一种从厚朴叶中制备厚朴酚及和厚朴酚的方法
【专利摘要】本发明涉及一种从厚朴叶中制备厚朴酚及和厚朴酚的方法，属于中药现代化领域。一种从厚朴叶中制备厚朴酚及和厚朴酚的方法，应用有机溶剂提取、小孔径树脂分离制备、有机溶剂结晶等方法从厚朴叶中制备高纯度厚朴酚及和厚朴酚单体成分，与现有的有工艺方法相比，具有工艺简单、粗提溶剂成本低、柱层析陈本低、填料分离精度高可反复利用，层析溶剂成本低、对环境污染相对较轻、厚朴酚及和厚朴酚纯度高等优点，适合工业型制备。
【专利说明】一种从厚朴叶中制备厚朴酚及和厚朴酚的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种从厚朴叶中制备厚朴酹(Magnolol)及和厚朴酹(Honok1l)的方法，属于中药现代化领域。
【背景技术】
[0002]厚朴酚及和厚朴酚为同分异构体，二者为常用中药厚朴的抗菌活性成分，同时也是厚朴药材质量控制的主要指标成分。文献报道二者除了抗菌作用外，还具有抗炎、抗焦虑、抗抑郁、抗肿瘤、抗衰老和心肌保护作用；此外，还有明显的、持久的中枢性肌肉松弛和中枢神经抑制作用；近期有药效学研究证实，厚朴酚及和厚朴酚还显示出降血糖活性。
[0003]厚朴为常用中药，来源于木兰科木兰属植物厚朴Magnolia officinalis Rehd etffils.和凹叶厚朴 Magnolia officinalis Rehd.et ffils.var.biloba Rehd.et ffils.的干燥干皮、枝皮和根皮，主产于四川、湖北、浙江、福建和安徽等地，具有芳香化湿、行气消积、燥湿除满、降逆平喘的功效，主治食积气滞、腹胀便秘、湿阻中焦、脘痞吐泻、痰壅气逆、胸满喘咳等病症。许多常用处方和中成药制剂中都有厚朴入药。
[0004]随着厚朴药材应用范围的扩大，其需求量在不断增加，为满足对其不断增大的需求量，目前已在四川、湖北、浙江、福建等主产区建立厚朴药材生产基地，大力发展厚朴种植。据初步统计，全国种植厚朴和凹叶厚朴面积不少于70万亩，栽培厚朴林多为厚朴纯林，每亩栽培厚朴约200~30 0株，以每株树每年平均产厚朴干叶1.5~2.5kg计算，全国厚朴叶的蕴藏量每年可达30万吨以上。厚朴为落叶乔木，其叶长25~50cm，宽15~25cm，11月自然凋落，来年春天又发新叶，因此，厚朴叶获取方式简便，资源丰富且每年可以再生。目前，国内大量厚朴叶未加利用，任其凋落腐烂，如能开发利用为新药材，不仅有利于厚朴资源的综合利用，而且可产生较大的经济效益和社会效益，对退耕还林和药农增收也起到一定的支持作用。
[0005]现代分析化学研究发现，厚朴叶中也含有和厚朴相同的木脂素类成分，可以作为厚朴酚及和厚朴酚的原料植物部位加以利用。现有专利报道厚朴叶中厚朴酚及和厚朴酚提取方法有有机溶剂提取法、采用温度控制曲线控制升温速度和恒温提取等。这些提取方法萃取目标物杂质过多、厚朴酚及和厚朴酚纯度较低，不适宜工业化大规模生产。
[0006]中国专利申请CN 102304027 A公开了一种从厚朴树叶中提取厚朴酚的方法，其步骤是:1.厚朴叶粉末用甲醇浸泡24h，抽滤，重复浸取三次，滤液浓缩至浸膏；2.浸膏中加入饱和澄清石灰水，搅拌Ih,离心,重复三次；3.上清液酸化至pH = 2-3,搅拌30min,离心，固形物用硅胶拌合，再用石油醚加热至微沸，保温lOmin，热滤，溶液用无水Na2SO4干燥；4.将干燥石油醚溶液浓缩，冷却结晶，得厚朴酚产品。该方法中需要使用浓酸将上清液PH值调至2-3，且要用石油醚加热到微沸。石油醚易燃易爆，其蒸气与空气可形成爆炸性混合物，遇明火、高热能引起燃烧爆炸。这些因素增加了操作的风险性，既不利于保护劳动者，也不利于产业化实施。石油醚成本较高。
【发明内容】
[0007]本发明的目的是针对现有产业化分离厚朴酚及和厚朴酚技术的不足，提供一种工艺设备简单、生产周期短、投资规模小、操作安全、对环境污染相对较轻、制备成本低、得率较高的高纯度厚朴酚及和厚朴酚的制备方法。
[0008]本发明通过以下方法实现本发明目的:
[0009]一种从厚朴叶中制备厚朴酚及和厚朴酚的方法，步骤如下:
[0010](I)取干厚朴叶粉碎；
[0011](2)厚朴叶粉末用4~6倍量的pH值为9-10的体积百分比浓度为60_95%碱性甲醇或乙醇溶液回流提取2-3次，提取温度为60~70°C，每次回流提取0.5-3h，合并提取液，用酸调至PH值为6-7，回收溶剂得浸膏；
[0012](3)浸膏用9~10倍量水溶解后，用I~2倍量的二氯甲烷萃取2-3次，或用氧化铝吸附富集，收集流出液，蒸干，备用；
[0013](4)取小孔径分离树脂加压装柱，用体积百分比浓度为35-50%的甲醇或乙醇或丙酮水溶液平衡柱子，然后将上样液缓慢滴加上样，上样完毕静置1-1.5h后依次用I~2倍量的体积百分比浓度为50 %、55 %、60 %、65 %、70 %的甲醇、乙醇或丙酮水溶液加压洗脱，收集厚朴酚及和厚朴酚段洗脱液，浓缩回收溶剂，得到厚朴酚及和厚朴酚混合组分；
[0014](5)取厚朴酚及和厚朴酚混合组分，用无水甲醇、或乙醇、或丙酮溶解，以4~6倍量的硅胶拌样，用硅胶为填料，以18~20倍量的体积比为6:1-8:1的石油醚一丙酮为洗脱剂，层析，检测，用2~4倍量的丙酮甲醇混合液结晶2次，得到厚朴酚及和厚朴酚单体。
[0015]步骤(2)所述的碱性甲醇或乙醇溶液采用碳酸氢钠、氢氧化钠或氨水调节其pH值；用酸调至中性的酸为盐酸。
[0016]步骤(4)中小孔径分离树脂为Chroma_R204。本发明采用的高精细分离小孔径吸附树脂，价格便宜，孔径分布均匀，分离精度较高，且不会造成对样品的死吸附，可重复利用，洗脱溶剂成本低、上样量大。
[0017]步骤(5)所述的丙酮甲醇混合溶液是丙酮和甲醇按体积比15:1混合制得。
[0018]一种厚朴叶提取物，采用以下方法制备得到:
[0019](I)取干厚朴叶粉碎；
[0020](2)厚朴叶粉末用4~6倍量的pH值为9_10的体积百分比浓度为60_95%碱性甲醇或乙醇溶液回流提取2-3次，提取温度为60~70°C，每次回流提取0.5-3h，合并提取液，用酸调至PH值为6-7，回收溶剂得浸膏；
[0021](3)浸膏用9~10倍量水溶解后，用I~2倍量的二氯甲烷萃取2-3次，或用氧化铝吸附富集，收集流出液，蒸干，备用；
[0022](4)取小孔径分离树脂加压装柱，用体积百分比浓度为35-50%的甲醇或乙醇或丙酮水溶液平衡柱子，然后将上样液缓慢滴加上样，上样完毕静置1-1.5h后依次用I~2倍量的体积百分比浓度为50 %、55 %、60 %、65 %、70 %的甲醇、乙醇或丙酮水溶液加压洗脱，收集厚朴酚及和厚朴酚段洗脱液，浓缩回收溶剂，得到厚朴酚及和厚朴酚混合组分；
[0023](5)取厚朴酚及和厚朴酚混合组分，用无水甲醇、或乙醇、或丙酮溶解，以4~6倍量的硅胶拌样，用硅胶为填料，以18~20倍量的体积比为6:1-8:1的石油醚一丙酮为洗脱剂，层析，检测，用2~4倍量的丙酮甲醇混合液结晶2次，得到厚朴酚及和厚朴酚单体。
[0024]步骤(2)所述的碱性甲醇或乙醇溶液采用碳酸氢钠、氢氧化钠或氨水调节其pH值；用酸调至中性的酸为盐酸。
[0025]步骤⑷中小孔径分离树脂为Chroma_R204。
[0026]步骤(5)所述的丙酮甲醇混合溶液是丙酮和甲醇按体积比15:1混合制得。
[0027]所述提取物中厚朴酚及和厚朴酚的含量>98%。
[0028]所述的厚朴叶提取物用于制备抗菌药、抗炎药、抗焦虑药、抗抑郁药、抗肿瘤药、抗衰老药药、心肌保护药或降血糖药的用途。
[0029]本发明方法的优点如下:本发明提供了以厚朴非药用部位为原料，工业化生产活性特征性成分厚朴酚及和厚朴酚的方法。厚朴酚及和厚朴酚极性较小，并且呈弱酸性，因此用高浓度的碱性醇液提取可使二者溶出率更高。将萃取物上小孔径加压分离树脂、采用不同浓度丙酮、乙醇或甲醇等为洗脱剂均能较好分离得到TLC上厚朴酚及和厚朴酚单一斑点。能有效分离开叶绿素和长链脂肪酸等杂质。高精细分离小孔径吸附树脂不会造成对样品的死吸附，其可重复利用，具有洗脱溶剂成本低、上样量大等优点。目前国内一些厂家开发的小孔径半凝胶型吸附树脂孔径分布均匀，40-100um价格较低，每公斤300元左右，分离精度较高，在一些植物的分离提取上具有国外昂贵的MCI GEL树脂系列分离功能。
[0030]本发明方法工艺设备简单、生产周期短、投资规模小、对环境污染相对较轻、制备成本低，厚朴酚及和厚朴酚纯度高，操作简便安全，适于工业化生产。
[0031]下面结合附图和【具体实施方式】对本发明做进一步说明，并非对本发明的限制，凡依照本发明公开内容所做的本领域等同替换，均属于本发明的保护范围。
【专利附图】
【附图说明】
[0032]图1为实施例1的和厚朴酚HPLC图谱
[0033]图2为实施例2的和厚朴酚HPLC图谱
[0034]图3为实施例1的厚朴酚HPLC图谱
[0035]图4为实施例2的厚朴酚HPLC图谱
【具体实施方式】
[0036]下面通过实施例对本发明方法作进一步详细说明，但本发明的保护范围不局限于所述内容，实施例中如无特殊说明，使用试剂为常规市售试剂，或按常规方法制得的试剂。
[0037]实施例1:
[0038]1.取厚朴叶96g粉碎至粒度为40目；
[0039]2.厚朴叶粉末用氨水调节pH值10的95%乙醇溶液回流提取三次，提取温度60°C，其中第一次500ml溶液回流提取2小时后过滤，滤渣用500ml溶液第二次回流提取I小时后过滤，滤渣用500ml溶液第三次回流提取0.5小时过滤，合并三次提取液；用盐酸调节pH值6，回收溶剂，得到粗提物(28.8g)；
[0040]3.用300ml水溶解粗提物，用二氯甲烷萃取3次，每次300ml，合并二氯甲烷液，蒸干，得浸膏(14.2g)；
[0041]4.取500g小孔径分离树脂Chroma-R204加压装柱，用体积百分比浓度为50%的丙酮水溶液平衡柱子，然后将上样液缓慢滴加上样，上样完毕静置Ih后依次用500ml体积百分比浓度为50 %、55 %、60 %、65 %、70 %丙酮水溶液加压洗脱(7bar)，TLC鉴别收集厚朴酚及和厚朴酚段洗脱液，回收丙酮水，得到组分A (8.3g)；
[0042]5.取组分A，用10ml丙酮溶解，以50g硅胶拌样，用硅胶为填料，以800ml石油醚一丙酮(8:1)洗脱，浓缩，得到组分B(2.2g)和组分C(l.Sg)，用7ml丙酮甲醇混合液(丙酮和甲醇按体积比15:1混合)和6ml丙酮甲醇混合液(丙酮和甲醇按体积比15:1混合)分别结晶2次，可分离纯化得到化合物I (0.24g)和化合物2 (0.13g)。HPLC检测含量>98% (见图1和图3)
[0043]以上所得化合物单体I和化合物2，经质谱、核磁共振氢谱、碳谱测定，分别依次鉴定为:厚朴酌.(Magnolol)、和厚朴酌.(Honok1l)。
[0044]实施例2:
[0045]1.取厚朴叶95g粉碎至粒度为40目；
[0046]2.厚朴叶粉末用氨水调节pH值9的95%乙醇溶液回流提取三次，提取温度60°C，其中第一次500ml溶液回流提取2小时后过滤，滤渣用500ml溶液第二次回流提取I小时后过滤，滤渣用500ml溶液第三次回流提取0.5小时过滤，合并三次提取液；用盐酸调节pH值6，回收溶剂，得到粗提物(28.2g)；
[0047]3.用300ml水溶解粗提物，过滤，残渣用10ml丙酮溶解，加入400ml水成混悬液，用10g氧化铝吸附富集，收集流出液，蒸干，得浸膏(13.3g)；
[0048]4.取500g小孔径分离树脂Chroma-R204加压装柱，用体积百分比浓度为50%的丙酮水溶液平衡柱子，然后将上样液缓慢滴加上样，上样完毕静置Ih后依次用500ml体积百分比浓度为50 %、55 %、60 %、65 %、70 %丙酮水溶液加压洗脱(7bar)，TLC鉴别收集厚朴酚及和厚朴酚段洗脱液，回收丙酮水，得到组分A (9.2g)；
[0049]5.取组分A，用10ml丙酮溶解，以50g硅胶拌样，用硅胶为填料，以900ml石油Bi—丙酮(8:1)洗脱，浓缩，得到组分B (2.4g)和组分C (1.6g)，用7.5ml丙酮甲醇混合液(丙酮和甲醇按体积比15:1混合)和5ml丙酮甲醇混合液(丙酮和甲醇按体积比15:1混合)分别结晶2次，可分离纯化得到化合物I (0.73g)和化合物2 (0.49g)。HPLC检测含量>98% (见图2和图4)。
[0050]以上所得化合物单体I和化合物2，经质谱、核磁共振氢谱、碳谱测定，分别依次鉴定为:厚朴酌.(Magnolol)、和厚朴酌.(Honok1l)。
[0051]实施例3:
[0052]1.取厚朴叶98g粉碎至粒度为40目；
[0053]2.厚朴叶粉末用氨水调节pH值9的60%甲醇溶液回流提取2次，提取温度70°C，其中第一次500ml溶液回流提取3小时后过滤，滤渣用500ml溶液第二次回流提取2小时后过滤，合并两次提取液；用盐酸调节PH值7，回收溶剂，得到粗提物(29.4g)；
[0054]3.用300ml水溶解粗提物，用二氯甲烷萃取2次，每次300ml，合并二氯甲烷液，蒸干，得浸膏(15.2g)；
[0055]4.取500g小孔径分离树脂Chroma-R204加压装柱，用体积百分比浓度为35%的甲醇水溶液平衡柱子，然后将上样液缓慢滴加上样，上样完毕静置1.5h后依次用500ml体积百分比浓度为50 %、55 %、60 %、65 %、70 %甲醇水溶液加压洗脱(7bar)，TLC鉴别收集厚朴酚及和厚朴酚段洗脱液，回收甲醇水，得到组分A(7.Sg)；
[0056]5.取组分A，用10ml甲醇溶解，以50g硅胶拌样，用硅胶为填料，以800ml石油Bi—丙酮(6:1)洗脱，浓缩，得到组分B (3.3g)和组分C(l.9g)，用1ml丙酮甲醇混合液(丙酮和甲醇按体积比15:1混合)和6ml丙酮甲醇混合液(丙酮和甲醇按体积比15:1混合)分别结晶2次，可分离纯化得到化合物I (0.22g)和化合物2 (0.12g)。HPLC检测含量>98%。
[0057]以上所得化合物单体I和化合物2，经质谱、核磁共振氢谱、碳谱测定，分别依次鉴定为:厚朴酌.(Magnolol)、和厚朴酌.(Honok1l)。
[0058]实施例4:
[0059]1.取厚朴叶97g粉碎至粒度为40目；
[0060]2.厚朴叶粉末用氨水调节pH值9的70%乙醇溶液回流提取三次，提取温度65°C，其中第一次500ml溶液回流提取3小时后过滤，滤渣用500ml溶液第二次回流提取2小时后过滤，滤渣用500ml溶液第三次回流提取0.5小时过滤，合并三次提取液；用盐酸调节pH值7，回收溶剂，得到粗提物(28.7g)；
[0061]3.用300ml水溶解粗提物，过滤，残渣用10ml丙酮溶解，加入400ml水成混悬液，用10g氧化铝吸附富集，收集流出液，蒸干，得浸膏(13.2g)；
[0062]4.取500g小孔径分离树脂Chroma_R204加压装柱，用体积百分比浓度为40%的乙醇水溶液平衡柱子，然后将上样液缓慢滴加上样，上样完毕静置1.5h后依次用500ml体积百分比浓度为50%、55%、60%、65%、70%丙酮水溶液加压洗脱(7bar)，TLC鉴别收集厚朴酚及和厚朴酚段洗脱液 ，回收乙醇水，得到组分A (6.6g)；
[0063]5.取组分A，用10ml乙醇溶解，以50g硅胶拌样，用硅胶为填料，以100ml石油醚一丙酮(7:1)洗脱，浓缩，得到组分B(2.Sg)和组分C(1.4g)，用9ml丙酮甲醇混合液(丙酮和甲醇按体积比15:1混合)和4.5ml丙酮甲醇混合液(丙酮和甲醇按体积比15:1混合)分别结晶2次，可分离纯化得到化合物I (0.63g)和化合物2 (0.21g)。HPLC检测含量 >98%。
[0064]以上所得化合物单体I和化合物2，经质谱、核磁共振氢谱、碳谱测定，分别依次鉴定为:厚朴酌.(Magnolol)、和厚朴酌.(Honok1l)。
【权利要求】
1.一种从厚朴叶中制备厚朴酚及和厚朴酚的方法，其特征在于步骤如下: (1)取干厚朴叶粉碎； (2)厚朴叶粉末用4~6倍量的pH值为9-10的体积百分比浓度为60-95%碱性甲醇或乙醇溶液回流提取2-3次，提取温度为60~70°C，每次回流提取0.5-3h，合并提取液，用酸调至PH值为6-7，回收溶剂得浸膏； (3)浸膏用9~10倍量水溶解后，用I~2倍量的二氯甲烷萃取2-3次，或用氧化铝吸附富集，收集流出液，蒸干，备用； (4)取小孔径分离树脂加压装柱，用体积百分比浓度为35-50%的甲醇或乙醇或丙酮水溶液平衡柱子，然后将上样液缓慢滴加上样，上样完毕静置1-1.5h后依次用I~2倍量的体积百分比浓度为50 %、55 %、60 %、65 %、70 %的甲醇、乙醇或丙酮水溶液加压洗脱，收集厚朴酚及和厚朴酚段洗脱液，浓缩回收溶剂，得到厚朴酚及和厚朴酚混合组分； (5)取厚朴酚及和厚朴酚混合组分，用无水甲醇、或乙醇、或丙酮溶解，以4~6倍量的硅胶拌样，用硅胶为填料，以18~20倍量的体积比为6:1-8:1的石油醚一丙酮为洗脱剂，层析，检测，用2~4倍量的丙酮甲醇混合液结晶2次，得到厚朴酚及和厚朴酚单体。
2.根据权利要求1所述从厚朴叶中提取厚朴酚及和厚朴酚的方法，其特征在于:步骤(2)所述的碱性甲醇或乙醇溶液采用碳酸氢钠、氢氧化钠或氨水调节其pH值；用酸调至中性的酸为盐酸。
3.根据权利要求1所述从厚朴叶中提取厚朴酚及和厚朴酚的方法，其特征在于:步骤(4)中小孔径分离树脂为Chroma-R204。
4.根据权利要求1所述从厚朴叶中提取厚朴酚及和厚朴酚的方法，其特征在于:步骤(5)所述的丙酮甲醇混合溶液是丙酮和甲醇按体积比15:1混合制得。
5.一种厚朴叶提取物，其特征在于采用以下方法制备得到: (1)取干厚朴叶粉碎； (2)厚朴叶粉末用4~6倍量的pH值为9-10的体积百分比浓度为60-95%碱性甲醇或乙醇溶液回流提取2-3次，提取温度为60~70°C，每次回流提取0.5-3h，合并提取液，用酸调至PH值为6-7，回收溶剂得浸膏； (3)浸膏用9~10倍量水溶解后，用I~2倍量的二氯甲烷萃取2-3次，或用氧化铝吸附富集，收集流出液，蒸干，备用； (4)取小孔径分离树脂加压装柱，用体积百分比浓度为35-50%的甲醇或乙醇或丙酮水溶液平衡柱子，然后将上样液缓慢滴加上样，上样完毕静置1-1.5h后依次用I~2倍量的体积百分比浓度为50 %、55 %、60 %、65 %、70 %的甲醇、乙醇或丙酮水溶液加压洗脱，收集厚朴酚及和厚朴酚段洗脱液，浓缩回收溶剂，得到厚朴酚及和厚朴酚混合组分； (5)取厚朴酚及和厚朴酚混合组分，用无水甲醇、或乙醇、或丙酮溶解，以4~6倍量的硅胶拌样，用硅胶为填料，以18~20倍量的体积比为6:1-8:1的石油醚一丙酮为洗脱剂，层析，检测，用2~4倍量的丙酮甲醇混合液结晶2次，得到厚朴酚及和厚朴酚单体。
6.根据权利要求5所述的厚朴叶提取物，其特征在于:步骤(2)所述的碱性甲醇或乙醇溶液采用碳酸氢钠、氢氧化钠或氨水调节其PH值；用酸调至中性的酸为盐酸。
7.根据权利要求5所述的厚朴叶提取物，其特征在于:步骤(4)中小孔径分离树脂为Chroma-R204o
8.根据权利要求5所述的厚朴叶提取物，其特征在于:步骤(5)所述的丙酮甲醇混合溶液是丙酮和甲醇按体积比15:1混合制得。
9.根据权利要求5-8中任何一项所述的厚朴叶提取物，其特征在于:所述提取物中厚朴酚及和厚朴酚的含量>98%。
10.权利要求5-9中任何一项所述的厚朴叶提取物用于制备抗菌药、抗炎药、抗焦虑药、抗抑郁药、抗肿 瘤药、抗衰老药药、心肌保护药或降血糖药的用途。
【文档编号】A61K31/05GK104163755SQ201410386682
【公开日】2014年11月26日 申请日期:2014年8月7日 优先权日:2014年8月7日
【发明者】杨竹雅, 谭文红, 马晓霞, 钱子刚, 卫莹芳, 杨树德, 张宝洪 申请人:云南中医学院