一种重组人胰岛素缓释片及其制备方法
【专利摘要】本发明公开了一种重组人胰岛素缓释片，其包括下述重量配比的原料：知母8-12份、黄芪6-8份、茶油籽3-5份、重组人胰岛素11-15份、卵磷脂22-30份、胆固醇6-10份、胶原蛋白3-6份、维生素E0.8-1.2份、壳聚糖0.4-0.7份。具体制备方法是将原辅料先经预处理，再制备重组人胰岛素脂质体冻干粉，最后经压片成型。本发明方便糖尿病患者服用，且产品包封率高，疗效好，安全无毒，作用时间长。
【专利说明】一种重组人胰岛素缓释片及其制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药领域，具体涉及一种重组人胰岛素缓释片及其制备方法。
【背景技术】
[0002]糖尿病(diabetes)是由遗传因素、免疫功能紊乱、微生物感染及其毒素、自由基毒素、精神因素等等各种致病因子作用于机体导致胰岛功能减退、胰岛素抵抗等而引发的糖、蛋白质、脂肪、水和电解质等一系列代谢紊乱综合征，临床上以高血糖为主要特点，典型病例可出现多尿、多饮、多食、消瘦等表现，即“三多一少”症状。糖尿病患者由于胰岛受损、功能缺失，不能够正常分泌胰岛素，胰岛素的体内合成不足，导致脂肪的合成速度明显降低，分解速度增快，最终导致血液中游离的脂肪酸含量升高。在肝脏中，线粒体将脂肪酸氧化生成了甘油三酯，甘油三酯沉积导致脂肪肝形成，或产生极低密度脂蛋白，乳糜微粒中的甘油三酯含量增高。由于糖尿病患者体内的脂蛋白酶活性明显降低，进而导致了高血脂症。高密度脂蛋白胆固醇主要负责摄取体内细胞中的胆固醇。临床研究发现，糖尿病患者体内的高密度脂蛋白胆固醇含量较低，甘油三酯含量相对较高，通过补充胰岛素可以缓解此症状。
[0003]人类应用的很大一部分胰岛素皆来源于动物。从动物脏器提取的猪、牛胰岛素受脏器来源的限制，而且由于一级结构的差异，带来免疫原性问题，并可能导致一系列的副作用。90年代至今，重组人胰岛素成功研发上市，重组人胰岛素是利用生物工程技术，获得的高纯度的生物合成人胰岛素，其氨基酸排列顺序及生物活性与人体本身的胰岛素完全相同，该品为白色或类白色的结晶性粉末，在水、乙醇和乙醚中几乎不溶，在稀盐酸和稀氢氧化钠溶液中易溶。作为临床糖尿病治疗，胰岛素仍以注射途径给药，这给病人带来极大的不便和痛苦，甚至可能出现不良反应如过敏、硬结、炎症等。研发安全有效、应用方便的胰岛素制剂一直是药学界一大热点。目前研究人员主要利用脂质体、纳米粒、微囊、微球等载体减少肠胃对胰岛素的降解和破坏，促进吸收。
[0004]脂质体是一种类似生物膜结构的双分子层微小囊泡，具有生物膜特性和药物传输能力，胰岛素以脂质体包裹方式给药有利于提高生物利用度和患者用药依从性，脂质体的内水相能保护胰岛素的结构和构象，而外部亲脂层有助于改善跨生物膜屏障吸收性能。在胰岛素脂质体中，胰岛素被包裹在脂质体内部，可抵抗蛋白酶的降解，脂质体的磷脂双分子层还可以控制胰岛素的释放，达到比较平稳的降低血糖。
[0005]制备脂质体的方法很多，且每种方法各有其特点。近年来，胰岛素载体的释药性研究已经取得了一些进展，但面临的困难仍然很多，主要是包封率较低，吸收有限，而且制剂制备方法不成熟，剂量较难控制，成本较高，以及对吸收部位的损坏乃至可能对人体脏器功能带来影响。在制备过程中若能适当地调节膜材，有机溶剂，缓冲溶液三者之间的比例，便可以获得具有较高包封率的脂质体。而包封率是指包裹在脂质体囊中药量占脂质体混悬液中药物总量的比例，衡 量脂质体制剂质量好坏的最重要的指标之一，也是其能否发挥较普通制剂高效、低毒作用的关键，包封率高，则药物缓释效果佳，产品可在体内平稳释放，从而药效得以充分表达。[0006]传统重组人胰岛素制剂单一以重组人胰岛素为主要成分，药效单薄，疗效持续性弱，患者需长期注射或服用，且长期使用后，剂量将不断增大，给患者带来较大困扰和不便。
【发明内容】
[0007]本发明旨在解决现有技术存在的上述不足，目的是提供一种重组人胰岛素缓释片，其组方科学，工艺严谨，包封率高，缓释效果佳，可长期有效降低糖尿病患者的空腹血糖值，对血糖、器官指数均有良好的改善。
[0008]实现上述目的的技术方案是:
一种重组人胰岛素缓释片，包括下述重量配比的原料:知母8-12份、黄芪6-8份、茶油籽3-5份、重组人胰岛素11-15份、卵磷脂22-30份、胆固醇6_10份、胶原蛋白3_6份、维生素E 0.8-1.2份、壳聚糖0.4-0.7份；
具体制备方法如下:
知母提取物的制备:取知母粉碎至200目，加知母质量12-16倍的质量分数为75-90%的乙醇溶液，于55-65°C提取2次，每次l_3h，合并两次提取液，过滤得知母粗提液，粗提液过DlOl型大孔吸附树脂柱，上样流速0.8-1.8BV/h,分别用质量分数35%、55%、65%的乙醇溶液各2.5-3.5BV洗脱，醇洗流速1.6-3.2BV/h,收集洗脱液，洗脱液经减压回收乙醇后，浓缩至药液相对密度为1.03-1.08g/ml，冷冻干燥得知母提取物；
黄芪提取物的制备:取黄芪粉碎至100目，回流提取2次，第一次加8-12倍量水提取2h，第二次加6-10倍量水提取1.5h，合并提取液，过滤，减压浓缩至相对密度为
1.01-1.05g/ml的清膏，喷雾 干燥，得黄芪提取物备用；
茶油籽提取液的制备:取茶油籽脱壳处理得茶油籽仁，于60-90°C条件下，用茶油籽仁质量5-12倍的石油醚回流提取茶油籽仁l_2h，滤过，取滤渣洗净干燥，再加入洗净干燥后的滤渣质量16-22倍的蒸馏水，于50-65°C浸提2次，每次2_3h，收集两次浸提液得茶油籽提取液备用；
磷酸盐缓冲溶液:称取氯化钠Sg、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠3.63g、磷酸二氢钾0.24g，溶于900ml蒸馏水中，调PH值至7.4，加水定容至1L，即得磷酸盐缓冲溶液备用；
重组人胰岛素预处理:将重组人胰岛素溶于重组人胰岛素质量2-4倍的0.01mol/L的HCl溶液中，再加入重组人胰岛素质量6-10倍的PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液，得预处理后的重组人胰岛素溶液备用；
重组人胰岛素脂质体冻干粉的制备:将卵磷脂、胆固醇、胶原蛋白、维生素E溶于432-540份的氯仿-乙醚中，得混合液备用，其中氯仿与乙醚的体积比为1:2-4 ;将上述混合液、预处理后的重组人胰岛素溶液、知母提取物、黄芪提取物充分混合后，水浴超声7-10min,形成稳定的W/0型乳液，将乳液置于旋转蒸发仪中24_27°C减压除去溶剂，旋转形成胶态后，加入26-30份PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液、壳聚糖、茶油籽提取液，在8_12°C水浴旋转孵化20-40min得孵化液，将孵化液经冷冻干燥后得重组人胰岛素脂质体冻干粉备用；压片成型:将重组人胰岛素脂质体冻干粉粉碎至100目，加入硬脂酸镁、微粉硅胶、羟丙甲基纤维素，混合均匀，压片机压片成型，得重组人胰岛素缓释片。
[0009]上述重组人胰岛素购于通化东宝药业股份有限公司。
[0010]本发明将传统的中药制剂与重组人胰岛素相组合，经预处理、脂质体冻干粉制备、压片制成缓释片剂，方便糖尿病患者服用，且产品包封率高，疗效好，安全无毒，作用时间长。经动物试验证明可有效降低糖尿病患者的空腹血糖值，改善血糖、器官指数。
具体实施例
[0011]下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明，以助于理解本发明的内容。
[0012]实施例1:
一种重组人胰岛素缓释片，包括下述重量配比的原料:知母9份、黄芪7份、茶油籽4份、重组人胰岛素13份、卵磷脂24份、胆固醇7份、胶原蛋白4份、维生素E 1.0份、壳聚糖
0.5 份；
具体制备方法如下:
知母提取物的制备:取知母粉碎至200目，加知母质量15倍的质量分数为80%的乙醇溶液，于60°C提取2次，每次2h，合并两次提取液，过滤得知母粗提液，粗提液过DlOl型大孔吸附树脂柱，上样流速1.4BV/h,分别用质量分数35%、55%、65%的乙醇溶液各2.9BV洗脱，醇洗流速2.4BV/h,收集洗脱液，洗脱液经减压回收乙醇后，浓缩至药液相对密度为1.05g/ml，冷冻干燥得知母提取物；
黄芪提取物的制备:取黄芪粉碎至100目，回流提取2次，第一次加10倍量水提取2h，第二次加8倍量水提取1.5h，合并提取液，过滤，减压浓缩至相对密度为1.03g/ml的清膏，喷雾干燥，得黄芪提取物备用；
茶油籽提取液的制备:取茶油籽脱壳处理得茶油籽仁，于75°C条件下，用茶油籽仁质量8倍的石油醚回流提取茶油籽仁 1.5h，滤过，取滤渣洗净干燥，再加入洗净干燥后的滤渣质量19倍的蒸馏水，于60°C浸提2次，每次2.5h，收集两次浸提液得茶油籽提取液备用；磷酸盐缓冲溶液:称取氯化钠Sg、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠3.63g、磷酸二氢钾0.24g，溶于900ml蒸馏水中，调PH值至7.4，加水定容至1L，即得磷酸盐缓冲溶液备用；
重组人胰岛素预处理:将重组人胰岛素溶于重组人胰岛素质量3倍的0.01mol/L的HCl溶液中，再加入重组人胰岛素质量8倍的PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液，得预处理后的重组人胰岛素溶液备用；
重组人胰岛素脂质体冻干粉的制备:将卵磷脂、胆固醇、胶原蛋白、维生素E溶于485份的氯仿-乙醚中，得混合液备用，其中氯仿与乙醚的体积比为1:3 ;将上述混合液、预处理后的重组人胰岛素溶液、知母提取物、黄芪提取物充分混合后，水浴超声8min，形成稳定的W/O型乳液，将乳液置于旋转蒸发仪中25°C减压除去溶剂，旋转形成胶态后，加入28份PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液、壳聚糖、茶油籽提取液，在10°C水浴旋转孵化30min得孵化液，将孵化液经冷冻干燥后得重组人胰岛素脂质体冻干粉备用；
压片成型:将重组人胰岛素脂质体冻干粉粉碎至100目，加入硬脂酸镁、微粉硅胶、羟丙甲基纤维素，混合均匀，压片机压片成型，得重组人胰岛素缓释片。
[0013]实施例2
一种重组人胰岛素缓释片，包括下述重量配比的原料:知母8份、黄芪6份、茶油籽3份、重组人胰岛素11份、卵磷脂22份、胆固醇6份、胶原蛋白3份、维生素E 0.8份、壳聚糖
0.4 份；
具体制备方法如下:知母提取物的制备:取知母粉碎至200目，加知母质量12倍的质量分数为75%的乙醇溶液，于55°C提取2次，每次lh，合并两次提取液，过滤得知母粗提液，粗提液过DlOl型大孔吸附树脂柱，上样流速0.8BV/h,分别用质量分数35%、55%、65%的乙醇溶液各2.5BV洗脱，醇洗流速1.6BV/h,收集洗脱液，洗脱液经减压回收乙醇后，浓缩至药液相对密度为1.03g/ml，冷冻干燥得知母提取物； 黄芪提取物的制备:取黄芪粉碎至100目，回流提取2次，第一次加8倍量水提取2h，第二次加6倍量水提取1.5h，合并提取液，过滤，减压浓缩至相对密度为1.01g/ml的清膏，喷雾干燥，得黄芪提取物备用；
茶油籽提取液的制备:取茶油籽脱壳处理得茶油籽仁，于60°C条件下，用茶油籽仁质量5倍的石油醚回流提取茶油籽仁lh，滤过，取滤渣洗净干燥，再加入洗净干燥后的滤渣质量16倍的蒸馏水，于50°C浸提2次，每次2h，收集两次浸提液得茶油籽提取液备用；
磷酸盐缓冲溶液:称取氯化钠Sg、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠3.63g、磷酸二氢钾0.24g，溶于900ml蒸馏水中，调PH值至7.4，加水定容至1L，即得磷酸盐缓冲溶液备用；
重组人胰岛素预处理:将重组人胰岛素溶于重组人胰岛素质量2倍的0.01mol/L的HCl溶液中，再加入重组人胰岛素质量6倍的PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液，得预处理后的重组人胰岛素溶液备用；
重组人胰岛素脂质体冻干粉的制备:将卵磷脂、胆固醇、胶原蛋白、维生素E溶于432份的氯仿-乙醚中，得混合液备用，其中氯仿与乙醚的体积比为1:2 ;将上述混合液、预处理后的重组人胰岛素溶液、知母提取物、黄芪提取物充分混合后，水浴超声7min，形成稳定的W/O型乳液，将乳液置于旋转蒸发仪中24°C减压除去溶剂，旋转形成胶态后，加入26份PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液、壳聚糖、茶油籽提取液，在8°C水浴旋转孵化20min得孵化液，将孵化液经冷冻干燥后得重组人胰岛素脂质体冻干粉备用；
压片成型:将重组人胰岛素脂质体冻干粉粉碎至100目，加入硬脂酸镁、微粉硅胶、羟丙甲基纤维素，混合均匀，压片机压片成型，得重组人胰岛素缓释片。
[0014]实施例3
一种重组人胰岛素缓释片，包括下述重量配比的原料:知母12份、黄芪8份、茶油籽5份、重组人胰岛素15份、卵磷脂30份、胆固醇10份、胶原蛋白6份、维生素E 1.2份、壳聚糖0.7份；
具体制备方法如下:
知母提取物的制备:取知母粉碎至200目，加知母质量16倍的质量分数为90%的乙醇溶液，于65°C提取2次，每次3h，合并两次提取液，过滤得知母粗提液，粗提液过DlOl型大孔吸附树脂柱，上样流速1.8BV/h,分别用质量分数35%、55%、65%的乙醇溶液各3.5BV洗脱，醇洗流速3.2BV/h，收集洗脱液，洗脱液经减压回收乙醇后，浓缩至药液相对密度为1.08g/ml，冷冻干燥得知母提取物；
黄芪提取物的制备:取黄芪粉碎至100目，回流提取2次，第一次加12倍量水提取2h，第二次加10倍量水提取1.5h，合并提取液，过滤，减压浓缩至相对密度为1.05g/ml的清膏，喷雾干燥，得黄芪提取物备用；
茶油籽提取液的制备:取茶油籽脱壳处理得茶油籽仁，于90°C条件下，用茶油籽仁质量12倍的石油醚回流提取茶油籽仁2h，滤过，取滤渣洗净干燥，再加入洗净干燥后的滤渣质量22倍的蒸馏水，于65°C浸提2次，每次3h，收集两次浸提液得茶油籽提取液备用；
磷酸盐缓冲溶液:称取氯化钠Sg、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠3.63g、磷酸二氢钾0.24g，溶于900ml蒸馏水中，调PH值至7.4，加水定容至1L，即得磷酸盐缓冲溶液备用；
重组人胰岛素预处理:将重组人胰岛素溶于重组人胰岛素质量4倍的0.01mol/L的HCl溶液中，再加入重组人胰岛素质量10倍的PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液，得预处理后的重组人胰岛素溶液备用；
重组人胰岛素脂质体冻干粉的制备:将卵磷脂、胆固醇、胶原蛋白、维生素E溶于540份的氯仿-乙醚中，得混合液备用，其中氯仿与乙醚的体积比为1:4;将上述混合液、预处理后的重组人胰岛素溶液、知母提取物、黄芪提取物充分混合后，水浴超声lOmin，形成稳定的W/0型乳液，将乳液置于旋转蒸发仪中27°C减压除去溶剂，旋转形成胶态后，加入30份PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液、壳聚糖、茶油籽提取液，在12°C水浴旋转孵化40min得孵化液，将孵化液经冷冻干燥后得重组人胰岛素脂质体冻干粉备用；
压片成型:将重组人胰岛素脂质体冻干粉粉碎至100目，加入硬脂酸镁、微粉硅胶、羟丙甲基纤维素，混合均匀，压片机压片成型，得重组人胰岛素缓释片。
[0015]实施例4
一种重组人胰岛素缓释片，包括下述重量配比的原料:知母6份、黄芪4份、茶油籽2份、重组人胰岛素9份、卵磷脂20份、胆固醇5份、胶原蛋白2份、维生素E 0.5份、壳聚糖0.2 份；
具体制备方法如下:
知母提取物的制备:取知母粉碎至200目，加知母质量10倍的质量分数为70%的乙醇溶液，于50°C提取2次，每次lh，合并两次提取液，过滤得知母粗提液，粗提液过DlOl型大孔吸附树脂柱，上样流速0.6BV/h,分别用质量分数35%、55%、65%的乙醇溶液各2.0 BV洗脱，醇洗流速1.4BV/h，收集洗脱液，洗脱液经减压回收乙醇后，浓缩至药液相对密度为1.01g/ml，冷冻干燥得知母提取物；
黄芪提取物的制备:取黄芪粉碎至100目，回流提取2次，第一次加6倍量水提取2h，第二次加5倍量水提取1.5h，合并提取液，过滤，减压浓缩至相对密度为1.01g/ml的清膏，喷雾干燥，得黄芪提取物备用；
茶油籽提取液的制备:取茶油籽脱壳处理得茶油籽仁，于55°C条件下，用茶油籽仁质量4倍的石油醚回流提取茶油籽仁lh，滤过，取滤渣洗净干燥，再加入洗净干燥后的滤渣质量12倍的蒸馏水，于45°C浸提2次，每次1.5h，收集两次浸提液得茶油籽提取液备用；
磷酸盐缓冲溶液:称取氯化钠Sg、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠3.63g、磷酸二氢钾0.24g，溶于900ml蒸馏水中，调PH值至7.4，加水定容至1L，即得磷酸盐缓冲溶液备用；
重组人胰岛素预处理:将重组人胰岛素溶于重组人胰岛素质量1.5倍的0.01mol/L的HCl溶液中，再加入重组人胰岛素质量5倍的PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液，得预处理后的重组人胰岛素溶液备用；
重组人胰岛素脂质体冻干粉的制备:将卵磷脂、胆固醇、胶原蛋白、维生素E溶于350份的氯仿-乙醚中，得混合液备用，其中氯仿与乙醚的体积比为1:1 ;将上述混合液、预处理后的重组人胰岛素溶液、知母提取物、黄芪提取物充分混合后，水浴超声5min，形成稳定的W/O型乳液，将乳液置于旋转蒸发仪中23°C减压除去溶剂，旋转形成胶态后，加入22份PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液、壳聚糖、茶油籽提取液，在7°C水浴旋转孵化20-40min得孵化液，将孵化液经冷冻干燥后得重组人胰岛素脂质体冻干粉备用；
压片成型:将重组人胰岛素脂质体冻干粉粉碎至100目，加入硬脂酸镁、微粉硅胶、羟丙甲基纤维素，混合均匀，压片机压片成型，得重组人胰岛素缓释片。
[0016]实施例5
一种重组人胰岛素缓释片，包括下述重量配比的原料:知母15份、黄芪9份、茶油籽7份、重组人胰岛素17份、卵磷脂33份、胆固醇12份、胶原蛋白7份、维生素E 1.8份、壳聚糖0.9份；
具体制备方法如下:
知母提取物的制备:取知母粉碎至200目，加知母质量18倍的质量分数为95%的乙醇溶液，于70°C提取2次，每次4h，合并两次提取液，过滤得知母粗提液，粗提液过DlOl型大孔吸附树脂柱，上样流速2.0BV/h,分别用质量分数35%、55%、65%的乙醇溶液各3.8BV洗脱，醇洗流速3.6BV/h,收集洗脱液，洗脱液经减压回收乙醇后，浓缩至药液相对密度为1.09g/ml，冷冻干燥得知母提取物；
黄芪提取物的制备:取黄芪粉碎至100目，回流提取2次，第一次加14倍量水提取2h，第二次加13倍量水提取1.5h，合并提取液，过滤，减压浓缩至相对密度为1.07g/ml的清膏，喷雾干燥，得黄芪提取物备用； 茶油籽提取液的制备:取茶油籽脱壳处理得茶油籽仁，于95°C条件下，用茶油籽仁质量14倍的石油醚回流提取茶油籽仁3h，滤过，取滤渣洗净干燥，再加入洗净干燥后的滤渣质量25倍的蒸馏水，于70°C浸提2次，每次4h，收集两次浸提液得茶油籽提取液备用；
磷酸盐缓冲溶液:称取氯化钠Sg、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠3.63g、磷酸二氢钾0.24g，溶于900ml蒸馏水中，调PH值至7.4，加水定容至1L，即得磷酸盐缓冲溶液备用；
重组人胰岛素预处理:将重组人胰岛素溶于重组人胰岛素质量5倍的0.01mol/L的HCl溶液中，再加入重组人胰岛素质量12倍的PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液，得预处理后的重组人胰岛素溶液备用；
重组人胰岛素脂质体冻干粉的制备:将卵磷脂、胆固醇、胶原蛋白、维生素E溶于580份的氯仿-乙醚中，得混合液备用，其中氯仿与乙醚的体积比为1:5;将上述混合液、预处理后的重组人胰岛素溶液、知母提取物、黄芪提取物充分混合后，水浴超声12min，形成稳定的W/0型乳液，将乳液置于旋转蒸发仪中29°C减压除去溶剂，旋转形成胶态后，加入32份PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液、壳聚糖、茶油籽提取液，在14°C水浴旋转孵化60min得孵化液，将孵化液经冷冻干燥后得重组人胰岛素脂质体冻干粉备用；
压片成型:将重组人胰岛素脂质体冻干粉粉碎至100目，加入硬脂酸镁、微粉硅胶、羟丙甲基纤维素，混合均匀，压片机压片成型，得重组人胰岛素缓释片。
[0017]对比例
一种重组人胰岛素缓释片，包括下述重量配比的原料:重组人胰岛素13份、卵磷脂24份、胆固醇7份、胶原蛋白4份、维生素E 1.0份、壳聚糖0.5份；
具体制备方法如下:
磷酸盐缓冲溶液:称取氯化钠Sg、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠3.63g、磷酸二氢钾0.24g，溶于900ml蒸馏水中，调PH值至7.4，加水定容至1L，即得磷酸盐缓冲溶液备用；重组人胰岛素预处理:将重组人胰岛素溶于重组人胰岛素质量3倍的0.01mol/L的HCl溶液中，再加入重组人胰岛素质量8倍的PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液，得预处理后的重组人胰岛素溶液备用；
重组人胰岛素脂质体冻干粉的制备:将卵磷脂、胆固醇、胶原蛋白、维生素E溶于485份的氯仿-乙醚中，得混合液备用，其中氯仿与乙醚的体积比为1:3 ;将上述混合液、预处理后的重组人胰岛素溶液充分混合后，水浴超声8min，形成稳定的W/0型乳液，将乳液置于旋转蒸发仪中25°C减压除去溶剂，旋转形成胶态后，加入28份PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液、壳聚糖，在10°C水浴旋转孵化30min得孵化液，将孵化液经冷冻干燥后得重组人胰岛素脂质体冻干粉备用；
压片成型:将重组人胰岛素脂质体冻干粉粉碎至100目，加入硬脂酸镁、微粉硅胶、羟丙甲基纤维素，混合均匀，压片机压片成型，得重组人胰岛素缓释片。
[0018]试验例
1、包封率测定:准确移取实施例1-5、对比例中的IOmL孵化液于离心分离管中，以12000r/min的转速离心lh，取上清液待测，色谱条件:色谱柱Hypersil 0DS2柱，流动相
0.05mol/L硫酸盐缓冲液-乙腈(72:28);流速1.0mL/min ;检测波长214nm ;进样量20 μ I。包封率:=W/ (W+W游)χ100%,式中，W表示脂质体中包封药物量，W游表示游离药物量，结果见下表1:
表1包封率比较
【权利要求】
1.一种重组人胰岛素缓释片，其特征在于:包括下述重量配比的原料:重组人胰岛素13份、卵磷脂24份、胆固醇7份、胶原蛋白4份、维生素E 1.0份、壳聚糖0.5份。
2.一种重组人胰岛素缓释片，其特征在于:包括下述重量配比的原料:知母8-12份、黄芪6-8份、茶油籽3-5份、重组人胰岛素11-15份、卵磷脂22-30份、胆固醇6_10份、胶原蛋白3-6份、维生素E 0.8-1.2份、壳聚糖0.4-0.7份。
3.—种重组人胰岛素缓释片，其特征在于:包括下述重量配比的原料:知母9份、黄芪7份、茶油籽4份、重组人胰岛素13份、卵磷脂24份、胆固醇7份、胶原蛋白4份、维生素E1.0份、壳聚糖0.5份。
4.如权利要求2所述的一种重组人胰岛素缓释片，其特征在于:具体制备方法为: 知母提取物的制备:取知母粉碎至200目，加知母质量12-16倍的质量分数为75-90%的乙醇溶液，于55-65°C提取2次，每次l_3h，合并两次提取液，过滤得知母粗提液，粗提液过DlOl型大孔吸附树脂柱，上样流速0.8-1.8BV/h,分别用质量分数35%、55%、65%的乙醇溶液各2.5-3.5BV洗脱，醇洗流速1.6-3.2BV/h,收集洗脱液，洗脱液经减压回收乙醇后，浓缩至药液相对密度为1.03-1.08g/ml，冷冻干燥得知母提取物； 黄芪提取物的制备:取黄芪粉碎至100目，回流提取2次，第一次加8-12倍量水提取2h，第二次加6-10倍量水提取1.5h，合并提取液，过滤，减压浓缩至相对密度为1.01-1.05g/ml的清膏，喷雾干燥，得黄芪提取物备用； 茶油籽提取液的制备:取茶油籽脱壳处理得茶油籽仁，于60-90°C条件下，用茶油籽仁质量5-12倍的石油醚回流提取茶油籽仁l_2h，滤过，取滤渣洗净干燥，再加入洗净干燥后的滤渣质量16-22倍的蒸馏水，于50-65°C浸提2次，每次2_3h，收集两次浸提液得茶油籽提取液备用； 磷酸盐缓冲溶液:称取氯化钠Sg、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠3.63g、磷酸二氢钾0.24g，溶于900ml蒸馏水中，调PH值至7.4，加水定容至1L，即得磷酸盐缓冲溶液备用； 重组人胰岛素预处理:将重组人胰岛素溶于重组人胰岛素质量2-4倍的0.01mol/L的HCl溶液中，再加入重组人胰岛素质量6-10倍的PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液，得预处理后的重组人胰岛素溶液备用； 重组人胰岛素脂质体冻干粉的制备:将卵磷脂、胆固醇、胶原蛋白、维生素E溶于432-540份的氯仿-乙醚中，得混合液备用，其中氯仿与乙醚的体积比为1:2-4 ;将上述混合液、预处理后的重组人胰岛素溶液、知母提取物、黄芪提取物充分混合后，水浴超声7-10min,形成稳定的W/0型乳液，将乳液置于旋转蒸发仪中24_27°C减压除去溶剂，旋转形成胶态后，加入26-30份PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液、壳聚糖、茶油籽提取液，在8_12°C水浴旋转孵化20-40min得孵化液，将孵化液经冷冻干燥后得重组人胰岛素脂质体冻干粉备用；压片成型:将重组人胰岛素脂质体冻干粉粉碎至100目，加入硬脂酸镁、微粉硅胶、羟丙甲基纤维素，混合均匀，压片机压片成型，得重组人胰岛素缓释片。
5.如权利要求3所述的一种重组人胰岛素缓释片，其特征在于:具体制备方法为: 知母提取物的制备:取知母粉碎至200目，加知母质量15倍的质量分数为80%的乙醇溶液，于60°C提取2次，每次2h，合并两次提取液，过滤得知母粗提液，粗提液过DlOl型大孔吸附树脂柱，上样流速1.4BV/h,分别用质量分数35%、55%、65%的乙醇溶液各2.9BV洗脱，醇洗流速2.4BV/h,收集洗脱液，洗脱液经减压回收乙醇后，浓缩至药液相对密度为1.05g/ml，冷冻干燥得知母提取物； 黄芪提取物的制备:取黄芪粉碎至100目，回流提取2次，第一次加10倍量水提取2h，第二次加8倍量水提取1.5h，合并提取液，过滤，减压浓缩至相对密度为1.03g/ml的清膏，喷雾干燥，得黄芪提取物备用；茶油籽提取液的制备:取茶油籽脱壳处理得茶油籽仁，于75°C条件下，用茶油籽仁质量8倍的石油醚回流提取茶油籽仁1.5h，滤过，取滤渣洗净干燥，再加入洗净干燥后的滤渣质量19倍的蒸馏水，于60°C浸提2次，每次2.5h，收集两次浸提液得茶油籽提取液备用；磷酸盐缓冲溶液:称取氯化钠Sg、氯化钾0.2g、磷酸氢二钠3.63g、磷酸二氢钾0.24g，溶于900ml蒸馏水中，调PH值至7.4，加水定容至1L，即得磷酸盐缓冲溶液备用； 重组人胰岛素预处理:将重组人胰岛素溶于重组人胰岛素质量3倍的0.01mol/L的HCl溶液中，再加入重组人胰岛素质量8倍的PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液，得预处理后的重组人胰岛素溶液备用； 重组人胰岛素脂质体冻干粉的制备:将卵磷脂、胆固醇、胶原蛋白、维生素E溶于485份的氯仿-乙醚中，得混合液备用，其中氯仿与乙醚的体积比为1:3 ;将上述混合液、预处理后的重组人胰岛素溶液、知母提取物、黄芪提取物充分混合后，水浴超声8min，形成稳定的W/O型乳液，将乳液置于旋转蒸发仪中25°C减压除去溶剂，旋转形成胶态后，加入28份PH=7.4的磷酸盐缓冲溶液、壳聚糖、茶油籽提取液，在10°C水浴旋转孵化30min得孵化液，将孵化液经冷冻干燥后得重组人胰岛素脂质体冻干粉备用； 压片成型:将重组人胰岛素脂质体冻干粉粉碎至100目，加入硬脂酸镁、微粉硅胶、羟丙甲基纤维素，混合均匀，压片机压片成型，得重组人胰岛素缓释片。
【文档编号】A61K38/28GK103495156SQ201310371791
【公开日】2014年1月8日 申请日期:2013年8月23日 优先权日:2013年8月23日
【发明者】楼秀余 申请人:楼秀余