一种新型疫苗佐剂及其制备方法

一种新型疫苗佐剂及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种疫苗佐剂组合物及其冻干制剂和制备方法。该疫苗佐剂组合物含有以下质量体积百分含量的各组分：（1）油相0.1-15%，所述油相选自角鲨烯、角鲨烷和中链甘油三酸酯中的一种或多种；（2）乳化剂0.1-15%，所述乳化剂选自聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯、磷脂和吐温中的一种或多种；和（3）水70-99.5%。本发明的新型疫苗佐剂组合物，稳定性良好，在2～8℃与20～25℃下均能长期保存。可作为灭活疫苗、减活疫苗、裂解疫苗、DNA疫苗、重组疫苗、亚单位疫苗、多肽蛋白疫苗等不同疫苗的佐剂。
【专利说明】
【技术领域】
[0001] 本发明涉及药物领域，具体涉及一种疫苗佐剂组合物及其冻干制剂和制备方法。 一种新型疫苗佐剂及其制备方法

【背景技术】
[0002] 疫苗是一种特殊的药物，作为免疫学经验、理论和生物技术共同发展而产生的生 物制品，它从防范于未然的角度免除了众多传染病对机体的威胁，对人类做出了巨大的贡 献。疫苗的基本成分常包括抗原、佐剂、防腐剂、稳定剂、灭活剂和其他活性成分等。
[0003] 随着现代生物技术的迅速发展，新的疫苗抗原纯度高，相对分子量小，疫苗的不良 反应低，然而这些抗原的免疫原性普遍较弱，为了提高抗原的有效性，必须在抗原中添加佐 剂以增强它们诱导免疫反应的能力。理想的佐剂不仅能增强机体的免疫应答，更能使机体 获得最佳的保护性免疫。
[0004] 佐剂可通过以下几种主要作用方式增强或调节抗原的作用，使机体产生持久、高 效和记忆性免疫应答。①使机体细胞浸润，出现巨噬细胞、浆细胞聚集，并使这些细胞增殖 以期发挥更大的作用；②增加抗原表面积，在特定条件下改变活性基团的构型，使抗原物质 降解，因而增加抗原的免疫原性，对相对分子量较低的抗原和半抗原增加抗原性，提高机体 抗体产量；③形成抗原储库的作用，将过多的抗原储存以延缓释放；④载体效应；⑤免疫刺 激作用，等等。
[0005]目前，应用最广泛的佐剂仍然是铝佐剂，包括氢氧化铝、磷酸铝等。自1926年 Glenny首次使用铝盐粘附白喉类毒素至今，经过几十年的使用，虽然铝佐剂的有效性和安 全性得到了人们的公认，但铝佐剂也有许多不足之处。如主要诱导产生体液免疫应答，诱导 细胞免疫应答的能力较弱，抗体以IgGl型为主。不同批次之间产品差异较大，质量难以控 制。会引起局部不良反应，形成肉芽肿，甚至发生局部无菌性脓肿。
[0006] 其它已经批准上市的佐剂中，MF59和AS03均为0/W型亚微乳，AS04则由氢氧化铝 和 3-〇_ 脱醜单憐酸类脂A(3-〇-deacylatedmonophosphoryllipidA，3D_MPL)组成。意 大利于1997年率先批准含MF59佐剂的流感亚单位疫苗复立达（Fluatf)上市，该佐剂能同 时刺激产生体液免疫应答与细胞免疫应答，从而提高对65岁以上老年人的免疫保护水平。 2009年欧盟批准含AS03佐剂的的H1N1疫苗Pandemrix*上市，含AS04佐剂的人乳头瘤状 病毒（HPV)疫苗Cervarix?也于当年在美国上市。
[0007]专利文献W09014837、EP0399843A2、US6299884B1、US6451325B1、US20090191226A2 公开了MF59的处方、制备方法及其用途。该佐剂含4. 0%?5. 0%角鲨烯、0. 5%吐温80、0. 5% 司盘85,平均粒径约为160nm左右。处方中所含的脂溶性表面活性剂司盘85和水溶性表面 活性吐温80,可使乳化剂的HLB值调节至适当水平。MF59在制备过程中需要高压均质，制 备过程控制难度高，且如果与疫苗混合后高压均质可导致疫苗部分失活。此外，吐温80具 有溶血作用，会导致组胺释放，容易引起过敏反应。
[0008]专利文献US2007141078A1、US2010189741A1、US2010183667A1 公开了AS03 的处 方、制备方法及其用途。单个剂量的AS03含角鲨烯10.68mg、DL-α-生育酚11.86mg，吐 温804. 85mg，平均粒径为150?155nm，配制过程同样需要高压均质。2009?2010年甲型 H1N1流行期间，欧洲多个国家报告pandemrixK疫苗接种者出现神经系统不良反应，主要 表现为嗜睡和睡眠过度。根据芬兰国家健康与福利研究所公布的一份调查报告显示，4? 19岁青少年在接种了 :pandemnx_'_疫苗后患嗜睡症的风险比同年龄组未接种疫苗的青少 年高出9倍。嗜睡症是一种睡眠失调现象，患者会感到极端疲倦，昏昏欲睡，往往会在毫无 预警的情况下睡着，甚至是在活动中途突然入睡。
[0009] 专利文献CN201010247976. 0公开了一种含角鲨烯、聚醚、聚氧乙烯蓖麻油的亚微 乳佐剂，但聚氧乙烯蓖麻油在注射给药中具有较大毒性，易引起变态反应、中毒性肾损伤、 神经毒性、心脏血管毒性等。
[0010] 专利文献CN200910193930. 2公开了一种水包油型复方疫苗佐剂，但其中的蜂胶 组成复杂，含多种不明成分，且制备过程需要用到70%乙醇，易造成溶剂残留，仅适用于兽 用疫苗。
[0011] 专利文献CN02144678. 4与201010103495. 2公开的均为一种纳米乳佐剂，粒径在 10?100nm之间。前者在制备过程中流感疫苗需经历高速搅拌与纳米裂解过程，容易导致 抗原效价降低甚至失活。后者所采用的辅料肉豆蘧酸异丙酯、油酸乙酯、聚氧乙烯蓖麻油在 注射给药中具有较大毒性，且佐剂效果差。


【发明内容】

[0012] 本发明要解决的技术问题是针对现有的疫苗佐剂免疫效果差、制备复杂的问题， 而提供一种新型疫苗佐剂组合物及其冻干制剂和制备方法，该新型疫苗佐剂能提高机体免 疫应答，降低疫苗用量，增强免疫效果，制备简单，不需要使用高压均质或纳米裂解等步骤， 易于工业化生产，有利于疫苗活性的保持。
[0013] 为此，本发明解决上述技术问题的技术方案如下：
[0014] 本发明的技术方案之一：一种疫苗佐剂组合物，其含有以下质量体积百分含量的 各组分：
[0015] (1)油相0. 1-15%，所述油相选自角鲨烯、角鲨烷和中链甘油三酸酯中的一种或多 种；
[0016] (2)乳化剂0. 1-15%，所述乳化剂选自聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯、磷脂和吐温中 的一种或多种；和
[0017] (3)水70-99. 5%。
[0018] 其中，所述的质量体积百分含量（w/v)是指克/100晕升。
[0019] 其中，所述油相选自角鲨烯、角鲨烷和中链甘油三酸酯中的一种或多种，优选的所 述油相是角鲨烯与中链甘油三酯的组合。所述油相的用量为〇. 1-15% (w/v)，优选0. 2-8% (w/v)，进一步优选0· 5-5% (w/v)。
[0020] 其中，所述乳化剂选自聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯、磷脂和吐温中的一种或多 种；优选的，所述乳化剂是聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯和磷脂的组合，或者是吐温和磷脂 的组合。所述乳化剂用量为0.1-15% (w/v)，优选0.2-8% (w/v)，进一步优选0.5-5% (w/ V)。
[0021] 其中，所述磷脂为可药用的天然磷脂或合成磷脂，或其衍生物，所述的天然磷脂优 选卵磷脂和/或大豆磷脂，所述的合成磷脂优选氢化大豆磷脂和/或氢化卵磷脂。
[0022] 其中，所述疫苗佐剂组合物含有水，用量为70-99. 5% (w/v)，优选90-98% (w/v)。 所述的水优选注射用水。
[0023] 其中，所述的疫苗佐剂组合物还可含有等渗调节剂。所述的等渗调节剂是常规种 类，优选氯化钠、氯化镁、氯化钙、葡萄糖和甘油中的一种或多种。所述的等渗调节剂的用量 为常规，优选0.1-8% (w/v)，进一步优选2-2.5% (w/v)。
[0024] 其中，优选的，所述的疫苗佐剂组合物还可含有pH调节剂。所述的pH调节剂是常 规种类，优选氢氧化钠、氢氧化钾等碱类，或盐酸、枸橼酸、磷酸、醋酸、酒石酸、马来酸、氨基 酸(如甘氨酸）等酸或其盐类。所述的pH调节剂的用量是常规，优选不超过1% (w/v)。
[0025] 其中，优选的，所述疫苗佐剂组合物还可含有防腐剂。所述的防腐剂是常规种类， 优选硫柳汞。所述的防腐剂的用量为常规，优选不超过0.1% (w/v)。
[0026] 其中，优选的，所述新型疫苗佐剂组合物还可含有疫苗，疫苗的用量为常规，优选 不超过1% (w/v)。
[0027] 本发明所述的疫苗佐剂组合物可在临用时与疫苗混合，使用，，或与疫苗在生产时 混合，灌封，供临床使用。
[0028] 本发明所述的疫苗佐剂组合物优选以水针形式存在。
[0029] 优选的，本发明所述的疫苗佐剂组合物是0/W型微乳溶液，其中微乳的粒径小于 150nm，优选小于100nm，进一步优选小于70nm。
[0030] 本发明的技术方案之二：所述的疫苗佐剂组合物的制备方法，包括以下步骤：
[0031] (1)油相制备
[0032] 将脂溶性乳化剂加入油相中，搅拌均匀作为混合油相，所述油相选自角鲨烯、角鲨 烷和中链甘油三酸酯中的一种或多种，所述脂溶性乳化剂选自磷脂和吐温中的一种或两 种；
[0033] (2)水相制备
[0034] 将水溶性原料加入水中，搅拌均匀作为水相，所述的水溶性原料包括水溶性乳化 剂聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯；和
[0035] (3)两相混合
[0036] 在搅拌下将步骤（2)所得的水相加入步骤（1)所得的混合油相中，得到带乳光的 溶液，加入水搅拌均匀得0/W型微乳溶液，即得。
[0037] 其中，步骤（1)中将脂溶性乳化剂加入油相中，搅拌均匀作为混合油相。优选 的，控温至2_75°C，使脂溶性乳化剂和油相混合均匀，从而获得混合油相。更优选加热至 50-70。。。
[0038] 步骤（2)中将水溶性原料加入水中，搅拌均匀作为水相。其中，所述的水溶性原料 包括水溶性乳化剂聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯，优选的还包括pH调节剂、等渗调节剂和防 腐剂中的一种或多种。
[0039] 步骤（3)中在搅拌下将步骤（2)所得的水相加入步骤（1)所得的混合油相中，得 到带乳光的溶液，然后加入水搅拌均匀得0/W型微乳溶液，即为所述的疫苗佐剂组合物。其 中，将步骤（2)所得的水相加入步骤（1)所得的混合油相在搅拌下进行，所述搅拌的速度为 20-10000rpm，优选300-700rpm。所述的搅拌的温度为2-75°C，优选50-70°C。优选的，步骤 (3)所述0/W型微乳溶液经0. 22μm滤膜过滤。
[0040] 步骤（1 )，（ 2)中所述的搅拌是指常规的搅拌，优选机械搅拌或磁力搅拌，只要使油 相或水相体系混合均匀即可。步骤（3)所述的搅拌也是指常规的搅拌，优选机械搅拌、磁力 搅拌或者高剪切搅拌。
[0041] 优选的，在步骤（1)、（2)或（3)中所述的任意步骤中往体系中加入疫苗混合均匀。
[0042] 步骤（3)所得的0/W型微乳溶液即可灌装，储存或使用。
[0043] 本发明的技术方案之三：一种疫苗佐剂冻干制剂，其含有以下质量百分比的各组 分：
[0044] (1)油相0.8-45%，所述油相选自角鲨烯、角鲨烷和中链甘油三酸酯中的一种或多 种；
[0045] (2)乳化剂0. 8-60%，所述乳化剂选自聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯、磷脂和吐温中 的一种或多种；和
[0046] (3 )冻干保护剂5-90%。
[0047] 其中，所述油相选自角鲨烯、角鲨烷和中链甘油三酸酯中的一种或多种，优选的所 述油相是角鲨烯与中链甘油三酯的组合。所述油相的用量为0.8-45% (wt)。
[0048] 其中，所述乳化剂选自聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯、磷脂和吐温中的一种或多 种；优选的，所述乳化剂是聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯和磷脂的组合，或者是吐温和磷脂 的组合。所述乳化剂用量为0.8-60% (wt)。
[0049] 其中，所述磷脂为可药用的天然磷脂或合成磷脂，或其衍生物，所述的天然磷脂优 选卵磷脂和或大豆磷脂，所述的合成磷脂优选氢化大豆磷脂和或氢化卵磷脂。
[0050] 其中，所述的疫苗佐剂冻干制剂含有冻干保护剂。所述的冻干保护剂是常规的种 类，优选甘露醇、乳糖、葡萄糖、山梨醇、海藻糖、蔗糖和麦芽糖中的一种或多种。更优选的是 甘露醇、葡萄糖、山梨醇、海藻糖和蔗糖中的一种或多种。所述的冻干保护剂是的用量也是 常规的，优选5-90% (wt)。
[0051] 其中，优选的，所述的疫苗佐剂冻干制剂还可含有pH调节剂。所述的pH调节剂是 常规种类，优选氢氧化钠、氢氧化钾等碱类，或盐酸、枸橼酸、磷酸、醋酸、酒石酸、马来酸、氨 基酸(如甘氨酸）等酸或其盐类。所述的pH调节剂的用量是常规，优选不超过1% (wt)。
[0052] 所述的疫苗佐剂冻干制剂可在临用时与疫苗混合，使用。优选的，所述的疫苗佐剂 冻干制剂还可含有疫苗，疫苗的用量为常规，优选不超过1% (wt)。
[0053] 本发明所述的疫苗佐剂冻干制剂以冻干形式存在。
[0054] 本发明所述的疫苗佐剂冻干制剂复溶后粒径小于150nm，优选小于100nm，进一步 优选小于7〇nm。
[0055] 本发明的技术方案之四：所述的疫苗佐剂冻干制剂的制备方法，包括以下步骤：
[0056] (1)油相制备
[0057] 将脂溶性乳化剂加入油相中，搅拌均匀作为混合油相，所述油相选自角鲨烯、角鲨 烷和中链甘油三酸酯中的一种或多种，所述脂溶性乳化剂选自磷脂和吐温中的一种或两 种；
[0058] (2)水相制备
[0059] 将水溶性原料加入水中，搅拌均匀作为水相，所述的水溶性原料包括水溶性乳化 剂聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯；
[0060] (3)两相混合
[0061] 在搅拌下将步骤（2)所得的水相加入步骤（1)所得的混合油相中，得到带乳光的 溶液，加入水搅拌均匀得0/W型微乳溶液；和
[0062] (4)冻干
[0063] 将步骤（3)所得的0/W型微乳溶液冻干，即得。
[0064] 其中，步骤（1)- (3)及其优选方式如上文所述。
[0065]其中，步骤（4)将步骤（3)所得的0/W型微乳溶液冻干，即得所述的疫苗佐剂冻干 制剂。其中，所述的冻干的方法是常规的。
[0066] 在符合本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实 例。
[0067] 本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0068] 本发明的积极进步效果在于：
[0069] 本发明提供多种应用方法，包括但不限于：（1)独立包装，临用前与疫苗混匀后使 用；（2)组合包装，与疫苗混匀后，灌封，贮藏于2?8°C，直至临床使用；（3)冻干疫苗产品， 与疫苗混匀后，冻干，贮藏于2?8°C，临床使用前复溶；(4)冻干疫苗产品，临床使用前复 溶，与疫苗混匀后使用。
[0070] 本发明的新型疫苗佐剂组合物，可使抗原靶向至淋巴细胞、树突状细胞等抗原提 呈细胞（APC)，提高APC对抗原的捕获能力。
[0071] 本发明的新型疫苗佐剂组合物，稳定性良好，在2-8°C与20-25°C下均能长期保 存。与MF59、AS03只能采用过滤除菌不同，该佐剂既能采用过滤除菌，也能经受终端热压灭 菌(不含疫苗时)。
[0072] 本发明的新型疫苗佐剂组合物，可作为灭活疫苗、减活疫苗、裂解疫苗、DNA疫苗、 重组疫苗、亚单位疫苗、多肽蛋白疫苗等不同疫苗的佐剂，包括但不限于季节性与大流行流 感疫苗(包括HI、H2、H3、H5、H7、H9、B亚型以及HA、NA、Ml、M2亚单位抗原)、人乳头瘤状病 毒疫苗、乙型肝炎疫苗、狂犬疫苗、脊髓灰质炎疫苗等。
[0073] 本发明的新型疫苗佐剂组合物用于不同年龄人群、动物的免疫接种，提高机体免 疫应答，降低疫苗用量。该佐剂较已有的乳剂型佐剂制备简单，不需要使用高压均质或纳米 裂解等步骤，易于工业化生产，有利于疫苗活性的保持，且能更大的增强疫苗的免疫效果。 该方法工艺简单，质量可控，适合大规模工业化生产。

【具体实施方式】
[0074] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实 施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商 品说明书选择。
[0075] 实施例1
[0076] 称取角S烯lg，中链甘油三酸酯lg，SolutolHS151. 5g，卵磷脂0.5g，混合后加热 至70°C，搅拌，得到油相；称取甘油2g，枸橼酸0. 132g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解， 用氢氧化钠溶液调节pH至7作为水相；在500rpm磁力搅拌下，将水相加入油相中，得到带 乳光的溶液，加水至l〇〇mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，灌封至安瓿，即得。
[0077]实施例2
[0078]称取角鲨烯2. 5g，中链甘油三酸酯2. 5g，SolutolHS154g，卵磷脂lg，混合后加热 至60°C，搅拌，得到油相；称取甘油2g，加入60mL注射用水中，搅拌，作为水相；在300rpm机 械搅拌下，将水相加入油相中，得到带乳光的溶液，加水至l〇〇mL，搅拌均匀，0. 45μm滤膜 滤过，灌封至安瓿，热压灭菌，即得。
[0079] 实施例3
[0080] 称取角鲨烯〇· 5g，中链甘油三酸酯0· 5g，SolutolHS152g，卵磷脂0· 5g，混合后加 热至50°C，搅拌，得到油相；称取硫柳汞0. 01g，枸橼酸0. 132g，加入60mL注射用水中，搅拌 使溶解，用氢氧化钠溶液调节pH至7. 4作为水相；在700rpm磁力搅拌下，将水相加入油相 中，得到带乳光的溶液，加入三价流感疫苗(血凝素含量各6mg)，加水至100mL，搅拌均匀， 0. 22μm滤膜滤过，灌封至安瓿，即得。
[0081] 实施例4
[0082] 称取角鲨烯0· 5g，SolutolHS154g，混合后控温至2°C，搅拌，得到油相；称取甘 油2g，加入60mL注射用水中，搅拌，作为水相；在200rpm磁力搅拌下，将水相加入油相中， 得到带乳光的溶液，加入三价流感疫苗(血凝素含量各〇.lmg)，加水至100mL，搅拌均匀， 0. 22μm滤膜滤过，灌封至安瓿，即得。
[0083] 实施例5
[0084] 称取角鲨烯0.3g，SolutolHS152g，混合后加热至40°C，搅拌，得到油相；称取氯 化钠0. 6g，磷酸二氢钾0. 2g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解，用氢氧化钠溶液调节pH 至6作为水相；在800rpm磁力搅拌下，将水相加入油相中，得到带乳光的溶液，加入三价流 感疫苗(血凝素含量各1. 5mg)，加水至100mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，灌封至安瓿，即 得。
[0085] 实施例6
[0086] 称取角鲨烯0.2g，SolutolHS150.4g，卵磷脂0·lg，混合后加热至75°C，搅拌，得 到油相；称取氯化钠〇. 9g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解，作为水相；在lOOrprn机械搅 拌下，将水相加入油相中，得到带乳光的溶液，加水至l〇〇mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过， 灌封至安瓿，即得。
[0087] 实施例7
[0088] 称取角S烯4g，中链甘油三酸酯4g，SolutolHS156g，卵磷脂2g，混合后加热至 55°C，搅拌，得到油相；量取60mL注射用水作为水相；在300rpm机械搅拌下，将水相加入油 相中，得到带乳光的溶液，加水至l〇〇mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，灌封至安瓿，即得。
[0089] 实施例8
[0090] 称取角S烯3g，中链甘油三酸酯7g，SolutolHS1515g，混合后加热至45?，搅拌， 得到油相；称取甘油2. 5g，加入60mL注射用水中，搅拌，作为水相；在400rpm机械搅拌下， 将水相加入油相中，得到带乳光的溶液，加水至l〇〇mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，灌封 至安瓿，即得。
[0091] 实施例9
[0092] 称取角鲨烷5g，中链甘油三酸酯10g，SolutolHS1511g，卵磷脂4g，混合后加热至 55°C，搅拌，得到油相；称取甘油2. 0g，加入60mL注射用水中，搅拌，作为水相；在400rpm磁 力搅拌下，将水相加入油相中，得到带乳光的溶液，加水至l〇〇mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜 滤过，灌封至安瓿，即得。
[0093] 实施例10
[0094] 称取中链甘油三酸酯0·lg，SolutolHS150. 15g，卵磷脂0· 05g，混合后加热至 65°C，搅拌，得到油相；称取磷酸二氢钠0. 142g、磷酸二氢钾0. 027g、氯化钠0. 8g、氯化 钾0. 02g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解，用氢氧化钾溶液调节pH至7作为水相；在 lOOOOrpm高剪切搅拌下，将水相加入油相中，得到带乳光的溶液，加水至100mL，搅拌均匀， 0. 22μm滤膜滤过，灌封至安瓿，即得。
[0095] 实施例11
[0096] 称取中链甘油三酸酯5g，SolutolHS157g，混合后加热至35°C，搅拌，得到油相； 称取甘油2. 0g，加入60mL注射用水中，搅拌，作为水相；在500rpm磁力搅拌下，将水相加 入油相中，得到带乳光的溶液，加水至l〇〇mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，灌封至安瓿，即 得。
[0097] 实施例12
[0098] 称取角S烯〇· 2g，中链甘油三酸酯lg，SolutolHS155g，混合后加热至65°C，搅 拌，得到油相；称取磷酸二氢钠〇. 142g、磷酸二氢钾0. 027g、氯化钠0. 8g、氯化钾0. 02g，加 入60mL注射用水中，搅拌，作为水相；在500rpm磁力搅拌下，将水相加入油相中，得到带乳 光的溶液，加入狂犬疫苗250IU，加水至100mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，灌封至安瓿， 即得。
[0099] 实施例13
[0100] 称取角鲨烯5g，SolutolHS1512g，卵磷脂3g，混合后加热至65°C，搅拌，得到油 相；称取氯化钠〇.lg，枸橼酸〇. 2g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解，用氢氧化钠溶液调 节pH至7作为水相；在500rpm磁力搅拌下，将水相加入油相中，得到带乳光的溶液，加水至 100mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，灌封至安瓿，即得。
[0101] 实施例14
[0102] 称取角鲨烷0. 5g，中链甘油三酸酯0. 5g，SolutolHS153g，大豆磷脂lg，混合后 加热至75°C，搅拌，得到油相；称取甘油2g，枸橼酸0. 3g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶 解，用氢氧化钠溶液调节pH至7作为水相；在lOOOOrpm高剪切搅拌下，将水相加入油相中， 得到带乳光的溶液，加水至l〇〇mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，灌封至安瓿，热压灭菌，即 得。
[0103] 实施例15
[0104] 称取中链甘油三酸酯0.lg，SolutolHS150.lg，混合后加热至55°C，搅拌，得到油 相；称取氯化钠〇. 4g，加入60mL注射用水中，搅拌，作为水相；在lOOOOrpm高剪切搅拌下， 将水相加入油相中，得到带乳光的溶液，加水至l〇〇mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，灌封 至安瓿，即得。
[0105] 实施例16
[0106] 称取角鲨烯0.2g，中链甘油三酸酯0.2g，SolutolHS150.5g，氢化卵磷脂0·lg，混 合后加热至65°C，搅拌，得到油相；称取葡萄糖8g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解，作为 水相；在500rpm磁力搅拌下，将水相加入油相中，得到带乳光的溶液，加水至100mL，搅拌均 匀，0. 22μm滤膜滤过，灌封至安瓿，即得。
[0107] 实施例17
[0108] 称取角S烯2g，中链甘油三酸酯2g，SolutolHS154. 5g，氢化大豆磷脂0. 5g，混合 后加热至65°C，搅拌，得到油相；称取甘油2g，枸橼酸0.lg，加入60mL注射用水中，搅拌使 溶解，用氢氧化钠溶液调节pH至7作为水相；在700rpm磁力搅拌下，将水相缓慢加入油相 中，得到带乳光的溶液，加水至l〇〇mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，灌封至安瓿，即得。
[0109] 实施例18
[0110] 称取角鲨烯〇.lg，中链甘油三酸酯〇. 2g，吐温804. 5g，卵磷脂0.lg，混合后加热 至65°C，搅拌，得到油相；称取磷酸二氢钠0. 142g、磷酸二氢钾0. 027g、氯化钠0. 8g、氯化 钾0. 02g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解，用氢氧化钠溶液调节pH至7作为水相；在 600rpm磁力搅拌下，将水相缓慢加入油相中，得到带乳光的溶液，加水至100mL，搅拌均匀， 0. 22μm滤膜滤过，灌封至安瓿，即得。
[0111] 实施例19
[0112] 称取中链甘油三酸酯0. 2g，吐温200. 15g，卵磷脂0. 05g，混合后加热至65°C，搅 拌，得到油相；称取氯化钠、氯化镁、氯化钙各〇. 2g，枸橼酸0.lg，加入60mL注射用水中，搅 拌使溶解，用氢氧化钠溶液调节pH至7作为水相；在700rpm磁力搅拌下，将水相缓慢加 入油相中，得到带乳光的溶液，加水至l〇〇mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，灌封至安瓿，即 得。
[0113] 实施例20
[0114]称取中链甘油三酸酯0.lg，吐温800. 075g，卵磷脂0. 025g，混合后加热至65°C，搅 拌，得到油相；称取甘油2g，枸橼酸lg，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解，用氢氧化钠溶液 调节pH至7作为水相；在700rpm磁力搅拌下，将水相缓慢加入油相中，得到带乳光的溶液， 加入乙肝疫苗50μg，加水至100mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，灌封至安瓿，即得。
[0115] 实施例21
[0116] 称取角S烯3g，中链甘油三酸酯5g，吐温806g，卵磷脂2g，混合后加热至65?，搅 拌，得到油相；称取甘油2g，甘氨酸0.lg，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解，用氢氧化钠溶 液调节pH至8作为水相；在700rpm磁力搅拌下，将水相缓慢加入油相中，得到带乳光的溶 液，加入乙肝疫苗500μg，加水至100mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，灌封至安瓿，即得。
[0117] 实施例22
[0118]称取角鲨烯5g，中链甘油三酸酯10g，吐温8012g，卵磷脂3g，混合后加热至65°C， 搅拌，得到油相；称取甘油2g，枸橼酸0.lg，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解，用氢氧化钠 溶液调节pH至7. 4作为水相；在500rpm磁力搅拌下，将水相缓慢加入油相中，得到带乳光 的溶液，加入H1N1流感疫苗150μg，加水至100mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，灌封至安 瓿，即得。
[0119] 实施例23
[0120] 称取角鲨烯2g，SolutolHS155g，卵磷脂lg，混合后加热至65°C，搅拌，得到油相； 称取甘油2g，枸橼酸0.lg，硫柳汞0.Olg，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解，用氢氧化钠溶 液调节pH至7作为水相；在700rpm磁力搅拌下，将水相缓慢加入油相中，得到带乳光的溶 液，加入乙肝疫苗5000μg，加水至100mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，灌封至安瓿，即得。
[0121] 实施例24
[0122] 称取角S烯2g，中链甘油三酸酯lg，SolutolHS152g，卵磷脂0. 5g，混合后加热至 65°C，搅拌，得到油相；称取甘油2g，枸橼酸0.lg，硫柳汞0.lg，加入60mL注射用水中，搅拌 使溶解，用氢氧化钠溶液调节pH至7作为水相；在700rpm磁力搅拌下，将水相缓慢加入油 相中，得到带乳光的溶液，加入H1N1流感疫苗5000μg，加水至100mL，搅拌均匀，0. 22μm滤 膜滤过，灌封至安瓿，即得。
[0123] 实施例25
[0124] 制备方法：称取角鲨烯lg，中链甘油三酸酯lg，SolutolHS151. 5g，卵磷脂0. 5g， 混合后加热至70°C，搅拌，得到油相；称取甘露醇4g，枸橼酸0. 132g，加入60mL注射用水 中，搅拌使溶解，用氢氧化钠溶液调节pH至7作为水相；在500rpm磁力搅拌下，将水相加入 油相中，得到带乳光的溶液，加水至l〇〇mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，冻干，封口，即得。
[0125] 实施例26
[0126] 称取角鲨烯2. 5g，中链甘油三酸酯2. 5g，SolutolHS154g，大豆磷脂lg，混合后加 热至60°C，搅拌，得到油相；称取葡萄糖5g，甘氨酸0.lg，加入60mL注射用水中，搅拌，作为 水相；在300rpm机械搅拌下，将水相加入油相中，得到带乳光的溶液，加水至100mL，搅拌均 匀，0. 45μm滤膜滤过，冻干，封口，即得。
[0127] 实施例27
[0128] 称取角S烯4g，中链甘油三酸酯4g，SolutolHS156g，卵磷脂2g，混合后加热至 55°C，搅拌，得到油相；称取甘露醇4g，加入60mL注射用水中，搅拌，作为水相；在300rpm机 械搅拌下，将水相加入油相中，得到带乳光的溶液，加水至l〇〇mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜 滤过，冻干，封口，即得。
[0129] 实施例28
[0130] 称取角S烯3g，中链甘油三酸酯7g，SolutolHS1515g，混合后加热至45?，搅拌， 得到油相；称取甘露醇2g，醋酸钠0. 05g，加入60mL注射用水中，用氢氧化钠溶液调节pH 至6-8作为水相；在400rpm机械搅拌下，将水相加入油相中，得到带乳光的溶液，加水至 100mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，冻干，封口，即得。
[0131] 实施例29
[0132] 称取角鲨烷5g，中链甘油三酸酯10g，SolutolHS1511g，卵磷脂4g，混合后加热至 55°C，搅拌，得到油相；称取海藻糖6g，磷酸二氢钠0.lg，加入60mL注射用水中，搅拌，作为 水相；在400rpm磁力搅拌下，将水相加入油相中，得到带乳光的溶液，加水至100mL，搅拌均 匀，0. 22μm滤膜滤过，冻干，封口，即得。
[0133] 实施例30
[0134] 称取角鲨烯5g，SolutolHS1512g，卵磷脂3g，混合后加热至65°C，搅拌，得到油 相；称取枸橼酸〇. 2g，蔗糖5g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解，用氢氧化钠溶液调节pH 至7. 4作为水相；在500rpm磁力搅拌下，将水相加入油相中，得到带乳光的溶液，加水至 100mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，冻干，封口，即得。
[0135] 实施例31
[0136] 称取中链甘油三酸酯0.lg，SolutolHS150.lg，混合后控温至2°C，搅拌，得到油 相；称取酒石酸〇.lg，山梨醇5g，加入60mL注射用水中，搅拌，作为水相；在lOOOOrpm高剪 切搅拌下，将水相加入油相中，得到带乳光的溶液，加水至l〇〇mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜 滤过，冻干，封口，即得。
[0137] 实施例32
[0138] 称取角鲨烯2g，中链甘油三酸酯2g，SolutolHS154. 5g，氢化大豆磷脂0. 5g，混合 后加热至65°C，搅拌，得到油相；称取枸橼酸0.lg，葡萄糖2g，加入60mL注射用水中，搅拌 使溶解，用氢氧化钠溶液调节pH至6作为水相；在700rpm磁力搅拌下，将水相缓慢加入油 相中，得到带乳光的溶液，加水至l〇〇mL，搅拌均匀，0. 22μm滤膜滤过，冻干，封口，即得。
[0139] 实施例33
[0140] 称取角鲨烯0.lg，中链甘油三酸酯0. 2g，吐温804. 5g，卵磷脂0.lg，混合后加热 至65°C，搅拌，得到油相；称取甘露醇2g、磷酸二氢钠0. 142g、磷酸二氢钾0. 027g、氯化钠 〇. 8g、氯化钾0. 02g，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解，用氢氧化钠溶液调节pH至7. 5作 为水相；在20rpm磁力搅拌下，将水相缓慢加入油相中，得到带乳光的溶液，加水至100mL， 搅拌均匀，〇. 22μm滤膜滤过，冻干，封口，即得。
[0141] 实施例34
[0142] 称取中链甘油三酸酯0.lg，吐温800. 075g，卵磷脂0. 025g，混合后加热至65°C，搅 拌，得到油相；称取甘露醇l〇g，枸橼酸lg，加入60mL注射用水中，搅拌使溶解，用氢氧化钠 溶液调节pH至7作为水相；在70rpm磁力搅拌下，将水相缓慢加入油相中，得到带乳光的溶 液，加水至100mL，搅拌均勻，0. 22μm滤膜滤过，冻干，封口，即得。
[0143] 下述试验例进一步证明本发明的创造性与新颖性，但所列举的试验例并不代表本 发明的全部应用范畴。
[0144] 试验例1佐剂粒径测定
[0145] 将实施例1-24制备的佐剂以注射用水稀释5倍，采用MalvernNano_ZS90动态光 散射粒径电位测定仪测定其粒径(结果见下表)。
[0146] 表1.佐剂粒径测定结果
[0147]

【权利要求】
1. 一种疫苗佐剂组合物，其特征在于，所述的疫苗佐剂组合物含有以下质量体积百分 含量的各组分： (1) 油相0. 1-15%，所述油相选自角鲨烯、角鲨烷和中链甘油三酸酯中的一种或多种； (2) 乳化剂0. 1-15%，所述乳化剂选自聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯、磷脂和吐温中的一 种或多种；和 (3) 水 70-99. 5%。
2. 如权利要求1所述的疫苗佐剂组合物，其特征在于，所述油相是角鲨烯与中链甘油 三酯的组合；所述油相为〇. 2-8% (w/v);所述乳化剂是聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯和磷脂 的组合，或者是吐温和磷脂的组合；所述乳化剂为〇. 2-8% (w/v)。
3. 如权利要求1所述的疫苗佐剂组合物，其特征在于，所述磷脂为卵磷脂、大豆磷脂、 氢化大豆磷脂和氢化卵磷脂中的一种或多种。
4. 如权利要求1所述的疫苗佐剂组合物，其特征在于，所述的疫苗佐剂组合物还含有 等渗调节剂，所述的等渗调节剂为〇.l-8%(w/v);所述的疫苗佐剂组合物还含有pH调节剂， 所述的pH调节剂不超过1% (w/v);所述疫苗佐剂组合物还含有防腐剂，所述的防腐剂不超 过0. 1% (w/v);或者，所述新型疫苗佐剂组合物还含有疫苗，所述的疫苗不超过1% (w/v)。
5. 如权利要求1所述的疫苗佐剂组合物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 油相制备 将脂溶性乳化剂加入油相中，搅拌均匀作为混合油相，所述油相选自角鲨烯、角鲨烷和 中链甘油三酸酯中的一种或多种，所述脂溶性乳化剂选自磷脂和吐温中的一种或两种； (2) 水相制备 将水溶性原料加入水中，搅拌均匀作为水相，所述的水溶性原料包括水溶性乳化剂聚 乙二醇-12-羟基硬脂酸酯；和 (3) 两相混合 在搅拌下将步骤（2)所得的水相加入步骤（1)所得的混合油相中，得到带乳光的溶液， 加入水搅拌均匀得0/W型微乳溶液，即得。
6. 如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)中控温至2-75°C，使所述的脂 溶性乳化剂和所述油相混合均匀，从而获得混合油相； 步骤（2)中所述的水溶性原料包括水溶性乳化剂还包括pH调节剂、等渗调节剂和防腐 剂中的一种或多种； 步骤（3)中将步骤（2)所得的水相加入步骤（1)所得的混合油相在搅拌下进行，所述搅 拌的速度为20-10000rpm，所述的搅拌的温度为2-75°C; 步骤（3 )所述0/W型微乳溶液经0. 22μm滤膜过滤； 步骤（3)所述的搅拌是机械搅拌、磁力搅拌或者高剪切搅拌；或者， 在步骤（1)、（2)或（3)中所述的任意步骤中往体系中加入疫苗混合均匀。
7. -种疫苗佐剂冻干制剂，其特征在于，所述的疫苗佐剂冻干制剂含有以下质量百分 比的各组分： (1) 油相0. 8-45%，所述油相选自角鲨烯、角鲨烷和中链甘油三酸酯中的一种或多种； (2) 乳化剂0.8-60%，所述乳化剂选自聚乙二醇-12-羟基硬脂酸酯、磷脂和吐温中的一 种或多种；和 (3)冻干保护剂5-90%。
8. 如权利要求7所述的疫苗冻干制剂，其特征在于，所述的冻干保护剂是选自甘露醇、 乳糖、葡萄糖、山梨醇、海藻糖、蔗糖和麦芽糖中的一种或多种。
9. 如权利要求7所述的疫苗冻干制剂，其特征在于，所述的疫苗佐剂冻干制剂还含有 pH调节剂，所述的pH调节剂不超过1% (wt);所述的疫苗佐剂冻干制剂还含有疫苗，所述的 疫苗不超过1% (wt)。
10. 如权利要求7所述的疫苗佐剂冻干制剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤： (1) 油相制备 将脂溶性乳化剂加入油相中，搅拌均匀作为混合油相，所述油相选自角鲨烯、角鲨烷和 中链甘油三酸酯中的一种或多种，所述脂溶性乳化剂选自磷脂和吐温中的一种或两种； (2) 水相制备 将水溶性原料加入水中，搅拌均匀作为水相，所述的水溶性原料包括水溶性乳化剂聚 乙二醇-12-羟基硬脂酸酯； (3) 两相混合 在搅拌下将步骤（2)所得的水相加入步骤（1)所得的混合油相中，得到带乳光的溶液， 加入水搅拌均匀得0/W型微乳溶液；和 (4) 冻干 将步骤（3)所得的0/W型微乳溶液冻干，即得。
【文档编号】A61K39/145GK104043119SQ201310080474
【公开日】2014年9月17日 申请日期:2013年3月13日 优先权日:2013年3月13日
【发明者】金方, 蔡伟惠 申请人:上海医药工业研究院, 中国医药工业研究总院