专利名称：从厚朴中分离厚朴酚及和厚朴酚的方法
技术领域：
本发明涉及从厚朴中分离厚朴酚及和厚朴酚的方法，特别是采用逆流色谱法从厚朴粗品中分离制备单体厚朴酚及和厚朴酚的方法。
背景技术：
结构式1的厚朴酚及结构式2的和厚朴酚是厚朴中的两种主要成分。
式1 式2厚朴为木兰科植物厚朴的干燥树皮，是我国重要的传统中药之一，具有以下药效(1)行气消胀用于腹胀或腹满痛，胀痛拒按。(2)温中燥湿用于湿浊中阻之脘腹胀满、呕吐泄泻。(3)降逆平喘用于肺气上逆之咳喘。大量的研究表明厚朴的有效成分是厚朴酚及和厚朴酚。因此，分离制备高纯的化合物单体成为研究的一个重要内容。然而，厚朴酚及和厚朴酚互为同分异构体，性质相似，采用传统的分离技术如薄层色谱、柱色谱以时，常常因为固体载体的吸附而产生拖尾、污染、损耗，结果很难获得较高纯度的化合物单体。
发明内容
本发明的目的是提供一种低成本、高回收率、适合于大规模从厚朴中分离厚朴酚及和厚朴酚的方法。
本发明从厚朴中分离厚朴酚及和厚朴酚的方法采用的是逆流色谱方法，包括以下步骤1)将厚朴药材粉末用有机溶剂反复浸提，将提取液合并、浓缩成浸膏，将所得浸膏烘干，得到浅棕色的厚朴粗提物；2)将用于逆流色谱分离用的溶剂倒入分液器中，形成互不相溶的两相溶剂；3)将厚朴粗品溶于步骤2)中等体积的两相混合溶剂中，得到厚朴样品溶液；4)将步骤2)两相溶剂中的一相注入逆流色谱仪分离柱内作为固定相，将步骤3)所得的厚朴粗品溶液注入逆流色谱仪的进样环中，开启逆流色谱仪，注入两相溶剂中的另一相作移动相，厚朴酚及和厚朴酚便在逆流色谱仪内进行连续的分配，通过紫外检测器的在线监测，收集、合并流出物，分别得到纯化的厚朴酚及和厚朴酚。
上述步骤1)所说的有机溶剂可以是正构烷烃、卤代烃、脂肪醇、脂肪酮、脂肪酯或醚。
上述步骤2)所说的用于分离的溶剂可为正构烷烃、卤代烃、脂肪醇、脂肪酮、脂肪酯、醚类和水中的两种或两种以上的混合物，这些溶剂对厚朴酚及和厚朴酚有较好的分配系数。
本发明采用的逆流色谱方法是一种连续的无需任何固体支持物的液液分配色谱方法，它避免了固态支持体或载体造成的吸附、损耗和变性等问题，能保证较高的峰型分辨度，分离量大、样品无损失、 回收率高、分离环境缓和，节约溶剂，能直接分离大量厚朴粗提样品或合成混合物，分离结果纯度一般可达到95％以上。而且所用的逆流色谱仪为普通仪器，它较高效液相色谱仪远为简单便宜，其溶剂由普通溶剂配制，价格便宜，因此是一种经济的从厚朴提取物中分离厚朴酚及和厚朴酚的方法。
图1为实施例1中厚朴粗品的高效液相分析图(图中1为和厚朴酚，2为厚朴酚)；图2为实施例1中分离厚朴酚及和厚朴酚的逆流色谱图(图中1为和厚朴酚，2为厚朴酚)；图3为实施例1中分离纯化的厚朴酚及和厚朴酚的高效液相分析图(图中1为和厚朴酚，2为厚朴酚)。
具体实施例方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步说明。
实施例11.将5kg干的厚朴药材粉末用65％乙醇10L加热回流3次，每次2小时，抽滤出溶剂，在滤渣中再加入10L的65％乙醇，重复以上操作三次，将提取液合并用真空旋转蒸发器减压浓缩成浸膏，浓缩温度为40℃，烘干后得85g厚朴粗品。其成分结构及含量如图1所示，和厚朴酚及厚朴酚的含量分别为55.4％和40.1％。
2.用逆流色谱仪分离厚朴提取物。用石油醚、乙酸乙酯、四氯化碳、甲醇和水，按体积比为1∶1∶8∶6∶1配制两相溶剂，在分液容器中静置分层，分出上下相。将厚朴粗品1500mg溶于7ml上相和7ml下相中形成样品溶液。逆流色谱柱内径4mm，柱体积为1600ml。以上相作固定相，下相为移动相，待逆流色谱仪分离柱内中注满固定相后，将样品溶液注入逆流色谱仪的进样环中，开启逆流色谱仪，转速为300转，以5ml/min的流速注入移动相，通过在线的紫外检测器监测流分，检测波长280nm，收集、合并流出物，分别得到和厚朴酚及厚朴酚，其纯度分别为99.68％，99.63％，，见图2和图3。厚朴酚及和厚朴酚的一维和二维核磁共振波谱图分别列于表1-表4.
实施例2厚朴粗品制备方式同实施例1，用逆流色谱仪分离厚朴提取物。用乙酸乙酯、四氯化碳、甲醇和水，按体积比为1∶6∶4∶1配制两相溶剂，在分液容器中静置分层，分出上下相。将厚朴粗品500mg溶于5ml上相和5ml下相中形成样品溶液。逆流色谱柱内径4mm，柱体积为1600ml。以上相作固定相，下相为移动相，待逆流色谱仪分离柱内中注满固定相后，将样品溶液注入逆流色谱仪的进样环中，开启逆流色谱仪，转速为300转，以5ml/min的流速注入移动相，通过在线的紫外检测器监测流分，检测波长280nm，收集、合并流出物，分别得到和厚朴酚及厚朴酚，其纯度分别为98.63％，98.03％。
实施例3厚朴粗品制备方式同实施例1，用逆流色谱仪分离厚朴提取物。用乙醚、乙酸乙酯、四氯化碳、甲醇和水，按体积比为0.5∶0.5∶5∶4∶1配制两相溶剂，在分液容器中静置分层，分出上下相。将厚朴粗品180mg溶于3ml上相和3ml下相中形成样品溶液。逆流色谱柱内径2mm，柱体积为380ml。以上相作固定相，下相为移动相，待逆流色谱仪分离柱内中注满固定相后，将样品溶液注入逆流色谱仪的进样环中，开启逆流色谱仪，转速为600转，以1.5ml/min的流速注入移动相，通过在线的紫外检测器监测流分，检测波长280nm，收集、合并流出物，分别得到和厚朴酚及厚朴酚，其纯度分别为98.54％，97.13％。
实施例4厚朴粗品制备方式同实施例1，用逆流色谱仪分离厚朴提取物。用正己烷、乙酸乙酯、甲醇、水，按体积比为4∶5∶4∶5配制两相溶剂，在分液容器中静置分层，分出上下相。将厚朴粗品70mg溶于1ml上相和1ml下相中形成样品溶液。逆流色谱柱内径1.6mm，柱体积为280ml。以上相作固定相，下相为移动相，待逆流色谱仪分离柱内中注满固定相后，将样品溶液注入逆流色谱仪的进样环中，开启逆流色谱仪，转速为600转，以1ml/min的流速注入移动相，通过在线的紫外检测器监测流分，检测波长280nm，收集、合并流出物，分别得到和厚朴酚及厚朴酚，其纯度分别为99.24％，98.45％。
表1.厚朴酚的1H-NMR和1H-1H COSY谱图数据
表2.厚朴酚的13C-NMR和2D NMR谱图数据
aDEPT 135 experiments.bQuatemary carbon.
表3.和厚朴酚的1H-NMR和1H-1H COSY谱图数据
表4.和厚朴酚的13C-NMR和2D NMR谱图数据
aDEPT 135 experiments.bQuatemary carbon
权利要求
1.从厚朴中分离厚朴酚及和厚朴酚的方法，其特征是包括以下步骤1)将厚朴药材粉末用有机溶剂反复浸提，将提取液合并、浓缩成浸膏，将所得浸膏烘干，得到浅棕色的厚朴粗提物；2)将用于逆流色谱分离用的溶剂倒入分液器中，形成互不相溶的两相溶剂；3)将厚朴粗品溶于步骤2)中等体积的两相混合溶剂中，得到厚朴样品溶液；4)将步骤2)两相溶剂中的一相注入逆流色谱仪分离柱内作为固定相，将步骤3)所得的厚朴粗品溶液注入逆流色谱仪的进样环中，开启逆流色谱仪，注入两相溶剂中的另一相作移动相，厚朴酚及和厚朴酚便在逆流色谱仪内进行连续的分配，通过紫外检测器的在线监测，收集、合并流出物，分别得到纯化的厚朴酚及和厚朴酚。
2.根据权利要求1所述的从厚朴中分离厚朴酚及和厚朴酚的方法，其特征是步骤1)所说的有机溶剂是正构烷烃、卤代烃、脂肪醇、脂肪酮、脂肪酯或醚。
3.根据权利要求1所述的从厚朴中分离厚朴酚及和厚朴酚的方法，其特征是步骤2)所说的用于分离的溶剂为正构烷烃、卤代烃、脂肪醇、脂肪酮、脂肪酯、醚类和水中的两种或两种以上的混合物。
全文摘要
本发明涉及从厚朴中分离厚朴酚及和厚朴酚的方法，包括以下步骤1)将厚朴药材粉末用有机溶剂反复浸提，合并提取液、浓缩成浸膏、烘干，得到厚朴粗品；2)将用于逆流色谱分离用的溶剂倒入分液器中，形成互不相溶的两相溶剂；3)将厚朴粗品溶于步骤2)中等体积的两相混合溶剂中；4)将步骤2)两相溶剂中的一相注入逆流色谱仪分离柱内作为固定相，将步骤3)所得的溶液注入逆流色谱仪的进样环中，开启逆流色谱仪，注入两相溶剂中的另一相作移动相，厚朴酚及和厚朴酚便在逆流色谱仪内进行连续的分配，收集、合并流出物，分别得到纯化的厚朴酚及和厚朴酚。该方法避免了固态支持体或载体造成的吸附、损耗和变性等问题，分离结果纯度可达到95％以上。
文档编号C07C39/21GK1686990SQ200510049579
公开日2005年10月26日 申请日期2005年4月6日 优先权日2005年4月6日
发明者潘远江, 卢延斌 申请人:浙江大学