用于免疫调节的拉多替吉治疗的制作方法

用于免疫调节的拉多替吉治疗的制作方法
【专利摘要】提供了使用拉多替吉(ladostigil)治疗患有炎症，特别是全身性炎症包括脓毒性休克和影响胃肠、心肌和内分泌系统的炎性状况的个体的方法。
【专利说明】用于免疫调节的拉多替吉治疗 发明领域
[0001] 本发明涉及包含拉多替吉（Iadostigil)的药物组合物和剂量单位，以及使用其 用于抑制炎症的方法。
[0002] 发明背景
[0003] 炎症是对伤害、感染或刺激的生物应答，其中细胞和微血管反应的级联用于根除 感染、去除损伤组织和产生新的组织。由各种免疫效应物和介质介导的免疫反应启动和紧 密地调节炎症应答。然而，尽管正常免疫系统被精密地调节，免疫应答中的偏差并非罕见。 这样的失调或过度的炎症反应可能导致潜在的有害过程，转而导致由于过度暴露于免疫介 质或细胞效应物的器官损伤和各种病症。这些包括急性病症诸如脓毒性休克，和慢性病症 诸如慢性胃肠道炎性疾病和自身免疫疾病。
[0004] 大脑中的免疫应答是特化的，以及与在外周中的那些非常不同。这样的不同赋予 中枢神经系统（CNS) -种免疫特权状态。如此，CNS相对地被从外周免疫系统隔离，并且 具有其自身驻留的免疫网，其中神经胶质细胞（主要是小胶质细胞和星形胶质细胞）不仅 服务于神经元的支持和营养作用，还通过瞬时上调炎症过程保卫CNS免受压力和致病性危 害。相反，全身炎症反应由外围免疫系统介导，并涉及不同的白细胞亚群，包括血源性单核 细胞、组织驻留巨噬细胞和特化的淋巴细胞。
[0005] 胃肠炎症
[0006] 克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、炎性肠病以及其他相关的状况形成了一系列的胃肠 道的慢性炎性疾病。炎性肠病（IBD)，慢性胃肠道炎症的一种形式，包括一组慢性炎性紊乱， 包括溃疡性结肠炎（UC)和克罗恩氏病（CD)。这些疾病表现为是由肠内炎症应答的无限制 激活引起的。这种炎症级联反应被认为是通过促炎性细胞因子的作用和淋巴细胞亚群的选 择性激活的作用而延续下去。在患有IBD的患者中，肠的内衬的溃疡和炎症导致腹痛、腹泻 和直肠出血的症状。溃疡性结肠炎发生在大肠，而在克罗恩氏病中该疾病可涉及整个胃肠 道，小肠和大肠都有。UC是主要影响结肠黏膜的浅层的状况，并且组织学分析显示黏膜的溃 疡形成，隐窝的钝化和损失，以及炎性浸润。
[0007] IBD的治疗通常利用各种口服施用的全身性抗炎剂，其被设计为减少炎症应答。一 线治疗通常采用5-氨基水杨酸（美沙拉嗪）或其前体、免疫抑制剂诸如环孢霉素，皮质甾 类诸如倍氯米松，以及生物制剂诸如英利昔单抗（针对肿瘤坏死因子a，TNFa的嵌合单克 隆抗体），抗白细胞粘连分子，和达克珠单抗（针对白细胞介素-2受体a，IL_2Ra的重组 人源免疫球蛋白Gl单克隆抗体）。由于IBD中细菌感染的假定作用，肠道菌群的根除也通 过包括抗生素和抗菌剂的使用的手段被尝试。约20-25%的患有UC的患者未能对药物治疗 响应，并且因此适用于总直肠结肠切除术的外科手术。一般来说，患有⑶的患者对药物治 疗的响应较低，并且通常不对手术治疗响应。
[0008] 糖尿病
[0009] 糖尿病是与血液中异常高水平的葡萄糖关联的一种常见的代谢紊乱。有两种主要 类型的糖尿病，被称为1型和2型。
[0010] 1型糖尿病（τID，或胰岛素依赖型糖尿病，IDDM)是由于自身免疫应答导致胰脏的 胰岛中β细胞的破坏引起的胰岛素缺乏造成的。1型糖尿病的初始阶段包括胰腺的胰岛的 炎症，被称为胰岛炎。胰岛炎的特征在于白细胞和巨噬细胞浸润进入胰岛，之后是自身免疫 攻击中胰腺的β细胞的实际破坏。研究表明，IDDM作为主要的炎性β细胞功能障碍进展 而没有实际β-细胞破坏，直到疾病过程的后期。
[0011] 2型糖尿病（T2D、以前的非胰岛素依赖型糖尿病、NIDDM或成年发病型糖尿病），显 示由强的遗传倾向和环境因素造成，环境因素诸如饮食、身体活动和年龄。它是一种代谢紊 舌L其特征在于，在相对的胰岛素抵抗和胰岛素缺乏的情况下的高血糖。2型糖尿病是由胰 岛素抵抗和减弱的β细胞功能相结合造成的。胰岛素抵抗被定义为在在脂肪组织、骨骼肌 组织和肝脏组织中对胰岛素缺乏敏感性。因此，胰腺产生大于正常量的胰岛素，一种被定义 为高胰岛素血症的状态。然而，最终胰腺失败，以及胰岛素分泌水平降低。
[0012] 促炎性细胞因子TNF-α、IL_1 β和IL-6水平的增加，也在糖尿病患者的血液中被 发现。炎症可能是高血糖，连同糖化和脂质过氧化的产物一起诱导的氧化应激继发的。促 成胰岛素抵抗和T2D的发展的一个主要因素是肥胖，其特征在于低度炎症的状态，其中增 殖的白血细胞和激活的巨噬细胞从循环迁移到组织（Wellen等2005)。
[0013] 不幸的是，目前还没有用于糖尿病的治愈方法。处方的治疗一般包括控制高血糖 来缓解症状，以及预防并发症，同时最小化低血糖发作。
[0014] 心肌缺血
[0015] 由于心肌缺血或缺血心脏衰竭导致的心脏疾病是在发达国家中死亡的主要原因。 当心脏暴露于缺血，氧的供给的缺乏导致心肌内ATP的耗尽，其如果减少90%，造成在心肌 中不可逆的结构变化。在再充氧后，有氧代谢的恢复导致活性氧簇（ROS)、超氧化物和羟基 自由基的过载，其能够损坏细胞膜上的细胞结构、酶或通道蛋白。这些事件可以触发炎性级 联反应的激活和细胞因子的释放（Cha等，2008)，其使得细胞更易于遭受心肌收缩功能障 碍或死亡。
[0016] 心肌缺血的治疗是针对改善血液流向心脏肌肉，并且可包括药物治疗、打开阻塞 的动脉的程序或冠状动脉搭桥手术。然而，外科手术，以及特别是心脏和血管手术具有围术 期心肌缺血性损害的进一步风险。一种用于最小化围术期损伤的方法被称为心肌缺血预调 理（ischemic preconditioning, IPC)〇
[0017] IPC是一种完善的用于心脏保护的程序，尤其是在接受心脏手术的患者中。IPC由 通过短的（重新）灌注间隔的短缺血期组成，在长时间的缺血损伤之前应用到心脏。在人 类和动物模型中，IPC保护心脏对抗与缺血关联的损害，以及减少由此产生的心室功能不全 (Nakano 等，2000)。
[0018] 由于缺血性心血管疾病的发病率和死亡率在老年人中显著高于青壮年的成年人。 老化造成心肌的结构部件中的改变，损害线粒体功能，增加单胺氧化酶（MAO)-A,以及产生 活性氧簇（ROS)。然而，来自老年受试者的心脏和糖尿病患者的心脏一般抵抗来自预调理程 序的心保护（Przyklenk，2011)。因此，对于保护老年受试者不受特别是心血管外科手术诱 发的心肌损害仍然存在未满足的需求。
[0019] 内毒素及相关应答
[0020] 内毒素总是与革兰氏阴性菌关联。虽然术语"内毒素"偶尔用来指任何细胞 相关的细菌毒素，在细菌学中它是适当地保守的指与革兰氏阴性病原体的外膜关联的 脂多糖（LPS)复合体，革兰氏阴性病原体例如大肠杆菌（Escherichia coli)、沙门氏菌 (Salmonella)、志贺氏菌（Shigella)、假单胞菌（Pseudomonas)、奈瑟氏球菌（Neisseria)、 流感嗜血杆菌（Haemophilus influenzae)、百日咳杆菌（Bordetella pertussis)和霍乱弧 菌（Vibrio cholerae)〇
[0021] 内毒素的生物活性与脂多糖（LPS)相关联。毒性与脂质组分（脂质A)关联，以及 免疫原性与多糖组分关联。革兰氏阴性菌的细胞壁抗原（0抗原）是LPS的组分。LPS引发 动物中各种炎症反应，以及其通过替代（备解素）途径激活补体。
[0022] 具体地，LPS诱导多种急性炎症反应，其定性地类似于在脓毒性休克的早期阶段 中发生的那些。而且，LPS诱导广泛的多种炎症介质，例如促炎细胞因子（如肿瘤坏死因 子-α、IL-Ιβ、IL-6、IL-8)的释放、纤维蛋白溶解系统的活化、激肽释放酶-激肽的生成 和磷脂酶Α2释放。在内毒素施用后吞噬性白细胞被引发以增强炎症反应。
[0023] 乙酰昍碱酯酶（AChE)的抑制剂
[0024] 乙酰胆碱酯酶（AChE)的抑制剂是抑制乙酰胆碱被酶AChE的分解，从而增加神经 递质乙酰胆碱的作用的水平和持续时间的化合物家族。可逆的AChE抑制剂他克林和多奈 哌齐，或伪可逆AChE抑制剂，诸如利凡斯的明和毒扁豆碱，被表明减轻与受损的乙酰胆碱 的水平关联的神经紊乱，诸如阿尔茨海默氏病（AD)。
[0025] 因为某些免疫系统细胞具有毒蕈碱和烟碱胆碱能受体的各种亚型和/或合成 AChE，已提出胆碱能上调可能导致抗炎作用。的确，用乙酰胆碱或其激动剂诸如烟碱的某 些临床前试验表明胆碱能上调之后的免疫调节（参见，如Borovikova等，2000, Wang等， 2004)。此外，在临床试验中检查了使用烟碱贴片用于人类溃疡性结肠炎的治疗（Sandborn 等，1997)。然而，作为治疗剂的烟碱的使用，特别是口服使用，被其毒性限制。
[0026] 此外，某些AChE抑制剂诸如多奈哌齐、他克林和利凡斯的明，被表明影响免疫系 统，特别是在CNS中。这种活性在很大程度上表明依赖于AChE抑制和/或要求其在CNS中存 在。参见，如 Nizri 等（2006) ,Reale 等（2004) ,Tyagi 等（2007)以及 Langley 等（2004)。 美国专利申请公布号2005/0222123涉及一种治疗患有细胞因子介导的炎性紊乱的受试者 的方法，包含向该受试施用者胆碱酯酶抑制剂以及加兰他敏。本发明的一些发明人的WO 2009/022345,涉及利凡斯的明和相关的苯基氨基甲酸酯用于多发性硬化症的治疗的用途。 本发明的一些发明人的WO 2009/022346,涉及利凡斯的明和这样相关的苯基氨基甲酸酯用 于治疗炎性肠病和其他自身免疫性疾病和慢性炎性胃肠疾病和状况的用途。
[0027] 然而，其他报告表明，由AChE抑制剂发挥的免疫调节作用不足以缓解病情的结 果，尤其是在CNS之外。例如，Nizri等（2005)公开了由非甾体抗炎药布洛芬和吡啶斯的 明组成的双功能化合物，被发现在EAE小鼠模型中有效。虽然通过吡啶斯的明单独治疗小 鼠导致减少淋巴细胞增殖，这样的治疗并没有改变疾病的严重程度。Nizri等（2007)已经 描述了另一种这样的双功能化合物，即IBU-辛基-金雀花碱，含有布洛芬和金雀花碱作为 烟碱激动剂，其还报告了每一部分单独地不能再现这个化合物的效果。Holmes等（2009)发 现高水平的血清TNF-α，其与AD患者中基线认知障碍的程度相关联，独立于伴随的胆碱酯 酶使用。
[0028] 与AChE抑制剂的使用关联的一个问题是在口服施用后发生的高度的副作用。这 些副作用包括恶心、呕吐、肠胃不适和腹泻。仅仅通过限制施用剂量最小化这些副作用可能 并不总是适用，因为AChE抑制剂活性必需的药物功效在较低剂量可能受损。
[0029] 此外，由于不良反应，很多AChE抑制剂在患有非神经学病理的患者的治疗中是禁 忌的。例如，利凡斯的明在糖尿病患者是禁忌的，因为它可提高血糖和促进糖尿病控制的损 失。其中禁忌利凡斯的明治疗的其他患者人群是那些有心血管/肺疾病和GI紊乱的患者 人群。事实上，尽管这些化合物的潜在的免疫调节特性的知识，目前没有适应于神经/神经 变性紊乱以外的状况的治疗的AChE抑制剂。
[0030] 柃多替吉
[0031] 拉多替吉，也称为R (+) -6- (N-甲基，N-乙基氨基甲酰氧基）-Ν' -炔丙基-1-氨基 讳满和（3R) _3_ (丙_2_块基氨基）-2, 3,-二氢-IH-讳满_5_基乙基甲基氨基甲酸酯，是 带有氨基甲酸酯基团的炔丙基氨基茚满。被设计为组合雷沙吉兰的MO-B抑制活性与利凡 斯的明的AChE抑制活性，拉多替吉在大脑中选择性地抑制AChE和MAO-A和B两者。在比 体内抑制任一酶的剂量低得多的剂量下，拉多替吉具有与降低氧化应激和小胶质细胞活化 关联的神经保护活性，两者都不是与抑制MAO或AChE的能力相关的。
[0032] 拉多替吉的盐包括拉多替吉的1/2L-酒石酸盐。这种拉多替吉的酒石酸盐，拉 多替吉酒石酸-6-(Ν-乙基，N-甲基氨基甲酰氧基）-Ν_炔丙基-I(R)-氨基茚满，酒石 酸（2:1)缩写为[(R)-CPAI]酒石酸盐，以及还称为拉多替吉酒石酸盐，具有CAS注册号 209394-46-7,以及可被用作拉多替吉片剂的活性成分。
[0033] 拉多替吉的活性包括AChE的抑制和MAO的抑制。在体内，拉多替吉在大脑中选择 性地抑制MAO-A和MAO-B两者。这些活性使得拉多替吉在共患痴呆症的阿尔茨海默氏病的 治疗中尤其有用。
[0034] 美国专利号6, 251，938、6, 303, 650和6, 538, 025,通过参考并入本文，公开了拉多 替吉及在大脑中选择性地抑制AChE和MAO的其它化合物。这些化合物可以对治疗阿尔茨 海默氏病和除了抑郁症之外的其他痴呆症，诸如老年性痴呆、帕金森氏型痴呆、血管性痴呆 和路易体痴呆是有用的。
[0035] 美国专利号7, 335, 685和美国申请公布号20060189819、20070088082和 20070093549,通过引用并入本文，公开了拉多替吉酒石酸盐的结晶形式以及制备其的方 法。美国专利号7, 375, 249和7, 476, 757和美国申请公布号20060199974,通过引用并入 本文，公开了包括拉多替吉的对映体氨基讳满（indanylamine)衍生物的合成。美国专利号 7, 491，847和美国申请公布号20070112217,通过引用并入本文，公开了用于分离炔丙基化 (propargylated)氨基茚满的方法。美国申请公布号20070203232,通过引用并入本文，公 开了用于分离炔丙基化（propargylated)氨基茚满的方法，并且公开了其在阿尔茨海默氏 病的治疗中的用途。美国申请公布号20070232691，通过引用并入本文，公开了拉多替吉治 疗精神分裂症的用途。
[0036] 美国申请公布号20060189685,通过引用并入本文，公开了包含拉多替吉的制剂。 美国申请公布号20070135518和20070293583,通过引用并入本文，公开了低剂量的拉多替 吉用于神经保护的用途。
[0037] WO 2005/051371公开了治疗易患心血管紊乱或疾病或患有心血管紊乱或疾病的 受试者的方法，其包含向该受试者施用有效地治疗该受试者的量的活性剂，活性剂选自由 下列组成的组：炔丙基胺、炔丙基胺衍生物、及其药学上可接受的盐。拉多替吉被鉴定为 N-炔丙基-1-氨基茚满的类似物。
[0038] WO 2006/130726公开了多发性硬化症的一种形式的治疗方法，包含施用一定量的 R(+)-6-(N-甲基，N-乙基氨基甲酰氧基）-Ν' -炔丙基-1-氨基茚满或其药学上可接受的 盐。WO'726还公开了，有效改善EAE的拉多替吉剂量（51和70. lmg/kg/天），在大脑中产 生AChE的47-52%抑制，以及在血液中AChE的60-65%抑制，而较低剂量没有被发现是有 效的。
[0039] 在本申请的 优先权日:之后公布的WO 2012/059920,涉及治疗被确定为具有阿尔茨 海默氏病和其它神经变性疾病的个体的方法，包含施用拉多替吉或其药物活性盐，剂量范 围在60-200mg拉多替吉/天。
[0040] Panarsky等（2010)公开了，拉多替吉和三种其活性代谢产物的体外治疗减少NO 从LPS诱导的小胶质细胞培养物的释放。该公开内容表明，氨基甲酸酯基团和炔丙基基团 对于它们在小神经胶质中针对LPS的保护活性可能是非必需的。响应于LPS的IL-I β和 TNF α的mRNA的量也在拉多替吉治疗之后减少。
[0041] 在本申请的 优先权日:之后公布的Panarsky等（2012)，公开了在顶叶皮层中，拉多 替吉（lmg/kg/天）显著减小了 IL-Ιβ、IL-6、TNF-a和可诱导的NO合酶（iNOS)的基因表 达。还显示了拉多替吉和三种其活性代谢产物的体外治疗抑制了 LPS诱导的NO从小鼠小 胶质细胞的释放，并且减少了 TNF-a mRNA和蛋白质和IL-I β和iNOS mRNA。
[0042] 然而，没有技术公开或清楚暗示了拉多替吉可用作用于非神经系统适应症，诸如 用于治疗中枢神经系统以外的外周器官中的炎性疾病的治疗药物。对能有效抑制炎症，没 有与市售消炎药关联的破坏性的副作用的拉多替吉及其药学上可接受的盐的方法和制剂 仍然存在需求。特别是，对与全身性炎症，包括如胃肠道炎症和与2型糖尿病相关的炎症， 关联的病理的治疗仍然存在未满足的需求。对如通过外科手术引起的缺血性脑损伤的保护 手段是未满足的需求。
[0043] 发明概述
[0044] 本发明涉及包含拉多替吉的药物组合物和剂量单位，以及使用其抑制炎症的方 法。本发明的【具体实施方式】涉及拉多替吉通过抵抗关键炎症介质的活性或抑制来自炎症诱 导细胞的炎性介质的释放来治疗炎症的用途。本发明还提供了用于改善全身性炎症，包括 脓毒性休克和影响胃肠、心肌和内分泌系统的炎性状况、以及其他的IL-6介导的病症的新 的治疗方式。
[0045] 本发明部分地基于拉多替吉在中枢神经系统（CNS)外产生有益治疗效果的令人 惊奇的发现。现在第一次证明，拉多替吉具有抗炎作用，这与其MAO和AChE抑制活性无关， 或者与其对小胶质细胞的报告的活性无关。拉多替吉在本文被证明在包括试验性内毒素血 症、溃疡性结肠炎和糖尿病的几种体内模型中，以及在减少促炎介质特别是IL-6的水平的 方面是有效的。拉多替吉被令人惊讶地发现优于其它药剂，诸如利凡斯的明，在全身性炎症 的各种体内模型中提供增加的功效和增强的安全性。
[0046] 本发明还部分地基于发现，这些抗炎活性在导致最小或没有MAO或AChE抑制的剂 量下是显著的，而较高剂量被令人惊讶的发现较差，或甚至在某些实验模型中无效。拉多替 吉的这种意想不到的抗炎药代动力学特征表明了拉多替吉在10-60mg/天的施用剂量的益 处，而至少最小化或甚至消除与MAO和/或AChE活性的抑制关联的副作用。
[0047] 还令人惊奇的发现，拉多替吉能够增强大鼠心肌缺血预调理（IPC)方案的功效， 第一次证明在以前不顺从于治疗的老年的受试者中对缺血/再灌注损伤增强保护。
[0048] 如此，本发明的各种实施方式中提供用于在需要其的受试者中抑制炎症，特别是 全身性炎症的方法。在其他实施方式中公开了用于治疗、预防或改善炎性疾病的方法，详情 如下。本发明的方法通过向需要其的受试者施用拉多替吉或其药物活性盐来实现。
[0049] 根据一个方面，提供了在需要其的受试者中抑制炎症的方法，该方法包含向该受 试者施用拉多替吉或其药物活性盐，从而抑制所述受试者的炎症。
[0050] 在一种实施方式中，该炎症是全身性炎症（不局限于CNS)。在另一种实施方式中， 该受试者被鉴定为患有炎性疾病而不是神经炎性疾病。在另一种实施方式中，该受试者不 伴随患有神经或神经变性疾病。在另一种实施方式中，该炎性疾病被升高的IL-6的水平介 导（例如，其特征在于增强的IL-6的血液水平）。
[0051] 在各种实施方式中，该炎性疾病选自由下列组成的组：炎性胃肠疾病（如结肠 炎）、炎性代谢疾病（如糖尿病）、以及缺血相关的炎症（如心肌缺血后的炎症）。
[0052] 在某些具体的实施方式中，该炎性胃肠疾病包括，但不限于，炎性肠病（如溃疡性 结肠炎和克罗恩氏病）、肠易激综合征、回肠炎、慢性炎性肠病、和乳糜泻。
[0053] 在其它具体的实施方式中，该炎性代谢疾病是1型糖尿病、2型糖尿病、糖尿病前 期、血脂异常、或胰岛素抵抗。在另一种【具体实施方式】中，该疾病是2型糖尿病。
[0054] 在另一种实施方式中，所述需要其的受试者是患有、或有风险发展内毒素血症或 脓毒性休克的受试者。在一种具体的实施方式中，受试者患有脓毒性休克。
[0055] 有利地，本发明的方法抑制受试者中的炎症，同时引起与胆碱酯酶活性的抑制关 联的最小副作用（如果有）。在另一种实施方式中，所述抑制炎症还包含最小化与胆碱酯酶 活性的抑制关联的副作用。在另一种实施方式中，所述拉多替吉以抑制不超过25%的乙酰 胆碱酯酶的活性、单胺氧化酶的活性、或这两种酶的组合的活性的量施用。在另一种实施方 式中，所述拉多替吉以抑制不超过15%的乙酰胆碱酯酶的活性、单胺氧化酶的活性、或这两 种酶的组合的活性的量施用。在另一种实施方式中，所述拉多替吉以10至60mg的每日剂 量施用。在另一种实施方式中，所述其药物活性盐是拉多替吉酒石酸盐。
[0056] 在另一种实施方式中，所述抑制炎症减少：TNF_a的血液水平、IL-β 1的血液水 平、IL-6的血液水平、TNF-a的脾水平、IL-β 1的脾水平、IL-6的脾水平、或其任意组合。 在一种具体的实施方式中，所述抑制炎症包含减少IL-6的血液水平。在一种具体的实施方 式中，所述抑制炎症包含抑制IL-6的释放。
[0057] 根据本发明的各种实施方式，拉多替吉可以如一个每日剂量的拉多替吉，或其它 实施方式中两个每日剂量的拉多替吉施用到所述受试者。例如，该两个每日剂量可以是等 分剂量。在另一种实施方式中，所述拉多替吉或所述其药物活性盐被配制成口服剂型。在 另一种实施方式中，所述拉多替吉或所述其药物活性盐被配制成直肠剂型，如用于胃肠道 炎性疾病的治疗。在另一种实施方式中，所述拉多替吉或其药物活性盐被配制成速释的药 物组合物。在另一种实施方式中，本发明的方法包含施用所述拉多替吉作为唯一的活性成 分。在又一实施方式中，该方法包含施用所述拉多替吉与另一种治疗或活性成分的组合，另 一种治疗或活性成分如缺血性调理疗法，详情如下。
[0058] 在另一方面，本发明提供了在需要其的受试者中治疗胃肠道的炎性疾病的方法， 包含向该受试者施用拉多替吉或其药物活性盐，由此来治疗该疾病。在另一种实施方式中， 该疾病是与胃肠道的病理性炎症相关联的慢性炎性疾病。在某些具体的实施方式中，炎性 胃肠疾病包括，但不限于，炎性肠病（如溃疡性结肠炎和克罗恩氏病）、肠易激综合征、回肠 炎、慢性炎性肠病、和乳糜泻。在某些实施方式中，所述拉多替吉以l〇-6〇mg的每日剂量施 用。在某些其他实施方式中，所述拉多替吉以抑制不超过25%或在其它实施方式中不超过 15%的乙酰胆碱酯酶的活性、单胺氧化酶的活性、或这两种酶的组合的活性的量施用。
[0059] 在另一方面，提供了在需要其的受试者中治疗炎性代谢疾病的方法，包含向该受 试者施用拉多替吉或其药物活性盐，由此来治疗该疾病。在各种实施方式中，该疾病包括， 但不限于，糖尿病（如1型或2型）、糖尿病前期、血脂异常和胰岛素抵抗。在一种具体实施 方式中，该疾病是2型糖尿病。
[0060] 在另一方面，本发明提供了在需要其的受试者中减少或抑制缺血性损伤（特别是 缺血性心肌损伤）的方法，包含向该受试者施用拉多替吉，从而在所述受试者中减少或抑 制缺血性损伤。优选地，拉多替吉与缺血性调理组合（如在调理治疗之前、与之同时或之 后）施用到所述受试者。例如，拉多替吉可被长期施用10-60mg的每日剂量到所述受试者 两周，随后调理，以及可在预调理如心肌IPC之后继续，所述心肌IPC通过机械动脉闭塞来 诱发短暂性缺血发作的重复循环来进行。有利地，该受试者是本来不顺从于缺血性调理的 年老的或糖尿病的受试者。
[0061] 在各种实施方式中，该方法可被用于在需要其的受试者中减少或抑制与缺血有关 的炎症（如，心肌缺血后的炎症）、用于减少或抑制围术期心肌缺血损伤、用于针对缺血和/ 或再灌注损伤提供保护、用于心脏手术或缺血性发作之前、期间或之后提供心脏保护、以及 用于增强缺血性调理的功效。在某些实施方式中，所述拉多替吉以10至60mg的每日剂量 施用。在某些其他实施方式中，所述拉多替吉以抑制不超过25%或在其它实施方式中不超 过15%的乙酰胆碱酯酶的活性、单胺氧化酶的活性、或这两种酶的组合的活性的量施用。 [0062] 在另一方面，提供了包含拉多替吉或其药物活性盐与缺血性调理疗法的组合的药 物组合物，所述缺血性调理疗法选自由下列组成的组：促红细胞生成素、阿片类药物（如， 吗啡、芬太尼、瑞芬太尼、美沙酮）、胰岛素和腺苷A1、A2A、A2B和/或A3受体激动剂（如， 腺苷、5' -N-乙基羧酰氨基腺苷、N6-环戊基腺苷、2-(1-己炔基）-N-甲基腺苷）。在一种具 体实施方式中，该组合物包含10至60mg单位剂量形式的拉多替吉。
[0063] 在另一方面，提供了一种药物包，包含拉多替吉或其药物活性盐，以及缺血性调理 疗法，所述缺血性调理疗法选自由下列组成的组：促红细胞生成素、阿片类药物、胰岛素和 腺苷2受体，与同时或顺序组合施用拉多替吉和缺血性调理疗法用于减少或抑制缺血性损 伤的说明书。在一种【具体实施方式】中，该药物包包含10-60mg单位剂量形式的拉多替吉。 [0064] 在另一方面，本发明提供了一种药物组合物，用于在需要其的受试者中抑制全身 性炎症，包含拉多替吉或其药物活性盐。在另一种实施方式中，该组合物用于在患有炎性 疾病的受试者中抑制炎症，该炎性疾病选自由下列组成的组：炎性胃肠疾病、炎性代谢疾病 和缺血相关的炎症。在另一具体的实施方式中，该疾病是选自由下列组成的组的炎性胃肠 疾病：炎性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩氏病）、肠易激综合征、回肠炎、慢性炎性肠病、和 乳糜泻。在另一实施方式中，该疾病是选自由下列组成的组的炎性代谢疾病：2型糖尿病、1 型糖尿病、糖尿病前期、血脂异常和胰岛素抵抗。在另一实施方式中，所述疾病是脓毒性休 克。在另一实施方式中，该炎性疾病是由升高的IL-6水平介导的。在另一实施方式中，所 述拉多替吉是以10至60mg的每日剂量。在另一实施方式中，所述拉多替吉是以抑制不超 过25%的乙酰胆碱酯酶的活性、单胺氧化酶的活性、或这两种酶的组合的活性的量，或以抑 制不超过15%的乙酰胆碱酯酶的活性、单胺氧化酶的活性、或这两种酶的组合的活性的量。 在另一实施方式中，所述其药物活性盐是拉多替吉酒石酸盐。
[0065] 在另一方面，提供了包含拉多替吉或其药物活性盐的药物组合物，用于治疗需要 其的受试者中的炎性疾病，其中所述疾病是胃肠道的炎性疾病或炎性代谢疾病。在另一实 施方式中，该疾病是与胃肠道的病理炎症相关的慢性炎性疾病，优选地，选自由下列组成的 组：炎性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩氏病）、肠易激综合征、回肠炎、慢性炎性肠病、和乳 糜泻。在另一实施方式中，该疾病是选自由下列组成的组的炎性代谢疾病：2型糖尿病、1型 糖尿病、糖尿病前期、血脂异常和胰岛素抵抗，优选2型糖尿病。
[0066] 在另一方面，提供了一种药物组合物，用于在需要其的受试者中减少或抑制缺血 性损伤，优选地，缺血性心肌损伤，包含拉多替吉或其药物活性盐。在另一实施方式中，该组 合物被用于与缺血性调理组合。在另一种实施方式中，该组合物被用于在需要其的受试者 中减少或抑制围术期心肌缺血损伤、或用于增强缺血性调理的功效。在另一种实施方式中， 该受试者是本来不顺从于缺血性调理的年老的或糖尿病的受试者。在另一种实施方式中， 该组合物包含拉多替吉或其药物活性盐，与缺血性调理疗法相结合，所述缺血性调理疗法 选自由下列组成的组：促红细胞生成素、阿片类药物、胰岛素和腺苷A1、A2A、A2B和/或A3 受体激动剂。
[0067] 在另一种实施方式中，所述拉多替吉以10至60mg的每日剂量施用。在另一种实 施方式中，所述拉多替吉是以抑制不超过15%的乙酰胆碱酯酶的活性、单胺氧化酶的活性、 或这两种酶的组合的活性的量。
[0068] 本发明的其它目的、特征和优点将从下面的描述和附图中变得清楚。
[0069] 附图简要说明
[0070] 图1.显示了用5% DSS处理第7天和第8天时拉多替吉对结肠炎的宏观参数的影 响。
[0071] 图2.证明了拉多替吉对由DSS溶液在小鼠中诱导的结肠收缩的影响。
[0072] 图3.阐明了拉多替吉对具有DSS诱导的结肠炎的小鼠中的细胞因子和髓过氧化 物酶增加的影响。
[0073] 图4.描述了血液葡萄糖水平与胰岛素血液水平和胰腺的胰岛细胞的数量的关 系。
[0074] 实施方式的详细描述
[0075] 本发明涉及包含拉多替吉或其活性盐的药物组合物和剂量单位，以及使用其通过 抑制炎性介质的释放来抑制炎症的方法。在另一实施方式中，抑制炎症是中和炎症介质的 反应性。
[0076] 本发明还提供了用于抑制全身性炎症的包含拉多替吉或其药学上可接受的盐的 药物组合物。已知此化合物用于阿尔茨海默病和其它形式的痴呆症的治疗。本发明提供了 包含拉多替吉的组合物用于治疗和抑制炎性病症，特别是，影响胃肠道、心肌和内分泌系统 的炎性状况、以及其他的IL-6介导的病症的进展的新用途。换言之，本发明是针对本来不 需要拉多替吉治疗的受试者的治疗。本发明的方法有利地通过在造成最小或没有MO或 AChE抑制的剂量施用拉多替吉或其盐实现，因此最小化与这些酶的抑制关联的不良效果。
[0077] 如下详述的，拉多替吉的抗炎特性在小鼠和其它哺乳动物的外周系统中被检查。 在某些试验中，内毒素血症是被LPS的注射诱导的。拉多替吉的单次口服施用（10mg/kg) 比20mg/kg的施用在脾脏中降低促炎性细胞因子TNF-a、IL-I β和IL-6的形成方面有效 的多。这是在大脑、血浆或脾脏中没有ChE的任何显著抑制下完成的。在其它试验中，拉多 替吉的长期口服施用（5或10mg/kg/天）减少了在结肠中被葡聚糖硫酸钠（DSS)诱导的 UC的症状和炎症标志物，而不造成结肠 ChE的任何抑制。这些发现与ChE抑制剂利凡斯的 明的观察结果恰好形成对比，利凡斯的明仅以在脾、结肠和大脑中抑制ChE>50%的剂量在 LPS内毒素血症和小鼠 DSS模型中显示抗炎活性。此外，拉多替吉显示了相比利凡斯的明在 阻止胃肠道炎症关联的体重损失方面发挥意想不到的改善的抗炎活性。因此，与ChE抑制 剂比较，拉多替吉提供了增强的功效和改善的安全性。
[0078] 在一种实施方式中，本发明提供了一种在受试者中抑制炎症，尤其是全身性炎症 的方法，包含该向受试者施用治疗有效量的拉多替吉或其药物活性盐，从而在需要其的受 试者中抑制炎症。
[0079] 在其它实施方式中，本文提供了在需要其的受试者中治疗胃肠道的炎性疾病或炎 性代谢疾病的方法，在需要其的受试者中减少或抑制缺血性损伤的方法，以及包含拉多替 吉或其药物活性盐与缺血性调理疗法相结合的组合物和药物包，所述缺血性调理疗法选自 由下列组成的组：促红细胞生成素、阿片类药物、胰岛素和腺苷A1、A2A、A2B和/或A3受体 激动剂，详情如下。
[0080] 本发明的组合物和方法有利地包含治疗有效量的拉多替吉抑制炎症而减少与 AChE和/或MAO活性的抑制关联的副作用的用途，详情如下。
[0081] 根据一些实施方式，本发明的方法包含鉴定患有炎性疾病的受试者，或在其它实 施方式中，处于发展炎性疾病的风险的受试者，并向所述受试者施用治疗有效量的拉多替 吉或其药物活性盐，从而治疗或抑制所述疾病的进展。
[0082] 炎症和炎症介质的抑制
[0083] 炎性疾病与特异性和非特异性防御系统的反应关联。特异性防御系统反应是对抗 原（可包括自身抗原）的特异性免疫系统反应应答，如由B细胞和T细胞介导的反应。非特 异性防御系统反应是由不能免疫记忆的白细胞介导的炎症应答。这样的细胞包括粒细胞、 巨噬细胞、中性粒细胞和嗜酸性粒细胞。炎症与大批的酶的活化、血管的通透性增加和血液 体液的外渗、细胞迁移和化学介质的释放关联。参与这些炎症反应或炎症级联反应的各种 炎症介质是已知的，包括，但不限于，细胞因子、趋化因子和急性期蛋白。用于炎症的检验是 本领域公知的。不希望受任何理论或作用机理的约束，本发明的化合物的免疫调节作用可 由一种或更多种这样的炎症参数确定，包括，但不限于，白细胞和淋巴细胞（如T细胞）的 活化、增殖、迁移和渗透到炎症部位。便利地，拉多替吉及其盐抑制炎症的功效可以用体外 和/或体内检验来确定，如下面举例说明的。例如，该化合物减少与炎性疾病关联的增加的 IL-6水平（如血液水平）的能力，可被用来确定该化合物改善该疾病的抗炎效果。
[0084] 在一种实施方式中，提供了在需要其的受试者中抑制炎症的方法，包含向所述受 试者施用拉多替吉或其药物活性盐，从而在需要其的受试者抑制炎症。在另一种实施方式 中，抑制炎症是治疗患有炎症的受试者。在另一实施方式中，抑制炎症是抑制炎症过程的进 展/恶化。在另一种实施方式中，抑制炎症是减少脓毒性休克的风险。在另一种实施方式 中，抑制炎症是抑制血液和/或脾脏中促炎细胞因子（诸如：TNF-a、IL-6、IL-I β )的水平 的升高。在另一种实施方式中，抑制炎症是抑制在发炎过程中血液和/或脾脏中促炎细胞 因子（诸如：TNF_a、IL-6、IL_li3)的水平的升高。在另一种实施方式中，抑制炎症是抑制 血液和/或脾脏中促炎细胞因子（诸如：TNF-a、IL-6、IL-I β)的水平的升高至少20%。 在另一种实施方式中，抑制炎症是抑制触发全身性炎症。在另一种实施方式中，抑制炎症是 抑制局部炎症蔓延为全身性炎症。在另一实施方式中，抑制炎症是抑制全身性炎症的进展。 每个可能性代表了本发明的独立实施方式。
[0085] 在另一种实施方式中，炎症是全身性炎症。在另一种实施方式中，全身性炎症是促 炎细胞因子从免疫相关细胞释放以及先天免疫系统的慢性活化的结果。在另一种实施方式 中，全身性炎症是慢性全身性炎症。
[0086] 在另一种实施方式中，炎症是全身性炎症反应综合征（SIRS)。在另一种实施方式 中，全身炎症反应综合征是一种影响整个身体的炎症状态，通常是免疫系统对感染的响应， 但是并不一定如此。在另一种实施方式中，全身炎症反应综合征涉及败血症，败血症是一种 其中个体符合SIRS的标准以及具有已知或高度怀疑的感染的状况。在另一种实施方式中， 炎症是急性炎症应答。在另一种实施方式中，全身性炎症是急性炎症应答。
[0087] 在另一种实施方式中，炎症是全身性炎症反应综合征。在另一种实施方式中，根据 本发明的炎症是脓毒性休克。在另一种实施方式中，根据本发明的炎症导致脓毒性休克。在 另一种实施方式中，本发明提供了一种在受试者中抑制或预防全身性炎症的方法，包含向 该受试者施用治疗有效量的拉多替吉或其药物活性盐。在另一种实施方式中，本发明提供 了一种在受试者中抑制或预防脓毒性休克的方法，包含向该受试者施用治疗有效量的拉多 替吉或其药物活性盐。在另一种实施方式中，全身炎症反应综合征是脓毒性休克或导致脓 毒性休克。在另一种实施方式中，该受试者患有内毒素血症。如本文使用的，术语"内毒素 血症"是指一种状况，其中内毒素（LPS粒子或分子）在受试者中存在的水平能够诱导特异 性应答，诸如败血症和脓毒性休克。通常，内毒素血症与革兰氏阴性细菌感染关联。
[0088] 在另一种实施方式中，炎症是慢性炎性疾病。在另一种实施方式中，炎症是结节性 多动脉炎。在另一种实施方式中，炎症是一种由于细菌、真菌或病毒感染的疾病，或可以是 子痫。
[0089] 在另一种实施方式中，根据本发明的炎症是细菌血症、真菌血症（funguemia)、寄 生虫血症、病毒血症关联的脓毒性休克，与多器官衰竭关联。在另一种实施方式中，根据本 发明的炎症是严重败血症，（诸如但不限于：腹膜炎、肺炎、导管相关感染、尿路、胆道感染 或疟疾）。在另一种实施方式中，根据本发明的炎症是由下列造成的：胰腺炎、烧伤、与脂肪 栓塞关联或不关联的多发伤、大量输血、成人呼吸窘迫综合征（ARDS)、急性肾衰竭（ARF)相 关的炎性疾病，或手术。在一种实施方式中，根据本发明的炎症可导致多器官功能障碍和严 重的灌注不足：即出血性、心源性、过敏性缺血再灌注：挤压综合征、主动脉横形钳闭、缺血 再灌注（即肠系膜、下肢缺血）。每个可能性代表了本发明的独立实施方式。
[0090] 在另一种实施方式中，根据本发明的炎症是慢性感染诸如，但不限于：HIV、心内膜 炎和感染相关的动脉炎即梅毒。在另一种实施方式中，炎症是全身性疾病诸如：坏死性血管 炎、韦格纳氏综合征、结节性多动脉炎、过敏性肉芽肿病、颞动脉炎、肾血管硬化、Takayasus 氏症、伯格氏病、自身免疫性疾病：如类风湿关节炎、系统性红斑狼疮（SLE)、急性风湿热、 皮肌炎、系统性硬皮病、血栓性血小板减少性紫癜、与升高的细胞因子（即TNF-α)或肿瘤 裂解关联的血液和癌症疾病、或内皮侵略卡勒氏病、淋巴瘤特别是T细胞淋巴瘤、肿瘤溶解 综合征，无论自发或血液或肿瘤性疾病（即急性白血病、实体肿瘤尤其是升高的细胞因子） 的抗癌治疗诱导的。在另一种实施方式中，根据本发明的炎症是由下列导致的：免疫疾病 (即贝格尔氏病）动脉粥样硬化、血管成形术后的手术后血管再狭窄、糖尿病（如糖尿病性 血管炎）、严重的肝脏疾病、或炎性肠病（IBD)。在一种具体的实施方式中，所述疾病是自身 免疫疾病。每个可能性代表了本发明的独立实施方式。
[0091] 在另一种实施方式中，本发明利用了公知的模型，其中全身性炎症是被脂多糖 (LPS)诱导的。在另一种实施方式中，LPS被用于诱导脓毒性休克。
[0092] 在另一种实施方式中，本发明涉及抑制系统地增加的炎性介质诸如细胞因子的水 平。这个实施方式是与以前关于拉多替吉对从小胶质细胞释放细胞因子的影响的报告无 关，尤其因为后者通常不会导致脑外诸如在血液中的细胞因子的升高水平。在另一种实施 方式中，本发明提供了在需要其的受试者中用于减少：TNF-α的血液水平、IL-β 1的血液 水平、IL-6的血液水平、TNF-α的脾水平、IL-β 1的脾水平、IL-6的脾水平、或其任意组合 的方法，包含向该受试者施用治疗有效量的拉多替吉或其药物活性盐。在另一种实施方式 中，需要其的受试者是患有炎症的受试者。在另一种实施方式中，需要其的受试者是患有全 身性炎症的受试者。在另一种实施方式中，需要其的受试者是患有脓毒性休克的受试者。 在另一种实施方式中，需要其的受试者是患有与炎症和/或全身性炎症关联的疾病的受试 者。在另一种实施方式中，需要其的受试者是具有TNF-α、IL_i3 1、IL_6的升高的血液和/ 或脾水平、或其任意组合的受试者。在另一种实施方式中，需要其的受试者是具有由于炎症 导致的TNF-a、IL_i3 1、IL_6的升高的血液和/或脾水平、或其任意组合的受试者。每个可 能性代表了本发明的独立实施方式。
[0093] 在另一种实施方式中，全身性炎症和/或脓毒性休克与IL-β 1、IL_6和TNF-a的 升高的血液和/或脾水平关联。在另一种实施方式中，减少IL-i3 1、IL_6和TNF-a的全身 性水平改善本发明的全身性炎性疾病。在另一种实施方式中，减少IL-β l、IL-6和TNF-a 的全身性水平减少可导致死亡的次级并发症的风险。在另一种实施方式中，减少IL-β 1、 IL-6和TNF- a的全身性水平减少脓毒性休克的风险。
[0094] 本发明的另一方面涉及用于在需要其的受试者中抑制炎症的方法，包含向该受试 者施用10至60mg拉多替吉或其药物活性盐的每日剂量。
[0095] 本发明的另一方面涉及用于在需要其的受试者中抑制炎症的方法，包含向该受试 者施用10至IOOmg拉多替吉或其药物活性盐的每日剂量，其中每日剂量诱导与胆碱酯酶活 性的抑制关联的最小的副作用。
[0096] 本发明的另一方面涉及用于在需要其的受试者中抑制炎症的方法，包含向该受试 者施用10至60mg拉多替吉或其药物活性盐的每日剂量，其中每日剂量在抑制MAO和/或 胆碱酯酶（ChE)的活性方面是不感受的（refractory)。
[0097] 本发明的另一方面涉及用于在需要其的受试者中抑制炎症的方法，包含向受试者 施用10至IOOmg拉多替吉或其药物活性盐的每日剂量，其中每日剂量具有最小的MAO和/ 或ChE抑制活性。
[0098] 本发明的另一方面涉及用拉多替吉抑制炎症的方法，其通过抑制下列从引起炎症 的细胞的释放：N0、IL-6、TNF-a、IL-β 1、iNOS、或其任意组合。
[0099] 在另一种实施方式中，该炎症是全身性炎症。
[0100] 可以理解，已知拉多替吉可用于治疗患有阿尔茨海默氏病、痴呆、轻度认知损伤、 帕金森氏病、年龄相关性黄斑变性、和肌萎缩性侧索硬化症的受试者（US 2007/0135518)。 拉多替吉也已经被建议在下列的治疗是有用的：多发性硬化（MS) (W0 2006/130726)、精神 分裂症（US2007/0232691)、亨廷顿氏病、共济失调毛细血管扩张症、巴滕病、皮质基底节变 性（corticobasal degeneration)、健忘症、失语症、克雅氏病、致命性家族性失眠症、婴儿 雷弗素姆病、莱姆病、马查多-约瑟夫病、多系统萎缩症、尼曼-皮克病、与蛋白聚集关联的、 雷弗素姆病、桑德霍夫病、夏-德尔格综合征、脊髓小脑性共济失调、亚急性脊髓混合变性、 脊髓痨、泰萨二氏病、中毒性脑病、以及颤抖刺猬综合征（Wobbly hedgehog syndrome) (W0 2012/059920)。任何这些疾病的治疗被排除在本发明的范围之外。在其他实施方式中，拉 多替吉用于预防这些疾病的发展的用途被排除在本发明的范围之外。优选地，通过本发明 的方法治疗的受试者不同时遭受任意上述疾病。
[0101] 在另一种实施方式中，本发明是基于，特别是，令人惊讶的发现，拉多替吉具有全 身抗炎作用，这延伸超出其已知的CNS的抗炎作用。在另一种实施方式中，全身抗炎作用是 实质上不同于局部CNS抗炎作用的。在另一种实施方式中，全身抗炎作用包括关键血液/ 脾脏炎性细胞因子诸如IL-6的抑制。因此，本文使用的术语"全身性炎症"是指在CNS外 涉及主要器官的炎症反应或症状。根据再一实施方式，"全身性炎症"排除CNS炎症，其是通 过大脑中小胶质细胞和其他驻留细胞诱导或介导的。还，根据某些其他实施方式，本发明提 供了用于抑制部分地体现在神经组织的炎症的改善的方法，通过施用如本文描述的优选的 拉多替吉剂量实现。
[0102] 在另一实施方式中，本发明涉及在需要其的受试者中抑制全身性炎症的方法，包 含向该受试者施用拉多替吉或其药物活性盐，从而抑制炎症。在另一种实施方式中，该受试 者患有炎性疾病。在另一种实施方式中，炎性疾病由增强的IL-6的水平介导（如，其特征 在于增强的IL-6的血液水平）。在各种【具体实施方式】中，炎性疾病是炎性胃肠疾病（如结 肠炎）、炎性代谢疾病（如糖尿病）、或缺血关联的炎症（如心肌缺血后的炎症），如下文进 一步详述。
[0103] 在另一方面，本发明提供了在需要其的受试者中治疗炎性疾病（如全身性炎性疾 病）的方法，包含向该受试者施用拉多替吉或其药物活性盐，由此来治疗该疾病。在各种具 体实施方式中，炎性疾病是炎性胃肠疾病（如结肠炎）、炎性代谢疾病（如糖尿病）、或缺血 关联的炎症（如心肌缺血后的炎症），如下文进一步详述。
[0104] 术语"治疗"是指施用疗法的量、方式、和/或模式有效地改善与疾病关联的状况、 症状、或参数，或阻止疾病的进展，到统计学显著程度或本领域技术人员可检测的程度。术 语"治疗（treating) "和"治疗（treatment) "还包括症状的严重程度和/或频率的减少、症 状和/或潜在原因的消除、症状和/或其潜在原因的发生的预防、以及损伤的改善或修复。 对于炎性疾病，该术语还包括减缓或阻止由于炎症过程导致的恶化进展。有效的量、方式、 或模式能够根据受试者改变，以及可对受试者定制。
[0105] 糖尿病和炎件代谢疾病
[0106] 根据一些实施方式，本发明的方法涉及拉多替吉用于治疗被鉴定为患有糖尿病的 受试者的用途。如本文使用的，术语"2型糖尿病"，也以及可互换地称为"非胰岛素依赖型 糖尿病（NIDDM) "，或T2D是指，其特征在于对于胰岛素的细胞抗性和/或胰岛素的分泌少于 保持血液葡萄糖水平平衡所需的紊乱。"1型糖尿病"，相反，是指其特征在于通过自身免疫 反应破坏在胰脏中产生胰岛素的β细胞的紊乱。
[0107] 在其它实施方式中，本发明涉及抑制糖尿病的进展或恶化。在其它实施方式中，还 设想处于发展T2D的风险的受试者，诸如，患有糖尿病前期、胰岛素抵抗、或先于T2D的开始 的其它炎性代谢疾病或状况的那些受试者的治疗。T2D往往特征在于表现为空腹血糖高于 140mg/dL的高血糖症。本文使用的术语"糖尿病前期"是指特征在于空腹血糖高于IOOmg/ dL但低于140mg/dL的状况。本文使用的术语"胰岛素抵抗"是指特征在于对在全身或个体 组织包括骨骼肌、心肌、脂肪组织和肝脏中的胰岛素的减少的敏感性的状况。本文使用的术 语"血脂异常"是指其中甘油三酸酯、游离脂肪酸、总胆固醇和LDL-胆固醇的至少一种是在 认为高于正常的水平的状况。在另一种实施方式中，方法涉及拉多替吉用于抑制糖尿病征 兆或症状，如用于预防或抑制高血糖症的用途。根据另一个方面，提供了在需要其的受试者 中抑制炎症的方法，包含向该受试者施用拉多替吉或其药物活性盐，从而抑制所述受试者 的炎症，其中该受试者患有炎性代谢疾病。在另一种实施方式中，受试者被鉴定为患有炎性 代谢疾病。在另一种实施方式中，方法包含鉴定受试者为患有炎性代谢疾病，以及施用拉多 替吉或其药物活性盐到被鉴定患有炎性代谢疾病的所述受试者。
[0108] 根据具体的实施方式，炎性代谢疾病包括，但不限于，2型糖尿病、1型糖尿病、糖 尿病前期、血脂异常、或胰岛素抵抗。
[0109] 在另一方面，提供了在需要其的受试者中治疗炎性代谢疾病的方法，包含向该受 试者施用拉多替吉或其药物活性盐，从而来治疗该疾病。在各种实施方式中，该疾病包括， 但不限于，2型糖尿病、1型糖尿病、糖尿病前期、血脂异常和胰岛素抵抗。在一种具体实施 方式中，该疾病是2型糖尿病。在另一种【具体实施方式】中，该疾病是1型糖尿病。在另一种 实施方式中，受试者被鉴定为患有炎性代谢疾病。在另一种实施方式中，方法包含鉴定受试 者为患有炎性代谢疾病，以及施用拉多替吉或其药物活性盐到被鉴定患有炎性代谢疾病的 所述受试者。
[0110] 心肌缺血和缺血件调理
[0111] 本文使用的术语"缺血性调理"是指其中通过暴露于刺激的缺血短暂发作，通常通 过预诱导短暂缺血/再灌注周期，使得组织耐受长时间缺血的有害影响的技术。调理可以 在缺血性应激物之前（预调理）、期间或之后（后调理）被应用。为了本说明书的目的，使 用该一般术语"缺血性调理"对描述一系列的亚致死性缺血发作的所有的程序进行描述，无 论程序是在缺血之前、期间或之后以及再灌注之前、期间或之后进行。
[0112] 在某种典型实施方式中，缺血性调理可通过诱导血管闭塞的短暂、重复的周期机 械地进行。在人类患者中，这个程序可通过如下产生：闭塞动脉（冠状动脉或远端，如股骨） 短暂的时间周期，之后随着除去闭塞，短周期的再灌注。预暴露的周期及组织暴露于缺血以 及再灌注的数目的时间不同，通常平均为3至5分钟。
[0113] 例如，机械性调理（如心肌缺血预调理，IPC)可如下进行：通过闭塞冠状动脉如左 旋动脉短时间如2-5分钟，2-4次，随后再灌注，和/或后调理可在再灌注后立即进行1-2分 钟。远端缺血预调理描述了另一个版本的这种治疗方法，其包括应用一系列的缺血和再灌 注的短暂亚致死发作到目标缺血器官以外的器官（此类缺血器官可以是如心脏）。在目标 缺血器官的正常灌注的恢复之前、期间或之后，应用一系列短暂缺血刺激到远处的器官，被 显示激活全身的缺血保护，以及因此减少目标器官的缺血-再灌注损伤。这些年来，大量的 远处器官已显示在远端缺血预调理的背景中来提供心脏保护，所述远处器官包括上肢和下 肢上的骨骼肌。在手术过程中向四肢的血流通常通过手动地或自动地充气的血压箍或止血 带袖带闭塞3-5分钟。然后接着是3-5分钟的放气区间，这个循环重复3-4次。
[0114] 在其他实施方式中，某些药剂也已经被建议来诱导缺血调理。药理学调理可以 如通过促红细胞生成素、阿片类药物（如吗啡、芬太尼、瑞芬太尼、美沙酮）、胰岛素和腺苷 Al、A2A、A2B和/或A3受体激动剂（如腺苷、5' -N-乙基羧酰氨基腺苷、N6-环戊基腺苷、 2-(1-己炔基）-N_甲基腺苷）诱导，如（Nakano等，2000)描述的。
[0115] 尽管这些治疗已经被显示在一些患者中有效，很多患者没有表现出从缺血性调理 程序获得任何临床益处。值得注意的是，该程序被发现在老年（65岁以上）和糖尿病患者 中一般是无效的，他们有发展冠状动脉心脏疾病的增加的风险，以及更可能经历心血管及 其它外科手术（Nakano等，2000，Przyklenk, 2011)。令人惊讶地，拉多替吉已经在本文被 证明使得缺血性调理治疗成为可能，即使在这些新的患者人群中。
[0116] 因此，根据一些实施方式，本发明的方法包含组合（同时或顺序）缺血性调理施用 拉多替吉或其盐到需要其的受试者。在一些实施方式中，这种组合治疗可在手术治疗如心 脏外科手术之前被施用到受试者，如在诊断为心肌梗死、心律失常或心脏衰竭的患者中。
[0117] 根据一个方面，本发明提供了在需要其的受试者中减少或抑制缺血性损伤（特别 是缺血性心肌损伤）的方法，包含向受试者施用拉多替吉，从而减少或抑制所述受试者的 缺血性损伤。在各种实施方式中，该方法可被用于在需要其的受试者中减少或抑制与缺血 有关的炎症（如，心肌缺血后的炎症）、用于减少或抑制围术期心肌缺血损伤、用于针对缺 血和/或再灌注损伤保护、用于在心脏手术或缺血性发作之前、期间或之后提供心脏保护、 以及用于增强缺血性调理的功效。在某些实施方式中，所述拉多替吉是10至60mg拉多替 吉的每日剂量。在某些其他实施方式中，所述拉多替吉是以抑制不超过25%的，或在其它实 施方式中不超过15%的，乙酰胆碱酯酶的活性、单胺氧化酶的活性、或这两种酶的组合的活 性的量的拉多替吉。每个可能性代表了本发明的独立实施方式。优选地，拉多替吉与缺血 性调理组合（如在调理治疗之前、同时或之后）被施用到所述受试者。例如，拉多替吉可在 调理之前以10-60mg的每日剂量长期施用到所述受试者两周，以及可在预调理之后继续， 所述预调理例如通过机械动脉闭塞诱发短暂性缺血发作的重复循环进行的心肌IPC。有利 地，受试者是本来不顺从于缺血性调理的年老的或糖尿病的受试者。在一种具体的实施方 式中，所述受试者是超过65岁的年龄。在另一种具体的实施方式中，所述受试者患有糖尿 病，如T2D。在另一种实施方式中，该方法包含鉴定所述受试者为不顺从于心肌缺血调理的 受试者。
[0118] 在一种实施方式中，提供了在需要其的受试者中针对再灌注损伤提供保护的方 法，包含向该受试者施用拉多替吉或其盐结合缺血性调理。
[0119] 在另一实施方式中，提供了在需要其的受试者中针对缺血性损伤提供保护的方 法，包含向该受试者施用拉多替吉或其盐组合缺血性调理。
[0120] 在另一实施方式中，提供了在需要其的受试者中在心脏手术之前、期间、或之后提 供心脏保护的方法，包含向该受试施用者拉多替吉或其盐组合缺血性调理。
[0121] 在另一实施方式中，提供了在需要其的选自下列所组成的组中在缺血性发作之 前、期间、或之后提供心脏保护的方法，向该受试者施用拉多替吉或其盐组合缺血性调理。
[0122] 在另一实施方式中，本发明提供了在需要其的受试者中增强缺血性调理的功效的 方法，包含向该受试者施用拉多替吉或其盐（如，与缺血性调理同时或顺序组合）。
[0123] 在另一方面，提供了包含拉多替吉或其药物活性盐与缺血性调理疗法组合的药物 组合物，所述缺血性调理疗法选自由下列组成的组：促红细胞生成素、阿片类药物（如，吗 啡、芬太尼、瑞芬太尼、美沙酮）、胰岛素和腺苷A1、A2A、A2B和/或A3受体激动剂（如，腺 苷、5' -N-乙基羧酰氨基腺苷、N6-环戊基腺苷、2-(1-己炔基）-N-甲基腺苷）。在一种具体 实施方式中，该组合物包含10至60mg单位剂量形式的拉多替吉。
[0124] 在另一方面，提供了包含拉多替吉或其药物活性盐以及缺血性调理疗法的药物 包，所述缺血性调理疗法选自由下列组成的组：促红细胞生成素、阿片类药物（例如，吗啡、 芬太尼、瑞芬太尼、美沙酮）、胰岛素和腺苷A1、A2A、A2B和/或A3受体激动剂（例如，腺苷、 5' -N-乙基羧酰氨基腺苷、N6-环戊基腺苷、2-(1-己炔基）-N-甲基腺苷）。在一种具体实 施方式中，该药物包包含10至60mg单位剂量形式拉多替吉的。
[0125] 缺血性调理疗法药物的剂量、剂型和施用途径已被描述，参见，如，Nakano 等，2000。
[0126] 胃肠炎症和炎件疾病
[0127] 炎性肠病是一种胃肠（GI)道的慢性炎性紊乱，其具有涉及遗传、免疫和环境因素 的多因素发病机制。在IBD中的慢性炎症由粘膜免疫系统和肠上皮屏障功能的失调导致， 其导致巨噬细胞强烈浸润入肠组织和释放促炎性细胞因子。由葡聚糖硫酸钠（DSS)的口服 施用诱导的UC的小鼠模型模拟见于人类受试者的体重损失和伴有血液和/或黏液的腹泻， 以及还显示了结肠长度的减少、隐窝异常、胃动力障碍和炎性细胞的浸润。
[0128] 克罗恩氏病的特征在于小和/或大肠内的溃疡，但可以影响消化系统从口腔到肛 门的任何地方。各种术语被用来描述克罗恩氏病，以及往往反映受影响的胃肠道的部分。例 如，大肠（结肠）的累及仅被称为克罗恩结肠炎或肉芽肿性结肠炎，而小肠的累及仅被称为 克罗恩肠炎。在小肠中的终端部分即回肠中的疾病，被称为克罗恩回肠炎。当小肠和大肠 都被累及时，病症被称为克罗恩小肠结肠炎或回肠结肠炎。溃疡性结肠炎是与克罗恩病相 关的一种病症，其只累及结肠，并且这些疾病常常被共同称作炎性肠病（IBD)。
[0129] 肠易激综合征（IBS)是对生活质量有显著影响的一种常见的紊乱，并且其占医疗 费用的相当大的比重。该紊乱特征在于下腹痛、腹胀、腹泻、便秘、或便秘与腹泻交替出现。 改变的肠蠕动、内脏痛觉过敏、食物过敏、细菌过度生长、心身因素、与肠神经系统关联的应 激，都被提出对IBS发病机制有影响。胃肠道炎症也可以与肠易激综合征以及应激关联。虽 然参与该疾病的病因和病理学过程还没有被完全阐明，但已经报道可发生改变的促炎性细 胞因子的释放。
[0130] 在另一方面，本发明提供了在需要其的受试者中治疗GI道炎性疾病的方法，包含 向受试者施用拉多替吉或其药物活性盐，由此来治疗该疾病。
[0131] 在另一种实施方式中，受试者被鉴定为患有GI道炎性疾病。在另一种实施方式 中，该方法包含鉴定受试者为患有GI道炎性疾病，以及施用拉多替吉或其药物活性盐到被 鉴定患有GI道炎性疾病的所述受试者。
[0132] 在另一种优选的实施方式中，该疾病是在个体中与持久性的，不论是连续的或间 断的GI道或其部分的病理炎症相关的慢性炎性疾病。
[0133] 在某些具体的实施方式中，炎性胃肠疾病包括，但不限于，炎性肠病（如溃疡性结 肠炎和克罗恩氏病）、肠易激综合征、回肠炎、慢性炎性肠病、和乳糜泻。每个可能性代表了 本发明的独立实施方式。
[0134] 在另一种实施方式中，炎性疾病由增强的IL-6的水平介导（如，其特征在于增强 的IL-6的血液水平）。
[0135] 根据另一个方面，提供了一种在需要其的受试者中抑制GI道炎症的方法，包含施 用拉多替吉或其药物活性盐到该受试者，从而抑制炎症。
[0136] 在另一种实施方式中，GI炎症是与胃肠道的慢性炎性疾病关联的。
[0137] 在另一种实施方式中，GI炎症是与胃肠道的自身免疫性疾病关联的。
[0138] 在各种实施方式中，该组合物对于治疗与胃肠系统关联的慢性疾病尤其有用，所 述与胃肠系统关联的慢性疾病包括，但不限于，结肠炎、回肠炎、克罗恩病、慢性炎性肠病、 乳糜泻、和炎性肠病。
[0139] 在另一种【具体实施方式】中，所述疾病是炎性肠病。在另一种【具体实施方式】中，所述 疾病是结肠炎。在另一种【具体实施方式】中，所述疾病是克罗恩氏病。在另一种具体实施方 式中，所述疾病是肠易激综合征。
[0140] 在另一方面，提供了在需要其的受试者中抑制与GI炎症关联的临床症状的方法， 包含施用到所述受试者拉多替吉或其药物活性盐。
[0141] 在某些实施方式中，所述拉多替吉是10至60mg拉多替吉的每日剂量。在某些其他 实施方式中，所述拉多替吉是以抑制不超过25%的，或在其它实施方式中不超过15%的， 乙酰胆碱酯酶的活性、单胺氧化酶的活性、或这两种酶的组合的活性的量的拉多替吉。
[0142] 用于减小副作用的剂量和手段
[0143] 根据某种实施方式，本发明的方法通过向该受试者施用治疗有效量的拉多替吉或 其盐实现。本文使用的治疗有效量是指足以在需要其的受试者中抑制炎症过程的量，并且 因此对于炎性疾病的治疗和改善是有用的。
[0144] 根据各种实施方式，本发明考虑使用的剂量为0. 5至170mg的拉多替吉。优选地， 治疗有效剂量是至少IOmg拉多替吉。在某些其它优选的实施方式中，治疗有效剂量是高达 150或在其它实施方式中高达120或高达IOOmg拉多替吉或其药物活性盐（S卩，基于拉多替 吉或其盐的相当量）。在另一种实施方式中，治疗有效量是10至IOOmg拉多替吉或其药物 活性盐的每日剂量。在另一种实施方式中，治疗有效量是10至80mg拉多替吉或其药物活 性盐的每日剂量。在另一种实施方式中，治疗有效量是10至60mg拉多替吉或其药物活性 盐的每日剂量。在另一种实施方式中，治疗有效量是10至50mg拉多替吉或其药物活性盐 的每日剂量。在另一种实施方式中，治疗有效量是10至40mg拉多替吉或其药物活性盐的 每日剂量。
[0145] 在另一种实施方式中，拉多替吉的胆碱酯酶（ChE)抑制活性与其抗炎活性是无关 的。在另一种实施方式中，拉多替吉的意想不到的药代动力学特征表明，每天10-60mg拉多 替吉范围施用的剂量抑制炎症，同时减少与AChE和/或MAO活性的抑制关联的副作用。在 另一种实施方式中，本发明提供了，每天10-120,优选IO-IOOmg拉多替吉，最小化通过拉多 替吉治疗的AChE和/或MAO活性的不需要的抑制作用。
[0146] 在另一种实施方式中，最小化AChE和/或MAO活性的不需要的抑制作用等于高达 (不多于）40%的抑制活性。在另一种实施方式中，最小化AChE和/或MAO活性的不需要 的抑制作用等于高达30 %的抑制活性。在另一种实施方式中，最小化AChE和/或MAO活 性的不需要的抑制作用等于高达25%的抑制活性。在另一种实施方式中，最小化AChE和/ 或MAO活性的不需要的抑制作用等于高达20%的抑制活性。在另一种实施方式中，最小化 AChE和/或MAO活性的不需要的抑制作用等于高达18 %的抑制活性。在另一种实施方式 中，最小化AChE和/或MAO活性的不需要的抑制作用等于高达15 %的抑制活性。在另一种 实施方式中，最小化AChE和/或MAO活性的不需要的抑制作用等于高达10%的抑制活性。 在另一种实施方式中，最小化AChE和/或MAO活性的不需要的抑制作用等于高达8%的抑 制活性。在另一种实施方式中，最小化AChE和/或MAO活性的不需要的抑制作用等于高达 5 %的抑制活性。
[0147] 本发明令人惊讶地公开了，以前被认为临床上优选的以其基于药代动力学的最大 耐受剂量施用拉多替吉，事实上不是有利的，并且在某些适应症中不提供增强的抗炎治疗 效果。而是，预料不到地在本文公开，如本发明公开的任何上述剂量和制剂的剂量和制剂， 提供了具有最小副作用的临床上有效的治疗效果。
[0148] 在另一种实施方式中，每天10至60mg拉多替吉或其药物活性盐的范围，确保功效 同时最小化与AChE活性、MAO活性、或两者的抑制关联的副作用。在另一种实施方式中，包 含10至40mg拉多替吉或其药物活性盐的剂量，确保功效同时最小化与AChE活性、MAO活 性、或两者的抑制关联的副作用。这些剂量分别提供高达25%或15%的上面提到的酶的抑 制。
[0149] 在另一实施方式中，本发明提供，每天10_120mg拉多替吉最小化通过拉多替吉抗 炎疗法的AChE、MAO活性或其组合的不需要的抑制作用。在另一实施方式中，本发明提供， 每天10-80mg拉多替吉最小化通过拉多替吉抗炎疗法的AChE、MAO活性或其组合的不需要 的抑制作用。在另一实施方式中，本发明提供，每天l〇_40mg拉多替吉最小化通过拉多替吉 抗炎疗法的AChE、MAO活性或其组合的不需要的抑制作用。在另一实施方式中，本发明提 供，每天40-120mg拉多替吉最小化通过拉多替吉抗炎疗法的AChE、MAO活性或其组合的不 需要的抑制作用。在另一实施方式中，本发明提供，每天20-60mg拉多替吉最小化通过拉多 替吉抗炎疗法的AChE、MA0活性或其组合的不需要的抑制作用。在另一种实施方式中，短语 "抗炎疗法"包括全身抗炎疗法、脓毒性休克疗法、或用于与炎症和全身性或急性炎症关联 的任何疾病的疗法。
[0150] 在另一种实施方式中，最小化通过拉多替吉对胆碱酯酶活性的抑制关联的副作 用，是利用基本上不能抑制胆碱酯酶活性的低剂量。在另一种实施方式中，用拉多替吉抑制 炎症还包含：（1)最小化与MAO活性的抑制关联的副作用，或（2)利用不能抑制MAO活性的 低剂量。
[0151] 在另一种实施方式中，最小化与AChE的抑制关联的副作用是减小SLUDGE综合征 的风险。在另一种实施方式中，所述副作用包括但不限于：厌食、恶心、呕吐、腹泻、失眠、心 动过缓、低血压、过度分泌、支气管收缩、GI道运动过强、肌肉收缩。在另一种实施方式中， 最小化是消除。在另一种实施方式中，最小化是在治疗人群中将任何副作用或副作用的组 合的风险减少至少10%、20%、40%、50%、60%、75%、80%或90%。在另一种实施方式中， 最小化是在患者中将任何副作用或副作用的组合的频率减少至少10 %、20 %、40 %、50 %、 60%、75%、80%或 90%。
[0152] 在另一种实施方式中，拉多替吉及其药学上可接受的盐，当以本文公开的剂量和 制剂施用时，提供了预料不到地最小化不需要的副作用和良好的安全性和功效特征。在另 一种实施方式中，本文使用的功效涉及拉多替吉的抗炎活性。在另一种实施方式中，本文使 用的功效涉及拉多替吉的全身性抗炎活性。在另一种实施方式中，拉多替吉及其药学上可 接受的盐以多个剂量或单一剂量被施用。在任一情况下，释放的和可用于吸收的药物的量 确保副作用最小，而将受试者暴露于足够量的药物来提供临床上有益的效果。
[0153] 在另一种实施方式中，本发明提供，短语"每日剂量"是每天（24小时）拉多替吉 或其盐的总剂量。在另一种实施方式中，本发明提供，"每日剂量"是以一个剂量或每天一次 施用。在另一种实施方式中，本发明提供，"每日剂量"是以两个剂量或每天两次施用。在另 一种实施方式中，本发明提供，"每日剂量"是被分成两剂。在另一种实施方式中，本发明提 供，剂量是每6、7、8、9、10、11或12小时被施用。
[0154] 在另一种实施方式中，拉多替吉或其药物盐被配制成用于速释。在另一种实施方 式中，拉多替吉或其药物盐被配制成用于持续释放。
[0155] 在另一种实施方式中，本发明涉及拉多替吉或其药物盐在制备抑制炎症的药剂中 的用途，其中该用途选自由下列组成的组：每天一次总每日施用10至60mg拉多替吉或其药 物盐。在一些实施方式中，拉多替吉或其药物活性盐以每天两个等分剂量被施用。
[0156] 在另一种实施方式中，本发明预料不到地提供了每天10_80mg范围的拉多替吉， 最小化或甚至消除与MAO和/或AChE活性的抑制关联的副作用。在另一种实施方式中，本 发明预料不到地提供了每天IO-SOmg范围的拉多替吉，最小化或甚至不感受对于MAO和/ 或AChE活性的实际抑制。在另一种实施方式中，本发明预料不到地提供了每天10-60mg范 围的拉多替吉，最小化或甚至消除与MAO和/或AChE活性的抑制关联的副作用。在另一种 实施方式中，本发明预料不到地提供了每天10-60mg范围的拉多替吉，最小化或甚至不感 受对于MAO和/或AChE活性的实际抑制。在另一种实施方式中，本发明预料不到地提供了 每天10-40mg范围的拉多替吉，最小化或甚至消除与MAO和/或AChE活性的抑制关联的副 作用。在另一种实施方式中，本发明预料不到地提供了每天10_40mg范围的拉多替吉，最小 化或甚至不感受对于MAO和/或AChE活性的实际抑制。在另一种实施方式中，本发明预料 不到地提供了每天10_30mg范围的拉多替吉，最小化或甚至消除与MAO和/或AChE活性的 抑制关联的副作用。在另一种实施方式中，本发明预料不到地提供了每天10_30mg范围的 拉多替吉，最小化或甚至不感受对于MAO和/或AChE活性的实际抑制。在另一种实施方式 中，本发明提供了一种用于在需要其的受试者中抑制炎症：(a)而最小化与胆碱酯酶活性 的抑制关联的副作用和/或（b)不抑制MAO和AChE的方法，包含施用到该受试者每天10 至IOOmg拉多替吉或其药物活性盐。在另一种实施方式中，本发明提供了一种用于在需要 其的受试者中抑制炎症：(a)而最小化与胆碱酯酶活性的抑制关联的副作用和/或（b)不 抑制MAO和AChE的方法，包含施用到该受试者每天10至IOOmg拉多替吉或其药物活性盐， 持续至少4天。在另一种实施方式中，本发明提供了一种用于在需要其的受试者中抑制炎 症：（a)而最小化与胆碱酯酶活性的抑制关联的副作用和/或（b)不抑制MAO和AChE的方 法，包含施用到该受试者每天10至40mg拉多替吉或其药物活性盐，持续至少4天。在另一 种实施方式中，本发明提供了一种用于在需要其的受试者中抑制炎症：(a)而最小化与胆 碱酯酶活性的抑制关联的副作用和/或（b)不抑制MO和AChE的方法，包含施用到该受试 者每天30至80mg拉多替吉或其药物活性盐，持续至少4天。
[0157] 在另一种实施方式中，该精确的时间段"至少4天"包括与AChE抑制和/或MO抑 制关联的减少的副作用的确定。在另一种实施方式中，至少4天是至少7天。在另一种实施 方式中，至少4天是7天。在另一种实施方式中，至少4天是8天。在另一种实施方式中， 至少4天是9天。在另一种实施方式中，至少4天是18天。在另一种实施方式中，在至少 7天的时间段逐步增加拉多替吉或其药物活性盐的剂量，维持药物的功效而最小化与AChE 抑制关联的副作用。在另一种实施方式中，在7天的时间段逐步增加拉多替吉或其药物活 性盐的剂量，维持药物的功效，而最小化与AChE抑制关联的副作用。在另一种实施方式中， 根据如本文描述的血液指标和/或如本文描述的与AChE抑制关联的副作用对每一患者单 独地设计时间段。
[0158] 在另一种实施方式中，一天两次施用拉多替吉或其药物活性盐，是一天两次施用 相等剂量的拉多替吉或其药物活性盐。在另一种实施方式中，在每一个剂量之间有至少6 小时的间隔。在另一种实施方式中，在每一个剂量之间有至少8小时的间隔。在另一种实 施方式中，在每一个剂量之间有至少10小时的间隔。在另一种实施方式中，在每一个剂量 之间有至少12小时的间隔。
[0159] 在另一种实施方式中，第一剂在早上的时间被施用。在另一种实施方式中，第一 齐U、第二剂或两者在进食和/或饮用之前被施用。在另一种实施方式中，第一剂在早上的时 间在进食和/或饮用之前被施用。在另一种实施方式中，第一剂在早上的时间在进食和/或 饮用之前至少15分钟被施用。在另一种实施方式中，第一剂、第二剂或两者在进食和/或 饮用之前至少15分钟被施用。在另一种实施方式中，第一剂、第二剂或两者在进食和/或 饮用之前至少30分钟被施用。在另一种实施方式中，第一剂、第二剂或两者在进食和/或 饮用之前至少45分钟被施用。在另一种实施方式中，第一剂、第二剂或两者在进食和/或 饮用之前至少60分钟被施用。在另一种实施方式中，第一剂、第二剂或两者在进食和/或 饮用之前至少75分钟被施用。在另一种实施方式中，第一剂、第二剂或两者在进食和/或 饮用之前至少90分钟被施用。在另一种实施方式中，每日施用是在24小时内施用。在另 一种实施方式中，每日施用是从醒来到睡前2个小时施用。
[0160] 在另一种实施方式中，一天两次施用拉多替吉或其药物活性盐，是以第一剂和第 二剂施用拉多替吉或其药物活性盐。在另一种实施方式中，该第一剂包含相等或少于第二 剂的量的拉多替吉或其药物活性盐。
[0161] 在另一种实施方式中，一天两次包括第一剂和第二剂。在另一种实施方式中，第一 剂在早上的时间被施用。在另一种实施方式中，第二剂在晚上的时间被施用。在另一种实 施方式中，第二剂在睡前3-6小时被施用。在另一种实施方式中，第二剂在20:00、19:00或 18: OO之前被施用。在另一种实施方式中，第一剂和第二剂都在进食和/或饮用之前被施 用，如本文提供的。在另一种实施方式中，第一剂在醒来时被施用，并且第二剂在睡前3-6 小时被施用。在另一种实施方式中，第一剂在第二剂之前至少6小时被施用。在另一种实 施方式中，第一剂在第二剂之前至少7小时被施用。在另一种实施方式中，第一剂在第二剂 之前至少8小时被施用。在另一种实施方式中，第一剂在第二剂之前至少5-8小时被施用。
[0162] 在另一种实施方式中，本文描述的施用是长期施用。如本文用到的，术语"长期施 用"是指重复施用包含具体量的活性成分的药物组合物持续至少12天、至少16天、至少21 天、或4个连续周。优选地这样施用重复至少12周或更多，24周或更多或52周或更多。
[0163] 在另一种实施方式中，术语"拉多替吉"包括其药物活性盐、水合物和溶剂化物。
[0164] 拉多替吉的药物活性盐可包括例如盐酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、柠檬酸 盐、磷酸盐、乙酸盐、乳酸盐、富马酸盐、氢溴酸盐、甲磺酸盐、双羟萘酸盐、氢碘酸盐、硝酸 盐、和甲基硫酸盐（methylsulfate)、甲苯磺酸盐（tosylate)。在一些实施方式中，拉多替 吉作为拉多替吉半酒石酸盐被提供（本文中也称为拉多替吉酒石酸盐）。
[0165] 另一实施方式，拉多替吉代谢产物包括：I) (R)-HCPAI ;2) (R)-MCPAI ;3) (R)-ECPAI ;4) (R)-CAI ;5) (R)-HPAI ;6) (R)-MCAI 以及 7) (R)-ECAI。在另一种实施方式中， 本发明的代谢产物通过肝脏中CYP450同工酶的作用被形成，除了（R)-HPAI之外，其为通过 AChE水解拉多替吉的结果。在另一种实施方式中，上面列举的代谢产物在不同的浓度抑制 AChE，除了（R) -HPAI之外，其不抑制AChE但是是MAO活性的强效抑制剂。在一些实施方式 中，诸如任何上述的剂量和制剂的剂量和制剂制备为具有使得在血浆中拉多替吉的代谢产 物（R)-MCPAI和（R)-MCAI的最大浓度分别不超过400ng/ml和80ng/ml的释放曲线。根据 某种特定实施方式，血浆中（R)-MCPAI的浓度的范围位于50-250ng/ml之间。在其它实施 方式中，血浆中（R)-MCPAI的浓度高达100或250ng/ml，以及为至少50、100或150ng/ml。 在一种特定的实施方式中，血浆中（R)-MCPAI的浓度是约120ng/ml。根据某种其它特定实 施方式，血浆中（R)-MCAI的最大浓度不超过10、20或30ng/ml。在其它实施方式中，血浆中 (R)-MCAI的浓度是至少3ng/ml。在一种特定的实施方式中，血浆中（R)-MCAI的浓度是约 10_30ng/ml。
[0166] 药物纟目合物
[0167] 药物组合物可通过提供安全的、临床上有效量的拉多替吉或其药学上可接受的盐 的任何途径被施用。在一些实施方式中，药物通过口服或直肠施用被提供。
[0168] 在另一种实施方式中，该药物组合物是口服速释组合物。在另一种实施方式中，术 语"速释"药物制剂包括其中拉多替吉或其药学上可接受的盐从制剂的释放速率和/或药 物的吸收既不明显也不是故意地被盖伦派操作（galenic manipulations)阻碍的任何制 齐U。在本情形中，速释可通过借助适当的药学上可接受的稀释剂或载体来提供，该稀释剂或 载体不在明显的程度上延长药物释放和/或吸收率。在另一种实施方式中，该术语不包括 适合于提供"修改"、"控制"、"持续"、"延长"、"扩展"或"延迟"拉多替吉或其药学上可接受 的盐的释放的制剂。
[0169] 包含拉多替吉或其药物活性盐的药物组合物以及药学上可接受的载体或稀释剂 的药物组合物被提供。该药物组合物可以被具有本领域普通技术的人员配制。合适的药 物载体被描述在这个领域中的标准参考教科书Remington's Pharmaceutical Sciences， A. Osol，其通过引用并入本文。
[0170] 单位剂量形式包含活性成分拉多替吉或其药物活性盐、拉多替吉和药用辅料或载 体诸如填充剂、崩解剂、润滑剂、助流剂、和可溶性和不溶性聚合物。
[0171] 填充剂的例子包括水溶性可压缩碳水化合物（water-soluble compressible carbohydrate)，诸如糖（如，右旋糖、蔗糖、麦芽糖和乳糖）；糖醇（如甘露醇、山梨醇、麦芽 糖醇、木糖醇）；淀粉水解物（如糊精、麦芽糖糊精、及类似物）；水不溶性可塑性变形材料 (如微晶纤维素或其他纤维素衍生物）；和水不溶性的脆性断裂的材料（如，磷酸二钙、磷酸 三钙及类似物以及其混合物）。
[0172] 粘合剂的例子包括干粘合剂诸如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素、及类似物； 湿粘合剂诸如水溶性聚合物，包括水胶体诸如阿拉伯胶（acacia)、藻酸盐、琼脂、瓜尔胶、刺 槐豆胶、角叉菜胶、羧甲基纤维素、刺云实（tara)、阿拉伯树胶（gum arabic)、西黄蓍胶、果 胶、黄原胶、结冷胶（gellan)、明胶、麦芽糊精、半乳甘露聚糖、石耳素、昆布多糖、硬葡聚糖、 菊粉、威兰胶（whelan)、鼠李胶（rhamsan)、菌胶团（zooglan)、甲兰胶（methylan)、几丁质、 环糊精、壳聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、纤维质、蔗糖、淀粉及类似物；及其衍生物和混合物。
[0173] 通过压制用于制作核心或核心部分的崩解剂的例子包括羟基乙酸淀粉钠、交联聚 乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素、淀粉、微晶纤维素及类似物。
[0174] 通过压制用于制作核心或核心部分的润滑剂的例子包括长链脂肪酸及其盐，诸如 硬脂酸镁和硬脂酸、滑石、甘油酯和蜡。
[0175] 通过压制用于制作核心或核心部分的助流剂的例子包括胶体二氧化硅及类似物。
[0176] 聚合物的例子包括亲水性聚合物和材料、不溶性聚合物和材料、pH依赖性聚合物、 及类似物。亲水性材料包括：水可溶胀的纤维素衍生物、聚亚烷基二醇、热塑性聚环氧烷、 丙烯酸类聚合物、水胶体、粘土、胶凝淀粉和溶胀的交联聚合物、及其衍生物、共聚物及其组 合。纤维素衍生物的例子包括羧甲基纤维素钠、交联羟丙基纤维素、羟丙基纤维素（HPC)、羟 丙基甲基纤维素（HPMC)、羟基异丙基纤维素、羟丁基纤维素、羟基苯基纤维素、羟乙基纤维 素（HEC)、羟戊基纤维素、羟丙基乙基纤维素、羟丙基丁基纤维素、羟丙基乙基纤维素。聚亚 烷基二醇的例子包括聚乙二醇。热塑性聚环氧烷的例子包括聚（环氧乙烷）。丙烯酸类聚合 物的例子包括钾甲基丙烯酸二乙烯基苯共聚物（potassium methacrylatedivinylbenzene copolymer)、聚甲基丙烯酸甲酯、CARB0P0L(高分子量交联丙烯酸均聚物和共聚物）及类似 物。水胶体的例子包括藻酸盐、琼脂、瓜尔胶、刺槐豆胶、κ角叉菜胶、t角叉菜胶、刺云实、 阿拉伯胶、西黄蓍胶、果胶、黄原胶、结冷胶、麦芽糊精、半乳甘露聚糖、石耳素、昆布多糖、硬 葡聚糖、阿拉伯树胶、菊粉、果胶、明胶、威兰胶、鼠李胶、菌胶团、甲兰胶、几丁质、环糊精、壳 聚糖。粘土的例子包括蒙脱石类诸如膨润土、高岭土、和锂藻土；三硅酸镁、硅酸镁铝、及类 似物，及其衍生物和混合物。胶凝淀粉的例子包括酸水解淀粉、溶胀淀粉，诸如羟基乙酸淀 粉钠，及其衍生物。交联聚合物的例子包括交联聚乙烯吡咯烷酮、交联琼脂和交联羧甲基纤 维素钠。
[0177] 不溶性的材料的例子包括水不溶性聚合物、和低熔点疏水性材料。水不溶性聚合 物的例子包括乙基纤维素、聚乙烯醇、聚乙酸乙烯酯、聚己酸内酯、乙酸纤维素及其衍生物、 丙烯酸酯、甲基丙烯酸酯、丙烯酸共聚物；及类似物和其衍生物、共聚物、和组合。低熔点疏 水性材料的例子包括脂肪、脂肪酸酯、磷脂和蜡。脂肪的例子包括氢化植物油，诸如例如可 可脂、氢化棕榈仁油、氢化棉籽油、氢化向日葵油和氢化大豆油；和游离脂肪酸及其盐。脂肪 酸酯的例子包括蔗糖脂肪酸酯、单、二、和三甘油酯、山嵛酸甘油酯、棕榈酰硬脂酰甘油酯、 单硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、肉豆蘧酸甘油酯、GlycoWax-932、月桂 酰聚乙二醇-32甘油酯、和硬脂酰聚乙二醇-32甘油酯。磷脂的例子包括磷脂酰胆碱、磷脂 酰丝氨酸、磷脂酰肌醇、和磷脂酸。合适的蜡的例子包括巴西棕榈蜡、鲸蜡、蜂蜡、小烛树蜡、 紫胶蜡、微晶蜡和石蜡；含脂肪的混合物诸如巧克力；及其类似物。
[0178] pH依赖性聚合物包括肠溶性纤维素衍生物，例如羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸 酯、羟丙基甲基纤维素乙酸酯琥珀酸酯、纤维素乙酸酯邻苯二甲酸酯；天然树脂，诸如紫胶 和玉米醇溶蛋白；肠溶乙酸酯衍生物，诸如例如聚乙酸乙烯邻苯二甲酸酯、纤维素乙酸酯邻 苯二甲酸酯、乙醛二甲基纤维素乙酸酯；以及肠溶丙烯酸酯衍生物，诸如例如聚甲基丙烯酸 酯系聚合物，诸如聚（甲基丙烯酸，甲基丙烯酸甲酯）1:2,以及聚（甲基丙烯酸，甲基丙烯酸 甲酯）1: 1，及类似物，及其衍生物、盐、共聚物、及组合。
[0179] 其他赋形剂可包括防腐剂；甜味剂、诸如阿斯巴甜、乙酰磺胺酸钾、三氯蔗糖、和糖 精；调味剂；着色剂；抗氧化剂；表面活性剂；润湿剂；及类似物和其混合物。剂量单位形式 可以涂有抛光剂及类似物。
[0180] 在一种实施方式中，口服剂型包含预定的释放曲线。在一种实施方式中，本发明的 口服剂型包含延长释放的片剂、胶囊、锭剂或咀嚼片剂。在一种实施方式中，本发明的口服 剂型包含缓释片、胶囊、锭剂或咀嚼片剂。在一种实施方式中，本发明的口服剂型包含速释 片、胶囊、锭剂或咀嚼片剂。在一种实施方式中，口服剂型根据期望的药物活性成分的释放 曲线配制，如本领域技术人员已知的。
[0181] 口服组合物，在一些实施方式中，包含液体溶液、乳液、悬浮液、及类似物。在一些 实施方式中，适用于制备这种组合物的药学上可接受的载体是本领域公知的。在一些实施 方式中，液体口服组合物包含约〇. 001 %至约〇. 933%的拉多替吉或其盐，或在另一个实施 方式中，约〇. 01 %至约10%。
[0182] 在一些实施方式中，用于在本发明的方法中使用的组合物包含溶液或乳液，其在 一些实施方式中是包含安全的和有效量的本发明的化合物的水性溶液或乳液，以及，任选 地包含预期用于局部鼻内给药的其它化合物。在一些实施方式中，该组合物包含约0.001 % 至约10. 0% w/v的拉多替吉或其盐，更优选为约00. 1 %至约2. 0,其用于通过鼻内途径全身 递送拉多替吉或其盐。
[0183] 在另一种实施方式中，该药物组合物通过静脉内、动脉内、或肌内注射液体制剂施 用。在一些实施方式中，液体制剂包括溶液、悬浮液、分散液、乳液、油及类似物。在一种实 施方式中，该药物组合物静脉内施用，并且因此配制成适合于静脉内施用的形式。在一种实 施方式中，该药物组合物动脉内施用，并且因此配制成适合于动脉内施用的形式。在一种实 施方式中，该药物组合物肌肉内施用，并且因此配制成适合于肌肉内施用的形式。
[0184] 在一种实施方式中，本发明的药物组合物通过本领域已知过程被制造，如，借助于 常规的混合、溶解、制粒、制糖衣丸、磨细、乳化、包封、包埋或冻干过程。
[0185] 在一种实施方式中，根据本发明使用的药物组合物使用包含赋形剂和助剂的一种 或更多种生理上可接受的载体以常规的方式配制，其促进活性成分向可以药用使用的制剂 的加工。在一种实施方式中，制剂取决于施用途径的选择。
[0186] 在一种实施方式中，本发明的注射剂是在水溶液中配制。在一种实施方式中，本发 明的注射剂在生理相容的缓冲液中被配制，诸如汉克氏溶液、林格氏溶液、或生理盐水缓冲 液。在一些实施方式中，对于经粘膜施用，适于待渗透的屏障的渗透剂在制剂中被使用。这 样的渗透剂通常为本领域已知。
[0187] 在一种实施方式中，本文描述的制剂被配制用于肠胃外给药，如，通过大剂量注射 (bolus injection)或连续输注。在一些实施方式中，用于注射的制剂呈现单位剂量形式， 如，在安瓿或多剂量容器中，任选地带有添加的防腐剂。在一些实施方式中，组合物是在油 性或水性媒介物中的悬浮液、溶液或乳液，并且含有配制剂诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散 剂。
[0188] 该组合物还包含，在一些实施方式中，防腐剂，诸如苯扎氯铵和硫柳汞及类似 物；螯合剂，诸如乙二胺四乙酸钠及其它；缓冲剂如诸磷酸盐、柠檬酸盐和乙酸盐；张力 齐IJ，诸如氯化钠、氯化钾、甘油、甘露糖醇及其它；抗氧化剂诸如抗坏血酸、乙酰半胱氨酸 (acetylcystine)、焦亚硫酸钠及其它；芳香剂；粘度调节剂，诸如聚合物，包括纤维素及 其衍生物；和聚乙烯醇以及酸和碱以根据需要调整这些含水组合物的pH值。该组合物还 包括，在一些实施方式中，局部麻醉剂或其它活性剂。该组合物可被用作喷雾剂、薄雾剂 (mist)、滴剂及类似物。
[0189] 在一些实施方式中，用于胃肠外施用的药物组合物包括水溶性形式的活性制剂的 水溶液。此外，活性成分的悬浮液，在一些实施方式中，被制备成适当的油性或水基注射悬 浮液。合适的亲脂性溶剂或媒介物包括，在一些实施方式中，脂肪油诸如芝麻油、或合成脂 肪酸酯，诸如油酸乙酯、甘油三酯或脂质体。水性注射悬浮液含有，在一些实施方式中，增加 悬浮液的粘度的基质，诸如羧甲基纤维素钠、山梨醇或葡聚糖。在另一种实施方式中，悬浮 液还含有合适的稳定剂或增加活性成分的溶解度以允许高浓缩溶液的制备的剂。
[0190] 在一些实施方式中，本发明在此说明，拉多替吉提供了增强的抗炎效果，其足以在 没有其他抗炎剂时有效使用。因此，根据一些实施方式，本发明的方法考虑到使用拉多替吉 作为唯一活性成分。
[0191] 还，在其它实施方式中，本发明涉及拉多替吉组合其它药物的用途，以及尤其提 供了包含拉多替吉和对于促进或增效心肌保护有用的药物的组合组合物（combination composition)和药盒，如本文描述的。因此，本文提供了包含拉多替吉以及一种或更多种 另外的活性成分的药物组合物和药物包，所述另外的活性成分选自由下列组成的组：促红 细胞生成素、阿片类药物（如，吗啡、芬太尼、瑞芬太尼、美沙酮）、胰岛素和腺苷A1、A2A、A2B 和/或A3受体激动剂（如，腺苷、5' -N-乙基羧酰氨基腺苷、N6-环戊基腺苷、2-(1-己炔 基）-N-甲基腺苷）。每个可能性代表了本发明的独立实施方式。根据特定的实施方式，本 发明提供了一种药物组合物，其中活性成分由下列组成：第一活性成分为拉多替吉或其盐 (如拉多替吉酒石酸盐），和选自由下列组成的组的第二活性成分：促红细胞生成素、吗啡、 芬太尼、瑞芬太尼、美沙酮、胰岛素、腺苷、5'-N-乙基羧酰氨基腺苷、N6-环戊基和2-(1-己 炔基）-N-甲基腺苷。每个可能性代表了本发明的独立实施方式。
[0192] 在一种【具体实施方式】中，该组合物或药物包包含10至60mg单位剂量形式的拉多 替吉。在其它【具体实施方式】中，有效剂量的另外的活性成分是本领域已知的，并且可以由熟 练的技术人员对患者调整。在另一种特定实施方式中，该组合物被配制成口服施用，使用 如如上面详细说明的赋形剂。在其他实施方式中，本发明涉及组合物、或药物包或药盒，其 中一种成分或更多种成分可被配制用于另一种施用途径，例如静脉内注射。例如，不限于， 重组促红细胞生成素是以商标名称Epogen?或Proerit?在等渗氯化钠/柠檬酸钠缓冲溶 液中或氯化钠/磷酸钠缓冲溶液中销售，用于静脉内（i.v.)或皮下（s.c.)施用。多种产 品以10, 000-40, 000单位/mL销售。吗啡以各种商标对于各种施用途径是可用的，包括口 服固体剂量形式（如Avinza、Kadian、MS Contin)和肠胃外剂量形式如用于i.v.、s. c.或 i. m.注射（如硫酸吗啡注射液在0. 5-15mg/ml)。胰岛素如作为肠胃外注射的溶液是可用 的，如在100单位/mL以商标名称Novolog和Humulin。腺苷如以商标名称Adenocard和 Adenoscan是可用的，用于i. V.注射或以3mg/mL输注。
[0193] 下面的实施例的呈现是为了更充分地说明本发明的一些实施方式。然而，它们不 应当以任何方式被解释为限制本发明的宽范围。 实施例
[0194] 本文描述的实施例展现在检查拉多替吉半酒石酸盐（拉多替吉酒石酸盐）的效果 的各种动物模型中的实验结果。因此，术语"拉多替吉"，如在下面实施例中出现的，是指拉 多替吉酒石酸盐。
[0195] 实施例1-实验件的结肠炎以及胃肠炎症
[0196] 小鼠中由DSS诱导的急性结肠炎
[0197] 8-9周以及体重25_30g的BALB/c OlaHsd雄性小鼠购自 Harlan (Jerusalem, Israel),并在无病原体的 Animal Facility of the Institute for Drug Research中装在标准笼中达5只/笼。所有的实验根据Principles ofLaboratory Animal Care(NIH出版#85-23,1985修订）方案MD-09-12197-4进行。通过施用在水中的 5% DSS 溶液（M.Wt· = 36,000-50，MP Biomedicals,LLC，Solon, 0H，USA)8 天在小鼠中诱 导急性结肠炎。DSS溶液每天新鲜准备。在实验期间，对小鼠提供随意获取的食物和水或 DSS溶液。它们被分成如下10只/组：媒介物对照组：小鼠饮水，并通过强饲法每天1次给 予水（lml/lOOgm)，进行8天；药物对照组：小鼠饮水，并通过强饲法每天1次给予拉多替吉 (10mg/kg)，进行8天。DSS未处理组：小鼠饮用5% DSS进行7天，以及第8天饮用水，以及 通过强饲法每天1次给予水（lml/lOOg)，进行8天。药物处理组：小鼠饮用5% DSS，之后 如上所述饮用水，以及通过强饲法每天1次给予拉多替吉（5或10mg/kg)，进行8天。测量 每一组小鼠消耗的5% DSS溶液的体积，以及计算平均体积/小鼠。在第8天，在拉多替吉 的最后一次剂量之后2小时小鼠用CO2麻醉，以及通过颈椎脱位被处死。取结肠和脾脏的 样品用于细胞因子ΜΡ0、细胞因子和ChE活性的测量。
[0198] 小鼠中急性肠炎的临床症状的评价
[0199] 每天记录每只小鼠的体重、粪便稠度和粪便中血液的存在。这些数据被用于计算 疾病活动指数（DAI)，如Kullmann等（2001)描述的。所有三个参数的评分范围为0-4之 间，组成如下：体重损失：无=〇, 1-5% = 1，5-10% = 2,10-20% = 3，>20% = 4。计算所 有的组第7天和第8天相对于第1天的体重损失的百分比。大便评价：正常颗粒=0,不沾 肛门的稀便=2,腹泻=4。出血：无=0,潜血检测（hemoccult) = 2,显著出血=4。最大 DAI得分为4,基于体重损失（相对于实验的第一天）、大便稠度和出血的分数的组合除以 3。处死后，测量从盲肠到直肠的结肠段的长度。
[0200] 结肠中的细胞因子检测
[0201] 结肠匀浆中TNF-a、IL-6和IL-I β的水平藉由Biolegend ELISA小鼠试剂盒 进行测量。使用Polytron均化器将1厘米的结肠在包含蛋白酶抑制剂混合物（Sigma, St. Louis, MO, USA ;稀释1:100)的冰冷PBS缓冲液中匀浆，以及之后在14, OOOrpm，4°C下离 心15分钟。根据制造商的方案，在试剂盒提供的稀释缓冲液中1:5稀释上清液，并且施加 到96孔MaxiSorb ELISA板上。在组织上清液中的总蛋白浓度藉由BCA试剂盒进行测量。 细胞因子的水平表示为pg/mg总组织蛋白。
[0202] 脾脏和结肠中胆碱酯酶活性的确定
[0203] 在关于拉多替吉的长期处理对在饮用DSS的小鼠中的ChE活性的效果的实验中， 脾脏如上面描述的被快速移除，连同从近端区域取的长度约0. 5厘米的结肠段。脾脏和结 肠段在冷的磷酸盐缓冲盐水（PBS)中被洗涤，随后在_80°C冰冻它们。对于检验，组织被解 冻，并且称重，并且PBS以Img组织比Iml的比率加入到每一组织。组织以24, OOOrpm的速 度，在含有0. 1% Triton的冷磷酸盐缓冲液pH 7中被匀浆，并且以HOOOrpm离心。血浆 和来自脾脏和结肠的上清液的等份与乙酰硫代胆碱和二硝基苯甲酸在磷酸盐缓冲液PH 7 中被孵育，并且黄色的显色速率被测量，如Ellman等（1961)描述的。ChE活性的抑制百分 比通过与通过强饲法给予水的对照小鼠的比较来计算。根据制造商的说明，蛋白浓度藉由 Pierce BCA蛋白检验试剂盒（Thermo Scientific, USA)被确定。值得注意的是，小鼠的结肠 和脾脏中的ChE活性主要归因于AChE，而在小鼠血浆中主要归因于BuChE。
[0204] 小鼠结肠组织中的中性粒细胞浸润
[0205] 通过根据Bradley (1982)描述的方案，在96孔微量滴定板中通过混合10 μ 1上清 液和290μ 1邻联二茴香胺二盐酸盐溶液，测量结肠段中髓过氧物酶（MPO)活性，监测中性 粒细胞浸润。数据从MPO标准曲线内插得出。MPO活性以单位/yg总蛋白表示，通过上面 描述的Pierce BCA蛋白试验试剂盒在样品中测量。
[0206] 拉多替吉处理对小鼠中结肠炎的宏观标志物的影响
[0207] 接受拉多替吉（5或10mg/kg)的小鼠的体重，类似于通过强饲法给予水的那些，在 8天期间增长2-3%;与之相比给予利凡斯的明（lmg/kg/天）的那些，其中体重减少4. 7%。 在结肠中，拉多替吉的所有剂量没有造成任何显著的ChE的抑制，而利凡斯的明抑制结肠 的ChE达>60% (表1)。饮用5%DSS的小鼠显示了 15%的体重损失（图1上部左图），其 被拉多替吉的两种剂量减少将近50%。利凡斯的明并没有阻止由DSS诱导的体重损失。带 有潜血的腹泻是急性结肠炎的早期临床迹象，出现在第5天。DSS处理的第7天和第8天， 结肠炎的迹象更严重，以及包括稀便或腹泻，粪便有血，结果是在第8天所有未处理的小鼠 中几乎最大得分。在第7天腹泻被拉多替吉的两种剂量显著地减少，以及在第8天流血被 拉多替吉（5mg/kg)显著地减少（图1上部右图）。在第7天和第8天对药物处理组计算 的疾病活动指数（DAI)显著地不同于饮用DSS给予水的组（p〈0. 01)(图1下部右图）。在 通过强饲法给予水以及饮用5% DSS溶液的小鼠中的宏观检查显示出结肠长度>30%的显 著的降低以及充血和炎症的迹象，这在用拉多替吉（5和10mg/kg)处理的那些中显著地少 (图 2)。
[0208] 细胞因子分泌和髓过氧化物酶活性（结肠淋巴细胞浸润的指示物）证实了 DSS处 理的小鼠的结肠中拉多替吉的强效抗炎活性。测量是在DSS摄取的第8天做的，此时TNF-α 水平不再显著升高。拉多替吉的较低剂量，5mg/kg比10mg/kg更有效地减少IL-I β的水平 和MPO活性，比拉多替吉10mg/kg。
[0209] 表I. DSS(5% )和拉多替吉处理对脾脏和结肠中胆碱酯酶活性和小鼠的结肠中髓 过氧化物酶活性的影响
[0210]
【权利要求】
1. 一种在需要其的受试者中抑制全身性炎症的方法，包含向所述受试者施用拉多替吉 或其药物活性盐，从而在需要其的受试者中抑制炎症。
2. 根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者被鉴定为患有选自由下列组成的组的 炎性疾病：炎性胃肠疾病、炎性代谢疾病和缺血相关的炎症。
3. 根据权利要求2所述的方法，其中所述疾病是选自由下列组成的组的炎性胃肠疾 病：炎性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩氏病）、肠易激综合征、回肠炎、慢性炎性肠病、和乳 糜泻。
4. 根据权利要求2所述的方法，其中所述疾病是选自由下列组成的组的炎性代谢疾 病：2型糖尿病、1型糖尿病、糖尿病前期、血脂异常和胰岛素抵抗。
5. 根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者患有脓毒性休克。
6. 根据权利要求1所述的方法，其中所述炎性疾病是由升高的IL-6水平介导的。
7. 根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述拉多替吉以10至60mg的每日剂 量被施用。
8. 根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述拉多替吉以抑制不超过25%的乙 酰胆碱酯酶的活性、单胺氧化酶的活性、或这两种酶的组合的活性的量施用。
9. 根据权利要求1-6中任一项所述的方法，其中所述拉多替吉以抑制不超过15%的乙 酰胆碱酯酶的活性、单胺氧化酶的活性、或这两种酶的组合的活性的量施用。
10. 根据权利要求1所述的方法，其中所述抑制炎症减少：TNF-a的血液水平、IL-3 1 的血液水平、IL-6的血液水平、TNF-a的脾水平、IL-0 1的脾水平、IL-6的脾水平、或其任 意组合。
11. 根据权利要求1或6所述的方法，其中所述抑制炎症包含抑制IL-6的释放。
12. 根据权利要求1所述的方法，其中所述拉多替吉或所述其药物活性盐被配制成口 服剂型。
13. 根据权利要求1所述的方法，其中所述拉多替吉或所述其药物活性盐被配制成直 肠剂型。
14. 根据权利要求1所述的方法，其中所述拉多替吉或其药物活性盐被配制成速释药 物组合物。
15. 根据权利要求1所述的方法，其中所述其药物活性盐是拉多替吉酒石酸盐。
16. 根据权利要求1所述的方法，包含施用所述拉多替吉作为唯一的活性成分。
17. -种在需要其的受试者中治疗胃肠道炎性疾病的方法，包含向所述受试者施用拉 多替吉或其药物活性盐，从而治疗所述疾病。
18. 根据权利要求17所述的方法，其中所述疾病是与所述胃肠道的病理性炎症相关联 的慢性炎性疾病。
19. 根据权利要18所述的方法，其中所述炎性胃肠疾病选自由下列组成的组：炎性肠 病（溃疡性结肠炎和克罗恩氏病）、肠易激综合征、回肠炎、慢性炎性肠病、和乳糜泻。
20. 根据权利要求18所述的方法，其中所述拉多替吉以10至60mg的每日剂量被施用。
21. 根据权利要求18所述的方法，其中所述拉多替吉以抑制不超过15%的乙酰胆碱酯 酶的活性、单胺氧化酶的活性、或这两种酶的组合的活性的量施用。
22. -种在需要其的受试者中治疗炎性代谢疾病的方法，包含向所述受试者施用拉多 替吉或其药物活性盐，从而治疗所述疾病。
23. 根据权利要求22所述的方法，其中所述疾病选自由下列组成的组：2型糖尿病、1 型糖尿病、糖尿病前期、血脂异常和胰岛素抵抗。
24. 根据权利要求23所述的方法，其中所述疾病是2型糖尿病。
25. -种在需要其的受试者中减少或抑制缺血性损伤的方法，包含向所述受试者施用 拉多替吉，从而减少或抑制所述受试者中的缺血性损伤。
26. 根据权利要求25所述的方法，其中所述缺血性损伤是缺血性心肌损伤。
27. 根据权利要求25所述的方法，其中拉多替吉与缺血性调理组合被施用到所述受试 者。
28. 根据权利要求27所述的方法，其中所述拉多替吉以10至60mg的每日剂量被施用。
29. 根据权利要求27所述的方法，其中所述拉多替吉以抑制不超过15%的乙酰胆碱酯 酶的活性、单胺氧化酶的活性、或这两种酶的组合的活性的量施用。
30. 根据权利要求27所述的方法，所述方法用于减少或抑制围术期心肌缺血性损害。
31. 根据权利要求27所述的方法，所述方法用于在需要其的受试者中增强缺血性调理 的功效。
32. 根据权利要求27所述的方法，其中所述受试者是本来不顺从于缺血性调理的年老 的或糖尿病的受试者。
33. -种药物组合物，所述药物组合物包含拉多替吉或其药物活性盐与缺血性调理疗 法组合，所述缺血性调理疗法选自由下列组成的组：促红细胞生成素、阿片类药物、胰岛素 和腺苷A1、A2A、A2B和/或A3受体激动剂。
34. 根据权利要求33所述的组合物，所述组合物包含10至60mg单位剂型的拉多替吉。
35. -种药物包，所述药物包包含拉多替吉或其药物活性盐和缺血性调理疗法，以及同 时或顺序组合施用拉多替吉和缺血性调理疗法的说明书，所述缺血性调理疗法选自由下列 组成的组：促红细胞生成素、阿片类药物、胰岛素和腺苷2受体，所述药物包用于减少或抑 制缺血性损伤。
36. 根据权利要求35所述的药物包，所述药物包包含10至60mg单位剂型的拉多替吉。
37. -种药物组合物，所述药物组合物用于在需要其的受试者中抑制全身性炎症，所述 药物组合物包含拉多替吉或其药物活性盐。
38. 根据权利要求37所述的组合物，所述组合物用于在患有选自下列组成的组的炎性 疾病的受试者中抑制炎症：炎性胃肠疾病、炎性代谢疾病和缺血相关的炎症。
39. 根据权利要38所述的组合物，其中所述疾病是选自由下列组成的组的炎性胃肠疾 病：炎性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩氏病）、肠易激综合征、回肠炎、慢性炎性肠病、和乳 糜泻。
40. 根据权利要求38所述的组合物，其中所述疾病是选自由下列组成的组的炎性代谢 疾病：2型糖尿病、1型糖尿病、糖尿病前期、血脂异常和胰岛素抵抗。
41. 根据权利要求38所述的组合物，其中所述疾病是脓毒性休克。
42. 根据权利要求38所述的组合物，其中所述炎性疾病是由升高的IL-6水平介导的。
43. 根据权利要求37-42中任一项所述的组合物，其中所述拉多替吉是以10至60mg的 每日剂量。
44. 根据权利要求37-42中任一项所述的组合物，其中所述拉多替吉以抑制不超过 25%的乙酰胆碱酯酶的活性、单胺氧化酶的活性、或这两种酶的组合的活性的量，或以抑制 不超过15%的乙酰胆碱酯酶的活性、单胺氧化酶的活性、或这两种酶的组合的活性的量。
45. 根据权利要求37所述的组合物，其中所述其药物活性盐是拉多替吉酒石酸盐。
46. -种药物组合物，所述药物组合物包含拉多替吉或其药物活性盐，用于在需要其的 受试者中治疗炎性疾病，其中所述疾病是胃肠道的炎性疾病或炎性代谢疾病。
47. 根据权利要求46所述的组合物，其中所述疾病是与胃肠道病理炎症相关的慢性炎 性疾病，优选地选自由下列组成的组：炎性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩氏病）、肠易激综 合征、回肠炎、慢性炎性肠病、和乳糜泻。
48. 根据权利要求46所述的组合物，其中所述疾病是选自由下列组成的组的炎性代谢 疾病：2型糖尿病、1型糖尿病、糖尿病前期、血脂异常和胰岛素抵抗，优选地2型糖尿病。
49. 一种药物组合物，所述药物组合物用于在需要其的受试者中减少或抑制缺血性损 伤，优选地缺血性心肌损伤，所述药物组合物包含拉多替吉或其药物活性盐。
50. 根据权利要求49所述的组合物，其中所述组合物与缺血性调理组合使用。
51. 根据权利要求50所述的组合物，所述组合物用于在需要其的受试者中减少或抑制 围术期心肌缺血损伤，或用于增强缺血性调理的功效。
52. 根据权利要求50所述的组合物，其中所述受试者是本来不顺从于缺血性调理的年 老的或糖尿病的受试者。
53. 根据权利要求50所述的组合物，所述组合物包含拉多替吉或其药物活性盐与缺血 性调理疗法的组合，所述缺血性调理疗法选自由下列组成的组：促红细胞生成素、阿片类药 物、胰岛素和腺苷A1、A2A、A2B和/或A3受体激动剂。
54. 根据权利要求46或49中任一项所述的方法，其中所述拉多替吉以10至60mg的每 日剂量施用。
55. 根据权利要求46或49中任一项所述的方法，其中所述拉多替吉以抑制不超过 15%的乙酰胆碱酯酶的活性、单胺氧化酶的活性、或这两种酶的组合的活性的量施用。
【文档编号】A61P29/00GK104379142SQ201380019117
【公开日】2015年2月25日 申请日期:2013年2月11日 优先权日:2012年2月12日
【发明者】玛塔·温斯塔克-罗辛 申请人:耶路撒冷希伯来大学伊森姆研究发展有限公司