本发明属于白藜芦醇生产提取纯化方法，特别涉及一种生产低农残、低大黄素含量的虎杖提取物的方法。
背景技术：
虎杖Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.是廖科植物虎杖属的植物，一般指其根，具有清热解毒，利湿退黄，散瘀止痛等功效，虎杖中主要含有虎杖苷，白藜芦醇（虎杖苷元）、大黄素等。白藜芦醇（虎杖苷元）又称为芪三酚，是生物活性很强的天然多酚类物质，抗氧化性极强，是肿瘤的化学预防剂，也是对降低血小板聚集，预防和治疗动脉粥样硬化、心脑血管疾病的化学预防剂；虎杖苷，又称白藜芦醇苷，可用于镇咳、调血脂、降低胆固醇、抗休克；大黄素也是一种多酚物质，具有泄下、抗菌、止咳、抗肿瘤、降血压等药理作用。
白藜芦醇结构式 虎杖苷结构式 大黄素结构式
虎杖提取物，是提取自虎杖根的提取物，目前主要出口欧美市场，由于大黄素有泻下作用，因此市场上主流规格除要求虎杖提取物中白藜芦醇、虎杖苷含量满足要求外，大黄素要求应≤2%，而且应满足欧美各项农残要求。为达到这一要求，目前生产厂家主要采用溶剂、树脂等分离脱除大黄素、农药，从而保留和提纯白藜芦醇、虎杖苷的方法，而本发明采用组织培养的方式，通过控制培养基的组成、培养时间，从而控制原料中大黄素处于很低的含量；另外，由于培养过程中，并不使用农药，所用物质也均是低农残含量物质，使得引入农药的途径均被堵死，因此得到的虎杖提取物也是低农残的。
MS培养基是用于植物组织培养的基础培养基，我们对其配方进行了改进，其改进后配方如下：
以上改进后MS配方的培养基正常情况下需要用去离子水稀释定容到1000mL，本发明在此之前先加入X溶液300-500mL，X溶液为人工种植虎杖根水提液上8号大孔树脂柱纯化白藜芦醇时，流出的上柱液和水洗脱液，这两种溶液在提取纯化白藜芦醇时往往都是舍弃不要的，而本发明变废为宝，从而使得资源得到了更充分的利用，节约了成本。经对比实验发现，使用改进MS+X培养基的，比仅使用市售MS培养基的，虎杖愈伤组织增殖快2倍以上。
鲜虎杖根中，一般含有大黄素0.2%～0.4%，白藜芦醇0.3-0.6%，而经过本专利方法3周组培得到的鲜虎杖根组织中，大黄素含量均低于0.02%，白藜芦醇含量却达到3%-4%。
虎杖人工种植时，要喷洒大量的农药，这些农药会残留在虎杖根中,而本发明组培过程中，并未引入新的农药，所用原料仅2种会带入农药，一是X溶液，但由于X溶液是水提上柱液和水洗脱液，而农药绝大多数均是脂溶性的，溶于水中的很少，即使含有农药，也被X溶液中的水稀释了10倍以上；二是最初残留在组培原始虎杖根组织中的农药，然而随着4次的扩繁增殖，即使不会在生长过程中降解，也已经被稀释了百倍以上，由此提取得到的提取物，农残含量肯定是极低的。
技术实现要素：
本发明的目的是提供一种生产低农残、低大黄素含量的虎杖提取物的方法。
本发明的技术方案概述如下：
1．一种生产低农残、低大黄素含量的虎杖提取物的方法，包括如下步骤：
（1）在超净台上，用消过毒的刀片取任意新鲜虎杖根组织块5～6mm，经过75%酒精、0.1%升汞处理灭菌，然后用无菌的去离子水洗净，放入改进MS+X的培养基上，放于25℃培养箱中，避光培养3周，然后切分生长良好的虎杖根愈伤组织，转换到新的MS+X的培养基上，按照同样的条件进行愈伤组织扩繁增殖培养，如此共扩繁增殖4次。所述改进MS+X的培养基，是在每配制1000mL的MS培养基时，用去离子水稀释到1000mL前，加入了300～500mL的X溶液；
（2）取扩繁增殖4次后培养得到的虎杖根组织，洗净培养基后打浆，加入95%乙醇，在55℃回流提取60分钟，虎杖根组织和95%乙醇的质量（kg）体积比（L）为1:3～5，过滤，如此提取2遍，合并2次滤液；
（3）将滤液减压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得虎杖提取物。
2．根据权利要求1一种生产低农残、低大黄素含量的虎杖提取物的方法，其特征在于所述X溶液为人工种植虎杖根水提液上8号大孔树脂柱纯化白藜芦醇时，流出的上柱液和水洗脱液，合并后搅拌均匀的溶液。
本发明的方法使用组培技术得到虎杖根的愈伤组织，使得大黄素和农残含量显著降低。
本发明使用正常以虎杖为原料提取纯化白藜芦醇时，废弃不要的上柱流出液和水洗脱液，不仅变废为宝，而且还提高了扩繁增殖的产量。
具体实施方式
下面通过具体的实施例说明本发明生产低农残、低大黄素含量的虎杖提取物的方法，下面的描述仅是为了使本领域的技术人员更好地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。
实施例1
生产低农残、低大黄素含量的虎杖提取物的方法，包括如下步骤：
（1）在超净台上，用消过毒的刀片取任意新鲜虎杖根组织块5～6mm，经过75%酒精、0.1%升汞处理灭菌，然后用无菌的去离子水洗净，放入改进MS+X的培养基上，放于25℃培养箱中，避光培养3周，然后切分生长良好的虎杖根愈伤组织，转换到新的改进MS+X的培养基上，按照同样的条件进行愈伤组织扩繁增殖培养，如此共扩繁增殖4次。所述改进MS+X的培养基，是在每配制1000mL的改进MS培养基时，用去离子水稀释到1000mL前，加入了300mL的X溶液；
（2）取扩繁增殖4次后培养得到的虎杖根组织，洗净培养基后打浆，加入95%乙醇，在55℃回流提取60分钟，虎杖根组织和95%乙醇的质量（kg）体积比（L）为1:3，过滤，如此提取2遍，合并2次滤液；
（3）将滤液减压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得虎杖提取物。白藜芦醇含量为33.6%，大黄素含量0.15%，检测出口欧美国家常检的191项农残，含量均小于等于0.01mg/kg。
实施例2
生产低农残、低大黄素含量的虎杖提取物的方法，包括如下步骤：
（1）在超净台上，用消过毒的刀片取任意新鲜虎杖根组织块5～6mm，经过75%酒精、0.1%升汞处理灭菌，然后用无菌的去离子水洗净，放入改进MS+X的培养基上，放于25℃培养箱中，避光培养3周，然后切分生长良好的虎杖根愈伤组织，转换到新的改进MS+X的培养基上，按照同样的条件进行愈伤组织扩繁增殖培养，如此共扩繁增殖4次。所述改进MS+X的培养基，是在每配制1000mL的改进MS培养基时，用去离子水稀释到1000mL前，加入了400mL的X溶液；
（2）取扩繁增殖4次后培养得到的虎杖根组织，洗净培养基后打浆，加入95%乙醇，在55℃回流提取60分钟，虎杖根组织和95%乙醇的质量（kg）体积比（L）为1:5，过滤，如此提取2遍，合并2次滤液；
（3）将滤液减压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得虎杖提取物。白藜芦醇含量为43.4%，大黄素含量为0.18%，检测出口欧美国家常检的191项农残，含量均小于等于0.01mg/kg。
实施例3
生产低农残、低大黄素含量的虎杖提取物的方法，包括如下步骤：
（1）在超净台上，用消过毒的刀片取任意新鲜虎杖根组织块5～6mm，经过75%酒精、0.1%升汞处理灭菌，然后用无菌的去离子水洗净，放入改进MS+X的培养基上，放于25℃培养箱中，避光培养3周，然后切分生长良好的虎杖根愈伤组织，转换到新的改进MS+X的培养基上，按照同样的条件进行愈伤组织扩繁增殖培养，如此共扩繁增殖4次。所述改进MS+X的培养基，是在每配制1000mL的改进MS培养基时，用去离子水稀释到1000mL前，加入了500mL的X溶液；
（2）取扩繁增殖4次后培养得到的虎杖根组织，洗净培养基后打浆，加入95%乙醇，在55℃回流提取60分钟，虎杖根组织和95%乙醇的质量（kg）体积比（L）为1:4，过滤，如此提取2遍，合并2次滤液；
（3）将滤液减压浓缩至糖度40%，喷雾干燥，即得虎杖提取物。白藜芦醇含量为32.8%，大黄素含量为0.17%，检测出口欧美国家常检的191项农残，含量均小于等于0.01mg/kg。