1.一种从羊胚胎中制备羊胚胎提取液的方法,其特征在于,从羊胚胎的选取及处理开始,经过组织破碎、细胞反复冻融、离心去杂、微滤,获得羊胚胎提取液,包括下述步骤:
(1)羊胚胎选取与处理:其羊胚胎为孕期6-8周,脱母体后浸泡在生理盐水中,30min内置-20℃储藏;
(2)组织破碎:去除羊胚胎肠胃杂质,碎成碎片,绞肉机2次后用4-6℃生理盐水制成肉浆,再用胶体磨研磨4次;
(3)细胞反复冻融:在-35±2℃和0℃反复冻融三次,每35±2℃时间冻融时间为12小时;
(4)离心去杂:采用冷冻离心机,确保离心室温度在-8—-10℃;
(5)微滤:离心上清液经滤纸过滤后,再经0.8um、0.2um过滤,得羊胚胎提取液。
2.根据权利要求1所述的从羊胚胎中制备羊胚胎提取液的方法,其特征在于,步骤(2)中所述生理盐水与羊胚胎重量比例为15:1。
3.一种从羊胚胎提取液中分离纯化得到羊胚胎素溶液的制备方法,其特征在于,通过不同纳米递度过滤,获得羊胚胎素溶液,包括下述步骤:
(1)纳滤:经过微滤后的羊胚胎提取液,在无菌条件下采用不同纳米递度过滤,去掉分子量大于6000道尔顿的物质和分子量小于100道尔顿物质;
(2)纳滤后的处理:纳滤后的溶液充氮后密封保存,确保储藏期因氧化导致生物活性降低,同时回收100道尔顿以下的液体循环利用,减少排放达到环保。
4.根据权利要求3所述的从羊胚胎提取液中分离纯化得到羊胚胎素溶液的制备方法,其特征在于,所述的在无菌条件下指的是B级洁净区内。
5.根据权利要求3所述的从羊胚胎提取液中分离纯化得到羊胚胎素溶液的制备方法,其特征在于,所述的不同纳米递度为10—100nm。
6.一种羊胚胎素溶液的质量标准,其特征在于:
性状:本品为无色或微黄色液体。
鉴别:取本品,加40%氢氧化钠溶液0.5ml,摇匀,再加1%硫酸铜溶液1ml,溶液显紫红色;
PH值:6.0~7.5;
蛋白质:取本品2ml,加20%磺基水杨酸溶液1ml,混匀,不得发生混浊或沉淀;
多肽含量:不得低于6mg/ml;
高分子物质:不得高于5.0%;
生物活性:不得低于30.0%;
贮藏:充氮密闭,-4℃以下保存;
有效期:24个月。
7.根据权利要求6所述的羊胚胎素溶液的质量标准,其特征在于,所述多肽含量的测定方法为福林酚测定法。
8.根据权利要求6所述的羊胚胎素溶液的质量标准,其特征在于,所述高分子物质的测定方法为高效液相色谱法。
9.根据权利要求6所述的羊胚胎素溶液的质量标准,其特征在于,所述生物活性的测定方法为T细胞活性测定法-脱E受体法。