木香烃内酯在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用的制作方法

本发明涉及木香烃内酯在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。

背景技术：

糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病最易发生、也是最致命的并发症。许多临床和实验研究表明，我国DN在糖尿病中的发生率高达1/3-1/5。DN发病原因多样化，发病机理尚不明确。目前DN的治疗方法主要是控制血糖、血压、血脂，饮食调节等。祖国传统中医药具有多层次、多环节、多途径、多靶点作用的特点。从中药中寻找有效的抗糖尿病肾病的成分是很有前景的一条药物开发途径。木香为国内外常用药材，在我国始载于《神农本草经》，有行气止痛、温中和胃之功效，用于治疗胸腹胀痛、呕吐、腹泻、痢疾、里急后重、食积不消等症。近年来，随着木香植物化学成分、药理活性及临床应用等方面研究的日趋深入，已证明其在抗心血管疾病、抗炎、抗癌、抗溃疡、抗病原微生物以及其他多方面表现出了良好的药理活性。而目前，木香烃内酯在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用尚未见报道。

技术实现要素：

本发明的目的是克服现有技术的不足，提供木香烃内酯在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。

本发明的第二个目的是提供含木香烃内酯的药物制剂在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。

本发明的技术方案概述如下：

木香烃内酯在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。

含木香烃内酯的药物制剂在制备治疗糖尿病肾病药物中的应用。

所述制剂的剂型优选为片剂、冲剂、胶囊、散剂或注射剂。

实验结果证明，木香烃内酯对糖尿病肾病具有治疗效果。

附图说明

图1为各组大鼠肾脏组织HE染色：A为正常组；B为模型组；C为木香烃内酯低剂量组；D为木香烃内酯高剂量组。

图2为各组大鼠肾脏组织中的核内NF-кB p65、Nrf2蛋白变化情况，其中：1为正常组；2为模型组；3为木香烃内酯低剂量组；4为木香烃内酯高剂量组。

图3为各组大鼠肾脏组织中的胞浆IKKβ、HO-1蛋白变化情况，其中：1为正常组；2为模型组；3为木香烃内酯低剂量组；4为木香烃内酯高剂量组。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

木香烃内酯为市售。

药理实验

1.造模分组58只SD大鼠随机分出12只设为正常组正常饲养，其余给予高脂高糖饮食4周后，腹腔注射STZ(链脲佐菌素)(65mg/kg weighet)一次，注射后5天测量空腹(禁食8小时)血糖>14mmol/L为造模成功。共剔除7只，造模过程死亡2只，剩余37只随机分为模型组(13只)及木香烃内酯低、高剂量组(分别12只)。造模成功分组后开始给药。木香烃内酯低、高剂量组每天灌胃分别给予10，20mg/kg weight，正常组与模型组给予等量生理盐水。共给药8周。

2.标本获取与分析于给药后每周测定各组大鼠体重、血糖。给药8周后，10％水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，分离血清-80℃冻存，作相关指标测定；快速剥离双肾，切取部分肾脏组织，4％中性甲醛固定，做HE染色和天狼星红染色病理切片；剩余组织-80℃冻存作相关指标测定。

3.组织病理学观察固定的肾组织石蜡包埋，常规切片，参照Szapiel等方法，对肾组织HE染色和天狼星红染色，光镜下观察病理结果并照相(×200)。

4.测定大鼠血清和肾脏组织SOD、GSH及MDA含量使用检测试剂盒检测大鼠血清和肾脏组织SOD、GSH及MDA含量。

5.Western blot法测定大鼠肾脏组织中Nrf2、HO-1及NF-кB p65、IKKβ的表达取低温冰箱保存的肾脏组织200mg，用预冷的生理盐水冲洗后，在冰上研磨。利用核蛋白提取试剂盒提取总蛋白和核蛋白，BCA蛋白定量法测定蛋白浓度，各组样本分别取总蛋白100μg变性后进行十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳进行蛋白质分离。然后将蛋白质转移至聚偏二氟乙烯膜，将膜室温封闭5h。与特异性的一抗4℃孵育过夜，与二抗室温孵育2h后，化学发光法显影于X胶片扫描后，核内蛋白以Histone H作为标准内参，胞浆蛋白GAPDH采用Quantityone图像分析软件对蛋白条带进行分析。蛋白相对表达含量以目的蛋白条带的灰度值与内参蛋白条带的灰度值的比值表示。

6.ELISA法测定大鼠肾脏组织中IL-6、TNF-α的表达肾脏组织匀浆制取后ELISA法检测IL-6、TNF-α。具体方法依照ELISA试剂盒说明书进行。

药理实验结果

1.木香烃内酯对糖尿病肾病模型大鼠一般情况和体重的影响造模过程中死亡两只大鼠。分组后正常组大鼠一般情况良好，体重增加比较稳定；而模型组精神状态不佳，皮毛凌乱而无光泽，身体体态不佳，实验过程中死亡2只，体重在给予STZ后增加缓慢；木香烃内酯低、高剂量组与模型组相比上述症状显著减轻，且动物体重增加的趋势与正常组差异不明显。在实验过程中木香烃内酯低剂量组死亡一只动物，木香烃内酯高剂量组未出现动物死亡。(见表1)

表1各组大鼠体重变化情况(g，)

(*P<0.05,与正常组比较；▲P<0.05,与模型组比较)

2.木香烃内酯对糖尿病肾病模型大鼠病理改变的影响肉眼观察发现：正常组大鼠肾脏大小形状正常，暗红色，表面光滑,易剥离；模型组多数大鼠肾脏体积增大，外观苍白、质地变硬；而木香烃内酯低、高剂量组多数大鼠肾脏体积较DN组变小，但仍较模型组大鼠肾脏体积有所增大。

HE染色显示(见图1)：正常组大鼠肾小球结构清晰，细胞外基质(ECM)与系膜细胞分布正常，毛细血管管腔清晰，肾小球囊壁光滑，未见增生及纤维化表现，肾小管由单层立方上皮围成，管腔规则，间质无炎症细胞浸润；模型组大鼠肾小球体积明显增大，肾小球肿胀、充血，肾小球内细胞数目增多，肾小囊变窄，部分肾小球毛细血管丛出现明显的分叶状、结节状病变或弥漫性萎缩，部分肾小球系膜细胞增生、基底膜增厚及肾小球系膜区增宽，部分肾小管上皮细胞肿胀，空泡变性，管腔变窄，间质中有灶状淋巴细胞浸润及少量纤维组织增生；给药组尤其是高剂量组大鼠上述病变明显较模型组减轻，表现为肾小球体积轻度增大、充血，肾小球系膜轻度增宽，基底膜轻度增厚，未见肾小球囊粘连，肾小管上皮细胞肿胀较轻，部分贤间质中可见少量炎症细胞浸润。

3.木香烃内酯对糖尿病肾病模型大鼠空腹血糖的影响各组随机分组后各组血糖无明显差异。高脂高糖饮食4周后，造模的4组大鼠血糖均有升高但与正常组比较无统计学意义。给予STZ后除了正常组外，其他各组血糖值显著升高，模型组血糖逐步升高，治疗组血糖有所下降，与模型组相比有统计学意义，说明木香烃内酯有一定的降血糖作用。(见表2)

表2各组大鼠血糖变化情况(mmol/L，)

(*P<0.05,与正常组比较；▲P<0.05,与模型组比较)、

4.木香烃内酯对糖尿病肾病模型大鼠血清和肾脏SOD、GSH和MDA的影响

结果见表3、4，从表中可以看出模型组抗氧化因子SOD和GSH均显著减少，而在木香烃内酯高、低剂量组均可以显著提高血清和肾脏SOD和GSH的表达。相应的过度的氧化应急的产物MDA在模型组中增加，而木香烃内酯高、低剂量组均可以显著降低血清和肾脏MDA的含量。

表3各组大鼠血清SOD，GSH和MDA的变化情况

(*P<0.05,与正常组比较；▲P<0.05,与模型组比较)

表4各组大鼠肾脏SOD，GSH和MDA的变化情况

(*P<0.05,与正常组比较；▲P<0.05,与模型组比较)

5.木香烃内酯对糖尿病肾病模型大鼠肾脏炎性因子IL-6、TNF-α的影响用ELISA法检测各组肾脏组织中炎症关键因子IL-6、TNF-α的表达，发现模型组IL-6、TNF-α较正常组表达显著升高，说明模型组中肾脏组织有炎症反应；而木香烃内酯高、低剂量组均可以显著抑制糖尿病肾病模型大鼠肾脏炎性因子IL-6、TNF-α的表达，与模型组比较具有显著性差异(见表5)。

表5各组大鼠肾脏组织中的IL-6、TNF-α变化情况

(*P<0.05,与正常组比较；▲P<0.05,与模型组比较)

6.木香烃内酯对糖尿病肾病模型大鼠肾脏Nrf2，HO-1蛋白表达的影响为了观察木香烃内酯是否通过Nrf2通路来发挥抗氧化作用，本研究采用了Western-blot检测了Nrf2，HO-1蛋白的表达。结果如图2、3，表6所示，模型组中肾脏组织中的Nrf2，HO-1蛋白表达较正常组显著降低，而木香烃内酯高、低剂量组均可以显著增加糖尿病肾病模型大鼠肾脏Nrf2，HO-1蛋白的表达，与模型组比较具有显著性差异。

表6各组大鼠肾脏组织中的NF-кB p65、IKKβ、Nrf2，HO-1蛋白变化情况

(*P<0.05,与正常组比较；▲P<0.05,与模型组比较)

7.木香烃内酯对对糖尿病肾病模型大鼠肾脏NF-кB p65、IKKβ蛋白表达的影响结果如图2、3，表6所示模型组中肾脏组织中NF-кB p65的蛋白表达较正常组显著上调，伴随NF-кB p65的蛋白的上调IKKβ蛋白表达也显著升高；而木香烃内酯高、低剂量组均可以显著下调糖尿病肾病模型大鼠肾脏NF-кB p65、IKKβ蛋白的表达，与模型组比较具有显著性差异。

含木香烃内酯的药物制剂在制备治疗糖尿病肾病药物的应用。

制剂的剂型为片剂、冲剂、胶囊、散剂或注射剂。