一种凝血酶抑制及其制备方法、应用的制作方法
【专利摘要】本发明涉及药物领域，具体涉及预防和治疗或预防动脉粥样硬化的多肽化合物。凝血酶抑制多肽1，其特征在于：其序列为ETARTPRADDGKLAAAACLEGNCAE。采用Fmoc保护的固相合成技术制备。可共价连接一个佐剂，佐剂是牛血清白蛋白，人血清白蛋白，或聚乙二醇。凝血酶抑制多肽1在治疗动脉粥样硬化相关疾病中的应用。所述的动脉粥样硬化相关疾病是心绞痛、心肌梗塞、心律失常、脑卒中、脑萎缩、顽固性高血压、肾功能不全等病变。可通过多种给药方式治疗动脉粥样硬化相关疾病，包括皮下或肌肉注射，静脉注射或者静脉滴注，口服给药如药丸、胶囊等，鼻喷剂等。本发明中的凝血酶抑制多肽1可以靶向抑制凝血酶，抑制凝血，达到预防或治疗动脉粥样硬化的作用。
【专利说明】一种凝血酶抑制及其制备方法、应用
【技术领域】：
[0001] 本发明涉及药物领域，具体涉及用于预防和治疗或预防动脉粥样硬化的多肽化合 物。
【背景技术】：
[0002] 动脉粥样硬化（Atherosclerosis)是由于脂肪、血栓、结缔组织和碳酸钙在血管 (主要是动脉，但也包括静脉）沉积所造成的一种对人体有害的状态。其特点是动脉管壁增 厚变硬、失去弹性和管腔缩小。动脉粥样硬化的症状主要决定于血管病变及受累器官的缺 血程度，主动脉粥样硬化常无症状，冠状动脉粥样硬化者，若管径狭窄达75%以上，则可发 生心绞痛、心肌梗塞、心律失常，甚至猝死。脑动脉硬化可引起脑缺血、脑萎缩，或造成脑血 管破裂出血，肾动脉粥样硬化常引起夜尿、顽固性高血压、严重者可有肾功能不全。肠系膜 动脉粥样硬化可表现为饱餐后腹痛便血等症状。下肢动脉粥样硬化引起血管腔严重狭窄者 可出现间歇性跛行、足背动脉搏动消失，严重者甚至可发生坏疽。动脉粥样硬化是一组称为 动脉硬化的血管病中最常见、最重要的一种。
[0003] 目前预防和治疗动脉粥样硬化的药物，主要为针对控制易患因素。如患有糖尿病、 应及时控制血糖，包括饮食控制。2型糖尿病的降糖药物应以不引起高胰岛素血症为宜如达 美康等；如有高血压则应给降压药，使血压降至适当水平，如有血胆固醇增高，则应控制高 胆固醇适当给予降脂药物。
[0004] 凝血酶能使纤维蛋白原转化成纤维蛋白。血管内促进血栓的形成，引起动脉粥样 硬化。我们的实验表明，采用凝血酶抑制剂可以控制血管内动脉粥样硬化血栓的形成，能有 效抑制动脉粥样硬化斑块的形成。这是一个治疗动脉粥样硬化的新靶点。
[0005] 现阶段，没有成熟开发的凝血酶抑制剂问世，用于治疗动脉粥样硬化。
【发明内容】
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[0006] 本发明目的是针对现有治疗动脉粥样硬化药物的特点，设计一种多肽化合物，能 有效治疗或预防动脉粥样硬化。
[0007] 技术方案
[0008] 凝血酶抑制多肽1，其特征在于：其序列为ETARTPRADDGKLAAAACLEGNCAE。采用 Fmoc保护的固相合成技术制备。可共价连接一个佐剂，佐剂是牛血清白蛋白，人血清白蛋 白，或聚乙二醇。凝血酶抑制多肽1在治疗动脉粥样硬化相关疾病中的应用。所述的动脉 粥样硬化相关疾病是心绞痛、心肌梗塞、心律失常、脑卒中、脑萎缩、顽固性高血压、肾功能 不全等病变。可通过多种给药方式治疗动脉粥样硬化相关疾病，包括皮下或肌肉注射，静脉 注射或者静脉滴注，口服给药如药丸、胶囊等，鼻喷剂等。
[0009] 有益结果：
[0010] 本发明中的凝血酶抑制多肽1可以靶向抑制凝血酶，抑制凝血，达到预防或治疗 动脉粥样硬化的作用。更优选是治疗动脉粥样硬化相关疾病药物中的用途。所述的脉粥样 硬化相关疾病包括心绞痛、心肌梗塞、心律失常、脑卒中、脑萎缩、顽固性高血压、肾功能不 全等病变。
【具体实施方式】
[0011] 实施例1
[0012] 多肽的化学合成方法
[0013] 多肽1用Fmoc保护的固相合成技术制备。合成反应按照多肽1序列从C端向N 端进行，Rink介质（可在Advanced Chem Tech公司购得）上有自由氨基。每一步连接过 程中，氨基酸残基都要活化，活化混合物中有4倍于介质上自由氨基的HBTU，HOBt，DIEA和 Fmoc-氨基酸。每次氨基酸的连接反应之后，都用一个吡啶/醋酸/N-甲基咪唑（4:1:0.5) 的混合物来封闭未连接的自由氨基，封闭反应10分钟。每次氨基酸的连接反应之后，下一 个氨基酸连接之前，都要把介质上的Fmoc-基团去掉，去Fmoc-基团使用含20 %哌啶的二甲 基甲酰胺，需15分钟。最后，当所有氨基酸残基顺序连接之后，多肽1用98%三氟乙酸从介 质上切割下来，切割在室温下进行2小时。
[0014] 应用上述化学条件可合成并获得多肽1，序列为ETARTPRADDGKLAAAACLEGNCAE，该 序列为全新序列。
[0015] 实施例2
[0016] 凝血酶抑制多肽1对小鼠动脉粥样硬化模型的影响
[0017] 建立小鼠动脉粥样硬化模型。雄性8周龄的C57BL/6J小鼠40只，随机分为4组， 分别为：A组为空白对照组：普通饲料喂养；B组为模型对照组：造模+高脂饲料喂养；C组 为药物干预组：造模+高脂饲料+凝血酶抑制多肽1 (l〇mg/kg/d) ;D为阳性药干预组：造模 +高脂饲料+瑞舒伐他汀片（l〇mg/kg/d)。连续12周。A组小鼠饲料为普通饲料，B、C、D 组小鼠用高脂高胆固醇饲料（含15%猪油+0. 25%胆固醇）喂养，以加速动脉粥样硬化模 型的形成。12周后，记录小鼠体重，检测多肽1对血清胆固醇的影响：血清总胆固醇（total cholesterol, TC)、甘油三酯（tryglyeride, TG)、高密度脂蛋白胆固醇（high density lipoprotein cholesterol, HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇（low density lipoprotein cholesterol，HDL-C)的水平；，检测小鼠主动脉粥样硬化形成情况：对小鼠主动脉大体和 主动脉根部冰冻切片行油红〇染色，对动脉粥样斑块面积进行定量。
[0018] 结果：各组实验小鼠实验期间体重都有增长趋势。随着喂养时间的变化，高脂饮食 喂养组的体重增长较正常饮食组快（P〈〇. 05,见表1)。多肽1组小鼠体重增长与正常饮食 组相当（P>〇. 05)，与模型组相比体重较轻（P〈0. 05)。多肽1组与高脂高胆固醇喂养的模型 小鼠组相比，TG、TC、HDL-C、LDL-C水平显著降低（P〈0. 01，见表2)，动脉粥样斑块面积显著 性减小（P〈0. 01，见表3)，与模型对照组比较差异均有统计学意义。
[0019] 表1凝血酶抑制多肽1对小鼠动脉粥样硬化模型小鼠体重的影响
[0020]
【权利要求】
1. 一种凝血酶抑制多肽，其特征在于：其序列为ETARTPRADDGKLAAAACLEGNCAE。
2. -种权利要求1所述多肽的制备方法，其特征在于：采用Fmoc保护的固相合成技 术制备。
3. 根据权利要求2所述的多肽的制备方法，其特征在于：共价连接一个佐剂，佐剂是牛 血清白蛋白，人血清白蛋白，或聚乙二醇。
4. 一种权利要求1所述的多肽在制备治疗动脉粥样硬化相关疾病中药物的应用。
5. 根据权利要求4的用途，其特征在于所述的动脉粥样硬化相关疾病是心绞痛、心肌 梗塞、心律失常、脑卒中、脑萎缩、顽固性高血压、肾功能不全。
6. 根据权利要求4所述的多肽1的用途，其特征在于：通过多种给药方式治疗动脉粥 样硬化相关疾病，包括皮下或肌肉注射，静脉注射或者静脉滴注，口服给药如药丸、胶囊等， 鼻喷剂。
【文档编号】A61P9/12GK104193809SQ201410508635
【公开日】2014年12月10日 申请日期:2014年9月28日 优先权日:2014年9月28日
【发明者】罗瑞雪 申请人:苏州普罗达生物科技有限公司