专利名称：免疫调节治疗剂的制作方法
免疫调节治疗剂本发明权利本发明在美国政府的支持下，以及国立卫生研究院过敏与传染病国家研究所授予的国立卫生研究院N015435号合约的支持下完成，美国政府在本发明中拥有权利。相关申请的引用本申请要求2009年3月19日提出的，名为“免疫调节剂的治疗活性”的美国临时申请61/158，526号的优先权，其整体纳入本文纳入参考。
背景技术：
1本发明领域本发明涉及从生物体液(血液，血清，或分泌物)中分离出的成分，从天然来源中分离这些成分的方法，使用这些成分保持和增强人体正常功能的方法，包括施用治疗有效量的天然或合成形式的分离成分的治疗疾病和病症的方法。2背景说明在健康的多细胞生物体中，体内平衡是通过严格控制的多种细胞功能上下调控的平衡来准确保持。细胞水平体内平衡的丧失会导致慢性疾病。这些细胞调节活动也会引起细胞间的相互作用和系统间的相互作用。这些相互作用导致了机体每个器官内细胞间的复杂关系以及每个这些器官/系统之间的相互作用。这些相互作用以多种通信形式，如细胞因子，酶，和循环细胞来发生。任何对身体的显著损伤会引起一系列有深度免疫调节作用的肽的释放。这些肽可能是广泛描述过的细胞因子类，(非抗体蛋白质会作为对特定刺激的反应释放并作为细胞间的中介体)也可能作为酶来作用。在每种情况下，其都会激活将机体缓慢导向有一个或多个下列特征的反应的通路1)有持久镇痛反应的疼痛和肿胀的快速降低；2)适应性免疫反应的刺激；3)分纤维蛋白沉积的分解和再吸收的延迟刺激；4)免疫系统监视细胞(NK细胞，T杀伤淋巴细胞)的刺激；或5)机体的基线状态转移到抗炎状态。虽然许多细胞因子已经被鉴定且其在特定反应中的功能也已被部分描述，已知的细胞调节的这方面知识还是有限的。如许多细胞因子相矛盾的确定活性所展示的，这是一个非常活跃的研究领域。完全解释通过细胞因子进行的复杂的细胞间通信还需要更多年的研究。外皮系统是在所有更高级生物形式中对抗病原体的最大单一防御。当由于外皮系统中断致使机体暴露于病原体，最容易受到其损害的时候，机体使用免疫系统的上调来保护其免遭潜在的感染过程。在细胞因子/免疫细胞级联中，通过这些肽中发生的修饰类型增强了机体对皮肤破损时可能发生的大量病理损害识别和反应的能力，同时强烈抑制这种类型的刺激经常引起的炎症。这包括免疫系统细胞的激活和细胞因子的释放，细胞因子作为治疗用能增强机体对包括急性和慢性细菌感染，急性和慢性病毒感染，寄生虫病，甚至肿瘤过程的其他病理损害识别和反应的能力。虽然皮肤是感染的最重要障碍，先天免疫系统能够对皮肤破损引起的大量攻击做出快速反应。先天免疫系统能识别和消灭病原体和有害的外来分子并在肿瘤的监视和抑制中有作用(Aufet al. ,2001 ；Bacha et al,2004 ； Gorelik et al.，1995 ；Wu and Pruett，1999)。除了刺激先天免疫系统，该反应也通过纤维蛋白的再吸收促进伤口和组织的愈合。这些沉积物是许多慢性病中的加重因素，导致许多愈合机制的失活并阻断受损细胞的营养支持。这种效应可见于慢性伤口，多发性硬化的斑，阿尔茨海默症的神经纤维缠结，动脉粥样硬化的斑，自身免疫疾病的组织变化，和作为保护肿瘤对抗免疫系统的防护而围绕癌细胞的纤维蛋白沉积。该反应也促进伤口愈合，免疫调节可通过刺激T杀伤淋巴细胞产生减少不适当的抗体表达的效果。这些细胞找出并摧毁不适当产生自身抗体的B细胞。通过消除自身抗体的产生，机体上的攻击被终止，这些抗体产生的炎症被消除，降低了症状以及自身免疫疾病通常最显著的起因。这些肽也增强了机体识别并摧毁在其细胞壁上表达非正常蛋白的细胞的能力。由于所有肿瘤细胞均在其细胞膜上表达非正常蛋白，这些T杀伤淋巴细胞在识别和摧毁各种癌症中非常重要。除了增加监视之外，这些肽还有强抗炎活性。通过TH-2细胞因子的刺激，这些肽抑制在急性损伤中可能出现的炎症反应。此外，其对阻断慢性疾病炎症可能更有帮助。这样的抗炎作用促进了急性和慢性损伤的愈合。在慢性疾病过程中，血管外空间中的纤维蛋白沉积是许多疾病进展不可或缺的部分。调动这些纤维蛋白沉积并防止其沉积现在已经成为治疗的靶标，但还没有通过此机理作用的成功的治疗剂被鉴定出来。防止对急性病理过程反应发生而的纤维蛋白沉淀防止了这些急性疾病转化为慢性疾病。纤维蛋白原是由六条肽链组成的二价体蛋白质，两组链每组Aa，Ββ和Y链各一。这些链通过二硫键在其氨基末端附近连接在一起，而留下其羧基末端暴露给凝血酶作用。作为对血管壁损伤的反应，凝血酶被激活并切割纤维蛋白原产生纤维蛋白单体以及两组肽每组纤维蛋白肽A和B各一。这些纤维蛋白单体随后互相连接构成了血凝块形成的松散支架。释放出的纤维蛋白肽特征已被描述，有一些物种依赖活性，但其之前并未被鉴定为免疫系统调节剂。其也具有快速降低血管通透性，以及激活内膜和血管外空间纤维蛋白再吸收的延迟刺激的疗效，这样的疗效之前未被鉴定或识别过。在身体任何系统中，产生体内平衡改变的任何活性也会刺激相反的过程以允许逆转这种变化。因此可以预期引起血管渗漏的过程也会导致修正该渗漏的过程。在纤维蛋白产生的情况下，这通过两种机制来实现 1)产生血块封闭渗漏区域，和2)释放降低血管整体渗透性的分子以防止这些分子移动到不需要它们的区域而有害。此外，血管外空间和内膜下空间中纤维蛋白的存在长期看是有害的，但紧急情况下是必要的。纤维蛋白肽A产生这些纤维蛋白沉积的延迟再吸收以防止与其长期存在相关的问题。当再吸收失败时，会导致慢性疾病。这些肽的跨物种活性已知， 但这种种间活性的机制之前还未被解释。尽管纤维蛋白肽B在物种和物种间几乎没有同源性，纤维蛋白肽A末端序列在大多数哺乳动物里有显著的同源性，这可能能解释大多数这种跨物种活性。此外，C3的一部分从一种哺乳动物到另一种也表现出相当的同源性。
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在冠状动脉疾病中血管内膜的纤维蛋白沉积以及许多其他疾病中血管外空间的纤维蛋白沉积导致这些疾病的进展。增长的纤维蛋白调节数据表明这样的纤维蛋白沉积是许多疾病过程的主要部分。这不仅是有由于纤维蛋白组成的物理屏障引起的功能受损，也是由于这些空间里纤维蛋白的促炎活性。此外，这些空间里纤维蛋白的存在抑制了愈合所必需的一些细胞的活性。这方面的一个例子是血管外纤维蛋白阻止雪旺细胞再生活性的能力。过去几年里研究人员已经能证实许多此类疾病过程中去除血管外纤维蛋白的疗效。这些研究证明了纤维蛋白的促炎活性以及正常细胞/器官功能的损害。这种损害是许多疾病，包括但不限于多发性硬化症，类风湿性关节炎，周围神经挤压伤，阿尔茨海默氏病，黄斑变性，慢性伤口与动脉粥样硬化病理过程的主要要素。在这些研究中血管外纤维蛋白是新疗法的重要靶标。过去的几年Thl和Th2细胞因子在免疫/炎症反应研究中也成为了突出的重点。 最初，Th2被视为抗炎的而Thl被视为促炎的。这种概括没有充分说明这些炎症谱对应端之间错综复杂的相互作用。另外，炎症反应也被定性为主动和被动类型，并进一步定为先天和适应性免疫系统中的活性部分。这些划分都没有真实的说明体内所见的反应，因为系统反应几乎总是包含了 Thl和Th2活性，先天和适应，以及主动和被动的免疫/炎症反应的组
口 O这样的组合活性也发生在机体对这些肽的反应中。这些肽引起可以被视为刺激性或抑制性的细胞因子级联中的一系列活动，但最终的结果是免疫系统刺激，从血管外空间里去除纤维蛋白的刺激，以及对炎症的抑制。许多在血流中循环的蛋白和肽被确认在人以及实验动物模型中对局部炎症过程有影响。这些蛋白和肽包括多种细胞因子和趋化因子。这些物质产生调节局部炎症反应程度的反馈回路。在多数慢性疾病中这种对炎症反应的控制是不够的，使得局部炎症导致健康组织的破坏。纤维蛋白肽A在多种疾病模型中有抗炎作用，因而减少了局部组织破坏并改善了疾病状态。本发明描述了这些模型，证实了纤维蛋白肽A的抗炎效果。这种抗炎反应作用的机理是被证实的纤维蛋白肽A的特定能力，通过特定抗炎细胞因子的产生在细胞因子板上产生从主要是Thl反应到主要是Th2反应的转变。除了这种细胞因子的转变之外， 纤维蛋白肽A有降低血管通透性的能力。这种血管通透性的降低有将血浆蛋白(如纤维蛋白)保持在血管内，防止其在血管外空间促炎活性的效果。尽管纤维蛋白特别的被认为是血管外空间的促炎分子，纤维蛋白肽A有能力大大减少纤维蛋白从血流中到血管外空间的迁移，并加速纤维蛋白从这些空间里的去除。这种抗炎活性(至少是防止促炎活性)在慢性炎症疾病治疗中有深远的意义。在1978年，Ruhenstroth-Bauer等证明了纤维蛋白肽A和B的抗炎活性。在他们的研究中，Ruhenstroth-Bauer和同事寻求理解对病理刺激反应的炎症的特定起因。他们首先证实了病理损伤后释放的急性期蛋白的改变。他们随后分离了这种改变产生的蛋白抗炎活性。美国专利4215109号描述了进一步分离这种抗炎活性的过程，首先到纤维蛋白原，随后进一步测定确定的纤维蛋白肽A和B是这种生物抗炎反应的来源，该反应在几乎所有病理过程中有有益效果。他们证实了角叉菜胶致大鼠足肿胀模型中的这种疗效，证明了增加的腹腔内注入的纤维蛋白原的疗效，随后将这种有益活性分离至纤维蛋白肽A和B。然而， 他们的研究没有描述这种抗炎活性作用的机理或将这种活性分离到具体肽。他们也没有使用他们的研究产生疗法。这个相同的小组(Scherer等，1981)随后证实了其他疾病模型中的这种抗炎效应。证实了通过每日腹腔注射人纤维蛋白肽A和B，豚鼠和鼠中实验性变应性脑脊髓炎 (EAE)过程的改善(一种多发性硬化症(MS)的疾病模型)。相比对照组，这些注射在治疗的动物中产生了疾病状态的显著改善。疾病临床神经系统体征改善明显，治疗动物中数量， 严重性和麻痹持续时间均减少。此外，与血浆蛋白外渗和神经软组织水肿相关的血管渗透性炎症改变在纤维蛋白肽治疗的动物中显著减少。最后，在这些动物血清中观察到循环免疫复合物显著较高的滴度，证实了使用纤维蛋白肽A和B的治疗没有改变对抗原刺激的特定免疫反应。他们因此得出结论，这种抗炎反应不是以免疫抑制为代价的。没有观察到抗碱性蛋白和抗脑抗体产生的不同。在纤维蛋白肽治疗动物和生理盐水治疗对照间没有显示出EAE特征性的细胞浸润显著的质量或数量差异(Scherer等，1979)，但通常与这些发现共同出现的炎症明显减少。这些研究完成不久之后，Marusic等以各类腹膜炎诱导证实了相同的发现。由于这些肽是轻度酸性的，Scherer等的研究可能被视为假阳性，而且似乎没有任何这个途径进一步的研究发表。纤维蛋白沉积在MS斑的发展中是一个重要的促进因素(Adams等2004)， 而且这些沉积是作为渗漏血管的结果而形成。如上所述，Scherer等证明了通过纤维蛋白肽A和B的治疗可以减轻血管渗漏。降低的血管通透性也略微降低了免疫复合物的迁移，并减缓了血管外空间纤维蛋白的沉积。此外，纤维蛋白有通过将雪旺细胞保持在非成髓鞘状态来调节雪旺细胞分化的能力。纤维蛋白诱导ERK1/2磷酸化和雪旺细胞中维持其在非成髓鞘状态的低亲和力受体 P75NGF的产生，抑制纤维连接蛋白的产生，并阻止髓鞘蛋白的合成(Akassoglou等2002)。 在许多慢性神经系统疾病中这样的血管外空间纤维蛋白的持续存在关系到疾病过程的持续和神经系统症状的进展。这包括多发性硬化的斑，阿尔茨海默症的神经纤维缠结，帕金森氏病的基底神经节病变，慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病的周围神经病变，和许多其他疾病中的纤维蛋白存在。这些纤维蛋白沉积也是神经系统以外的病理过程的重要部分。这由动脉粥样硬化心脏疾病，慢性伤口，高血压，癌症(产生癌细胞周围的障碍)，黄斑变性，自身免疫性疾病，和许多其他疾病进展中纤维蛋白的重要作用证实。也已观察到抗变应反应/抗过敏反应活性。Masuda等(2001)证实纤维蛋白肽A 片段(与本发明的目的相同的片段)将鼠抗体IgE脱糖基化。该脱糖基化的IgE不再有刺激从肥大细胞释放组胺的能力，因此防止了过敏性/变应反应。然而该脱糖基化过程没有影响IgE与抗原相互作用，与肥大细胞以及其他免疫细胞连接，或改变这些细胞执行由IgE 抗原/抗体复合物结合到其膜受体上引起的所有其他正常活动的能力的性能。他们进一步证实了合成形式的肽序列也以相同的方式脱糖基化IgE。一旦这种脱糖基化发生，他们不再能诱导鼠全身过敏反应(Masuda等2001)。然而，Masuda和同事没能解释脱糖基化机制。 他们也没有评估脱糖基化的IgE在免疫系统反应中可能具有的更多效应。已确认通过糖基化和脱糖基化的细胞因子系统性效应修饰。这种IgE的脱糖基化可能是纤维蛋白肽A对 IgE的直接效果，或者也可能是免疫调节的额外效果。这样的脱糖基化以及随后的组胺反应缺乏可以部分解释施用纤维蛋白肽A后观察到的血管通透性降低。组胺反应的缺乏可能导致损害时纤维蛋白沉积的减少。由于这种脱糖基化看起来不以其他方式抑制免疫系统，也不改变IgE结合抗原的能力，该有益影响并没有带来对机体免疫反应的有害影响。相反，这种脱糖基化仅控制了引起过敏反应的有害的获得性亢进。纤维蛋白肽A降低烧伤模型中损伤严重性的能力已经被证实(WormsenUri.专利 10/790888)。在该专利中发现结合组蛋白肽的纤维蛋白肽A能防止热或化学烧伤的伤害并加速已经发生的烧伤的愈合。他们推测这种愈合的发生主要是由于抗炎作用。为证明这一点，他们预处理同种其他动物的烧伤渗出液，随后分离有这种疗效的渗出液组分。他们发现仅含有纤维蛋白肽A的组分有在降低烧伤严重性中有极大的保护作用。他们没有推测这种保护效果的作用机制。该工作暗示这种效果的机制是通过降低血管渗透性，降低的血管渗透性可防止血浆蛋白外渗引起的损害，包括溶酶体酶的释放和超氧阴离子的产生。纤维蛋白肽B促进成纤维细胞，单核细胞和中性粒细胞迁移到损伤区，而不刺激中性粒细胞中溶酶体酶的释放和超氧阴离子产生的能力也证实了纤维蛋白肽B(也可能是 A)帮助伤口愈合的能力(Senior等，1986)。作为对纤维蛋白对中性粒细胞的化学诱导活性的反应，这些物质的释放推测会导致多发性硬化症中所见的脱髓鞘。此外，Gray等(1990) 证实了纤维蛋白原α和β链刺激成纤维细胞复制的能力，向含有纤维蛋白原的溶液中加入凝血酶显著增强这种活性，这有力表明了这种活性与该切割相关。如发现这些肽几十年后此领域后续信息和研究的缺乏所示，这些发现还不能被认为足够发展包含它们的治疗方法。缺少正在进行的研究部分是由于所有这些研究人员没能认识到这些肽的免疫调节和抗炎能力，能增强免疫系统并同时减少炎症反应。这种预防慢性感染中免疫调节，促成更加健康的Th2环境，刺激伤口愈合中国必需细胞的迁移，并同时防止减缓愈合和导致慢性伤口的损伤机制。新血管的生长是一个包括多种不同类型细胞的复杂多因素过程。当血管损伤中断血流时，愈合过程需要血流恢复到正在愈合的细胞。该过程以受损细胞的以及与成纤维细胞迁移相结合填补损伤缺陷的血栓的降解和吸收开始。随后血管细胞分化形成能最终成熟成血管的小管。血管生成是伤口愈合必不可少的正常生理过程。纤维蛋白在实体瘤中围绕渗漏血管积累(Brown等，1998)。纤维蛋白也被证明在宿主-肿瘤交界处聚合形成纤维蛋白网，其可以通过支持内皮细胞的粘连，迁移，增殖和分化来促进肿瘤血管生成(Bootle-Wilbraham等，2001)。随着纤维蛋白网增厚，对血管生成的促进消失，纤维蛋白网成为这些内皮细胞粘连，迁移，增殖和分化的障碍。这种障碍也防止了免疫细胞识别和消灭肿瘤细胞。通过仅使用活化的纤维蛋白肽A和B片段，产生的细胞因子级联有这些有益的血管生成活性，而没有“保护”肿瘤细胞免受免疫系统攻击。这种效果可部分通过白介素IB的现有数据外推以及其对炎症和免疫细胞的效果来解释。伤口床上细胞的迁移和分化受到细胞因子和特定其他免疫细胞(巨噬细胞和淋巴细胞)存在的很大影响。IL-IB促进这些细胞迁入伤口床，从而产生更有助于血管生成的环境。此外，作为对激活的纤维蛋白肽A片段和纤维蛋白肽A在炎症级联中的其他直接效应的反应，IL-10 的升高提供了更强的淋巴细胞，单核细胞，巨噬细胞，和单核细胞迁入这些区域的能力，其中不释放溶酶体酶但仍然有攻击细胞和其他外来物的能力。纤维蛋白在血管壁中的沉积在许多血管系统疾病中发生。纤维蛋白肽A调动这些纤维蛋白沉积以及防止进一步沉积的能力在各种血管疾病中有着深远的意义。这些包括， 但不限于，冠状动脉疾病，黄斑变性，跛行，与动脉粥样硬化的改善。在许多其他疾病中该过
9程促进了血流，在多数慢性疾病中改善了结果。当对任何组织的伤害发生时，这些纤维蛋白沉积的吸收创造了更有助于血管生成过程的环境。这在糖尿病足溃疡得到最好的证明，其中在大脉管和微脉管中的慢性纤维蛋白沉积极大的阻碍血液流动，而且由于患处缺乏血液流通阻碍了组织愈合。之前的研究没有记载纤维蛋白肽A刺激血管生成以及由此生成健康血管环境的能力。事实上，Staton等(美国专利申请公布号20040039157)证实了纤溶酶切割产生的一个纤维蛋白肽A片段竟然有相当突出的抗血管生成活性。Thompson等(1992)也将纤维蛋白原血管生成活性分离到片段E，其是纤溶酶释放的中央结处的纤维蛋白原部分，但没能确认纤维蛋白肽A的潜在治疗效果，由于凝血酶最初被用于溶液中以分解纤维蛋白原，其应该是已经存在于被证明有治疗活性的溶液中的副产品。之前发表的研究没有确认纤维蛋白肽A和/或B为抗病毒素或抗生素。观察到使用纤维蛋白肽A治疗后再给予Ponto Toro病毒的小鼠存活率增加。使用了两种不同形式的纤维蛋白肽A :1)过滤的山羊血清血清组分，计算含有约3mg纤维蛋白肽A(也包含山羊纤维蛋白肽B以及补体C3片段)，和2)合成的纤维蛋白肽A。然而这些物质没有直接抗病毒作用(预期的结果)，但结果确实证明与安慰剂组相比，治疗过的动物存活改善(见图1)。 在该研究中分析了几个标准。这包括肝，脾，和血清病毒滴度；血清谷丙转氨酶(ALT)的测定；在感染后第3天对肝和肺肝性黄疸评分；每日体重测量；至死亡的平均天数；和总生存率。使用包含纤维蛋白肽A的测试物治疗的两组表现相同。在这些治疗组中60%的鼠生存，而在安慰剂组中仅有25%存活。这样的改善对每个独立纤维蛋白肽A组在统计学上显著(P值=0. 03)，当这些组合并起来计算使用纤维蛋白肽A的总改善时统计学显著性也改善了(P值=0.015)。尽管评价的任何其他疾病标准没有可观察到的不同，存活率仍然增加，表明了病毒引起疾病的能力没有改变，而机体在一剂纤维蛋白肽A后对抗威胁生命感染的能力增强。在该研究中没有进行炎症或纤维蛋白沉积测定。纤维蛋白肽A和利巴韦林对照间存在差异，该差异在统计学上不显著(P值=0.08)。这些结果表明了纤维蛋白肽A在传染病领域潜在的治疗价值，其有增强愈合并减少症状持续时间的能力。由于身体对传染病的常规反应会导致非常促炎的状态，甚至在感染治愈后这种状态经常引起持续的症状。纤维蛋白肽A有减轻这些症状并由此缩短疾病症状期的能力，而且不阻碍身体对抗感染的能力。这种效果也可能是由于纤维蛋白肽A将蛋白调动出血管外空间的能力。考虑到细胞因子板的转变延迟，并基于这种可验证的转变的预期效果，纤维蛋白肽A产生的增强免疫效果对在获得性免疫反应上有比对先天免疫反应强的多。这种差异解释了在疾病所有其他指标都缺少改善的情况下，生存率仍然有很大提高。进行第二项研究以测试这些物质对抗甲型流感Hmi。在该研究中对照是低剂量的利巴韦林。每组中所有鼠均死亡，表明感染比预期更严重。这再次证明了缺乏时间以发展出将被纤维蛋白肽A的存在所增强的真正适应性反应。本发明肽在治疗肿瘤疾病中的抗肿瘤活性是由于三种不同的作用机制1)增强免疫系统监控以消除肿瘤细胞，2)防止或消除癌细胞周围的纤维蛋白沉积，3)减轻肿瘤细胞团周围的肿胀和这些肿胀引起的症状。首先通过IL-IB的活性，免疫系统T-杀伤淋巴细胞，NK淋巴细胞，和B细胞的产生增加。这样的分化使得机体能基于癌细胞细胞膜上异常蛋白质显现发现并摧毁癌细胞。 这些肽因此具有治疗甚至对化疗反应差得的癌症的能力。而这种作用机制需要时间攻击并除去已经扩散的癌症，这种类型的刺激也可以防止癌症不断发展。增加的血浆纤维蛋白原水平或恶性肿瘤细胞纤维蛋白原分泌引起纤维蛋白原或纤维蛋白沉积进恶性肿瘤组织细胞外基质，这些因素作为细胞外基质的一部分有促进恶性肿瘤细胞的增殖，侵袭和转移的效果(Rybarczyk等，2000年)。因而这些肽防止纤维蛋白迁入围绕肿瘤细胞的基质的能力有消除癌细胞对宿主免疫系统防护的效果，并帮助宿主识别和消除癌细胞。除此效果之外，这些肽对宿主免疫系统的刺激增强了免疫系统摧毁这些细胞的能力。因为许多这些症状是由于转移引起的炎症，上述抗炎活性降低了转移癌的症状。 此外，化疗引起的症状通常部分是由于这些药物以及这些药物引起的细胞损毁的炎症效应。从上面的描述可见，这些肽有治疗自身免疫疾病的能力，通过1)降低对自身免疫抗体攻击的炎症反应，2)降低导致自身免疫疾病病理进展的纤维蛋白沉积，幻通过产生能寻找并摧毁产生自身抗体细胞的T-杀伤淋巴细胞来摧毁产生自身抗体的B细胞。执行监视功能的能力缺失对自身免疫疾病的进展负有最终责任。这些肽有能力恢复这种功能。当 IL-I β与某些疾病的破坏过程进展有关时，这种低水平刺激似乎没有这些效果或IL-10 刺激的存在调停/防止了这些效果。Buckheit (W0/2006/116381)证明了使用癌细胞裂解物处理过得山羊血清组分对特定癌症有抗肿瘤活性。这最初被认为对山羊抗体的形成是次要的，他们随后证实了没有大蛋白(包括免疫球蛋白)的这些动物的血清组分仍然有抗肿瘤活性。他们也证明了用一种类型癌细胞裂解物预处理的山羊血清组分有能力治疗其他类型的癌症。他们推测这种效应与抗体片段相关。免疫或接种包括将患者暴露于灭活的致病抗原以刺激对特定病原体的免疫反应。 这种主动免疫类型通常提供对特定疾病长时间的防护。建立对几种常见病毒的主动免疫的进一步尝试已被证明是徒劳的，这引起了对使用被动免疫治疗这些疾病的研究。这类治疗使用一个或多个患者或动物产生的中和抗体来治疗其他患者或动物的感染。从历史上看， 已经使用被动免疫治疗多种疾病。几十年来，免疫受损的病人被给予混合的IgG以增强其免疫力。随着在我国人口中出生血液感染的几率和单克隆抗体生产能力的增加，这种疗法在一般轻度免疫系统功能障碍的治疗中已经不再流行。混合抗体制备物现在只能被偶尔用于在暴露增加时刺激免疫系统，以及阻止自身免疫疾病的攻击。尽管存在这些因素，被动免疫作为一种可能的对特定病毒或细菌感染的疗法还是受到关注。然而，来自个体或动物的带有确定的免疫力的血清也可能包含病毒或细菌，因此，转输血清也可能导致感染。在努力开发对特定疾病的新抗病毒和抗生素药物中，评估了这种超免疫血清对受这些疾病折磨的人的治疗潜力。这些方法有超敏性反应的发生和额外感染潜在风险的明显困难，但其有可证明的效力。这种类型的治疗最简单的形式是简单的将宿主动物暴露给特定病原体随后从动物中提取血液并将含有抗体的血清组分注射给病人。Karpas (美国专利号4，863，730)使用含有高滴度的获自HIV阳性患者血浆的异源人中和抗体来治疗艾滋病。尽管该方法被证明能有效降低病毒血症并延迟AIDS发病，临床应用和大规模生产异常困难。Davis (W097/02839, W001/60156,02/07760, US2002/006022)使用一种方法治疗 HIV感染的患者，包括以病毒裂解液(HIV)或细菌裂解液(金黄色葡萄球菌，链球菌，大肠杆菌)接种山羊和注射获自这些超免疫山羊的血清。他的方法以及使用这种方法治疗HIV以及其他感染的成功已经被广泛宣传(Washington Post, April 9,2000 ；Dateline Houston television broadcast, Sept 18，1998 ；等)。在他的方法中，他使用包括硫酸铵沉淀以及随后的使血液最初凝固后的过滤过程(透析或凝胶过滤)的标准提取和纯化方法。Gelder 和同事(美国专利 #6043347，6258599，63；35017，和 6670181)也开发了一种方法，使用超免疫山羊生产假设能识别特定病毒表位的中和抗体。他们使用不能在人中激发中和抗体产生但山羊可做适当反应的的抗原。Gelder将Davis描述的过程复杂化，将 HIV-mN和HIV-2NZ中纯化的蛋白注入山羊，随后使用已知包含高度保守的HIV表位区域的合成肽增强免疫力。这种方法形成了目前HIV治疗临床试验中的药物(HRG214)的生产。 制造商还声称从暴露于一种病毒的动物通过其过程制备的其血清制品对治疗其他类型病毒疾病有益(见Vironyx网站)。此外，去除血清中的大蛋白(包括去除所有完整抗体)没有消除疗效但确实增强了制品的安全性。据推测，这种疗效源于剩余的血清组分中抗体片段的存在(特别是Fab片段)。伴随该研究的信息中，说明了最好去除所有大小大于30kD的蛋白，基本上消除所有来自山羊治疗的抗体和片段。Dalgleish(W003/004049, W003/064472)认识到一部分这些配方中的活性不能完全由中和抗体的活性解释。因此他推测这些制品的抗炎活性可能依赖于抗-HLA和/或抗-FAS抗体。他证实了这些抗体有抗炎效果，防止类似正常人HLA的病毒表位对免疫系统的过度刺激。Dalglish和同事证明了用抗-HLA和/或抗-FAS抗体富集的血清组分在有不适当的高HLA水平的，如慢性感染(病毒和细菌的)，局部癌症(指定肺，胰，肝，肠，淋巴结和皮肤癌)，广泛的多种疾病治疗中，以及有高HLA水平的其他疾病如糖尿病和多发性硬化症的治疗中很有用。在他的研究中，Dalglish和同事没有使用超免疫山羊(在血液移出前没有用抗原处理山羊)。Tolett (W0 04/033665)，也描述了异种血清混合物治疗HIV的疗效，使用经过滤而在未经别的纯化的HIV-暴露动物的血清或血浆。血清或血浆混合物是来自多种动物的，未经过任何纯化过程的简单的未处理的血清混合物。Ansley (美国专利号5，219，578)使用同样的制备过程来制备IgG血清组分，尽管在该专利中，事先没有进行对山羊免疫系统的刺激。这些未经病原体处理的山羊的血清被移出并处理，随后使用来预防和治疗多种兽类疾病。这些疾病包括多种机会性生物体引起的马下呼吸道疾病(ELRD)，不同B血清型结节根霉引起的绵羊和羔羊羊脚腐病，和牛呼吸系统疾病。Ansley证明了未经免疫的绵羊的血清在被治疗的动物中诱导免疫系统非特定性激活，引起显著的疗效。Hamm等证明了山羊血清组分治疗马下呼吸道感染的能力。Thacker (美国专利号7358044)证明了包含低分子量肽的血清组分可以被用于刺激免疫系统，极大的改善使用多种病原体致死性激发的动物的存活率。在该研究中，未经病原体处理的动物的血清被用于药物制备。该专利也引用了研究，其中山羊血清的一个组分，
12基本上不含免疫球蛋白，当细菌激发前M小时施用该山羊血清组分时能给予使用致死剂量多杀性巴氏杆菌激发的鸡显著的保护。类似的结果可以在给予鼠伤寒沙门氏菌致死激发的鼠中获得。Bucldieit (美国专利申请2006/(^9216 证明了来自接种病毒，细菌或癌细胞裂解液的动物的血清或血浆具有治疗裂解液制备来源的疾病的能力。这种疗效在基本不含所有抗体和大蛋白的血清组分中最大。除了这些证明血清组分疗效的研究之外，探索中和单克隆抗体用途的多个研究已经完成。这些研究的结果已证明令人失望(见例如Burton D R et al. Science (1994) 266 1024-1027 ；Trkola A. et al. J. Virol. (1996)70 :1100-1108 ；Conley A J. et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA(1994) 91 :3348-3352 ；)。尽管这些抗体在体外似乎有显著的疗效，而在体内没能证实有清楚的疗效Miehm 1995)。大体上，异源抗体混合物(从天然血清中生产，因而含有本发明的活性肽)似乎比单克隆抗体明显更有效，再次表明了对单独抗体的替代作用机制。这些混合物在疾病预防中比在疾病的治疗中也感觉更有效(Montefiori， 2001)。发明简述如本发明实施和广泛描述的，本发明涉及药物组合物，这些组合物的膳食补充剂， 以及制备在多种环境中调节免疫系统并增强免疫反应的，来自动物血液的哺乳动物血清生物活性组分和从此分离和制造肽的方法。此外，本发明包括这些肽的合成形式，而且本发明包括增强这些治疗和预防效果的这些肽的衍生物和修饰物。本发明的一个实施方式涉及包含肽的制剂，肽含有在SEQ ID Nos. 1-5,7-9, 11-13，15，16，和20-22中识别出的序列，纤维蛋白肽A的序列，在产生纤维蛋白肽A的哺乳动物种类间基本同源的纤维蛋白肽A区域的序列，补体C3的序列，以及任何也含有一个或多个保守的氨基酸取代的前述序列，其中制剂基本上没有包含可检测的纤维蛋白肽B。优选的，制剂进一步包含药学上可接受的载体如，例如水，油，食用油，脂肪酸，脂类，多糖类，纤维素，甘油，乙二醇，及其组合。优选的食用油包括，例如柠檬油，薄荷油，或葡萄籽油。优选的制剂被制成口服，经粘膜，非肠道，淋巴，或静脉施用以使生物活性形式的制剂以生理有效浓度被释放到患者系统中。也优选是膳食补充剂的制剂和从生物来源纯化或合成制造的制剂。本发明的另一个实施方式涉及含有纤维蛋白肽A或其片段，以及药学上可接受的载体的药物组合物，其中纤维蛋白肽A或其片段为治疗有效量，优选的，治疗有效量是从 0. Img至500mg。也优选组合物其中治疗有效浓度防止沉积并刺激患者血管外空间，如与冠状动脉疾病相关的，和血管内膜下空间内纤维蛋白的再吸收。优选组合物在治疗有效浓度是无毒的并基本不含可检测的纤维蛋白肽B。组合物可以包含源自人或非人，但优选哺乳动物纤维蛋白肽A序列的纤维蛋白肽A或其片段。表达非人纤维蛋白肽A序列的哺乳动物包括马，猫，犬，牛，山羊，绵羊，和鼠。本发明另一个实施方式涉及治疗或预防患者疾病的方法，包括提供包含纤维蛋白肽A或其片段，以及药学上可接受的载体，而不含纤维蛋白肽B的组合物，其中纤维蛋白肽A或其片段来自非人的哺乳动物；以及对患者施用一定剂量组合物，其中施用是经粘膜的以使纤维蛋白肽A或其片段施用5分钟内在患者淋巴系统中达到治疗有效水平。优选患者是人，也优选疾病是血管炎症或冠状动脉疾病。优选单剂组合物含有从0. Img至IOmg 的活性成分，和优选的施用包括初始施用以及随后的，口服和经粘膜的，持续施用，而持续的施用至少7天不重复。优选纤维蛋白肽A或其片段刺激患者细胞释放细胞因子ILl β， IL-10，而非IL-1，IL-4或TNFa。另一个优选的方面是患者纤维蛋白肽B的活性被抑制， 如，例如，通过施用纤维蛋白肽B结合剂。本发明另一个实施方式涉及防止纤维蛋白沉积并吸收患者血管内沉积的纤维蛋白的方法，包括提供包括纤维蛋白肽A或其片段和药学上可接受的载体的药物组合物；以及对患者施用组合物以使纤维蛋白肽A或其片段在患者淋巴系统中达到治疗有效水平。优选患者是人以及纤维蛋白肽A或其片段来自非人的哺乳动物纤维蛋白肽A序列。组合物的使用优选通过经粘膜施用直接进入淋巴系统，以及包括初始施用以及随后持续的施用，而持续的施用不超过一周一次。本发明另一个实施方式涉及哺乳动物血清组分，其中组分包含多种成分，澄清无颗粒，基本所有成分分子量在约1200道尔顿至约1700道尔顿范围内。优选哺乳动物是马， 猫，犬，牛，山羊，绵羊，和鼠。本发明另一个实施方式涉及包含肽的制剂，肽含有选自由SEQ ID Nos. 6，10，14， 和17-19，纤维蛋白肽B的序列，在产生纤维蛋白肽B的哺乳动物种类间基本同源的纤维蛋白肽B区域的序列组成的组，其中制剂基本上没有包含可检测的纤维蛋白肽A。优选制剂进一步包含药学上可接受的载体如，例如水，油，食用油，脂肪酸，脂类，多糖类，纤维素，甘油， 乙二醇，及其组合。优选的食用油包括，例如柠檬油，薄荷油，或葡萄籽油。优选的制剂被制成口服，经粘膜，非肠道，淋巴，或静脉施用以致生物活性形式的制剂以生理有效浓度被释放到患者系统中。也优选是膳食补充剂的制剂和从生物来源纯化或合成制造的制剂。本发明另一个实施方式涉及治疗或预防患者疾病的方法，包括提供包含纤维蛋白肽B或其片段，以及药学上可接受的载体的组合物，其中组合物基本不含能检测的纤维蛋白肽A，其中纤维蛋白肽B或其片段来自非人的哺乳动物；以及对患者施用一定剂量组合物，其中施用是经粘膜的以使纤维蛋白肽B或其片段施用5分钟内在患者淋巴系统中达到治疗有效水平。优选患者是人，疾病是自身免疫性疾病，如，例如，关节炎，克罗恩病，乳糜泻，I型糖尿病，格雷夫症，特发性血小板减少性紫癜，银屑病，硬皮病，系统性红斑狼疮， 或溃疡性结肠炎，或疾病是免疫调节疾病如，例如，过于活跃的免疫系统。优选单剂含有从 0. Img至IOmg的活性成分。本发明另一个实施方式涉及哺乳动物血清组分，其中组分包含多种成分，澄清无颗粒，基本所有成分分子量在约800道尔顿至约2300道尔顿范围内。优选的，哺乳动物选自马，猫，犬，牛，山羊，绵羊，和鼠组成的组。本发明的其他实施方式和优势部分在随后的详述中展示，部分可在详述中显而易见，或可从本发明的实施中学得。
图1天然或合成形式的纤维蛋白肽对受到Ponto Toro病毒感染的鼠存活的影响。 有活性的血清组分包含山羊纤维蛋白肽A和B以及补体C3片段。图2聚乙二醇化和非聚乙二醇化的合成纤维蛋白肽A在急性实验性变应性脑脊髓烟鼠模型中的效果。图3本发明牛血清组分实施方案的HPLC解读。21. 73和22. 84处的峰被鉴定为 SERIM A ；22. 59 和 23. 28 处的峰为 SERIM B ；20. 13 处的小峰为 SERIM C。图4本发明马血清组分实施方案的HPLC解读。21. 32和18. 30处的峰被鉴定为 SERIM A ；14. 56 和 23. 53 处的峰为 SERIM B ； 11. 62 和 11. 84 处的峰为 SERIM C。图5本发明山羊血清组分实施方案的HPLC解读。马血清组分包含最高相对量的马SERIM A(峰在17. 86)。在这个样品中没有鉴定出其他肽，但检索蛋白数据库显示没有另外两种马数据库中的SERIMs的序列信息。图6本发明人血清组分实施方案的HPLC解读。可以看出，人样品包含比动物样品更多的肽。然而，样品仍然与多数肽质量有关系。29. 46和20. 96处的峰都对应肽A。25. 27 和30. 41处的峰对应肽B，19. 16处的峰对应肽C。发明详述人体在严重外伤后有惊人的愈合能力。考虑受严重外伤的人和受轻伤害的人对伤害反应的不同，有三点差异突出1)受严重外伤的人免疫系统反应显著增强；2)经历严重外伤的人在伤害的早期有相对最小化的肿胀；3)与受更轻伤害的人相比，严重外伤产生麻木效应，减轻严重外伤患者感受的疼痛。医学文献和当今的医疗模式将这些发现归因于“应激反应”，内源性内啡肽的释放是这种反应的一部分。已经惊人的发现在这些类型的伤害中释放的一组肽是许多应激反应益处的原因。当在慢性疾病中使用这些肽时该反应对患者有很大的益处。本发明确定了多种肽的细胞因子活力，其中一些分子之前被确认但还没有说明细胞因子活性。此外，本发明描述的特定分子之前没有被确认为生物活性物质。尽管特定肽的序列可能被确认，这些肽的切割和生物活性肽的释放之前没有被描述过。这些肽归为两类 1)作为凝血级联的一部分释放的肽，和2)作为补体系统的一部分释放的肽。许多作为凝血级联的一部分释放的肽已经被确定，细胞因子作用机制之前没有被描述或识别。补体系统的肽之前没有被描述为母蛋白裂解物，而且他们的细胞因子活性之前也没有被描述过。本发明详述公开了这些肽作为对外皮破损的反应释放。多数严重到足以引起血管壁损伤的病理损害会产生类似的多肽释放。在凝血级联的初始段，激活的蛋白质中许多小肽被释放形成血凝块的框架。这些降解产物总是被认为是相对不活跃的肽，尽管凝血级联外的一些次要活性归因于它们。这些肽存在于血流中刚足够长时间进一步再循环，半衰期仅几分钟。然而，考虑到其他生理过程不同系统间的复杂相互作用，由于血凝的需要通常与对病原体暴露一致，来自血凝级联的降解产物有上调免疫系统的能力。此外细胞因子活动通常在非常低的剂量发生。这些小体积肽，尽管其在体内半衰期非常短，有深远影响的的能力惊人。虽然意外，这可能是由于当血管壁或外皮有破损时免疫系统上调的需要。本发明的肽有这种阻止纤维蛋白和相关物质沉积的能力。这是免疫调节和细胞级联刺激的直接效应或部分结果，但纤维蛋白肽A直接或间接导致纤维蛋白沉积调节的事实显示为急性和慢性疾病治疗的重大突破。此外，补体系统作为对相同类型损害以及随后感染源暴露的反应激活。从补体级联C3蛋白中释放了一种之前没被识别的肽，其对这种免疫调节活性有贡献。本发明的一个实施方式涉及包含肽的制剂，肽含有在SEQ ID Nos. 1-5,7-9, 11-13，15，16，和20-22中识别出的序列。也包括含有纤维蛋白肽A或补体C3的序列，以及分别在产生纤维蛋白肽A或补体C3的哺乳动物种类间基本同源的纤维蛋白肽A或补体C3 区域的序列的肽。序列可以来自人或非人的来源。本发明也涉及含有一个或多个任何前述序列保守的氨基酸取代的序列。优选的，制剂基本不含可检测的纤维蛋白B。优选制剂进一步包含药学上可接受的载体如，例如水，油，食用油，脂肪酸，脂类，多糖类，纤维素，甘油，乙二醇，及其组合，以及任意的如J. Arch和N. Bowring的名为“药物组合物”的W0/010757 (整体纳入作为参考)中公开的多种常规使用的载体。优选的食用油包括，例如柠檬油，薄荷油，或葡萄籽油，以及其他天然油和来自植物的脂肪酸。优选的制剂被制成口服，经粘膜，非肠道，淋巴，或静脉施用以使生物活性形式的制剂以生理有效浓度被释放到患者系统中。还优选从生物来源纯化或合成制造的制剂，包括肽序列本身。本发明还包括编码这些肽的核酸序列。本发明另一个实施方式是上面和此处描述的制剂，其是膳食补充剂。本发明的制剂对人和动物摄入安全，在所有有效剂量都是无毒的，并不含有内源毒素或其他有害物质或污染物。作为膳食补充剂施用可以以纯的制剂形式，优选经粘膜并更优选悬浮在脂肪酸， 糖或多糖，油，或其他载体物质中(如作为液体，凝胶，膏，粉，片剂，或丸)以让口腔粘膜，如舌下粘膜直接吸收。作为膳食补充剂，制剂可以被施用给患者或与其他成分结合如在饮料或食物产品中。本发明另一个实施方式涉及含有纤维蛋白肽A或其片段，以及药学上可接受的载体的药物组合物，其中纤维蛋白肽A或其片段为治疗有效量，优选的，治疗有效量是从 0. Img至500mg。也优选组合物其中治疗有效浓度防止沉积并刺激患者血管外空间，如与冠状动脉疾病相关的，和血管内膜下空间内纤维蛋白的再吸收。优选组合物在治疗有效浓度是无毒的并基本不含可检测的纤维蛋白肽B。组合物可以包含源自人或非人，但优选哺乳动物纤维蛋白肽A序列的纤维蛋白肽A或其片段。表达非人纤维蛋白肽A序列的哺乳动物包括马，猫，犬，牛，山羊，绵羊，和鼠。本发明另一个实施方式涉及治疗或预防患者疾病的方法，包括提供包含纤维蛋白肽A或补体C3，或其片段，以及药学上可接受的载体的药物组合物。优选组合物不含可检测量的纤维蛋白肽B，其中纤维蛋白肽A或补体C3，或其片段来自非人的哺乳动物；以及对患者施用一定剂量组合物，其中施用是经粘膜的以使纤维蛋白肽A或补体C3，或其片段施用5分钟内在患者淋巴系统中达到治疗有效水平。优选患者是人，也优选疾病是血管炎症或冠状动脉疾病。优选单剂组合物含有从0. Img至IOmg的活性成分，更优选从0. 1到5mg， 更优选少于lmg。施用可以是定期的，优选的施用包括一连几天的单一有效剂量的初始施用，以及随后的隔日一次的施用剂量施用，更优选每几天一次，更优选一周一次或甚至更低频率。所有药剂的施用优选口服和经粘膜的，如经舌下粘膜。优选纤维蛋白肽A或其片段刺激患者细胞释放细胞因子11^10，11^-10，而非11^-1，11^-4或1顺(1。另一个优选的方面是患者纤维蛋白肽B的活性被抑制，如，例如，通过施用纤维蛋白肽B结合剂。结合剂包括对纤维蛋白肽B特定的配体，抗体，或抗体片段，和，优选是无毒的并含有能使纤维蛋白肽B相对纤维蛋白肽A活性不活跃的一种或多种物质(如液体或化学品)。本发明另一个实施方式涉及防止纤维蛋白沉积并吸收患者血管和身体其他区域内沉积的纤维蛋白的方法。这些方法包括提供包括纤维蛋白肽A或补体C3，或其片段和药学上可接受的载体的药物组合物；以及对患者施用组合物以使纤维蛋白肽A或补体C3，或其片段在患者淋巴系统中达到治疗有效水平。优选患者是人以及纤维蛋白肽A或补体C3， 或其片段来自非人的相同分子哺乳动物序列。组合物的使用优选通过经粘膜施用直接进入淋巴系统，以及包括初始施用以及随后持续的施用，而持续的施用不超过几天一次如一周一次或甚至一月一次。本发明另一个实施方式涉及哺乳动物血清组分，其中组分包含多种成分，澄清无颗粒，基本所有成分分子量在确定的范围内。通过分子量分级血清的方法是公知的，包括使用分子量截留膜透析，离心和盐分级。分子量范围优选小于3000道尔顿，更优选从约5800 道尔顿到约2500道尔顿，更优选从约1000道尔顿到约2000道尔顿，更优选从约1200道尔顿到约1800道尔顿，更优选从约1400道尔顿到约1800道尔顿。优选哺乳动物是马(马)， 犬(狗)，猫(猫)，牛(如母牛，牛或公牛)，山羊(山羊)，绵羊(绵羊或羊羔)，或鼠(鼠)， 或可以是任何产纤维蛋白A或补体C3的适合的哺乳动物。发明另一个实施方式涉及包含肽的制剂，肽含有SEQ ID Nos. 6，10，14，和17-19 序列，纤维蛋白肽B的序列，在产生纤维蛋白肽B的哺乳动物种类间基本同源的纤维蛋白肽 B区域的序列。优选制剂基本上没有包含可检测量的纤维蛋白肽A。优选制剂进一步包含药学上可接受的载体如，例如水，油，食用油，脂肪酸，脂类，多糖类，纤维素，甘油，乙二醇， 及其组合，或如J. Arch和N. Bowring的名为“药物组合物”的W0/010757 (整体纳入作为参考)中公开的其他常规载体。优选的食用油包括，例如柠檬油，薄荷油，或葡萄籽油，以及任何其他菜油或果油或脂肪酸，或植物油，多糖，或脂肪酸。优选的制剂被制成口服，经粘膜， 非肠道，淋巴，或静脉施用以使生物活性形式的制剂以生理有效浓度被释放到患者系统中。 优选制剂是舌下口服的。还优选从生物来源纯化或合成制造的制剂。本发明还包括编码这些肽的核酸序列。本发明另一个实施方式是上面和此处描述的制剂，其是膳食补充剂。本发明的制剂对人和动物摄入安全，在所有有效剂量都是无毒的，并不含有内源毒素或其他有害物质或污染物。作为膳食补充剂施用可以以纯的制剂形式，优选经粘膜并更优选悬浮在脂肪酸， 糖或多糖，油，或其他载体物质中(如作为液体，凝胶，膏，粉，片剂，或丸)以让口腔粘膜，如舌下粘膜直接吸收。作为膳食补充剂，制剂可以被施用给患者或与其他成分结合如在饮料或食物产品中。本发明另一个实施方式涉及治疗或预防患者疾病的方法，包括提供包含纤维蛋白肽B或其片段，以及药学上可接受的载体的组合物，其中组合物基本不含能检测的纤维蛋白肽A，其中纤维蛋白肽B或其片段来自非人的哺乳动物；以及对患者施用一定剂量组合物，其中施用是经粘膜的以使纤维蛋白肽B或其片段施用5分钟内在患者淋巴系统中达到治疗有效水平。优选患者是人，疾病是自身免疫性疾病，如，例如，关节炎，克罗恩病，乳糜泻，I型糖尿病，格雷夫症，特发性血小板减少性紫癜，银屑病，硬皮病，系统性红斑狼疮， 或溃疡性结肠炎，或疾病是免疫调节疾病如，例如，过于活跃的免疫系统。优选单剂含有从 0. Img至IOmg的活性成分，或更优选从0. Img到5mg，或更优选从0. Img到lmg。
本发明另一个实施方式涉及哺乳动物血清组分，其中组分包含多种成分，以常规方法澄清无颗粒，基本所有成分分子量在从约800道尔顿到约2700道尔顿的范围内。优选成分的分子量范围从约1000道尔顿到约2500道尔顿，更优选从约1200道尔顿到约1800 道尔顿，更优选从约1200道尔顿到约1800道尔顿，更优选从约1400道尔顿到约1800道尔顿。优选哺乳动物选自马，猫，犬，牛，山羊，绵羊，和鼠，或可以是任何产纤维蛋白B的适合的哺乳动物组成的组。天然或合成的纤维蛋白肽A调节血管外空间的纤维蛋白沉积(该空间的纤维蛋白沉积和该空间纤维蛋白沉积的调动)，由此控制疾病进展和改善沉积导致的症状。因此，本发明也涉及天然或合成的纤维蛋白肽A调节血管内膜下空间纤维蛋白沉积(该空间的纤维蛋白沉积和该空间纤维蛋白沉积的调动)由此控制疾病进展和改善沉积导致的症状。在治疗研究中还使用了纤维蛋白肽A和B的组合。但这些研究没能区分出一种肽与另一种的活性。此外，多数现有的公布的研究使用了物种特定的纤维蛋白肽，因此不能证实跨物种的效果。本发明显示了纤维蛋白肽A作为免疫调节剂的活性。本发明还显示了在肽的C末端的高度种间同源区域。纤维蛋白肽A和B通过显著的直接抗炎反应降低血管通透性改变的严重程度，主要作用于EAE进展的免疫非特定性时期。这种反应改善了疾病过程中的急性炎症反应。因此不能预期这种类型的反应会大幅降低自身免疫攻击的初始症状，但随着时间其能终止攻击和促进从攻击中愈合。纤维蛋白肽A调节纤维蛋白以及血管外纤维蛋白的沉积和再吸收。描述的通过上面任意方法获得血清的过程产生了富含本发明肽的血清。考虑到大多数这些制品中没有使用凝血抑制剂，凝血在从供体动物或患者移出血液后立即自然发生，释放部分或全部本专利目的肽。一旦释放，这些肽经历进一步的自然过程以产生活性肽片段。由于这些专利中描述的过滤方法不能从血清中去除这些小肽，以及给出的确定的纤维蛋白肽A和B的效力， 这些多肽是使用这些制品所见治疗效果部分或全部的原因。许多慢性疾病显示纤维蛋白沉积的存在是疾病进展的重要病理部分。防止这些沉积和消除已经存在的沉积是这些疾病治疗中的重要靶标。如这里评价的，作为对外伤反应释放的这些相同多肽的疗效的显著数据证明了这些多肽防止或减缓纤维蛋白沉积和刺激纤维蛋白再吸收的能力。这些肽在纤维蛋白的激活中以交错的方式释放。切割激活纤维蛋白肽A，其能阻止纤维蛋白沉积，随后是纤维蛋白肽B，其能促进纤维蛋白沉积。然而该组合引起伤口修复。使用质谱，在过滤样品以仅保存那些大小优选小于3kD的物质后从血清中分离出一组小肽。绝大多数这些本发明肽是凝血级联的副产品，尽管其之前没有被用作治疗剂。这些肽的治疗活性分为两类1)调节纤维蛋白沉积和已存在的纤维蛋白沉积的再吸收；2)将免疫系统从慢性疾病中所见的被动模式调节到主动监视模式；和幻抗炎活性。血管外空间纤维蛋白沉积的调节被认为是治疗多种疾病的重要潜在靶标，包括红斑性狼疮，多发性硬化症，动脉粥样硬化，类风湿关节炎，阿尔茨海默症。在这些疾病中(以及许多其他疾病中)血管外空间纤维蛋白沉积是疾病进展中的重要事件。尽管纤维蛋白沉积可能不是特定疾病的起因，始于这种纤维蛋白沉积时间的过程是疾病进展和这些疾病引起的组织破坏的重要病理因素。这种沉积也阻断身体经常使用的愈合受伤组织的机制。这些肽阻断这种纤维蛋白沉积的能力从没有被认作潜在的治疗方法。此外，已确认由于纤维蛋白存在在这些组织中引起的级联效应，慢性纤维蛋白沉积阻止正常的组织愈合。本发明的肽也激发这些纤维蛋白沉积的再吸收，使得慢性疾病中的自然愈合过程恢复。由注射本发明的肽激发的免疫级联证明了这种Thl/Th2组合反应类型，如证明了白介素IB和10持续的升高和白介素13，5，6，和8，和TNF-α不持续的升高的数据所示。这些白介素源于免疫细胞(巨噬细胞，单核细胞和淋巴细胞)。肽，纤维蛋白肽A和B，的抗炎反应最先见于1978年的公布(Ruhenstroth-bauer 等美国专利4，215，109号)。然而，严重缺乏研究这种活性的任何后续公布，特别是缺乏在实验性变应性(自身免疫)脑脊髓炎模型中的其他发表的研究。此外，作者没有确定抗炎反应的机制，也没有确定这些肽的免疫刺激能力。如本发明所示，这种抗炎反应部分是由于本发明肽刺激Th2细胞因子IL-10释放的能力。尽管这种反应在急性疾病中有意义，设计的急性疾病模型不能显示这种反应在慢性疾病中更显著的效果。只使用纤维蛋白肽A，使用不同剂量的聚乙二醇化的纤维蛋白肽A进行三组研究。发现这种修饰降低了任何可测量的纤维蛋白肽A活性，证明了纤维蛋白肽A的降解在这种多肽激活中的重要性。除了纤维蛋白肽A和B的这种抗炎性能之外，由这些肽引起的级联反应增加了促炎细胞因子IL-IB的生产。IL-IB是炎症反应重要的中介物，包括于多种细胞活动中，包括细胞增殖，分化和凋亡(受刺激的细胞死亡)。尽管我们的研究中没有证明IL-2的升高， IL-I可能通过诱导IL-2的释放来刺激胸腺细胞增殖和分化。IL-I也刺激B细胞成熟和增殖，激发成纤维细胞生长因子和胶原酶(其他T和B淋巴细胞的刺激物)从滑膜细胞释放。 由于其有刺激前列腺素的释放的能力，IL-I被认为是内源性致热源。尽管所见的源自这些肽的IL-IB增加似乎不足以诱导发热反应，对免疫系统的整体效果相当深远。缺乏致热性也可能是部分由于同时刺激出的IL-10的抗炎活性。由于外皮是对抗感染的第一防御线，免疫调节级联作为对任何外皮破损的反应发生。作为对这种类型破损反应的这些肽的释放至少包括免疫调节活性的显著部分。在确定这种免疫调节活性的活性成分过程，这些肽的生物活性形式实际是之前描述的肽的片段， 这些片段远比完整的肽更有活性。为激活纤维蛋白，纤维蛋白肽A和B被从纤维蛋白原亚单位Aa和Ββ的羧基端切割下来。纤维蛋白原A和B随后经历进一步的生理激活步骤以变成有力的免疫调节物。尽管观察到这些肽许多次要效果，其中没有显著的或能视为本发明公开的可行的治疗选择的。除了作为对外皮损伤或感染损害反应的上面的凝血因子的释放之外，增强免疫系统找出并摧毁异常细胞的能力的免疫级联反应开始。这种免疫系统刺激可以被分为两个方面，先天和适应性反应。通过向身体引入异常细胞，先天免疫系统快速响应抵挡损害。这种反应的一部分是能激活攻击和摧毁感染生物的系统的补体级联激活。结合这一点，一个之前没有确认的补体C3片段一直存在于所有测试的哺乳动物血清组分中，提示这种分子参与这些血清组分的免疫调节活性。这种蛋白引起了免疫系统先天和适应性部分的全面刺激。释放这种肽的切割位点的指示之前没有被确定过，也没有文献承认该片段有生物学活性。该片段从C3a_g被去除后保存的C3蛋白部分的氨基端取下。保存的片段被称为补体C3a链片段2。该片段组成了补体C3蛋白的1321-1663氨基酸，C3f后其余的蛋白
19被切割，并参与补体级联。本发明证明了随着C3f的切割(氨基酸1304-1320)，产生了额外的酶活性。该肽的切割是物种依赖的，氨基端有明显的同源序列，但羧基端有不同。相比其他哺乳动物，羧基端的取代改变了人中的切割位点，但这个改变没有影响分子的活性。 在人血清中，这个肽组成了 C3蛋白的1321-1336序列，带一个SEETKENEGFTVTAEGK序列 (SEQ ID NO. 16)。在其他确定的物种中，这个蛋白包括在13 处以精氨酸取代甘氨酸，还有1333处导致切割位点变化的其他取代。因此这些取代导致了多数其他哺乳动物中带序列SEETKENERFTV(SEQ ID NO. 7)的截短的肽的切割。种间同源性轻微变化，由此序列编号在种间也有变化。这改变了该肽位置的氨基酸编号。然而，在每个物种中这种肽被作为补体C3f的切割之后的下个片段释放(C3g位置比C3f序列更向氨基端)。少数如上文所述的例外中，后面的序列在所有确认了补体C3全序列的物种中有强同源性。在每种情况下，这种额外切割分离出包含显著免疫系统刺激的片段。这种刺激增强了先天和适应性免疫系统活性，使活性大大增强。虽然不受限制，如许多其他免疫系统刺激物所证明的，免疫系统的慢性刺激有长期副作用的显著风险，当这种分子与激活的纤维蛋白肽A片段的抗炎活性联用时，这种组合很大的增强了免疫系统，而且纤维蛋白肽A的抗炎活性基本完全控制了预期的副作用。 除这些发现外，由组成imf-C3氨基端和af-FA羧基端的序列组成的合成肽有这种双重作用。已知的在1320氨基酸处以谷氨酰胺取代精氨酸导致C3补体减少症(C3同种异形C3’F02’ MWatanabe等。1993)，这一事实增强了支持该片段功用的数据的强度。预期可以改变切割位点的该取代引起免疫功能的显著变化，导致了对病理刺激的低反应，并证明了该分子的存在对正常免疫反应是必要的。这个数据也也可以推断证明该分子刺激先天免疫系统的能力。每一个补体C3的另一个蛋白片段都包含在补体级联中而该肽显然没有。作为治疗血清组分的一部分，本发明显示该分子通过免疫系统刺激在多种病理过程中有极大的疗效。使用补体级联反应的传统命名法，该蛋白应为补体C3h。由于其不参与补体级联反应， 该蛋白被称为C3调节片段(imf-C3)，澄清了该肽在补体级联反应之外的活性类型。本发明包括获得血清治疗成分或通过从头合成过程或发酵来合成血清中的活性肽，以及利用这些肽治疗宿主感染，炎症，肿瘤和自身免疫疾病。本发明的一个实施方式涉及使用来自凝血级联的有生物活性的降解产物以激活免疫系统反应的治疗方法。除了描述的特定肽之外，来自本专利没有特别描述的其他动物血清的类似的衍生或合成肽也被包括，这是由于这些肽包含的足够同源性和相似特征显示了其他动物的同源肽也会有相同的治疗活性。如本发明实施和广泛描述的，本发明涉及药物组合物和来自动物血液的哺乳动物血清生物活性组分的制备方法，该组分能调节免疫系统，增强免疫反应，抑制炎症反应，以及减少任何其他哺乳动物多种疾病中的血管外纤维蛋白慢性沉淀。按照本发明方法制备的生物活性组分分离了提供广泛新疗法的肽。本发明的一个实施方式是提供肽的方法，例如， 通过生产血液血清生物活性组分，包括步骤(i)从动物中抽取血液；(ii)从所述血液中分离血清；和(iii)分离包含这些肽的组分。进一步优选动物是哺乳动物，尽管在其他动物如家禽的血清中也发现了相同的特征。生产含有这些肽的血清组分的优选方法包括但不限于超滤，HPLC分离，其他形式的色谱，切向流过滤，透析，离心，电泳，以及其他。尽管天然血清有治疗效果，优选血清经过过滤以限制提供给接收动物的其他分子。理想的这样可以消除任何大于6kD的分子，优选大于3kD的分子。在优选的本发明方法的实施方案中血液是动脉和/或静脉血。在进一步优选的实施方式中，方法进一步包括温育所述血液和凝血酶的步骤，生理的或通过在体外加入凝血酶。方法优选包括冻干所述血清的步骤，血清组分被冷冻并保存在_80°C下直至接近使用时间。可选择的，冻干的血清组分可以被悬浮在适合的溶液中并作为膳食补充剂口服施用以改善免疫系统正常功能。治疗1)本发明一个方面是有生物活性的血清组分，其可以按照本发明的方法生产，或按能包括进本发明血清组分的任何方法制备。2)本发明进一步的方面是这种血清组分的应用，作为包含这种本发明生物活性血清组分以及与之联合的多种能促进吸收药物的动物利用的其他药用级添加剂中任意添加剂的药物制品。这些添加剂可以包括填料，载体，粘结剂，吸附剂，防腐剂，稀释剂等。在本发明药物制品优选的实施方式中，制品被制成皮下或静脉注射的溶液。其他实施方式包括本发明作为局部用制剂如凝胶，乳液或补片，舌下含化溶液或制剂，栓剂，锭剂，胶囊或片剂， 等的使用。3)本发明另一个方面是本发明的生物活性血清组分或本发明的药物制品生产治疗急性细菌感染的人和兽用药物的用途。4)本发明另一个方面是本发明的生物活性血清组分或本发明的药物制品生产治疗慢性细菌感染的人和兽用药物的用途。5)本发明另一个方面是本发明的生物活性血清组分或本发明的药物制品生产预防细菌感染的人和兽用药物的用途。6)本发明另一个方面是本发明的生物活性血清组分或本发明的药物制品生产治疗急性病毒感染的人和兽用药物的用途。7)本发明另一个方面是本发明的生物活性血清组分或本发明的药物制品生产治疗慢性病毒感染，如HIV，HCV, HBV, HSV, HPV的人和兽用药物的用途。8)本发明另一个方面是本发明的生物活性血清组分或本发明的药物制品生产预防病毒感染，如上面列出的人和兽用药物的用途。9)本发明另一个方面是本发明的生物活性血清组分或本发明的药物制品生产治疗寄生虫病药物的用途。10)本发明另一个方面是本发明的生物活性血清组分或本发明的药物制品生产预防寄生虫病的人和兽用药物的用途。11)本发明另一个方面是本发明的生物活性血清组分或本发明的药物制品生产治疗自身免疫疾病的人和兽用药物的用途，自身免疫疾病包括风湿关节炎，系统性红斑狼疮， 硬皮病，混合性结缔组织病，肖格伦病，牛皮癣，强直性脊柱炎和反应性关节炎，白塞氏综合征，血管炎，结节，多浆膜炎，淀粉样变性，克罗恩病，溃疡性结肠炎等。12)本发明另一个方面是本发明的生物活性血清组分或本发明的药物制品生产治疗神经疾病的人和兽用药物的用途，神经疾病包括脱髓鞘疾病(多发性硬化症等)，退行性疾病(阿尔茨海默氏症，帕金森氏病等)，神经病变(糖尿病的，特发性的，毒性的等)和其他慢性神经性疼痛(RSD等)。13)本发明另一个方面是本发明的生物活性血清组分或本发明的药物制品生产治疗肿瘤性疾病的人和兽用药物的用途，肿瘤性疾病包括癌，肉瘤，白血病和淋巴瘤。14)本发明另一个方面是本发明的生物活性血清组分或本发明的药物制品生产治疗肌肉骨骼系统炎症疾病的人和兽用药物的用途。15)本发明另一个方面是本发明的生物活性血清组分或本发明的药物制品生产治疗超免疫疾病，例如缓解过敏过程和减少季节性过敏的人和兽用药物的用途。16)本发明另一个方面是本发明的生物活性血清组分或本发明的药物制品生产治疗慢性伤口的人和兽用药物的用途，慢性伤口包括慢性褥疮，糖尿病足溃疡等。17)本发明另一个方面是本发明的生物活性血清组分或本发明的药物制品生产治疗其他形式的慢性疼痛的人和兽用药物的用途18)本发明进一步的方面是使用这种血清组分作为包含这种本发明生物活性血清组分以及与之联合的多种能促进吸收药物的动物利用的其他食品级添加剂中任意添加剂的膳食补充制品。这些添加剂可以包括填料，载体，粘结剂，吸附剂，防腐剂，稀释剂等。在本发明用途进一步优选的实施方式中，药物通过这些肽的合成合成生产。这些合成的肽与过滤的哺乳动物血清组分有相同的生物学功能，在这个实施方式中本发明涉及包含序列SEQ ID N01-21和其保守取代和修饰的肽的分离和制造。在本发明进一步的实施方式中这些合成的肽被用于上面1-18描述的治疗。在本发明进一步的实施方式中，药物是有激活片段下列特征的任何肽1)N-末端包含8到20个氨基酸，2)这部分通常包含大于平均数目的酸性氨基酸，3) C-末端含有序列 FLAEGGGV(SEQ ID NO 22)，同源序列，或含有GGV (SEQ ID NO 21)的C末端的一部分，以及 4)与纤维蛋白肽A在编的肽相比C末端有预期的精氨酸丢失。该末端序列在哺乳动物中高度保守，被认为是肽的活性部分。本发明另一个实施方式是有这些特征的或具备与本发明相同的生物活性的三个肽同源结构的肽，获自自然或合成来源。优选的，这些肽显示纤维蛋白肽A或含有其保守序列的片段的一个或多个保守的氨基酸取代。保守取代定义为保持蛋白结构和功能特征的氨
基酸替代。在这个实施方式中，包括了从与人类序列数据中纤维蛋白肽A氨基酸序列同源的任意动物纤维蛋白原α链获得的肽。在本发明进一步实施方式中拥有这些特征的肽被用于上面1-18描述的治疗。本发明另一个实施方式是从患者中取血，进行各种纯化/过滤过程以分离有上述特征的肽，并随后自体注射施用肽以产生本发明的生物活性的过程。在这个实施方式中，短时间内处理血清并立即回输血清，或者可以大量取血清，随后在延长的时间内按一定间隔给予小部分含有产品的处理过的肽。在这个实施方式中可以用包括超滤，HPLC分离，其他形式的色谱，切向流过滤，透析，离心，电泳，和许多其他方式在内的多种方法中任意的方法为自体注射做处理。在这个实施方式中抽取的血液立即置于离心机中，血清被分离随后处理或冷冻保存直至开始处理。剂量等份被冷冻储存直至马上要注射之前。在本发明进一步的实施方式中，为自体注射处理过的肽被用于上面1-18描述的治疗。本发明另一个实施方式是对本发明的肽特定起反应的抗体或抗体片段的生产。本发明另一个实施方式涉及编码本发明肽的核酸序列，和能与之杂交的序列。下面实施例展示了本发明的实施方式，但不应被视为对本发明范围的限制。
实施例本发明是审阅现有文献，超滤的人，牛，猫，马，和山羊血清质谱数据分析，以及随后确定组分和合成肽拥有所述的免疫调节能力的产物。除非使用凝血抑制剂，在从动物或人中取血的过程中会发生凝血过程。在这种超滤的产物中发现的肽主要是凝血级联的副产品。令人惊讶的发现这些之前确定的肽中C末端精氨酸已被去除。这种活性是由于羧肽酶B的存在。血流中这种酶的存在生理激活了许多肽。由于这种酶存在于血清中并始终对含有羧基末端精氨酸的分子行使这种精氨酸切除，这种酶从纤维蛋白肽A和B以及imf-C3 羧基端去除精氨酸是自然发生的。这种去除激活这些肽称为强有力的免疫调节剂。仍然连接有精氨酸的肽的量在动物样品中很少，以至于在任何动物的质谱数据中几乎找不到完整的肽(见图1，2，3和4)。从所有四种哺乳动物样品中分离出的仅有的肽是SEQ ID No 12， 但这种肽在牛和马样品中的存在极少，这可能与交叉污染有关。在人样品(相同的方法处理)中，仍然连接有末端精氨酸的肽的量大得多，表明在人血清中通过羧肽酶B去除该精氨酸的过程的效率远低于在动物中发生的。在上面描述的激活的纤维蛋白原片段之外，除马样品外的每个样品包含上面描述的之前未被确认的C3补体片段。该片段位于C3c补体α链片段2的N末端，依物种包含 12-17个氨基酸。在三个不同数据库中检索，该C3补体没有出现在马序列中，这可能解释了那个样品中没有识别出这种肽。在分析的其他物种中，该片段有相当的同源性，特别是氨基端。人C3补体片段中的同源片段也没有被识别为从C3c α链片段2上切割下的。该C3 α 链片段在N末端有强同源序列，在前12个氨基酸中仅有一个肽的取代。数据表明在山羊和牛血清组分分析中该肽量更高，这可能解释了多数现有数据中山羊血清的优先使用。由于山羊和牛中该肽的存在似乎显著高于其他物种中所发现的，该分子的活力可以解释使用山羊作为现在用于治疗的血清组分的主要动物血清来源。与质谱结果联合的MASCOT检索数据库将牛和山羊中的这种肽识别为序列命中，但在其他样品中仅将其识别为可能的序列命中。也发现较短的山羊和牛肽比较长的人的自然发生的肽有更大的活性。尽管不同动物样品中所见的纤维蛋白肽B片段没有任何显著的同源性(纤维蛋白肽A和描述的C3补体片段的特征)，纤维蛋白肽B仍然可能是某些治疗效果的重要部分。 这种显著同源性的缺乏表明治疗效果最可能是物种特定的，限制了使用动物模型证明人肽疗效的能力。事实上，检查不同哺乳动物序列信息显示了即使是在关系密切的物种之间，纤维蛋白原b链区域几乎没有同源性(猩猩与人的纤维蛋白肽B序列明显不同)。一旦这些肽被识别，进行比较分析以评估血清组分的相似性。在肽A的羧基端和肽C中发现很大的同源性，但是在肽B中物种间没有显著的同源性。多数物种间活性可能在肽A和C。由于血清组分中抗感染活性数据似乎最强，使用Ponto Toro和甲型流感Hmi的动物模型以三种不同的样品试验这两种病毒1)合成的人激活的纤维蛋白肽Ad)合成的动物肽imf_C3 ；和幻过滤冻干的，测试发现含有全部三种肽的山羊血清组分。尽管这些物质不能像直接抗病毒剂一样作用，结果确实证明了与安慰剂组相比治疗的动物存活率改
口 ο在该研究中分析了几个标准。这包括肝，脾，和血清病毒滴度；血清谷丙转氨酶 (ALT)的测定；在感染后第3天对肝和肺肝性黄疸评分；每日体重测量；至死亡的平均天数；和总生存率。使用包含纤维蛋白肽A的测试物治疗的两组表现相同。在这些治疗组中 60%的鼠生存，而在安慰剂组中仅有25%存活。这样的改善对每个独立纤维蛋白肽A治疗组在统计学上显著(P值=0. 03)，当这些组合并起来计算使用纤维蛋白肽A的总改善时统计学显著性也改善了(P值=0. 015)。尽管评价的任何其他疾病标准没有可观察到的不同， 存活率仍然增加，表明了病毒引起疾病的能力没有改变，而机体在一剂肽A后对抗威胁生命感染的能力增强。在该研究中没有进行炎症或纤维蛋白沉积测定。尽管纤维蛋白肽A和利巴韦林对照间存在差异，该差异在统计学上不显著(P值=0.08)。这些结果表明了这些肽(特别是纤维蛋白肽A)在传染病领域的治疗价值，其有增强愈合并减少症状持续时间的能力。由于身体对传染病的常规反应会导致非常促炎的状态，甚至在感染消除后这种状态经常引起持续的症状。纤维蛋白肽A有减轻这些症状并由此缩短疾病症状期的能力，而不阻碍身体对抗感染的能力。这种效果也可能是部分由于纤维蛋白肽A将蛋白(特别是纤维蛋白)调动出血管外空间的能力。除了该Ponto Toro研究之外，进行了测试这些物质对抗甲型流感Hmi的研究。在该研究中对照是低剂量的利巴韦林。每组中的所有鼠都死亡，表明感染比预期的更严重。对施用这些物质后的健康志愿者做细胞因子板评价以更充分描述作用机制和治疗活性。为证明这些肽的效果，将含有本发明制型肽的过滤的血清样品(见山羊过滤组分 HPLC图，图5)施用给一健康志愿者，最初使用山羊制品。即将施用之前，以及按时间间隔在施用后(施用后15分，1小时，和3小时，见表1)获得12细胞因子板测试结果。基于发表的研究，预计这些间隔中细胞因子板有变化，但观察到的效果远小于预期。5周后将另一个高得多的剂量的自体制品施用给同样的健康志愿者。注意表1最后一列白介素10，13， 和1β初始水平的显著差异。此外，白介素2受体水平有轻微升高。考虑到第一组数据中的微小变化，细胞因子板中最初所见的微小变化在更长的时间内继续升高。表1 施用本发明的山羊肽后12细胞因子板测试。
权利要求
1.包含肽的制剂，肽含有选自由SEQID Nos. 1-5，7-9，11-13，15，16，和20-22，纤维蛋白肽A的序列，在产生纤维蛋白肽A的哺乳动物种类间基本同源的纤维蛋白肽A区域的序列，补体C3的序列，以及含有一个或多个保守的氨基酸取代的前述序列所组成组的序列， 其中制剂基本上没有包含可检测的纤维蛋白肽B。
2.权利要求1的制剂，进一步包含药学上可接受的载体。
3.权利要求2的制剂，其中药学上可接受的载体选自由水，油，食用油，脂肪酸，脂类， 多糖类，纤维素，甘油，乙二醇，及其组合。
4.权利要求3的制剂，其中食用油是柠檬油，薄荷油，或葡萄籽油。
5.权利要求1的制剂，其被制成口服，经粘膜，非肠道，淋巴，或静脉施用。
6.权利要求1的制剂，其中生物活性形式的制剂以生理有效浓度被释放到患者系统中。
7.权利要求1的制剂，其是一种膳食补充剂。
8.权利要求1的制剂，其从生物来源纯化或合成制造。
9.药物组合物，含有纤维蛋白肽A或其片段，以及药学上可接受的载体，其中纤维蛋白肽A或其片段为治疗有效量，治疗有效量是从0. Img至500mg。
10.权利要求9的组合物，其中治疗有效浓度防止沉积并刺激患者血管外和血管内膜下空间内纤维蛋白的再吸收。
11.权利要求9的组合物，其中治疗有效浓度防止沉积并刺激与冠状动脉疾病相关的纤维蛋白沉积的再吸收。
12.权利要求9的组合物，其在治疗有效浓度是无毒的并基本不含可检测的纤维蛋白肽B。
13.权利要求9的组合物，其中纤维蛋白肽A或其片段来自人的纤维蛋白肽A序列。
14.权利要求9的组合物，其中纤维蛋白肽A或其片段来自非人的纤维蛋白肽A序列。
15.权利要求14的组合物，其中非人的序列来自哺乳动物物。
16.权利要求15的组合物，其中哺乳动物选自由马，猫，犬，牛，山羊，绵羊，和鼠组成的组。
17.治疗或预防患者疾病的方法，包括提供包含纤维蛋白肽A或其片段，以及药学上可接受的载体，而不含纤维蛋白肽B的组合物，其中纤维蛋白肽A或其片段来自非人的哺乳动物；以及对患者施用一定剂量组合物，其中施用是经粘膜的以使纤维蛋白肽A或其片段施用5 分钟内在患者淋巴系统中达到治疗有效水平。
18.权利要求17的方法，其中患者是人。
19.权利要求17的方法，其中疾病是血管炎症。
20.权利要求17的方法，其中疾病是冠状动脉疾病。
21.权利要求17的方法，其中单剂含有从0.Img至IOmg的活性成分。
22.权利要求17的方法，其中对患者施用一定剂量组合物包括初始施用以及随后持续的施用，而持续的施用至少7天不重复。
23.权利要求17的方法，其中经粘膜施用是口服。
24.权利要求17的方法，其中纤维蛋白肽A或其片段刺激细胞因子ILlβ，IL-10，而非11^-1，比-4或1咿0的释放。
25.权利要求17的方法，其中患者纤维蛋白肽B的活性被抑制。
26.权利要求25的方法，其中通过施用纤维蛋白肽B结合剂来抑制纤维蛋白肽B的活性。
27.防止纤维蛋白沉积并吸收患者血管内沉积的纤维蛋白的方法，包括 提供包括纤维蛋白肽A或其片段和药学上可接受的载体的药物组合物；以及对患者施用组合物以使纤维蛋白肽A或其片段在患者淋巴系统中达到治疗有效水平。
28.权利要求27的方法，其中患者是人。
29.权利要求27的方法，其中纤维蛋白肽A或其片段来自非人的哺乳动物纤维蛋白肽 A序列。
30.权利要求27的方法，其中组合物通过经粘膜施用直接施用入淋巴系统。
31.权利要求27的方法，其中对患者施用包括初始施用以及随后持续的施用，而持续的施用不超过一周一次。
32.哺乳动物血清组分，其中组分包含多种成分，澄清无颗粒，基本所有成分分子量在约1200道尔顿至约1700道尔顿范围内。
33.权利要求32的组分，其中哺乳动物选自马，猫，犬，牛，山羊，绵羊，和鼠组成的组。
34.包含肽的制剂，肽含有选自由SEQID Nos. 6，10，14，和17-19，纤维蛋白肽B的序列，在产生纤维蛋白肽B的哺乳动物种类间基本同源的纤维蛋白肽B区域的序列组成的组， 其中制剂基本上没有包含可检测的纤维蛋白肽A。
35.权利要求34的制剂，进一步包含药学上可接受的载体。
36.权利要求35的制剂，其中药学上可接受的载体选自由水，油，食用油，脂肪酸，脂类，多糖类，纤维素，甘油，乙二醇，及其组合。
37.权利要求36的制剂，其中食用油是柠檬油，薄荷油，或葡萄籽油。
38.权利要求34的制剂，其被制成口服，经粘膜，非肠道，淋巴，或静脉施用。
39.权利要求34的制剂，其中生物活性形式的制剂以生理有效浓度被释放到患者系统中。
40.权利要求34的制剂，其是一种膳食补充剂。
41.权利要求34的制剂，其从生物来源纯化或合成制造。
42.治疗或预防患者疾病的方法，包括提供包含纤维蛋白肽B或其片段，以及药学上可接受的载体的组合物， 其中组合物基本不含能检测的纤维蛋白肽A，其中纤维蛋白肽B或其片段来自非人的哺乳动物；以及对患者施用一定剂量组合物，其中施用是经粘膜的以使纤维蛋白肽B或其片段施用5 分钟内在患者淋巴系统中达到治疗有效水平。
43.权利要求42的方法，其中患者是人。
44.权利要求42的方法，其中疾病是自身免疫性疾病。
45.权利要求44的方法，其中自身免疫性疾病选自由关节炎，克罗恩病，乳糜泻，I型糖尿病，格雷夫症，特发性血小板减少性紫癜，银屑病，硬皮病，系统性红斑狼疮，和溃疡性结肠炎组成的组。
46.权利要求42的方法，其中疾病是免疫调节疾病。
47.权利要求46的方法，其中免疫调节疾病是过于活跃的免疫系统。
48.权利要求42的方法，其中单剂含有从0.Img至IOmg的活性成分。
49.哺乳动物血清组分，其中组分包含多种成分，澄清无颗粒，基本所有成分分子量在约800道尔顿至约2300道尔顿范围内。
50.权利要求49的组分，其中哺乳动物选自马，猫，犬，牛，山羊，绵羊，和鼠组成的组。
全文摘要
从饲养动物的血清中分离了一组肽并使用质谱进行鉴定。这些肽是纤维蛋白原激活和补体级联反应副产品。有最大活性的肽是纤维蛋白肽A和纤维蛋白肽B的活性形式(通过去除末端精氨酸激活)，以及补体成分3的免疫调节片段。这些形式的纤维蛋白肽的A和B有显著的免疫调节能力，能增强对包括各类感染因子在内的外来物质的识别，降低炎症反应，防止血管外纤维蛋白沉积，刺激已经沉积的纤维蛋白再吸收，增强身体识别和消灭肿瘤细胞的能力，降低包括过敏性鼻炎和休克在内的过敏反应症状，而且其能减少自身抗体复合物的形成和积累，改善慢性神经系统疾病的症状，并降低慢性疼痛综合症的症状。
文档编号C12Q1/68GK102439175SQ201080020360
公开日2012年5月2日 申请日期2010年3月9日 优先权日2009年3月9日
发明者威德·M·梅林, 米歇尔·J·梅林 申请人:威德·M·梅林, 米歇尔·J·梅林