一种胰岛素淀粉样多肽抑制剂及其制备方法、应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及药物领域，具体涉及抑制剂1化合物，能治疗糖尿病。所述的抑制剂1序列为KATPIESHQVJAAEKRKC。所述抑制剂1的制备方法，采用Fmoc保护的固相合成技术制备，Rink酰氨MBHA树脂和Fmoc-Gly-Wang树脂作为载体，6-氯-1-羟基苯并三氮唑和N,N-二异丙基碳二亚胺为缩合剂，三氟乙酸为切割试剂。所述抑制剂1在预防或治疗糖尿病及糖尿病并发症中的应用。所述的糖尿病并发症是糖尿病肾病、糖尿病高血压、糖尿病眼疾、糖尿病神经性病变。抑制剂1可通过多种给药方式预防或治疗糖尿病及糖尿病并发症，包括皮下或肌肉注射，静脉注射或者静脉滴注，口服给药如药丸、胶囊等，鼻喷剂等。本发明中的胰岛淀粉样多肽抑制剂1，可以靶向抑制胰岛淀粉样多肽形成，达到预防或治疗糖尿病的效果。
【专利说明】一种胰岛素淀粉样多肽抑制剂及其制备方法、应用
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及药物领域，具体涉及用于治疗糖尿病的多肽化合物。
【背景技术】
[0002] 糖尿病是一组以高血糖为特征的代谢性疾病，是由于胰岛素不足或胰岛素的细胞 代谢作用缺陷所引起的葡萄糖、蛋白质及脂质代谢紊乱的一种综合症。近年来，糖尿病患者 的人数逐渐增多，分为I型糖尿病和II型糖尿病。其中II型糖尿病患者的人数占糖尿病 总人数的85-90%，严重威胁着病人的健康和生命。如果糖尿病得不到良好的控制，可能引 起很多并发症，例如：糖尿病肾病、视网膜病变、高血压等。
[0003] 近期的研究表明在2型糖尿病的病发过程中，不断增长的β-细胞凋亡是导致β-细胞衰退和高血糖症发生的主要原因。目前，大多数患者通过口服降糖药物来帮助控制 体内血糖，但是却无法提高β-细胞的活性，促进胰岛素的分泌，很多患者最终仍然要使用 胰岛素治疗。
[0004] 胰岛淀粉样变性与糖尿病之间存在联系。胰岛淀粉样多肽的纤维丝形成会通过细 胞凋亡导致β-细胞死亡，淀粉样沉积可能直接会杀死细胞。抑制胰岛淀粉样多肽形成，可 以减少胰岛淀粉样多肽对β-细胞的细胞毒性，促进胰岛素的分泌。因此，胰岛淀粉样多肽 抑制认为是治疗糖尿病的靶点。尽管如此，并没有成熟开发的胰岛淀粉样多肽抑制剂问世， 用于预防或治疗糖尿病。
【发明内容】
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[0005] 本发明目的是针对现有降血糖的药物的特点，设计一种抑制剂，能有效治疗糖尿 病。
[0006] 技术方案
[0007] -种胰岛淀粉样多肽抑制剂1，其序列为KATPIESHQVAAEKRKC。所述抑制剂1的制 备方法，其特征在于：采用Fmoc保护的固相合成技术制备，采用Fmoc保护的固相合成技术 制备，Rink酰氨MBHA树脂和Fmoc-Gly-Wang树脂作为载体，6-氯-1-羟基苯并三氮唑和 N，N-二异丙基碳二亚胺为缩合剂，三氟乙酸为切割试剂。所述抑制剂1在预防或治疗糖尿 病及糖尿病并发症中的应用。所述的糖尿病并发症是糖尿病肾病、糖尿病高血压、糖尿病眼 疾、糖尿病神经性病变。抑制剂1可通过多种给药方式预防或治疗糖尿病及糖尿病并发症， 包括皮下或肌肉注射，静脉注射或者静脉滴注，口服给药如药丸、胶囊等，鼻喷剂等。
[0008] 有益结果：
[0009] 本发明中的胰岛淀粉样多肽抑制剂1，可以靶向抑制胰岛淀粉样多肽形成，达到预 防或治疗糖尿病的效果。更优选是治疗糖尿病和/或糖尿病并发症药物中的用途。所述的 糖尿病包括I型糖尿病和Π型糖尿病；所述的糖尿病并发症包括但不限于：糖尿病肾病、 糖尿病高血压、糖尿病眼疾、糖尿病神经性病变等。
【具体实施方式】
[0010] 实施例1
[0011] 多肽的化学合成方法
[0012] 抑制剂1用Fmoc保护的固相合成技术制备。合成反应按照抑制剂1序列从C端 向N端进行，Rink醜氨MBHA树脂和Fmoc-Gly-Wang树脂作为载体（可在AdvancedChem Tech公司购得）上有自由氨基。每一步连接过程中，氨基酸残基都要活化，活化混合物中有 4倍于载体上自由氨基的HBTU，H0Bt，DIEA和Fmoc-氨基酸。用6-氯-1-羟基苯并三氮唑 和N，N-二异丙基碳二亚胺为缩合剂，进行连接反应，每次氨基酸的连接反应之后，用吡啶/ 醋酸/N-甲基咪唑（4:1:0.5)的混合物来封闭未连接的自由氨基，封闭反应10分钟。下一 个氨基酸连接之前，都要把载体上的Fmoc-基团去掉，去Fmoc-基团使用含20%哌啶的二甲 基甲酰胺，需15分钟。最后，当所有氨基酸残基顺序连接之后，抑制剂1用98%三氟乙酸从 载体上切割下来，切割在室温下进行2小时。
[0013] 应用上述化学条件可合成并获得抑制剂1，序列为KATPIESHQVJAAEKRKC，该序列 为全新序列。也可委托上海生工合成。
[0014] 实施例2
[0015] 胰岛淀粉样多肽抑制剂1的体外细胞凋亡的测定
[0016] 本实验研究了胰岛素淀粉样多肽抑制剂1抑制胰岛瘤细胞（INS-1细胞）凋亡的 作用。当细胞用10μmol/L胰岛素样淀粉多肽处理后，经TUNEL染色后发现与培养基对照组 相比出现了很多绿色亮点，说明体系中存在凋亡的细胞。当20ymol/L胰岛素淀粉样多肽 抑制剂1与胰岛素淀粉样多肽共孵育后，镜检看到比单纯加胰岛素样淀粉多肽的对照组较 少的绿色亮点。对拍摄照片进行计数并统计后，发现用lOumol/L胰岛素样淀粉多肽处理 的细胞凋亡率约为76. 3 %，而20μmol/L抑制剂1与胰岛素样淀粉多肽共同处理的细胞凋 亡率减少到35. 5 % (p〈0. 05)。并且只用20μmol/L抑制剂1处理的细胞的凋亡情况与培 养基对照组并无明显差别，说明抑制剂1显著减少了胰岛素样淀粉多肽诱导的细胞凋亡， 但此浓度的抑制剂1自身对细胞没有毒性作用。
[0017] 实施例3
[0018] 胰岛淀粉样多肽抑制剂1的体内降糖实验
[0019] 昆明小鼠，高脂高糖喂养至体重18?22g，雌雄各半，实验前禁食不禁水24h，腹腔 一次性注射链脲佐菌素（STZ) 50mg/kg(1 %的柠檬酸盐缓冲液溶解配制）。1周后小鼠尾静 脉采血测血糖（BS)，BS高于16mmol/L为造模成功。造模后将小鼠分为3组，每组10只， 糖尿病模型组（DM组）：给予等量的PBS缓冲液皮下注射；对照组（胰岛素）：20μg/kg皮 下注射给药（溶于0.lmol/LPBS缓冲液），一天两次，连续12d;样品组（胰岛淀粉样多肽 抑制剂1):同对照组；另取10只正常小鼠做为空白组。用药后第12d于尾静脉取血快速测 量血糖。12d之后，在停药1周后，禁食不禁水16小时进行葡萄糖耐量试验。用25%葡萄 糖溶液（2g/kg)灌胃，灌胃后0、120分钟尾静脉取血检测血糖。
[0020] 结果：胰岛淀粉样多肽抑制剂1具有降低糖尿病模型小鼠血糖的作用（P〈〇. 05,表 1);同时，可以缓解糖尿病模型小鼠的糖耐量（表2)。其抑制剂1的作用与对照组胰岛素 作用相当。
[0021] 表1胰岛淀粉样多肽抑制剂1对小鼠降血糖作用
[0022]
[0023]
【权利要求】
1. 一种胰岛淀粉样多肽抑制剂，其特征在于：其氨基酸序列为KATPIESHQVAAEKRKC。
2. -种权利要求1所述抑制剂的制备方法，其特征在于：采用Fmoc保护的固相合成 技术制备，Rink酰氨MBHA树脂和Fmoc-Gly-Wang树脂作为载体，6-氯-1-羟基苯并三氮 唑和N，N-二异丙基碳二亚胺为缩合剂，三氟乙酸为切割试剂。
3. 根据权利要求1所述抑制剂在制备预防或治疗糖尿病及糖尿病并发症药物中的应 用。
4. 根据权利要求3的用途，其特征在于所述的糖尿病并发症是糖尿病肾病、糖尿病高 血压、糖尿病眼疾、糖尿病神经性病变。
5. 根据权利要求4所述的抑制剂的用途，其特征在于：通过多种给药方式预防或治疗 糖尿病及糖尿病并发症，包括皮下或肌肉注射，静脉注射或者静脉滴注，口服给药如药丸、 胶囊，鼻喷剂。
【文档编号】A61P3/10GK104327162SQ201410508632
【公开日】2015年2月4日 申请日期:2014年9月28日 优先权日:2014年9月28日
【发明者】罗瑞雪 申请人:苏州普罗达生物科技有限公司