低剂量白细胞介素2在免疫相关性疾病治疗中的应用的制作方法
【专利摘要】本发明“低剂量白细胞介素2在免疫相关性疾病治疗中的应用”，提供了一种通过调节自身免疫病患者体内异常紊乱的T细胞，从上游治疗免疫病的方法。传统抗肿瘤方案应用的大剂量白介素-2(注射用重组人IL-2)的治疗目的在于刺激多种免疫细胞增加杀伤肿瘤细胞，不适合在自身免疫性疾病中应用。本发明人发现应用低剂量的IL-2上调了Treg和抑制了Tfh及Th17细胞，即而诱导免疫耐受同时纠正了患者体内的免疫细胞失衡状态，从上游调靶向调节T细胞，治疗病情活动的系统性红斑狼疮、干燥综合征和类风湿关节炎等免疫病患者有较好的疗效和安全性。该治疗方法安全、有效、便于临床应用，对于抗原诱导的免疫功能亢进导致多种自身抗体和炎症因子产生而累及脏器损伤为致病机制的多种自身免疫性疾病患者提供了新的治疗手段。
【专利说明】低剂量白细胞介素2在免疫相关性疾病治疗中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明涉及白细胞介素2 (IL-2)在自身免疫性疾病中的应用。
【背景技术】
[0002] 自身免疫性疾病，如系统性红斑狼疮（Systemic Lupus Erythematosus, SLE)，类 风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA)和干燥综合征（Sjiigren Syndrome，SS)是以免疫 性炎症为突出表现的弥漫性结缔组织或炎症性疾病病。血清中出现多种致病性自身抗体和 多系统受累是该类疾病的主要临床特征。例如，SLE患者发病初期多表现为低热、面部皮疹、 乏力、脱发、关节痛等临床症状，严重者会出现抽搐、晕厥等神经系统症状，晚期多发展为慢 性肾炎甚至肾衰竭。该病在我国的患病率约为70/10万人，即患病人数高达90万左右，而 5年的生存率仅有50-85%，预后差，严重威胁患者的生活质量，给患者及社会带来了沉重 的精神和经济负担。类风湿关节炎是一种以多关节侵蚀性滑膜炎症为特征的系统性自身免 疫病，患病率为〇. 33%，我国约有500万患者，且多为中青年女性，未经正规治疗致残率达 75%。我国在2006年进行的第二次全国残疾人抽样调查中，致残性关节病在导致肢体残疾 的21类病因中排第2位（20. 1% )，仅次于脑血管病（20.6% )，其中79.4%为RA致残。
[0003] 自身免疫性疾病是一种抗原驱动、T细胞介导的全身性自身免疫病。其发病的始 动环节之一是T淋巴细胞的异常活化及其免疫失衡，多项研究显示Treg是维持免疫平衡的 调节性细胞，在感染或自身抗原诱导的炎症反应和抗体产生过程中，在外周诱导免疫耐受。 多种自身免疫性疾病，如SLE、SS、RA、血管炎、强直性脊柱炎等都与这种免疫失衡有关。
[0004] 白细胞介素2(IL-2)是促进Treg产生和维持功能的重要的细胞因子。IL-2有3 个受体，分别为α，β和Y，其中最重要的一个高亲和性亚基为IL2Ra，即⑶25。Treg细 胞表面表达高水平的⑶25, IL-2通过结合⑶25促进Treg产生和维持，是Treg的一个至 关重要的生长因子。正常情况下，胸腺产生的Treg细胞迁移到外周，在低剂量IL-2的刺 激下不停增殖，维持稳定的表达水平；而在外周，IL-2和TGF-β等亦可以诱导幼稚T细胞 分化成Treg ;故IL-2的缺陷可以导致Treg数目减低。目前认为Treg主要通过三种方式 发挥抑制功能：1)直接接触抑制，主要与CTLA-4等相关；2)分泌抑制性因子，如IL-10及 TGF-β等；3)竞争性耗竭循环中的T细胞生长因子：如IL-2,促使其他T细胞凋亡。CTLA-4 及IL-10基因的突变均可以导致Treg抑制功能减弱，从而使外周免疫耐受被打破，而Treg 细胞中IL-2受体降低或者缺陷则不仅可以降低其增殖水平，还可以干扰其抑制功能。多项 研究表明，SLE患者中既存在Treg功能的缺陷，其主要与CTLA-4和TGF-β的突变有关，又 存在Treg数目的缺陷，其主要与IL-2的缺陷相关。
[0005] 十多年来，大剂量IL-2曾经作为一种免疫增强剂用于抗肿瘤及抗病毒治疗，疗效 显著，一直沿用至今。令人意外的是，几个实验组在临床用药中，发现IL-2在一些病人身 上，不仅没有增强免疫效应，反而诱导出了免疫耐受。Koreth等利用低剂量IL-2治疗难治 性慢性移植物抗宿主反应（GVHD)，在GVHD病人身上成功地诱导出了高水平的Treg，但对其 他效应T细胞无明显改变，一半的患者在临床上得到缓解。丙型肝炎合并自身免疫性疾病 一直是治疗的难点，激素及其他免疫抑制剂的治疗可诱发丙肝病毒的活动，而丙肝的干扰 素-α联合利巴韦林会诱发免疫性疾病的活动。Saadoun等应用低剂量IL-2治疗丙型肝炎 诱导的自身免疫性血管炎，同样，成功地诱导了 Treg水平的上升，血管炎的临床和实验室 指标均得到显著改善，而更重要的是丙肝病毒载量无变化。因此，IL-2在免疫系统中具有 双重调控的作用，即增强免疫反应和诱导免疫耐受形成的作用。
[0006] 随着治疗方法的进步和治疗方案的优化，SLE等自身免疫性疾病的主要死因逐渐 由肾脏、呼吸系统等器官并发症转变为增高的感染和肿瘤的发生率。而疾病本身的免疫监 控功能紊乱和药物的免疫抑制作用是其主要原因。所以，相比较于目前广泛应用的免疫 抑制剂，包括新型的生物制剂，寻找一种能逆转免疫失衡，重建免疫耐受，调节免疫平衡的 治疗方法显得尤为重要。本发明人的研究旨在通过应用注射用重组人IL-2 (Recombinant human interleukin-2, rhIL-2)免疫调节治疗系统性红斑狼疮等自身免疫性疾病患者，并 发现应用低剂量的IL-2治疗病情活动的SLE患者有较好的疗效和安全性，可能通过上调了 Treg和抑制Tfh及Thl7细胞的功能有关，纠正了患者体内的免疫细胞失衡状态，从上游调 靶向调节T细胞，提供了系统性红斑狼疮、类风湿关节炎、干燥综合征等免疫性疾病新的治 疗手段。
[0007] 发明概述
[0008] 本发明的目是提供一种安全有效的自身免疫性疾病的免疫治疗方法。
[0009] 在系统性红斑狼疮的治疗中，发明人发现小剂量应用IL-2 (60万U/米2,皮下注 射，隔日给药），2周为一个疗程，间歇2周后进行第二个疗程。患者4-10周后不仅可以使 患者的临床症状得到显著改善，包括免疫相关的发热、皮疹、血液系统异常，而且改变患者 体内的T细胞水平（Treg细胞上调，Tfh和Tfhl7细胞下调），多种自身抗体，如抗dsDNA， 抗核小体抗体的滴度随治疗逐渐下降，反映病情活动度SLEDAI评分也明显减低，达到病情 缓解率高。对于SS和RA患者也具有相应的疗效。因此，低剂量IL-2治疗SLE，RA和SS等 免疫性疾病具有较好的疗效和安全性，是临床上治疗该病的新的免疫治疗方法。
[0010] 本发明目的是提供SLE、SS和RA等多种免疫性疾病治疗的新方法，靶向性的调节 异常的T细胞，从上游途径治疗疾病，调节免疫平衡。
[0011] 本发明所使用的IL-2可以是任何能够在患者体内发挥功能的IL-2,首选重组人 IL-2 (rhIL-2)，溶于灭菌注射用水或生理盐水，制剂形式是水溶液，其已经在临床上使用多 年，而且使用方便，适合临床的广泛推广。
[0012] 目前，美国FDA仅批准了重组人IL-2治疗肿瘤性疾病，且国际指南上应用较大剂 量的IL-2 (300-600万u/天）达到增加杀伤肿瘤细胞的作用。对于HIV等抗病毒感染的治 疗文献中，使用的剂量为1000万U/天。本发明所述的"低剂量"指的是30-100万U/米 2/ 天。与高剂量IL-2应用相比，低剂量的IL-2在临床上极少出现发热、皮疹等症状，也避免 了引起毛细血管渗漏综合征导致的低血压、休克、肾功能不全等药物不良反应；机制上为上 调调节性T细胞，而不增加引起炎症反应的效应性T细胞，比如Thl，Thl7等。
[0013] 本发明所述的"以免疫细胞失衡为基础的免疫系统疾病"，例如系统性红斑狼疮、 干燥综合征、类风湿关节炎、血管炎（白塞病、变应性肉芽肿性血管炎、肉芽肿性多血管炎、 结节性多动脉炎等）、强直性脊柱炎、炎症性肠病、皮肌炎和多肌炎等，是指由于自身抗原或 抗原肽暴露诱导的辅助性T细胞亢进，B细胞介导，产生多种自身抗体导致的多器官受累的 自身免疫性疾病。通过低剂量的IL-2的摄入，调节了失衡的辅助性T细胞体系，从而减少 自身抗体的产生及其对靶器官的攻击，从上游达到治疗免疫系统疾病的作用。
[0014] 综上所述，本发明涉及IL-2在制备治疗免疫系统疾病的药物中的应用，所述免疫 系统疾病是以免疫细胞失衡为基础的。
[0015] 本发明涉及IL-2在制备治疗免疫系统疾病的药物中的应用，其中所述免疫系统 疾病包括：系统性红斑狼疮、干燥综合征、类风湿关节炎、血管炎（白塞病、变应性肉芽肿性 血管炎、肉芽肿性多血管炎、结节性多动脉炎等）、强直性脊柱炎、炎症性肠病、皮肌炎和多 肌炎等。
[0016] 本发明涉及IL-2在制备治疗免疫系统疾病的药物中的应用，其中IL-2的作用制 是调节免疫细胞失衡，包括对Treg，Thl7和Tfh细胞的影响。
[0017] 本发明涉及IL-2在制备治疗免疫系统疾病的药物中的应用，其中所述药物是注 射剂。
[0018] 本发明涉及IL-2在制备治疗免疫系统疾病的药物中的应用，其中IL-2以低剂量 制备成药物。
[0019] 本发明涉及IL-2在制备治疗免疫系统疾病的药物中的应用，其中IL-2用于患者 时以低剂量给药。
[0020] 本发明涉及IL-2在制备治疗免疫系统疾病的药物中的应用，其中IL-2为人重组 IL-2,用药方案为低剂量：30-100万U/m2,连续或间隔应用。
[0021] 本发明涉及一种治疗免疫系统疾病的药物，所述免疫系统疾病是以免疫细胞失衡 为基础的，所述药物包括IL-2和药物上可接受的辅料或载体。进一步地，所述免疫系统疾 病包括：系统性红斑狼疮、干燥综合征、类风湿关节炎、血管炎（白塞病、变应性肉芽肿性血 管炎、肉芽肿性多血管炎、结节性多动脉炎等）、强直性脊柱炎、炎症性肠病、皮肌炎和多肌 炎等。
[0022] 本发明涉及一种治疗免疫系统疾病的药物，所述免疫系统疾病是以免疫细胞失衡 为基础的，所述药物包括IL-2和药物上可接受的辅料或载体,还包括其他协同治疗所述疾 病的药物，例如糖皮质激素。
【专利附图】
【附图说明】
[0023] 图1. SLE患者治疗前后患者皮疹的变化。
[0024] 图2.治疗前后SLE患者疾病活动度评分变化（SLEDAI) (η = 19)
[0025] 图3.治疗前后SLE患者自身抗体水平的变化（η = 19)
[0026] 注释：AnuA :抗核小体抗体；anti-dsDNA :抗dsDNA抗体。
[0027] 图4.流式结果显示Treg、Tfh和Thl7在治疗前后变化。（P均<0.05)。
[0028] 注释：Treg :调节性T细胞；Tfhem ;效应性滤泡辅助性T细胞；Thl7细胞：辅助性 Thl7细胞。
[0029] 图5. SS患者的外周血辅助性T细胞分析。
[0030] 注释：A-C为Treg的变化的分析及流式图，D为Tfh治疗前后的变化，E为Thl7在 治疗前后的变化。
【具体实施方式】
[0031] 实施例1药物使用方法和适用人群。
[0032] 使用方法：
[0033] 活动期或复发的患者在原治疗不变的基础上应用或者写应用中小剂量激素 (0. 1-0. 5mg/kg/d)联合重组人白细胞介素-2 60万U/米2,皮下注射，隔日一次，持续2周， 停2周，连续3个疗程。
[0034] 适用人群：
[0035] 自身免疫异常导致的免疫系统疾病，包括：系统性红斑狼疮、干燥综合征、类风 湿关节炎、血管炎（白塞病、变应性肉芽肿性血管炎、肉芽肿性多血管炎、结节性多动脉炎 等）、强直性脊柱炎、炎症性肠病、皮肌炎和多肌炎。
[0036] 禁忌症：
[0037] 1、严重的慢性肝、肾、心功能不全者。
[0038] 2、严重的耐药菌感染，如菌血症、败血症。
[0039] 实施例2低剂量IL-2治疗中重度SLE具有明显疗效。
[0040] 本研究共治疗了 19例SLEDAI大于8分的SLE患者。患者的治疗前如表1所列。 经过低剂量IL-2的治疗后，94.7% (η = 18)的狼疮病情缓解，患者无明显的不良反应。
[0041] 1、治疗前19例系统性红斑狼疮患者的临床和实验室特征
[0042] 表 L Clinical characteristics of the 19 Systemic Lupus Erythematosus patients.
[0043]
【权利要求】
1. IL-2在制备治疗免疫系统疾病的药物中的应用，所述免疫系统疾病是以免疫细胞失 衡为基础的。
2. 权利要求1的应用，其中所述免疫系统疾病包括：系统性红斑狼疮、干燥综合征、类 风湿关节炎、血管炎（白塞病、变应性肉芽肿性血管炎、肉芽肿性多血管炎、结节性多动脉 炎等）、强直性脊柱炎、炎症性肠病、皮肌炎和多肌炎等。
3. 权利要求1或2所述的应用，其中IL-2的作用制是调节免疫细胞失衡，包括对Treg， Thl7和Tfh细胞的影响。
4. 权利要求1或2的应用，其中所述药物是注射剂。
5. 权利要求1或2的应用，其中IL-2以低剂量制备成药物。
6. 权利要求1或2的应用，其中IL-2用于患者时以低剂量给药。
7. 权利要求1或2的应用，其中IL-2为人重组IL-2,用药方案为低剂量：30-100万U/ m2,连续或间隔应用。
8. -种治疗免疫系统疾病的药物，所述免疫系统疾病是以免疫细胞失衡为基础的，所 述药物包括IL-2和药物上可接受的辅料或载体。
9. 权利要求8的药物，其中所述免疫系统疾病包括：系统性红斑狼疮、干燥综合征、类 风湿关节炎、血管炎（白塞病、变应性肉芽肿性血管炎、肉芽肿性多血管炎、结节性多动脉 炎等）、强直性脊柱炎、炎症性肠病、皮肌炎和多肌炎等。
【文档编号】A61P37/02GK104189892SQ201410419793
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年8月22日 优先权日:2014年8月22日
【发明者】栗占国, 何菁, 余迪 申请人:北京大学人民医院