本发明属于健康产品领域，涉及一种苁蓉提取物的制备方法，及其在抗疲劳方面的应用。本发明的提取物可以作为食品、保健食品、或药品使用。
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：疲劳是机体经过复杂的生理生化变化过程所导致的结果。从中枢神经系统到骨骼肌细胞再到细胞内的物质代谢过程，中间任何一个环节或者过程的综合变化都可造成疲劳。疲劳不但降低了机体原有的工作能力，而且提示着机体发展到一定程度的伤病状态。人体产生疲劳状态后，假如得不到及时的治疗和消除，将会逐渐积累，最终导致过劳，出现慢性疲劳综合征。现代社会许多人因为过度疲劳处于亚健康状态，严重影响了工作效率和生活质量。因此，寻找有效的抗疲劳药物是近年来卫生保健人员和科学工作者关注的热点。由于化学合成药品干扰人体的生理生化代谢，引起严重的毒副反应且研究代价昂贵，世界各国正把重点转向天然药物。在“人类回归大自然”的国际潮流中，我国悠久的传统药物学理论基础和实践经验以及丰富的中草药资源更是为世界瞩目，从中草药中寻找毒副作用小、安全有效的抗疲劳药物己成为药学界的研究热点。本发明旨在寻找一种具有较好抗疲劳功效的植物提取物，是以肉苁蓉为原料，肉苁蓉CistancheHerba又名金笋、地精、苁蓉、大芸，为列当科植物肉苁蓉CistanchedeserticolaY.C.Ma或管花肉苁蓉Cistanchetubulosa(Schrenk)Wight的干燥带鳞叶的肉质茎，主产于内蒙古、甘肃、新疆、青海等地。始载于《神农本草经》，列为上品，其后古典《本草经疏》、《本草汇言》、《月华子本草》等多有记载。李时珍曰：“此物补而不峻，故有从容之兮”。肉苁蓉味甘、咸，性温，具有补肾阳、益精血、润肠通便的功能，在我国已有两千多年的使用历史。现代药理学表明，肉苁蓉除作为传统的补肾壮阳中药外，更兼具有抗衰老、增强记忆、提高免疫力等多种功能。本发明使用特殊工艺制备得到苁蓉提取物，经体内生物活性实验证实其具有显著的抗疲劳功效。技术实现要素：本发明公开了一种苁蓉提取物的制备方法及其用途，将肉苁蓉肉质茎晾干粉碎后，使用酶提取法获得具有生物活性的苁蓉提取物，该提取物可以用作食品、保健食品以及药品。本发明种的制备工艺是经过长期的科学研究而总结出来的，其特点在于工艺简单、经济，绿色环保，同时用于大规模生产。为达到上述目的，本发明是通过下述方法实现的：一种肉苁蓉提取物，其通过下述方法制备得到：将肉苁蓉鲜品或干品与水混合，进行酶提取，提取液浓缩至约30℃时的相对密度为1.05～1.10g/mL，经干燥得到提取物。肉苁蓉选用地上或地下部分，其中地上部分优选自叶、花、茎或种子。优选地，肉苁蓉肉质茎部分晾干后，粉碎、过筛，加水搅拌，调节温度和pH，加入生物蛋白酶进行酶解提取，提取完成后，煮沸，离心、过滤，上清液经浓缩干燥，得到土黄色苁蓉提取物。优选地，(1)将肉苁蓉药材中的肉质茎部分晾干并粉碎，过40目以上筛网从而获得苁蓉药粉。(2)将一定量的苁蓉药粉与纯化水按质量比为1∶10～1∶20混合，加入药粉质量的0.1％～0.5％的生物蛋白酶，调节pH至5～9，恒温40～55℃搅拌3～6h；(3)提取完成后，将步骤(2)中的药材提取液煮沸5～10min，待冷却至室温，离心过滤，滤液待用；(4)将步骤(3)中的滤液在温度为50～60℃浓缩至约30℃时的相对密度为1.05～1.10g/mL，经干燥得到土黄色苁蓉提取物；所述苁蓉提取物的收率不低于40％。优选步骤(3)中的滤液浓缩前为50～60℃优选地，所述的生物蛋白酶选自食品级的中性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40万u/g)、菠萝蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、碱性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一种或者它们的混合物，优选地使用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或者它们的混合物；优选地，所述的浓缩方法可以为膜浓缩、减压浓缩、常压浓缩；优选地，所述的干燥方法可以为喷雾干燥、真空干燥、加热干燥、冷冻干燥。本发明还提供了一种肉苁蓉提取物的提取方法，其包括下述步骤：将肉苁蓉鲜品或干品与水混合，进行酶提取，提取液浓缩至约30℃时的相对密度为1.05～1.10g/mL，经干燥得到提取物。优选地，所述提取方法包括下述步骤：(1)将肉苁蓉药材中的肉质茎部分晾干并粉碎，过40目以上筛网从而获得苁蓉药粉；(2)将一定量的苁蓉药粉与纯化水按质量比为1∶10～1∶20混合，加入药粉质量的0.1％～0.5％的生物蛋白酶，调节pH至5～9，恒温40～55℃搅拌3～6h；(3)提取完成后，将步骤(2)中的药材提取液煮沸5～10min，待冷却至室温，离心过滤，滤液待用；(4)将步骤(3)中的滤液在温度为50～60℃浓缩至约30℃时的相对密度为1.05～1.10g/mL，经干燥得到土黄色苁蓉提取物；所述苁蓉提取物的收率不低于40％。优选地，所述的生物蛋白酶选自食品级的中性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40万u/g)、菠萝蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、碱性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一种或者它们的混合物，优选地使用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或者它们的混合物；优选地，所述的浓缩方法可以为膜浓缩、减压浓缩、常压浓缩；优选地，所述的干燥方法可以为喷雾干燥、真空干燥、加热干燥、冷冻干燥。本发明还提供了一种组合物，其含有上述提取物，和可药用或食用辅料；可为任意剂型，优选其是片剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、微丸剂、滴丸剂、糖浆剂、散剂、浸膏剂、煎膏剂、口服液体制剂及其他药学上可以接受的剂型。所述提取物和组合物可提高生物体体内乳酸代谢从而起到抗疲劳的作用。所述的组合物可用于制备预防、治疗或者减轻因疲劳引起的相关疾病的药物、食品或保健品。优选地，本发明的苁蓉提取物的制备方法，其包括下述步骤：肉苁蓉肉质茎部分晾干后，粉碎、过筛，加水搅拌，将温度和pH调至生物蛋白酶酶提取的最佳条件后，加入一定量的生物蛋白酶进行酶解提取，提取完成后，煮沸灭活，离心、过滤，上清液经浓缩干燥，得到土黄色苁蓉提取物，具体制备方法如下：(1)将肉苁蓉药材中的肉质茎部分晾干并粉碎，过40目以上筛网从而获得苁蓉药粉。(2)将一定量的苁蓉药粉与纯化水按质量比为1∶10～1∶20混合，加入药粉质量的0.1％～0.5％的生物蛋白酶，调节pH至5～9，恒温40～55℃搅拌3～6h。(3)提取完成后，将步骤(2)中的药材提取液煮沸5～10min，待冷却至室温，离心过滤，滤液待用。(4)将步骤(3)中的滤液在温度为50～60℃浓缩至约30℃时的相对密度为1.05～1.10g/mL，经干燥得到土黄色苁蓉提取物。所述的生物蛋白酶选自食品级的中性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、木瓜蛋白酶(酶活力≥40万u/g)、菠萝蛋白酶(酶活力≥30万u/g)、碱性蛋白酶(酶活力≥20万u/g)、胰酶(酶活力≥3000u/g)中的一种或者它们的混合物，优选地使用中性蛋白酶、碱性蛋白酶、木瓜蛋白酶中的一种或者它们的混合物。所述的浓缩方法可以为膜浓缩、减压浓缩、常压浓缩。所述的干燥方法可以为喷雾干燥、真空干燥、加热干燥、冷冻干燥。所述苁蓉提取物的收率在40～60％。本发明还提供了一种组合物，其含有所述苁蓉提取物，药物或食品上可接受的助剂。所述该专利中制备所得苁蓉提取物可以与常规预防或治疗疲劳疾病的药物如黄精、枸杞等复配组合。所述该专利中制备所得苁蓉提取物可以与药用辅料组合，其是片剂、分散片、胶囊剂、软胶囊剂、微囊剂、颗粒剂、注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、微丸剂、滴丸剂、糖浆剂、散剂、浸膏剂、煎膏剂、口服液体制剂及其他药学上可以接受的剂型。所述该专利中制备所得苁蓉提取物可提高体内乳酸代谢从而起到抗疲劳的作用，用于制备预防、治疗或者减轻因疲劳引起的相关疾病的药物、食品或保健品方面的用途。经研究表明，本发明的苁蓉提取物能促进斑马鱼体内乳酸代谢，改善其运动能力，因此，可以预期本发明的苁蓉提取物或含有它的药物组合物可以用于预防、治疗或者减轻因疲劳引起的相关疾病的药物、食品或保健品方面的用途。实施例下面通过实施例对本发明作进一步说明。应该理解的是，本发明实施例所述方法仅仅是用于说明本发明，而不是对本发明的限制，在本发明的构思前提下对本发明制备方法的简单改进都属于本发明要求保护的范围。如无特别说明，实施例中用到的所有原料和溶剂均购自SigmaBiochemicalandOrganicCompoundsforResearchandDiagnosticClinicalReagents公司。实施例1：将肉苁蓉药材中的肉质茎部分(和田天力沙生药物开发有限责任公司，其它商购产品亦可)晾干并粉碎，过60目筛网备用。称取100kg苁蓉药粉，与纯化水按质量比为1∶10混合，加入200g中性蛋白酶(酶活力为30万u/g)，调节pH至7～8，保持温度为45～50℃。搅拌提取3h后，将提取液煮沸5～10min，待冷却至室温，离心过滤，滤液待用。将滤液在温度为55～60℃浓缩至约30℃时的相对密度为1.05g/mL，经喷雾干燥机进行干燥，进风温度为160～170℃，出风温度为70～80℃，干燥完成后，得到49kg土黄色苁蓉提取物(批号为C-1)。实施例2：将肉苁蓉药材中的肉质茎部分(和田天力沙生药物开发有限责任公司，其它商购产品亦可)晾干并粉碎，过40目筛网备用。称取100kg苁蓉药粉，与纯化水按质量比为1∶15混合，加入100g碱性蛋白酶(酶活力为40万u/g)，调节pH至8～9，保持温度为40～45℃。搅拌提取4h后，将提取液煮沸5～10min，待冷却至室温，离心过滤，滤液待用。将滤液在温度为55～60℃浓缩至约30℃时的相对密度为1.10g/mL，经真空干燥箱进行干燥，温度为60～65℃，负压为0.08～0.1MPa，干燥12h后，得到56kg土黄色苁蓉提取物(批号为C-2)。实施例3：将肉苁蓉药材中的肉质茎部分(和田天力沙生药物开发有限责任公司，其它商购产品亦可)晾干并粉碎，过40目筛网备用。称取100kg苁蓉药粉，与纯化水按质量比为1∶20混合，加入150g木瓜蛋白酶(酶活力为50万u/g)，调节pH至7.5～8.5，保持温度为50～55℃。搅拌提取4h后，将提取液煮沸5～10min，待冷却至室温，离心过滤，滤液待用。将滤液在温度为55～60℃浓缩至约30℃时的相对密度为1.08g/mL，经喷雾干燥机进行干燥，进风温度为160～170℃，出风温度为70～80℃，干燥完成后，得到42kg土黄色苁蓉提取物(批号为C-3)。实施例4：组合物对斑马鱼运动的影响评价实验动物为野生型AB品系，每个实验组为均30尾斑马鱼，在28℃培养箱中孵育。正常对照组为养鱼水处理正常斑马鱼；用亚硫酸钠诱导斑马鱼，以此作为斑马鱼缺氧疲劳模型；取浓度为2mg/mL苁蓉提取物(批号为C-1)进行评价，是以水溶给样方式处理模型组斑马鱼，并以中华跌打丸为阳性对照组。处理结束后，每个实验组随机选择的10尾斑马鱼，测定斑马鱼的运动总距离(S)(实验结果如表1)，对运动能力影响评价的计算公式如下：运动改善率(％)＝[(S提取物-S模型)/(S正常-S模型)]×100％表1组合物对斑马鱼运动改善作用定量结果组别浓度(mg/mL)总运动距离(mm，Mean±SE)运动改善作用(％)正常对照组/7635±703/模型对照组/2950±202/中华跌打丸19088±447131.0提取物C-128647±417121.6注：与模型对照组比较：p＜0.001。模型对照组斑马鱼总运动距离(2950mm)与正常对照组(7635mm)比较p＜0.001，提示模型构建成功；阳性药中华跌打丸组(1mg/mL)，斑马鱼总运动距离为9088mm，与模型对照组比较p＜0.001，运动改善作用为131.0％，提示中华跌打丸对亚硫酸钠诱发的斑马鱼缺氧疲劳具有极显著的抗疲劳作用。苁蓉提取物在2mg/mL浓度下，斑马鱼总运动距离分别为：8647mm，其运动改善作用为121.6％，与模型对照组比较p＜0.001，提示苁蓉提取物明显改善亚硫酸钠诱发的斑马鱼缺氧疲劳的运动能力，因而具有显著的抗疲劳作用。实施例4：组合物对斑马鱼乳酸代谢的影响评价实验动物为野生型AB品系，每个实验组为均80尾斑马鱼，在28℃培养箱中孵育。正常对照组为养鱼水处理正常斑马鱼；用亚硫酸钠诱导斑马鱼，以此作为斑马鱼缺氧疲劳模型；取浓度为2mg/mL苁蓉提取物(C-1)进行评价，是以水溶给样方式处理模型组斑马鱼，并以中华跌打丸为阳性对照组。处理结束后，测定每个实验组斑马鱼体内的乳酸含量(C)(实验结果如表2)，对乳酸代谢改善作用计算公式如下：乳酸代谢促进率(％)＝[(C模型-C提取物)/(C模型-C正常)]×100％表2组合物对斑马鱼乳酸代谢促进作用定量结果组别浓度(mg/mL)乳酸含量(mmol/gprot，Mean±SE)乳酸促进作用(％)正常对照组/0.196±0.0007模型对照组/0.377±0.0017中华跌打丸10.301±0.000441.9提取物C-120.335±0.000723.3注：与模型对照组比较：p＜0.001。模型对照组斑马鱼体内乳酸含量(0.377mmol/gprot)与正常对照组(0.196mmol/gprot)比较p＜0.001，提示模型构建成功；阳性药中华跌打丸组(1mg/mL)，斑马鱼体内乳酸含量为0.301mmol/gprot，与模型对照组比较p＜0.001，其乳酸代谢促进作用为41.9％，提示中华跌打丸显著促进亚硫酸钠诱发的斑马鱼缺氧疲劳斑马鱼体内的乳酸代谢。苁蓉提取物在2mg/mL浓度下，斑马鱼体内乳酸含量为0.335mmol/gprot，乳酸代谢促进作用为23.3％，与模型对照组比较p＜0.001，提示苁蓉提取物可显著促进亚硫酸钠诱发的斑马鱼缺氧疲劳斑马鱼体内的乳酸代谢。当前第1页1 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