细胞穿透肽和包含其的缀合物的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明设及来源于人类端粒酶逆转录酶化TERT)的细胞穿透肤、所述细胞穿透肤 的缀合物、活性成分W及包含所述缀合物的组合物。
【背景技术】
[0002] 尽管低分子量物质、核酸、蛋白质、纳米颗粒等在分子水平作为治疗物质具有极大 的潜能，但因为其不能穿透组织和细胞膜而使它们的使用受到限制。递送运样的物质到细 胞的系统的发展已经成为过去二十年研究的活跃领域。将物质转运至细胞内成为分子治疗 方法方面的话题。低分子量物质、核酸或者纳米颗粒通过某些试剂、电穿孔或者热休克转运 进细胞内。但是，很难找到合适的方法不破坏蛋白的活性和完整性而将蛋白递送进入细胞 内。在十九世纪八十年代，在进行关于HIV的细胞穿透能力的研究中，发现由特定的11个氨 基酸组成的HIV-TAT蛋白在向细胞内的转运过程中发挥重要作用。因此，从十九世纪九十年 代开始，寻找将蛋白转运至细胞内的正确方法的研究成为研究的热点领域。
[0003] 端粒已知是在染色体末端发现的遗传物质的重复序列，其防止染色体损伤或合并 到其它的染色体。端粒的长度在每次细胞分裂时缩短，并且在一定次数的细胞分裂后，端粒 长度极度缩短W致细胞停止分裂并且死亡。另一方面，已知端粒的延长会延长细胞寿命。例 如，癌细胞制造一种称为端粒酶的酶，其阻止端粒的缩短，因此导致癌细胞的繁殖。
[0004] STAT3抑制剂通过包括调亡、抑制血管生成和阻断免疫逃逸的复杂的抗肿瘤机制 来调节肿瘤。据报道，作为STAT3抑制剂药物的NSC74859在施用时具有剂量依赖性副作用。 所W，需要通过施用低剂量的该药物来抑制肿瘤的方法。
[0005] 紫杉醇用于治疗卵巢癌、乳腺癌、肺癌或胃癌，据报道紫杉醇具有剂量依赖性副作 用，即通过骨髓抑制而减少白细胞、红细胞和血小板。所W，需要通过施用低剂量紫杉醇来 更有效地治疗癌症的方法。
【发明内容】
[0006] 技术问题
[0007] 对于食物、药物和健康补充剂，将在体内具有高吸收需求的活性成分转运进入细 胞是非常重要的，如蛋白质、核酸、肤、脂质、糖脂、矿物质、葡萄糖、纳米颗粒、生物制品、造 影剂、药物和化学化合物。
[000引例如就抗癌药物而言，其W超过有效剂量施用W激活抗癌效果，并且据报道已知 的抗癌药物对于高剂量施用具有副作用，包括通过抑制骨髓而减少白细胞、红细胞、血小板 和正常细胞调亡。所W，需要通过施用低剂量药物来抑制癌症的方法。
[0009] 本发明的目的是提供一种在细胞内具有高传导性的细胞穿透肤及包括其的缀合 物。
[0010] 本发明的另一个目的是提供一种作为细胞穿透肤和抗癌药物的组合的缀合物，W 及包含该缀合物作为转运祀标特异性抗癌药物的有效手段的药物组合物。
[0011] 本发明的另一个目的是提供一种作为细胞穿透肤和STAT3抑制剂的组合的缀合 物，W及包含该缀合物作为转运STAT3抑制剂的有效手段的药物组合物。
[0012] 本发明的另一个目的是提供一种作为细胞穿透肤和紫杉醇的组合的缀合物，W及 包含该缀合物作为转运紫杉醇的有效手段的药物组合物。
[0013] 问题的解决方案
[0014] 根据本发明的实施方式，作为来源于端粒酶的细胞穿透载体肤（cell penetrating carrier peptide),可W提供下述细胞穿透载体肤：其中所述肤包含沈Q ID NO: 1的氨基酸序列，所述肤具有与上述序列大于80%同源性的氨基酸序列，或者所述肤包 含上述肤的片段。
[0015] 根据本发明实施方式中的细胞穿透载体肤，所述片段可由3个W上氨基酸组成。
[0016] 根据本发明的另一个实施方式，作为细胞穿透载体肤和活性成分的缀合物，提供 包含SEQ ID N0:1的氨基酸序列的细胞穿透载体肤，具有与上述序列大于80%同源性的氨 基酸序列，或者包含上述序列的片段的肤。
[0017] 根据本发明的另一个实施方式，提供了选自由W下物质组成的组的活性成分:蛋 白质、核酸、肤、脂质、糖脂、矿物质、葡萄糖、纳米微粒、生物制品、造影剂、药物和化学化合 物。
[0018] 根据本发明的另一个实施方式的缀合物，所述活性成分可W是细胞因子、抗体、抗 体片段、治疗性酶、可溶性受体或配体。
[0019] 根据本发明的另一个实施方式的缀合物，所述活性成分可W用于治疗或预防疾 病。
[0020] 根据本发明的另一个实施方式，可提供用于治疗和预防疾病的方法，该方法包括 将根据本发明的缀合物施用于需要其的个体。
[0021] 根据本发明的另一个实施方式，可提供根据本发明的缀合物用于治疗和预防疾病 的应用。
[0022] 根据本发明的另一个实施方式，可提供用于治疗和预防疾病的根据本发明的缀合 物。
[0023] 根据本发明的另一个实施方式的缀合物，所述疾病可选自由W下疾病组成的组： 皮肤病、膜腺癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌、肝细胞癌、表皮样癌、非小细胞肺癌 (NSCLC)、皮肤表皮样癌、月经过多、子宫内膜异位症、子宫腺肌病、子宫肌瘤、女性或男性不 育、儿童性早熟、良性前列腺增生、由表皮细胞增殖引起的皮肤病，由T淋己细胞引起的炎症 及W上病症的组合。
[0024] 根据本发明的另一个实施方式的缀合物，所述活性成分可W是抗癌药物。
[0025] 根据本发明的另一个实施方式的缀合物，所述抗癌药物可W是STAT3抑制剂。
[0026] 根据本发明的另一个实施方式的缀合物，所述抗癌药物可W是紫杉醇 (paclitaxel)。
[0027] 根据本发明的另一个实施方式的缀合物，所述载体肤和活性成分可W通过共价 键、非共价键或接头介导连接。
[0028] 根据本发明的另一个实施方式，提供了包含所述缀合物的药物组合物。
[0029] 根据本发明的另一个实施方式的药物组合物，所述药物组合物可用于治疗或预防 疾病。
[0030] 根据本发明的另一个实施方式，提供了一种方法，其中所述方法包括给需要治疗 或预防疾病的个体施用包含根据本发明的缀合物的药物组合物的步骤。特别是，所述方法 可用于抗癌治疗或预防癌症。
[0031] 根据本发明的另一个实施方式，可提供包含根据本发明的缀合物的药物组合物用 于治疗或预防疾病的应用。特别是，所述应用可W用于抗癌治疗或预防癌症。
[0032] 根据本发明的另一个实施方式，可提供用于治疗或预防疾病的包含根据本发明的 缀合物的药物组合物。特别是，所述药物组合物可用于抗癌治疗或预防癌症。
[0033] 根据本发明的另一个实施方式，所述药物组合物可用于治疗或预防选自由W下疾 病组成的组的疾病:皮肤病、膜腺癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌、肝细胞癌、表皮 样癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、皮肤表皮样癌、月经过多、子宫内膜异位症、子宫腺肌病、子宫 肌瘤、女性或男性不育、儿童性早熟、良性前列腺增生、由表皮细胞增殖引起的皮肤病、由T 淋己细胞引起的炎症W及W上病症的组合。
[0034] 根据本发明的另一个实施方式，所述药物组合物可用于抗癌治疗或预防癌症。
[0035] 根据本发明的另一个实施方式，提供将药物转运至细胞内的试剂盒，其中所述试 剂盒包含含有缀合物的组合物和说明书，所述缀合物是活性成分和包含SEQ ID NO: 1的氨 基酸序列的细胞穿透载体肤、与上述序列具有大于80%同源性的肤或者包含上述肤的片段 的肤的缀合物，且所述说明书公开了组合物的剂量、施用路径、施用次数和适应症中的一种 或多种。
[0036] 根据本发明的另一个实施方式，可提供将活性成分转运至细胞内的系统，作为将 活性成分转运至细胞内的系统，其中所述系统包括根据本发明的实施方式的缀合物，其中 所述缀合物包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列、与上述序列具有大于80%同源性的氨基酸序 列或包含上述序列的片段的肤，其中所述肤具有细胞穿透性W使活性成分被转运至细胞 内。
[0037] 根据本发明的另一个实施方式，作为通过细胞穿透载体肤将活性成分转运至细胞 内的方法，可W提供用于将活性成分转运至细胞内的方法，其中所述方法包括向有需要者 施用根据本发明的另一个实施方式的缀合物的步骤，其中所述肤包括SEQ ID NO: 1的氨基 酸序列、与上述序列具有大于80%同源性的氨基酸序列或包含上述序列的片段的肤，其中 所述肤也具有细胞穿透性W使活性成分被转运至细胞内。
[0038] 根据本发明的另一个实施方式，所述方法可将活性成分局部转运到细胞中的线粒 体。
[0039] 根据本发明的另一个实施方式，提供编码根据本发明的一个实施方式的肤的多核 巧酸。
[0040] 根据本发明的另一个实施方式，提供包含根据本发明的另一个实施方式的多核巧 酸的载体。
[0041] 根据本发明的另一个实施方式，提供包含根据本发明的另一个实施方式的载体的 转化细胞。
[0042] 根据本发明的另一个实施方式，使用根据权利要求1或权利要求2所述的细胞穿透 载体肤，W使活性成分转运进入细胞。
[0043] 根据本发明的另一个实施方式，可提供用于治疗或预防疾病的方法，其中所述方 法包含向有需要者施用根据本发明的一个实施方式的缀合物，其中所述细胞穿透载体肤包 括SEQ ID NO: 1的氨基酸序列、与上述序列具有大于80%同源性的氨基酸序列或上述序列 的片段的肤，其中所述肤具有细胞穿透性W使得活性成分被转运进入细胞，其中所述疾病 选自由W下疾病组成的组:皮肤病、炎性疾病、膜腺癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃 癌、肝细胞癌、表皮样癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、皮肤表皮样癌、月经过多、子宫内膜异位 症、子宫腺肌病、子宫肌瘤、女性或男性不育、儿童性早熟、良性前列腺增生、由表皮细胞增 殖引起的皮肤病、由T淋己细胞引起的炎症及W上病症的组合。
[0044] 发明应用
[0045] 通过使用根据本发明的细胞穿透肤，可提供递送癌症特异性抗癌药物的有效方 式。具体地，通过制造根据本发明的细胞穿透载体肤的缀合物和抗癌药物，可使已知抗癌药 物的有效剂量降低，并且还可使由癌症特异性效果引起的副作用降低。
[0046] 附图描述
[0047] 图1表示根据本发明的肤和已知抗癌药物的缀合的抗癌机制的图表。
[0048] 图2表示施用根据本发明的肤的缀合物和造影剂(FITC)后细胞内的运输的图。
[0049] 图3表示仅施用各个浓度的根据本发明的肤之后