的分离包括深层过滤。
10.如以上权利要求中任一项所述的方法，其中步骤d)包括过滤和/或离心。
11.如以上权利要求中任一项所述的方法，其中该病毒是一种无包膜病毒。
12.如以上权利要求所述的方法，其中该病毒是PCV2。
13.如以上权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤b)中，少于25%的靶蛋白被分离。
14.如以上权利要求中任一项所述的方法，其中在步骤b)中，至少50%，优选至少90%的病毒DNA被分离。
15.如以上权利要求中任一项所述的方法，该方法是一种用于从包括一种靶蛋白的水溶液中选择性地除去病毒DNA的方法。
【文档编号】A61L2/00GK104023752SQ201280061308
【公开日】2014年9月3日 申请日期:2012年12月19日 优先权日:2011年12月20日
【发明者】P·约翰森, C·J·克普卡 申请人:诺维信公司