本发明属于中药领域，具体涉及一种代代花萼挥发油在制备减肥药物中的应用。
背景技术：
代谢综合征是多种代谢异常症候群的总称，包括肥胖、胰岛素抵抗，血脂异常，高胰岛素血症、高血压等。在这些代谢异常中，肥胖首当其冲，成为其他代谢异常的首要体现，已经在全球范围内危害着人类的健康。Ⅱ型糖尿病、高血压、心脑血管疾病、肿瘤等多种疾病的发生、发展都与肥胖有着密切的关系。目前肥胖已成为危害人类健康的全球性健康问题，它与Ⅱ型糖尿病、高血压、心脑血管疾病、肿瘤等多种疾病的发生、发展密切相关。
3T3-L1前脂肪细胞分离自小鼠胚胎(17～19d)的Swiss 3T3细胞，能特异性地被诱导分化成成熟的脂肪细胞。由于小鼠前体脂肪细胞的取材较为方便，并且关于小鼠前体脂肪细胞的培养研究技术较成熟，使得3T3-L1前脂肪细胞已成为国际上公认的研究脂肪代谢的细胞模型。越来越多的研究发现中药可通过抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖发挥预防或减肥的功效。比如于华强等利用MTT法以及油红O染色法研究不同浓度的芹菜素对前脂肪细胞增殖以及分化的影响，实验结果表明，芹菜素能够显著地抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖以及分化，并呈剂量依赖性，提示芹菜素可能具有预防或治疗肥胖的作用。
代代(Citrus aurantium L.var.amara Engl)是芸香科柑橘属植物酸橙的一个变种，代代花是其花蕾的干品，具有良好的药理作用，常用于治疗气郁不舒、脘腹胀痛、积食不化、恶心呕吐等。目前国内外对代代花的研究主要以其挥发油类化合物为主，而对代代花其它有效成分的研究报道几乎没有。代代花作为药食两用价值的天然保健品，其有效成分的提取纯化和药理活性等方面的研究还有待进一步深入探讨，全面加强代代花的生物利用，对于开发新药、指导临床用药具有重要的意义。
技术实现要素：
为了克服现有技术的不足和缺点，本发明的目的在于提供一种代代花萼挥发油在制备减肥药物中的应用。
本发明的目的通过下述方案实现：
一种代代花萼挥发油在制备减肥药物中的应用。
所述代代花萼挥发油为采用水蒸气蒸馏法加热提取代代花萼的挥发油。
或所述代代花萼挥发油为将采用水蒸气蒸馏法加热提取代代花萼的挥发油进行微波处理得到的挥发油。
或所述代代花萼挥发油为将采用水蒸气蒸馏法加热提取代代花萼的挥发油进行超声处理得到的挥发油。
所述代代花萼挥发油的制备方法，包含如下步骤：
将代代花萼粗粉置于水蒸气蒸馏装置中，浸泡，采用水蒸气蒸馏法加热提取挥发油；停止加热后冷却；采用有机溶剂收集挥发油，除水除去有机溶剂，得到代代花萼挥发油记为CAV。进一步地，将代代花萼挥发油CAV进行微波处理或超声处理。
或者所述代代花萼挥发油是将代代花萼挥发油CAV采用微波处理得到，即代代花萼挥发油记为CAV-M。
又或者所述代代花萼挥发油是将代代花萼挥发油CAV采用超声处理得到，即代代花萼挥发油记为CAV-U。
所述水蒸气蒸馏法中蒸馏水与代代花萼粗粉的体积质量比为(10～30)mL:1g；
所述加热提取的温度为80～100℃；所述加热提取的时间为4～6h；所述浸泡时间为1～3h；所述冷却时间为30～60min。
所述的有机溶剂为乙醚或石油醚。
所述除有机溶剂的方式为减压浓缩；所述减压浓缩的温度为40～60℃。
所述除水的方式优选为采用无水硫酸钠除水；
所述微波处理的微波功率为500～800W；所述微波处理的时间为30s～150s。
所述超声处理的频率为80～100KHz，功率为200～500W；所述超声处理的时间为2～5min。
所述代代花萼粗粉是将代代花萼(Citrus aurantium L.var.amara Engl)进行干燥，粉碎过筛得到。
所述干燥温度为40～60℃；所述干燥时间为18～24h；所述的粉碎过筛为40～60目筛。
所述代代花萼挥发油(CAV、CAV-M和CAV-U)可作为新型的减肥药物，应用于肥胖症的治疗。
一种减肥药物，含有上述代代花萼挥发油(CAV、CAV-M和CAV-U)中的至少一种；
本发明的原理：天然植物来源的有效成分能通过抑制前脂肪细胞的增殖发挥减肥的功效。本发明发现和确证天然植物有效成分具有显著的减肥活性，且使用剂量低，在同样剂量下的毒副作用也较低。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明首次发现代代花萼挥发油(CAV、CAV-M和CAV-U)在体外能显著抑制3T3-L1前脂肪细胞的增殖。
(2)本发明使用剂量低，在同样剂量下的毒副作用也较低。
附图说明
图1是实施例1制备得到的代代花萼挥发油CAV、CAV-M和CAV-U对3T3-L1前脂肪细胞增殖抑制作用图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例中，小鼠3T3-L1前脂肪细胞购自中科院上海生命科学研究院细胞资源中心；代代花萼购自广州清平药材市场。
实施例1从代代花萼中制备得到代代花萼挥发油CAV、CAV-M和CAV-U
(1)称取代代花萼粗粉100g，于5000mL圆底烧瓶中，加入2000mL蒸馏水，充分摇匀后浸泡1h，100℃保持微沸提取6h，停止加热，冷却30min，使冷凝管中的挥发油全部冷凝下来，减少挥发；将刻度段蒸馏水放出，再用乙醚从冷凝管顶部自上而下淋洗挥发油，锥形瓶收集；然后加入适量无水硫酸钠除脱水，(缓慢加入无水硫酸钠，并充分震荡均匀，观察硫酸钠的结块情况，如果加进去就结成饼状的说明水多继续添加硫酸钠，直到沉淀后硫酸钠呈松散流沙状且可以自由滑动，并且没有明显的融化状态，干燥结束，每次用到的量为10g)，用滤纸过滤转移至楔形瓶中，将滤液用旋转蒸发仪在40℃、30r/min下减压浓缩至将乙醚旋干，即得淡黄色代代花萼挥发油，命名为CAV；
(2)将(1)中制得的CAV采用微波功率700W(格兰仕G70D20CN1P-D2(S0))处理30s，得到代代花萼挥发油CAV-M；
(3)将(1)中制得的CAV采用采用超声(KQ-300VDB型三频数控超声清洗器)频率100KHz，功率500W，处理3min，得到代代花萼挥发油CAV-U。
实施例2从代代花萼中制备得到代代花萼挥发油CAV、CAV-M和CAV-U
(1)称取代代花萼粗粉100g，于5000mL圆底烧瓶中，加入3000mL蒸馏水，充分摇匀后浸泡1.5h，100℃保持微沸提取5h，停止加热，冷却40min，使冷凝管中的挥发油全部冷凝下来，减少挥发；将刻度段蒸馏水放出，再用乙醚从冷凝管顶部自上而下淋洗挥发油，锥形瓶收集；然后加入适量无水硫酸钠除脱水，(缓慢加入无水硫酸钠，并充分震荡均匀，观察硫酸钠的结块情况，如果加进去就结成饼状的说明水多继续添加硫酸钠，直到沉淀后硫酸钠呈松散流沙状且可以自由滑动，并且没有明显的融化状态，干燥结束，每次用到的量为10g)，用滤纸过滤转移至楔形瓶中，将滤液用旋转蒸发仪在50℃、20r/min下减压浓缩至将乙醚旋干，即得淡黄色代代花萼挥发油，命名为CAV；
(2)将(1)中制得的CAV采用微波功率600W(格兰仕G70D20CN1P-D2(S0))处理40s，得到代代花萼挥发油CAV-M；
(3)将(1)中制得的CAV采用采用超声(KQ-300VDB型三频数控超声清洗器)频率100KHz，功率400W，处理4min，得到代代花萼挥发油CAV-U。
实施例3从代代花萼中制备得到代代花萼挥发油CAV、CAV-M和CAV-U
(1)称取代代花萼粗粉100g，于5000mL圆底烧瓶中，加入1500mL蒸馏水，充分摇匀后浸泡2h，100℃保持微沸提取5.5h，停止加热，冷却50min，使冷凝管中的挥发油全部冷凝下来，减少挥发；将刻度段蒸馏水放出，再用乙醚从冷凝管顶部自上而下淋洗挥发油，锥形瓶收集；然后加入适量无水硫酸钠除脱水，(缓慢加入无水硫酸钠，并充分震荡均匀，观察硫酸钠的结块情况，如果加进去就结成饼状的说明水多继续添加硫酸钠，直到沉淀后硫酸钠呈松散流沙状且可以自由滑动，并且没有明显的融化状态，干燥结束，每次用到的量为10g)，用滤纸过滤转移至楔形瓶中，将滤液用旋转蒸发仪在40℃、40r/min下减压浓缩至将乙醚旋干，即得淡黄色代代花萼挥发油，命名为CAV；
(2)将(1)中制得的CAV采用微波功率500W(格兰仕G70D20CN1P-D2(S0))处理60s，得到代代花萼挥发油CAV-M；
(3)将(1)中制得的CAV采用采用超声(KQ-300VDB型三频数控超声清洗器)频率100KHz，功率300W，处理5min，得到代代花萼挥发油CAV-U。
实施例4MTT法检测代代花萼挥发油CAV、CAV-M和CAV-U对3T3-L1前脂肪细胞增殖的影响
分别取生长对数期的小鼠3T3-L1前脂肪细胞，1000rpm离心5min，弃去上清液，用含质量分数为10％胎牛血清的DMEM培养基调整细胞数为5×104/mL，100μL接种于96孔培养板中，置于5％CO2培养箱中，37℃培养24h后，弃去上清液，各组分别加入含有CAV实施例1制得)、CAV-M(实施例1制得)和CAV-U(实施例1制得)的DMEM培养基(CAV、CAV-M和CAV-U的终浓度分别为31.25、62.5、125、250和500μg/mL)。在37℃、5％CO2培养箱中培养24h，弃去上清液，PBS清洗两次，每孔加入200μL不含血清的DMEM基础培养基和20μL噻唑蓝(MTT)，放入培养箱中继续孵育4h，弃上清液，每孔加入150μL二甲基亚砜(DMSO)，避光放置于微量振荡器均匀震荡10min，用酶标仪测量在490nm波长下的OD值，计算细胞增殖抑制率。图1是实施例1制备得到的代代花萼挥发油CAV、CAV-M和CAV-U对3T3-L1前脂肪细胞增殖抑制作用图。
CAV(图1)、CAV-M(图1)和CAV-U(图1)在31.25～500μg/mL范围内对小鼠3T3-L1前脂肪细胞均表现出显著的增殖抑制作用。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。