本发明涉及一种创伤敷料的制备方法，具体是一种纳米银颗粒蚕茧茧壳创伤敷料的制备方法。
背景技术：
皮肤作为人体最大的器官，当外因造成皮肤的大面积损伤，如灼伤、溃疡或急性创伤时，需尽快覆盖皮肤创面以减少蛋白质、血红细胞等体液的流失。因此，开发出防止受损皮肤感染和脱水的新材料迫在眉睫。传统的干态敷料如脱脂棉、天然或合成的绷带和纱布在伤口愈合的初始阶段非常重要，但是这些敷料是干态的，不能为伤口愈合提供一个有利的湿润环境，而且这些干态的敷料也常常容易与伤口粘结在一起，容易造成二次创伤。受到湿润伤口愈合理念的激发，已经开发出各种各样的湿态敷料。其中，水凝胶已经被国内外的研究机构高度重视，因为水凝胶可以在伤口的界面维持湿润的愈合环境，可允许气体交换，可作为微生物的障碍，可去除多余的渗出液，具有极好的生物相容性，促进伤口快速愈合，很容易去除，不会造成二次创伤。
最近10多年来，组织工程的迅猛发展，使得研究开发具有良好生物相容性的、在植入体内后可自行生物降解的、可用于器官和软、硬组织的重建与修复的组织工程材料成为可能。创面生物敷料分为动物皮敷料和非动物皮敷料。动物皮敷料如自体皮、同种异体皮、异种皮；非动物皮敷料主要包含胶原、甲壳素(壳聚糖)、海藻酸纤维生物、丝素、细菌纤维素类医用敷料以及蜂蜜生物敷料等，通常的做法是将上述材料的一种或者几种进行混合后，并适当交联后，成型得到的创伤敷料。这些方法，所得到的创伤敷料结构单一，并且处理过程程序繁琐，耗时，效果都不太理想，并且抗菌效果都不太好，使用这些抗菌效果不好的创伤敷料时，需要额外使用抗生素，这容易产生耐药性。
技术实现要素：
本发明所要解决的技术问题是提供一种操作简单，流程短，成本低，基本保留了蚕茧茧壳的天然结构以保证敷效，并原位还原出银纳米颗粒负载在蚕茧敷料的表面，从而提高蚕茧敷料的抗菌性和促进伤口愈合能力的纳米银颗粒蚕茧茧壳创伤敷料的制备方法。
本发明解决上述技术问题的技术方案如下：一种纳米银颗粒蚕茧茧壳创伤敷料的制备方法，包括以下步骤：
S1、将蚕茧除去表面茧衣，切开两端，去除蚕蛹，而后在蚕茧中间纵向切开，将其呈片状展开；
S2、取一内置有CaCl2∶乙醇∶H2O摩尔比为1∶2∶8的丝胶溶解液的容器，将片状的蚕茧按1∶50～1∶200的浴比放入所述丝胶溶解液中，而后将所述容器置于水浴锅中进行50℃～75℃的热处理，待片状的蚕茧变成透明状态的一层茧膜后将其取出，并立即放入15℃～25℃常温的超纯水中清洗，洗去所述茧膜上附着的所述丝胶溶解液的溶质CaCl2和乙醇；
S3、取0.005～0.03g/mL的硝酸银溶液400～1200μL加入装有20mL去离子水的培养皿中，将所述茧膜浸润在培养皿的溶液里，并在室温光照下反应2～4h，利用所述茧膜表面的丝胶蛋白将所述硝酸银溶液中的银离子原位还原生成银纳米颗粒并负载在所述茧膜表面，而后将表面负载有银纳米颗粒的所述茧膜取出，用去离子水冲洗洗去其表面的硝酸银溶液；
S4、将表面负载有银纳米颗粒的所述茧膜经过真空冷冻干燥得到纳米银颗粒蚕茧茧壳创伤敷料。
本发明的有益效果是：操作简单，流程短，成本低，基本保留了蚕茧茧壳的天然结构以保证敷效，并原位还原出银纳米颗粒负载在蚕茧敷料的表面，从而提高蚕茧敷料的抗菌性和促进伤口愈合能力。
优选地，S2中所述容器置于水浴锅中进行至少20～80min的50～75℃的热处理，确保片状的蚕茧能够变成透明状态的一层茧膜。
优选地，S2中热处理完成的茧膜在超纯水中清洗至少5min，确保茧膜上附着的所述丝胶溶解液的溶质被清洗彻底，保证敷料的敷效。
优选地，S2中所述容器为烧杯，确保片状的蚕茧在所述容器内被所述水浴锅进行热处理的可靠性。优选地，S3中的室温为20～25℃，确保所述茧膜表面的丝胶蛋白与硝酸银溶液中的银离子原位还原反应稳定可靠。
优选地，S3中用去离子水冲洗1～2次洗去表面负载有纳米银颗粒的所述茧膜表面的硝酸银溶液，确保表面负载有纳米银颗粒的所述茧膜纯净，不影响其敷效。
附图说明
图1为本发明实施例2获得的纳米银颗粒蚕茧茧壳创伤敷料的电镜图(图中黑块为纳米银颗粒)。
具体实施方式
以下结合附图对本发明的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本发明，并非用于限定本发明的范围。
实施例1，一种纳米银颗粒蚕茧茧壳创伤敷料的制备方法，包括以下步骤：
S1、将蚕茧除去表面茧衣，切开两端，去除蚕蛹，而后在蚕茧中间纵向切开，将其呈片状展开；
S2、取一内置有CaCl2∶乙醇∶H2O摩尔比为1∶2∶8的丝胶溶解液的烧杯，将片状的蚕茧按1∶50的浴比放入所述丝胶溶解液中，而后将所述烧杯置于水浴锅中进行80min的50℃的热处理，待片状的蚕茧变成透明状态的一层茧膜后将其取出，并立即放入20℃常温的超纯水中清洗5min，洗去所述茧膜上附着的所述丝胶溶解液的溶质CaCl2和乙醇；
S3、取0.005g/mL的硝酸银溶液1200μL加入装有20mL去离子水的培养皿中，将所述茧膜浸润在培养皿的溶液里，并在室温光照下反应2h，利用所述茧膜表面的丝胶蛋白将所述硝酸银溶液中的银离子原位还原生成银纳米颗粒并负载在所述茧膜表面，而后将表面负载有银纳米颗粒的所述茧膜取出，用去离子水冲洗2次洗去其表面的硝酸银溶液；
S4、将表面负载有银纳米颗粒的所述茧膜经过真空冷冻干燥得到纳米银颗粒蚕茧茧壳创伤敷料。
实施例2，一种纳米银颗粒蚕茧茧壳创伤敷料的制备方法，包括以下步骤：
S1、将蚕茧除去表面茧衣，切开两端，去除蚕蛹，而后在蚕茧中间纵向切开，将其呈片状展开；
S2、取一内置有CaCl2∶乙醇∶H2O摩尔比为1∶2∶8的丝胶溶解液的烧杯，将片状的蚕茧按1∶120的浴比放入所述丝胶溶解液中，而后将所述烧杯置于水浴锅中进行50min的60℃的热处理，待片状的蚕茧变成透明状态的一层茧膜后将其取出，并立即放入20℃常温的超纯水中清洗6min，洗去所述茧膜上附着的所述丝胶溶解液的溶质CaCl2和乙醇。
S3、取0.01g/mL的硝酸银溶液800μL加入装有20mL去离子水的培养皿中，将所述茧膜浸润在培养皿的溶液里，并在室温光照下反应3h，利用所述茧膜表面的丝胶蛋白将所述硝酸银溶液中的银离子原位还原生成银纳米颗粒并负载在所述茧膜表面，而后将表面负载有银纳米颗粒的所述茧膜取出，用去离子水冲洗2次洗去其表面的硝酸银溶液。
S4、将表面负载有银纳米颗粒的所述茧膜经过真空冷冻干燥得到纳米银颗粒蚕茧茧壳创伤敷料。
实施例3，一种纳米银颗粒蚕茧茧壳创伤敷料的制备方法，包括以下步骤：
S1、将蚕茧除去表面茧衣，切开两端，去除蚕蛹，而后在蚕茧中间纵向切开，将其呈片状展开；
S2、取一内置有CaCl2∶乙醇∶H2O摩尔比为1∶2∶8的丝胶溶解液的烧杯，将片状的蚕茧按1∶200的浴比放入所述丝胶溶解液中，而后将所述烧杯置于水浴锅中进行20min的75℃的热处理，待片状的蚕茧变成透明状态的一层茧膜后将其取出，并立即放入20℃常温的超纯水中清洗7min，洗去所述茧膜上附着的所述丝胶溶解液的溶质CaCl2和乙醇；
S3、取0.03g/mL的硝酸银溶液400μL加入装有20mL去离子水的培养皿中，将所述茧膜浸润在培养皿的溶液里，并在室温光照下反应4h，利用所述茧膜表面的丝胶蛋白将所述硝酸银溶液中的银离子原位还原生成银纳米颗粒并负载在所述茧膜表面，而后将表面负载有银纳米颗粒的所述茧膜取出，用去离子水冲洗1次洗去其表面的硝酸银溶液；
S4、将表面负载有银纳米颗粒的所述茧膜经过真空冷冻干燥得到纳米银颗粒蚕茧茧壳创伤敷料。
实验案例1
取健康成年新西兰白兔12只，雌雄不限，体重2.5kg。动物术前2h禁饮食，用速眠新(0.1ml/kg)肌注麻醉。10min后麻醉起效。动物俯卧固定于手术台上，背部备皮消毒铺无菌巾，术前画线。沿画线切除全厚皮肤(保留筋膜)，无菌条件下别于白兔脊柱两侧各2.5cm直径的背部皮肤全层环形切除，形成直径1.5cm的圆形皮肤缺损创面2个，彻底止血，一组取实施例1制得的纳米银颗粒蚕茧茧壳创伤敷料平铺于创面上，轻压，使得材料与创面充分接触，注意与创面间不能产生气泡，边缘与周边皮肤间重合，其上分别覆盖单层油纱布、生理盐水纱布、无菌干纱布，每层厚度约为3～5mm，最后再以弹性绷带加压包扎。空白对照组以凡士林纱布代替，然后独笼饲养。并分别于术后3天，7天，14天处死实验兔，观察创面的愈合情况，并计算愈合面积率，覆盖有纳米银颗粒蚕茧茧壳创伤敷料的伤口愈合效果平均比空白在3天，7天，14天的分别要快19％，42％，250％。由此可知，实施例1制得的纳米银颗粒蚕茧茧壳创伤敷料具有明显的加速伤口愈合能力。
实验案例2
取健康成年新西兰白兔12只，雌雄不限，体重2.5kg。动物术前2h禁饮食，用速眠新(0.1ml/kg)肌注麻醉。10min后麻醉起效。动物俯卧固定于手术台上，背部备皮消毒铺无菌巾，术前画线。沿画线切除全厚皮肤(保留筋膜)，无菌条件下别于白兔脊柱两侧各2.5cm直径的背部皮肤全层环形切除，形成直径1.5cm的圆形皮肤缺损创面2个，彻底止血，并人为制造伤口感染，所切的每个伤口均涂抹浓度为1.0×108CFU mL-1的金黄葡萄球菌溶液1ml，24小时后，所以感染的伤口分成两组，一组取实施例1制得的纳米银颗粒蚕茧茧壳创伤敷料平铺于创面上，轻压，使得材料与创面充分接触，注意与创面间不能产生气泡，边缘与周边皮肤间重合，其上分别覆盖单层油纱布、生理盐水纱布、无菌干纱布，每层厚度约为3～5mm，最后再以弹性绷带加压包扎。另一组作为空白对照组以凡士林纱布代替，然后独笼饲养。并分别于术后3天，7天，14天处死实验兔，观察创面的愈合情况，并计算愈合面积率，覆盖有纳米银颗粒蚕茧茧壳创伤敷料的伤口愈合效果平均比空白在3天，7天，14天的分别要快14％，47％，270％。由此可知，实施例1制得的纳米银颗粒蚕茧茧壳创伤敷料对于感染伤口也具有明显的加速伤口愈合能力，且抗菌效果好。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。