包含抗cd22抗体的免疫缀合物的制作方法
【专利摘要】本发明提供包含共价连接于奈莫柔比星衍生物的抗CD22抗体的免疫缀合物及其使用方法。
【专利说明】包含抗CD22抗体的免疫缀合物 发明领域
[0001] 本发明涉及包含抗⑶22抗体的免疫缀合物及其使用方法。
[0002] 背景
[0003] 如⑶19、⑶22及⑶52的B细胞抗原代表具有用于治疗淋巴瘤的治疗潜力的 目标（Grillo-Lopez A.J.等人，Curr Pharm Biotechnol，2:301_ll，（2001))。CD22 为一种仅在成熟分化阶段表达在B细胞表面上的135-kDa B细胞限制性唾液酸糖蛋白 (sialoglycoprotein) (Dorke n，B.等人，J. Immunol. 136 :4470-4479 (1986))。CD22 在人类 中的主要形式为CD22P，其在细胞外域中含有7个免疫球蛋白超家族域（Wilson，G.L.等 人，J. Exp. Med. 173 :137-146 (1991))。一种变体形式C D22 a缺乏免疫球蛋白超家族域3和 4 (Stamenkovic，I?和 Seed，B.，Nature 345 :74-77 (1990))。已显不人类 CD22 的配体结合 与免疫球蛋白超家族域1和2(又称为表位1和2)相关（Engel，P.等人，J. Exp. M ed. 181 : 1581-1586,1995)〇
[0004] B细胞相关病症包括但不限于恶性淋巴瘤（非霍奇金淋巴瘤（Non-Hodgkin' s Lymphoma)，NHL)、多发性骨髓瘤及慢性淋巴细胞性白血病（CLL，B细胞白血病（⑶5+B淋巴 细胞））。非霍奇金淋巴瘤（NHL)为一组主要起因于B淋巴细胞的异质癌症，其占所有新近 诊断癌症的约 4% (Jemal，A.等人，CA-Cancer J Clin，52 :23-47,(2002))。侵袭性 NHL 占 成人 NHL 的约 30-40% (Harris，N.L.等人，Hematol. J.l :53-66(2001))且包括弥漫性大 B 细胞淋巴瘤（DLBCL)、套细胞淋巴瘤（MCL)、外周T细胞淋巴瘤及间变性大细胞淋巴瘤。一 线组合化学疗法治愈的侵袭性NHL患者少于半数，且大多数患者最终死于其疾病（Fisher， R. I. Semin. Oncol. 27 (增刊 12) :2-8 (2000))。
[0005] 在B细胞NHL中，在侵袭性群体及无痛性群体中，⑶22表达分别在91 %至99 % 的范围内（Cesano，A.等人，Blood 100:350a(2002))。CD22可充当B细胞活化复合物的 组分（Sato，S.等人，Semin. Immunol. 10 :287-296 (1998))与粘着分子（Engel，Pl 等人， J. Immunol. 150 :4719-4732(1993))两者。CD22缺乏小鼠的B细胞具有较短寿命及增强的 细胞凋亡，这表明此抗原在B细胞存活中具有作用（Otipoby，K. L等人，Nature (Lond) 384 : 634-637(1996))。在与其天然配体或抗体结合之后，CD22快速内化，从而在原代B细胞中 提供共刺激信号并且在赘生性B细胞中提供促细胞凋亡信号（Sato, S.等人，Immunity 5: 551-562(1996))。
[0006] 本领域中对靶向CD22以供诊断及治疗CD22相关病状，如癌症的药剂存在需要。本 发明满足这个需要且提供其它益处。
[0007] 概述
[0008] 本发明提供抗CD22抗体及免疫缀合物及其使用方法。
[0009] 在一些实施方案中，提供一种包含共价连接于细胞毒性剂的结合⑶22的抗体的 免疫缀合物，其中所述抗体结合SEQ ID NO :28的氨基酸20至240内的表位。在一些实施 方案中，细胞毒性剂为奈莫柔比星（nemorubicin)衍生物。
[0010] 在一些实施方案中，抗体包含⑴包含氨基酸序列SEQ ID NO : 11的HVR-H3,（ii) 包含氨基酸序列SEQ ID NO :14的HVR-L3,以及（iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO :10的 HVR-H2。在一些实施方案中，抗体包含（i)包含氨基酸序列SEQ ID N0:9的HVR-H1，（ii) 包含氨基酸序列SEQ ID NO : 10的HVR-H2,以及（iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO :11的 HVR-H3。在一些实施方案中，抗体包含：a) (i)包含氨基酸序列SEQ ID NO :9的HVR-H1，（ii) 包含氨基酸序列SEQ ID N0:10的HVR-H2，（iii)包含氨基酸序列SEQ ID N0:11的HVR-H3， (iv)包含选自SEQ ID NO : 12及15至22的氨基酸序列的HVR-Ll，（V)包含氨基酸序列SEQ ID NO :13的HVR-L2,以及（vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO :14的HVR-L3 ;或b)⑴包含氨 基酸序列 SEQ ID NO :9 的 HVR-H1，（ii)包含氨基酸序列 SEQ ID NO :10 的 HVR-H2,（iii) 包含氨基酸序列SEQ ID NO :11的HVR-H3,（iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO :15的HVR-L1， (V)包含氨基酸序列SEQ ID NO : 13的HVR-L2,以及（vi)包含氨基酸序列SEQ ID NO : 14的 HVR-L3。在一些实施方案中，抗体包含：a) (i)包含选自SEQ ID NO: 12及15至22的氨基酸 序列的HVR-L1，（ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO :13的HVR-L2,以及（iii)包含氨基酸序列 SEQ ID NO :14的HVR-L3 ;或b)⑴包含氨基酸序列SEQ ID NO :15的HVR-L1，（ii)包含氨 基酸序列SEQ ID NO :13的HVR-L2,以及（iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO :14的HVR-L3。 在一些实施方案中，抗体包含：a)与氨基酸序列SEQ ID NO :7具有至少95%序列同一性的 VH序列；或b)与氨基酸序列SEQ ID NO :8具有至少95%序列同一性的VL序列；或c)如 (a)中的VH序列及如（b)中的VL序列。在一些实施方案中，抗体包含具有氨基酸序列SEQ ID NO :7的VH序列。在一些实施方案中，抗体包含具有氨基酸序列SEQ ID NO :6的VL序 列或具有氨基酸序列SEQ ID NO :8的VL序列。在一些实施方案中，抗体为IgGl、IgG2a或 IgG2b抗体。
[0011] 在一些实施方案中，提供一种包含共价连接于细胞毒性剂的结合⑶22的抗体的 免疫缀合物，其中所述抗体包含（a)具有氨基酸序列SEQ ID NO :7的VH序列及具有氨基酸 序列SEQ ID NO :8的VL序列，并且其中所述细胞毒性剂为奈莫柔比星衍生物。
[0012] 在一些实施方案中，免疫缀合物具有式Ab-(L-D) P，其中：(a) Ab为抗体；(b) L为接 头；（c)D为细胞毒性剂；且（d) p在1-8的范围内。
[0013] 在一些实施方案中，D为奈莫柔比星衍生物。在一些这类实施方案中，D具有选自 以下的结构：
[0014]
【权利要求】
1. 一种免疫缀合物，其包含共价连接于细胞毒性剂的结合CD22的抗体，其中所述抗体 结合SEQ ID NO ;28的氨基酸20至240内的表位，并且其中所述细胞毒性剂为奈莫柔比星 衍生物。
2. 如权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述抗体包含（i)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;11的HVR-册，（ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;14的HVR-L3, W及（iii)包含氨基酸 序列 SEQ IDN0 ;10 的 HVR-肥。
3. 如权利要求1或2所述的免疫缀合物，其中所述抗体包含（i)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;9的HVR-H1，（ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;10的HVR-肥，W及（iii)包含氨基 酸序列SEQ ID NO ;11的HVR-册。
4. 如权利要求1所述的免疫缀合物，其中所述抗体包含： a) (i)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;9的HVR-H1，（ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;10的 HVR-肥，（iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;11的HVR-册，（iv)包含选自SEQ ID NO ;12及 15至22的氨基酸序列的HVR-L1，（V)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;13的HVR-L2, W及（vi) 包含氨基酸序列SEQ ID NO ;14的HVR-L3 ;或 b) (i)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;9的HVR-H1，（ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;10 的HVR-肥，（iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO ; 11的HVR-册，（iv)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;15的HVR-Ll，（V)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;13的HVR-L2, W及（vi)包含氨基酸序 列沈Q ID NO ;14 的 HVR-L3。
5. 如权利要求1至3中任一项所述的免疫缀合物，其中所述抗体包含： a) (i)包含选自SEQ ID NO ;12及15至22的氨基酸序列的HVR-L1，（ii)包含氨基酸 序列 SEQ ID NO ;13 的 HVR-L2, W及（iii)包含氨基酸序列 SEQ ID NO ;14 的 HVR-L3 ;或 b) (i)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;15的HVR-L1，（ii)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;13 的HVR-L2, W及（iii)包含氨基酸序列SEQ ID NO ;14的HVR-L3。
6. 如权利要求1至5中任一项所述的免疫缀合物，其中所述抗体包含： a) 与氨基酸序列SEQ ID NO ;7具有至少95%序列同一性的VH序列；或 b) 与氨基酸序列SEQ ID NO ;8具有至少95 %序列同一性的化序列；或 C)如（a)中的VH序列及如化）中的化序列。
7. 如权利要求6所述的免疫缀合物，其包含具有氨基酸序列SEQ ID NO ;7的VH序列。
8. 如权利要求6所述的免疫缀合物，其包含具有氨基酸序列SEQ ID NO ;6的化序列 或具有氨基酸序列SEQ ID NO ;8的化序列。
9. 一种免疫缀合物，其包含共价连接于细胞毒性剂的结合CD22的抗体，其中所述抗体 包含（a)具有氨基酸序列SEQ ID NO ;7的VH序列及具有氨基酸序列SEQ ID NO ;8的化序 列，并且其中所述细胞毒性剂为奈莫柔比星衍生物。
10. 如权利要求1至9中任一项所述的免疫缀合物，其中所述抗体为IgGl、IgG2a或 IgG化抗体。
11. 如权利要求1至10中任一项所述的免疫缀合物，其中所述免疫缀合物具有式 Ab-a-D)p，其中： (a) Ab为所述抗体； (b) L为接头； (c) D为所述细胞毒性剂；并且 (d) p在1-8的范围内。
12. 如权利要求11所述的免疫缀合物，其中D为奈莫柔比星衍生物。
13. 如权利要求12所述的免疫缀合物，其中D具有选自W下的结构：
14. 如权利要求11至13中任一项所述的免疫缀合物，其中所述接头可由蛋白酶裂解。
15. 如权利要求14所述的免疫缀合物，其中所述接头包含va^cit二肤或化e-高Lys 二肤。
16. 如权利要求11至13中任一项所述的免疫缀合物，其中所述接头具有酸不稳定性。
17. 如权利要求16所述的免疫缀合物，其中所述接头包括踪。
18. 如权利要求12所述的免疫缀合物，其具有选自W下的式：
其中Ri和R2独立地选自H及Ci-Ce焼基。
19. 如权利要求11至18中任一项所述的免疫缀合物，其中P在1-3的范围内。
20. -种免疫缀合物，其具有选自W下的式：
其中Ab为抗体，其包含（i)包含氨基酸序列SEQ IDNO ;9的HVR-H1，（ii)包含氨基酸 序列SEQ ID NO ;10的HVR-肥，（iii)包含氨基酸序列SEQ IDNO ;11的HVR-册，（iv)包含 氨基酸序列SEQ IDN0;15的HVR-L1，（V)包含氨基酸序列SEQ ID N0;13的HVR-L2，W及 (vU包含氨基酸序列SEQ ID NO ;14的HVR-L3 ;并且其中P在1至3的范围内。
21. 如权利要求20所述的免疫缀合物，其中所述抗体包含VH序列SEQ ID NO ;7及化 序列 SEQ ID NO ;8。
22. 如权利要求21所述的免疫缀合物，其中所述抗体包含重链SEQ ID NO ;26及轻链
沈Q ID NO ; 23。
23. 如前述权利要求中任一项所述的免疫缀合物，其中所述抗体为单克隆抗体。
24. 如前述权利要求中任一项所述的免疫缀合物，其中所述抗体为人类抗体、人源化抗 体或嵌合抗体。
25. 如前述权利要求中任一项所述的免疫缀合物，其中所述抗体为结合CD22的抗体片 段。
26. 如前述权利要求中任一项所述的免疫缀合物，其中所述抗体结合人类CD22。
27. 如权利要求26所述的免疫缀合物，其中人类CD22具有序列SEQ ID N0;28或SEQ ID NO ：29〇
28. -种药物制剂，其包含如前述权利要求中任一项所述的免疫缀合物及药学上可接 受的载体。
29. 如权利要求28所述的药物制剂，其还包含另一治疗剂。
30. -种治疗患有CD22阳性癌症的个体的方法，所述方法包括向所述个体施用有效量 的如权利要求1至27中任一项所述的免疫缀合物。
31. 如权利要求30所述的方法，其中所述CD22阳性癌症选自淋己瘤、非霍奇金淋己瘤 (NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性无痛性NHL、难治性NHL、难治性无痛性NHL、慢 性淋己细胞性白血病（化L)、小淋己细胞性淋己瘤、白血病、毛细胞白血病化化)、急性淋己 细胞性白血病（A化)、伯基特氏淋己瘤及套细胞淋己瘤。
32. 如权利要求31所述的方法，其还包括向所述个体施用另一治疗剂。
33. 如权利要求32所述的方法，其中所述另一治疗剂包含结合CD79b的抗体。
34. 如权利要求33所述的方法，其中所述另一治疗剂为包含共价连接于细胞毒性剂的 结合CD79b的抗体的免疫缀合物。
35. -种抑制CD22阳性细胞增殖的方法，所述方法包括在容许如权利要求1至27中任 一项所述的免疫缀合物结合所述细胞的表面上的CD22的条件下使所述细胞暴露于所述免 疫缀合物，由此抑制所述细胞的增殖。
36. 如权利要求35所述的方法，其中所述细胞为费生性B细胞。
37. 如权利要求36所述的方法，其中所述细胞为淋己瘤细胞。
38. -种治疗患有CD22阳性癌症的个体的方法，其中所述CD22阳性癌症对第一治疗剂 具有抗性，所述方法包括向所述个体施用有效量的如权利要求1至27中任一项所述的免疫 缀合物。
39. 如权利要求38所述的方法，其中所述CD22阳性癌症选自淋己瘤、非霍奇金淋己瘤 (NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性无痛性NHL、难治性NHL、难治性无痛性NHL、慢 性淋己细胞性白血病（化L)、小淋己细胞性淋己瘤、白血病、毛细胞白血病化化)、急性淋己 细胞性白血病（A化)、伯基特氏淋己瘤及套细胞淋己瘤。
40. 如权利要求38或39所述的方法，其中所述第一治疗剂包含结合除CD22 W外的抗 原的第一抗体。
41. 如权利要求40所述的方法，其中所述第一治疗剂为包含结合除CD22 W外的抗原的 第一抗体及第一细胞毒性剂的第一免疫缀合物。
42. 如权利要求40或41所述的方法，其中所述第一抗体结合CD79b。
43. 如权利要求38或39所述的方法，其中所述第一治疗剂包含结合CD22的第一抗体。
44. 如权利要求43所述的方法，其中所述第一治疗剂为包含结合CD22的第一抗体及第 一细胞毒性剂的第一免疫缀合物。
45. 如权利要求41至44中任一项所述的方法，其中所述第一细胞毒性剂与如权利要求 1至27中任一项所述的免疫缀合物的细胞毒性剂不同。
46. 如权利要求45所述的方法，其中所述第一细胞毒性剂为MMAE。
47. 如权利要求46所述的方法，其中所述CD22阳性癌症表达P-糖蛋白（P-gp)。
48. -种治疗患有CD22阳性癌症的个体的方法，其中所述CD22阳性癌症表达P-gp，所 述方法包括向所述个体施用有效量的如权利要求1至27中任一项所述的免疫缀合物。
49. 如权利要求48所述的方法，其中所述CD22阳性癌症选自淋己瘤、非霍奇金淋己瘤 (NHL)、侵袭性NHL、复发性侵袭性NHL、复发性无痛性NHL、难治性NHL、难治性无痛性NHL、慢 性淋己细胞性白血病（化L)、小淋己细胞性淋己瘤、白血病、毛细胞白血病化化)、急性淋己 细胞性白血病（A化)、伯基特氏淋己瘤及套细胞淋己瘤。
【文档编号】A61K47/48GK104428007SQ201380036640
【公开日】2015年3月18日 申请日期:2013年7月8日 优先权日:2012年7月9日
【发明者】P·波拉基斯, A·波尔森, S·D·斯潘塞, S-F·于, 郑冰 申请人:基因泰克公司