用于治疗和预防神经疾病、神经炎症和阿尔茨海默病的组合物的制作方法
本申请要求2015年12月16日提交的美国临时申请第62/268371号和2016年6月3日提交的美国临时申请第62/345375号的权益。参考申请的内容通过引用并入本申请中。
背景技术：
a.技术领域
本发明涉及含有能够预防和治疗神经疾病、蛋白质错误折叠、蛋白质聚集、神经炎症和阿尔茨海默病(alzheimer’sdisease)的化合物混合物的制剂。
b.相关技术说明
诸多人类神经退行性病症与受制于病理学错误折叠的蛋白质聚集有关(ellisdon等人，2004)。蛋白质具有向其与其他分子相互作用赋予稳定性、功能性及特异性的天然结构。蛋白质基因改变、转译后修饰及暴露于某些环境条件可改变蛋白质的三维结构，由此导致其错误折叠的构型假设。在一些情况下，错误折叠产生能量上不利的构型，促进蛋白质自组装成聚集物。聚集的错误折叠蛋白质对诸多细胞，包括神经元可为尤其有毒的。聚集的错误折叠蛋白质穿透细胞膜可导致细胞死亡。蛋白质错误折叠涉及人类神经退行性病症，诸如阿尔茨海默病(β淀粉状蛋白和磷酸化的τ蛋白质)、帕金森病(parkinson’sdisease)(α突触核蛋白蛋白质)、路易体痴呆(dementiawithlewybodies)(β淀粉状蛋白、磷酸化的τ蛋白质和α突触核蛋白蛋白质)、额颞叶型痴呆(τ蛋白质)、海绵状脑病(朊病毒蛋白质)，以及涉及诸多其他中枢及全身性淀粉样变性(参见ellisdon等人，2004)。减少蛋白质错误折叠倾向、解聚或以其他方式改变聚集路径和/或减轻折叠错误的蛋白质及其聚集物的毒性的干预代表了预防和治疗阿尔茨海默病及数种其他涉及蛋白质错误折叠的人类病症的潜在方式。
阿尔茨海默病(ad)是一种涉及蛋白质错误折叠的疾病。ad是造成老年痴呆的主要原因(mayoclinic,alzheimer's,2014)。ad估计使超过5百万美国人受折磨且随着人口老龄化，发病率快速增加。尽管可治疗其症状，但ad仍为不可治愈且致命的病症。并未完全知晓ad的病因，但基因和环境因素与其发病机制有关。潜在的病理学过程历经数十年的生命演变。最早记录的病理学改变是脑和脑血管结构中关于异常β淀粉状蛋白产生、聚集、代谢和/或清除的可溶及不可溶淀粉状蛋白聚集物的积累。慢性神经炎症出现在ad中，且与异常的小神经胶质细胞活化以及细胞因子和趋化因子改变相关。通过反应性氧物质和晚期糖基化终点产物对神经元造成的增加的氧化损伤出现在ad中。ad还与τ的过度磷酸化和τ聚集相关，由此导致神经原纤维缠结形成。随着ad病理学进展，存在显著的突触及神经元损失以及神经胶质变性，由此造成脑萎缩。还发生神经传递质(诸如乙酰胆碱及谷氨酰胺)缺乏以及干扰脑葡萄糖代谢。ad显示痴呆伴随认知、日常功能和行为逐渐衰退，通常初始影响短期回忆并渐渐影响所有认知区域(mayoclinic,alzheimer's,2014)。
炎症可以是ad中另一潜在因素以及数种其他神经退行性疾病。存在多种涉及发炎路径的蛋白质，诸如环加氧酶cox1和cox2以及5-脂肪氧合酶5lox。抑制这些酶或下游发炎中间物(诸如白三烯)可抑制炎症。促炎性细胞因子(诸如ifnγ、tnf-a、il-1和il-6)在可促进ad脑炎症的t-辅助类型1(th1)反应中产生。促炎性细胞因子减少或抗炎性细胞因子增加可在ad中具有治疗性益处。炎症的某些抑制因子包括nsaid和抗炎性细胞因子(诸如il-2)和t-辅助2(th2)反应细胞因子(诸如il-4)。过去测试cox-1抑制因子和其他nsaid作为对ad的潜在治疗或预防的临床试验大部分失败。已假设其他cox抑制因子，尤其与lox抑制因子(例如双重cox/lox抑制因子)结合可为治疗老化相关的脑病症(诸如阿尔茨海默病)提供改良的治疗性途径且具有可接受的肠胃耐受性(hoozemans等人,2008)。在此方面，cox2抑制因子展示通过显著地逆转小鼠中老化诱导的保持性缺乏，成为对神经元炎症的潜在疗法(bishnoi等人，2005)。
减少氧化损伤还可减少涉及ad的神经炎症和其他神经退行性疾病。作为实例，减少cox1、cox2和5lox活性通过缓解经氧化的脂肪酸而部分减少炎症。特别地，cox1和cox2通过缓解两种脂肪酸二十碳四烯酸(aa)和二十二碳六烯酸(dha)的氧化产物来减少神经毒性和神经退化(hoozemans等人)。药物流行病学数据、来自人类组织及体液的分析数据和大部分来自鼠类模型的机理数据均涉及神经退化的发病机制中的aa和dha氧化产物(hoozemans等人，2008)。5-lox酶主要涉及二十碳四烯酸转化成炎性介质。同时环加氧酶(cox1和cox2)产生前列腺素，5-lox产生白三烯(silverman等人，1999)。抑制cox1和cox2将二十碳四烯酸分流至5-lox路径，因此产生涉及发炎和过敏性反应的白三烯、分子(steinhilber等人，2013)。
目前针对ad的治疗包括帮助增强细胞至细胞通信水平的那些治疗，诸如乙酰胆碱酯酶抑制剂和美金刚(memantine)(mayoclinic,alzheimer’s,2014)。然而，尽管大规模研究，但自从批准新颖类别的药剂用于ad已过去十年。在大规模、较佳控制的前瞻性临床试验中，没有膳食补充剂被认为有益于人类ad患者。
姜黄素(diferulomethane)是在姜黄根中发现的多酚植物化学成分，其具有抗氧化性、抗炎性、抗淀粉状蛋白性和其他特性。姜黄素是呈咖喱粉末的主要成分。有迹象表明食用咖喱可降低痴呆发病率(ng,2006)。在过去的二十年，临床前研究中已经展现姜黄素的诸多可能益处，这些临床前研究显示姜黄素对类淀粉前驱蛋白质代谢、β淀粉状蛋白聚集物、含τ神经原纤维缠结、神经炎症和数个其他ad病理学要素令人鼓舞的效应(lim,2001；yang,2005；ma,2013)。
另外，活体外、活体内和/或临床研究显示姜黄素有可能治疗诸多其他疾病、病状、病症、其病因和/或其症状。例如，姜黄素具有抗微生物和抗病毒效应，是强力消炎剂和免疫调节剂，保护心血管系统，是癌症化学预防剂和化学治疗剂，是神经保护性且神经治疗性的，是针对糖尿病和肥胖药理学的潜在药物，防止肾损伤，在心肺流转术后保护肺，是用于治疗肠胃病症的药剂，是伤口愈合的调节剂，是生殖系统调节剂，是抗血管生成剂和是抗毒理学剂(beevers2011)。
然而，由于姜黄素显示了极其不良的肠胃吸收和口服生物可用性，与姜黄素相关的药物动力学对姜黄素用于治疗诸多人类疾病的广泛临床用途造成显著挑战(beevers2011)。另外，向人类经口施用纯化姜黄素的主要障碍是几乎100％所摄入材料转化成不跨越血脑屏障的惰性葡萄糖醛酸化的形式。此转化可以是利用姜黄素的有希望的活体外和动物研究不与人类对象中功效相关的原因(ringman,2005)。在一项研究(ringman,2012)中，研究者每天提供ad患者至多4克纯化的姜黄素制剂，其约等效于32倍印度平均个体膳食摄入量。尽管施用如此高的剂量，但在患者血液中发现极少量(大约7.76ng/ml)姜黄素，且在脑脊髓液(csf)中未检测到未经修饰的姜黄素。另外，在姜黄素摄入之后，在ad相关的csf生物标志中未观测到改变。
最近努力研发更加生物可用的姜黄素制剂使用脂质体包封技术或将胡椒碱添加至姜黄素制剂(ringman,2005)。然而，极少(若存在)尝试已经成功在血液中提供显著水平的姜黄素(ringman2012；ringman,2005)。例如，姜黄素的血液和尿液水平为不存在的或几乎不可测量的，其中纯姜黄素的口服剂量低于2000mg(ringman,2005)。另外，迄今为止，经口施用的制剂未显示出在脑脊髓液中产生可检测水平的姜黄素。
向人类经口施用纯姜黄素的额外障碍是肠胃副作用。副作用可包括腹泻、黑色粪便、胃刺激和恶心(ringman2005；ringman2012)。这些副作用在一些患者中十分严重，使得那些患者退出临床试验(ringman2012)。
在阿尔茨海默病的活体外和动物(小鼠)模型中测试一种含有姜黄素的专有组合物hsrx-888。发现减少了淀粉状蛋白斑负担并对ad相关的脑病理学具有其他正面作用(shytle等人，2009,shytle等人，2012)。然而，活体外和啮齿动物中活性并非始终与人类中的活性或人类中姜黄素摄入相关，很可能部分由于这些模型和人类不同的药物动力学特征。
技术实现要素：
本发明提供了一种目前面对治疗和预防以下疾病的问题的解决方案：阿尔茨海默病；炎症；神经炎症；由神经炎症、蛋白质错误折叠、蛋白质聚集导致的疾病和病状；以及由蛋白质错误折叠和蛋白质聚集导致的疾病和病状。
本发明人出人意料地确定了姜黄中发现的数种化合物的组合可预防和治疗阿尔茨海默病、炎症、蛋白质错误折叠、蛋白质聚集，并可增加人类对象中姜黄素的摄入。本发明人还确定了特定相对浓度的化合物增强组合的化合物的这些能力。另外，本发明人确定了使用具有额外药剂的本发明的化合物用于治疗或预防疾病和病状，诸如阿尔茨海默病、炎症和蛋白质错误折叠/聚集相关的疾病和病状增强了组合的化合物预防和治疗这些疾病和病状的能力。另外，本文公开的组合在治疗和/或预防其他神经病症、疾病和病状，诸如其他退行性/蛋白质错误折叠病症、脑血管疾病、发炎性疾病、创伤/闭合性头部损伤、癫痫和/或赘生物中提供益处。
在一个方面，公开了本文公开的生物标志1至16、18、19中任一种、任意组合或全部和姜黄素的组合物。在一些情况下，组合物包括姜黄素和/或姜黄素的功能衍生物和具有120.094amu的精确质量且具有至少2.17％的相对丰度的生物标志1，其中在姜黄(curcumalonga)中发现该生物标志1，且其中相对丰度是相对于掺入溶解在乙醇中的0.5mg/ml组合物中的25mg/ml水杨酸。
在一些实施方案中，组合物进一步包括以下额外生物标志中的任一种或任意组合或全部：精确质量为134.110amu且相对丰度为至少0.31％的生物标志2；精确质量为200.157amu且相对丰度为至少0.47％的生物标志6；和精确质量为232.146amu且相对丰度为至少2.38％的生物标志12，其中在姜黄中发现这些生物标志，且其中相对丰度是相对于掺入溶解在乙醇中的0.5mg/ml组合物中的25mg/ml水杨酸。在一些实施方案中，组合物具有生物标志1、2、6和12中的至少2种、3种或4种。
在一些实施方案中，本文公开的组合物进一步包括以下中的一种或多于一种：精确质量为150.104amu且浓度为至少0.04重量％的生物标志3；精确质量为176.120amu且相对丰度为至少0.96％的生物标志4；精确质量为192.091amu且相对丰度为至少1.74％的生物标志5；精确质量为202.172amu且相对丰度为至少0.87％的生物标志7；精确质量为204.188amu且相对丰度为至少0.30％的生物标志8；精确质量为216.151amu且相对丰度为至少10.75％的生物标志9；精确质量为218.203amu且相对丰度为至少4.00％的生物标志10；精确质量为220.183amu且相对丰度为至少0.72％的生物标志11；精确质量为234.162amu且相对丰度为至少3.52％的生物标志13；精确质量为256.240amu且相对丰度为至少0.25％的生物标志14；精确质量为308.105amu且浓度为至少1.50重量％的生物标志15；精确质量为338.115amu且浓度为至少1.67重量％的生物标志16；精确质量为372.157amu且浓度为至少0.88重量％的生物标志18；和精确质量为450.261amu且相对丰度为至少0.61％的生物标志19，其中在姜黄中发现各生物标志，且其中相对丰度是相对于掺入溶解在乙醇中的0.5mg/ml组合物中的25mg/ml水杨酸。
在一些实施方案中，各生物标志的质量是通过实时直接分析-tof(dart-tof)质谱仪所确定的质量。
在一些实施方案中，生物标志中的至少一个以合成方式获得。在一些实施方案中，生物标志中的至少一个从植物中分离。在一种情况下，生物标志中的至少一个从姜黄中分离。在一些实施方案中，组合物的生物标志相对丰度具有至少90％、优选至少95％或至少98％的批次间化学一致性。
在一些实施方案中，组合物进一步包含至少一种药物。在一些实施方案中，组合物进一步包含至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂。在一种情况下，至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂是多奈哌齐(donepezil)、他克林(tacrine)、加兰他敏(galantamine)、利凡斯的明(rivastigmine)、其盐或其任意组合。在一些实施方案中，组合物进一步包括n-甲基-d-天冬氨酸酯(nmda)受体拮抗剂。在一些实施方案中，nmda受体拮抗剂是美金刚。在一些实施方案中，组合物进一步包括至少一种消炎药。在一种情况下，至少一种消炎药是非类固醇消炎药。在一种情况下，非类固醇消炎药是乙酰水杨酸、布洛芬(ibuprofen)、酮基布洛芬(ketoprofen)或萘普生(naproxen)、其盐或其任意组合。
在一些实施方案中，组合物经配制用于鼻内施用。在一种情况下，组合物以干燥粉末和/或通过喷雾器施用。在一些实施方案中，组合物经配制用于局部施用、通过注射施用和/或经口施用。在一种情况下，组合物经配制用于经口施用。在另一情况下，组合物是锭剂、粉末、片剂、凝胶帽(gel-cap)、明胶、液体溶液、食品、食品中和/或可溶解膜。
在一些实施方案中，生物标志中的至少一个能够结合至淀粉状蛋白。在一些实施方案中，生物标志中的至少一个能够预防淀粉状蛋白聚集。在一些实施方案中，配制组合物以减少淀粉状蛋白分泌。在一些实施方案中，配制组合物以降低可溶和不可溶淀粉状蛋白水平。
在一些实施方案中，配制组合物以减少τ。在一些实施方案中，配制组合物以减少磷酸化的τ和/或τ的磷酸化。
在一些实施方案中，配制组合物以减少蛋白质错误折叠。在一些实施方案中，配制组合物以减少蛋白质聚集。
在一些实施方案中，配制组合物以减少神经炎症。在一些实施方案中，配制组合物以增加il-4与il-2的比率。
在一些实施方案中，配制组合物以增加认知。
在一些实施方案中，配制组合物以抑制cox1和/或cox2或其路径。在一些实施方案中，配制组合物以抑制5lox或其路径。在一些实施方案中，配制组合物以具有抗氧化活性。在一些实施方案中，配制组合物以清除自由基。在一些实施方案中，配制组合物以增加th2反应。
在一些实施方案中，配制组合物以抑制或治疗神经疾病、病症和/或病状。在一些实施方案中，配制组合物以抑制或治疗退行性/蛋白质错误折叠病症、脑血管疾病、发炎疾病、创伤/闭合性头部损伤、癫痫症和/或赘生物。在一些实施方案中，配制组合物以抑制或治疗阿尔茨海默病、帕金森病、路易体疾病(lewybodydisease)、额颞叶型退化症、进行性核上麻痹、肌萎缩性侧索硬化、多系统萎缩症、大脑淀粉样变性、脊髓小脑萎缩症、缺血性中风、再灌注损伤、大脑血管痉挛、多发性硬化症、cns狼疮、震荡、挫伤、慢性创伤性脑病、全身性癫痫病症、局部癫痫病症、转移性肿瘤和/或原发性cns肿瘤。在一些实施方案中，配制组合物以抑制或治疗阿尔茨海默病。
在一些实施方案中，配制组合物以预防神经疾病、病症和/或病状。在一些实施方案中，配制组合物以预防退行性/蛋白质错误折叠病症、脑血管疾病、发炎疾病、创伤/闭合性头部损伤、癫痫症和/或赘生物。在一些实施方案中，配制组合物以预防阿尔茨海默病、帕金森病、路易体疾病、额颞叶型退化症、进行性核上麻痹、肌萎缩性侧索硬化、多系统萎缩症、大脑淀粉样变性、脊髓小脑萎缩症、缺血性中风、再灌注损伤、大脑血管痉挛、多发性硬化症、cns狼疮、震荡、挫伤、慢性创伤性脑病、全身性癫痫病症、局部癫痫病症、转移性肿瘤和/或原发性cns肿瘤。在一些实施方案中，配制组合物以预防阿尔茨海默病。
在一些实施方案中，组合物配制成止吐药。在一些实施方案中，配制组合物以治疗与服用至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂、nmda受体拮抗剂和/或姜黄素的对象相关的副作用和/或不良事件。在一些实施方案中，配制组合物以预防与服用至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂、nmda受体拮抗剂和/或姜黄素的对象相关的副作用和/或不良事件。
在一些实施方案中，当与无生物标志1至16、18和/或19中的任一个时摄入的姜黄素和/或其类似物相比，配制组合物以增加对象的姜黄素和/或其类似物摄入。
在一些实施方案中，组合物进一步包含至少一种姜黄酮，并且姜黄素和/或其类似物与姜黄酮的重量比为0.5至0.9。
在一些实施方案中，配制组合物以向经施用该组合物的人类的血清中提供组合物中所存在的至少30％姜黄素和/或其功能衍生物。在一些实施方案中，配制组合物以向经施用该组合物的人类的血清中提供至少10mg姜黄素和/或其功能衍生物。在一些实施方案中，配制组合物以在向对象施用后在该人类对象的血清中提供针对姜黄素和/或其功能衍生物的20分钟至120分钟的tmax。在一些实施方案中，配制组合物以在向对象施用后在该人类对象的血清中提供针对姜黄素和/或其功能衍生物的至少5微摩尔的cmax。
在一些实施方案中，配制组合物以在向对象施用后在该人类对象的血清中提供针对生物标志1的5分钟至120分钟的tmax。在一些实施方案中，配制组合物以在向对象施用后在该人类对象的血清中提供针对生物标志2的2分钟至60分钟的tmax。在一些实施方案中，配制组合物以在向对象施用后在该人类对象的血清中提供针对生物标志6的10分钟至180分钟的tmax。在一些实施方案中，配制组合物以在向对象施用后在该人类对象的血清中提供针对生物标志12的5分钟至20分钟的tmax。
在一些实施方案中，配制组合物以向经施用该组合物的人类脑脊髓液中提供组合物中所存在的姜黄素和/或其功能衍生物。在一些实施方案中，配制组合物以向经施用该组合物的人类脑脊髓液中提供至少1mg姜黄素和/或其功能衍生物。在一些实施方案中，配制组合物以向经施用该组合物的人类脑脊髓液中提供生物标志1至16、18或19中的至少一个。
在一些实施方案中，组合物进一步包含显像剂。在一种情况下，显像剂共价键合至生物标志1至16、18或19中的至少一个。在另一情况下，显影剂不共价键合至生物标志1至16、18或19中的任一个。
本文公开了治疗对象的方法。在一些实施方案中，该方法是通过向对象施用本文公开的组合物中的任一个来治疗处于神经疾病、病状和/或病症风险和/或患有神经疾病、病状和/或病症的对象的方法，且其中该神经疾病、病状和/或病症在该对象中得以改善和/或与如果患者未经治疗，该神经疾病、病状和/或病症的预期发作相比，发作延迟。在一些实施方案中，神经疾病、病状和/或病症是退行性/蛋白质错误折叠病症、脑血管疾病、发炎疾病、创伤/闭合性头部损伤、癫痫症和/或赘生物。在一些实施方案中，神经疾病、病状和/或病症是阿尔茨海默病、帕金森病、路易体疾病、额颞叶型退化症、进行性核上麻痹、肌萎缩性侧索硬化、多系统萎缩症、大脑淀粉样变性、脊髓小脑萎缩症、缺血性中风、再灌注损伤、大脑血管痉挛、多发性硬化症、cns狼疮、震荡、挫伤、慢性创伤性脑病、全身性癫痫病症、局部癫痫病症、转移性肿瘤和/或原发性cns肿瘤。在一些实施方案中，神经疾病、病状和/或病症是阿尔茨海默病。
在一些实施方案中，该方法是用于治疗处于阿尔茨海默病风险或患有阿尔茨海默病的对象的方法。在一些实施方案中，该方法包括向对象施用本文公开的组合物中的任一个，其中该对象中阿尔茨海默病的至少一种症状得以改善或与如果患者未经治疗，阿尔茨海默病的预期发作相比，阿尔茨海默病的发作延迟。在一些实施方案中，该方法包括其中对象经鉴别为具有淀粉状蛋白分泌、淀粉状蛋白聚集、τ过磷酸化、神经炎症或认知下降或其任意组合。
在一些实施方案中，本文公开的方法包括其中在24小时期间向对象施用总量为1mg至10000mg、10mg至5000mg、50mg至2500mg或100mg至1000mg的组合物。
在一些实施方案中，本文公开的方法包括其中生物标志1至16、18或19中的至少一个以合成方式获得。在一些实施方案中，该方法包括其中生物标志1至16、18或19中的至少一个由植物中分离。在一种情况下，该方法包括其中生物标志中的至少一个由姜黄中分离。在一些实施方案中，该方法包括其中组合物生物标志的相对丰度具有至少95％批次间化学一致性。
在一些实施方案中，本文公开的方法包括其中组合物进一步包含乙酰胆碱酯酶抑制剂。在一种情况下，该方法包括其中该乙酰胆碱酯酶抑制剂是多奈哌齐、他克林、加兰他敏、利凡斯的明、其盐或其任意组合。在一种情况下，该方法包括其中该乙酰胆碱酯酶抑制剂是多奈哌齐、其盐或其任意组合。在一些实施方案中，本文公开的方法包括其中该组合物进一步包含n-甲基-d-天冬氨酸酯(nmda)受体拮抗剂。在一些实施方案中，nmda受体拮抗剂是美金刚。
在一些实施方案中，本文公开的方法包括其中组合物被鼻内施用。在一些实施方案中，该方法包括其中组合物呈干燥粉末形式和/或通过喷雾器施用。在一些实施方案中，该方法包括其中组合物被局部施用、通过注射施用和/或经口施用。在一种情况下，该方法包括其中组合物经口施用。在另一情况下，该方法包括其中该组合物作为锭剂、粉末、片剂、凝胶帽、明胶、液体溶液、食品、食品中和/或可溶解膜被施用。
在一些实施方案中，本文公开的方法包括其中生物标志中的至少一个结合至淀粉状蛋白。在一些实施方案中，该方法包括其中淀粉状蛋白聚集减少。在一种情况下，该方法包括其中与针对所施用的组合物中各个生物标志所预期的淀粉状蛋白聚集中的累积减少量相比，所施用的组合物中生物标志在减少淀粉状蛋白聚集中协同起作用。在一些实施方案中，该方法包括其中淀粉状蛋白分泌减少。在一种情况下，该方法包括其中与针对所施用的组合物中各个生物标志所预期的淀粉状蛋白分泌中的累积减少量相比，所施用的组合物中生物标志在减少淀粉状蛋白分泌中协同起作用。在一些实施方案中，该方法包括其中可溶和不可溶的淀粉状蛋白水平降低。
在一些实施方案中，本文公开的方法包括其中τ水平降低。在一些实施方案中，该方法包括其中磷酸化的τ水平和/或τ的磷酸化减少。
在一些实施方案中，本文公开的方法包括其中蛋白质错误折叠水平降低。在一些实施方案中，本文公开的方法包括其中蛋白质聚集水平降低。
在一些实施方案中，本文公开的方法包括其中反应性氧物质水平和/或自由基水平降低。
在一些实施方案中，本文公开的方法包括其中神经炎症减少。在一些实施方案中，该方法包括其中il-4与il-2的比率增加。
在一些实施方案中，本文公开的方法包括其中认知增加。
在一些实施方案中，本文公开的方法包括其中当与无生物标志1至16、18和/或19中的任一个时摄入的姜黄素和/或其功能衍生物相比，增加了摄入到对象中的姜黄素和/或其功能衍生物。
在一些实施方案中，本文公开的方法包括其中组合物进一步包含至少一种姜黄酮，并且姜黄素和/或其功能衍生物与姜黄酮的重量比为0.5至0.9。
在一些实施方案中，本文公开的方法包括其中组合物中所存在的至少30％姜黄素和/或其功能衍生物进入对象血清中。在一些实施方案中，该方法包括其中至少10mg姜黄素和/或其功能衍生物进入对象血清中。在一些实施方案中，该方法包括其中在向对象施用后在该对象的血清中针对姜黄素和/或其功能衍生物的tmax为20分钟至120分钟、20分钟至110分钟、30分钟至150分钟、25分钟至100分钟或30分钟至90分钟。在一些实施方案中，该方法包括其中在向对象施用后在该对象的血清中针对姜黄素和/或其功能衍生物的cmax为至少5微摩尔、至少6微摩尔、至少10微摩尔或至少11微摩尔。在一些实施方案中，该方法包括其中在向对象施用后在该对象的血清中针对生物标志1的tmax为5分钟至120分钟、2分钟至100分钟、7分钟至150分钟或10分钟至100分钟。在一些实施方案中，该方法包括其中在向对象施用后在该对象的血清中针对生物标志2的tmax为2分钟至60分钟、1分钟至45分钟、5分钟至120分钟或5分钟至50分钟。在一些实施方案中，该方法包括其中在向对象施用后在该对象的血清中针对生物标志6的tmax为10分钟至180分钟、5分钟至150分钟、15分钟至210分钟或15分钟至150分钟。在一些实施方案中，该方法包括其中在向对象施用后在该对象的血清中针对生物标志12的tmax为5分钟至20分钟、2分钟至15分钟、7分钟至30分钟或7分钟至15分钟。
本文公开的是治疗与服用至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂、nmda受体拮抗剂和/或姜黄素的对象相关的副作用和/或不良事件的方法。在一些实施方案中，该方法包括向对象施用本文公开的组合物中的任一个，其中与服用至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂、nmda受体拮抗剂和/或姜黄素的对象相关的至少一种副作用和/或不良事件减少。
本文公开的是预防与服用至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂、nmda受体拮抗剂和/或姜黄素的对象相关的副作用和/或不良事件的方法。在一些实施方案中，该方法包括向对象施用本文公开的组合物中的任一个，其中与如果该对象不服用本文公开的组合物中的任一个，所预期的至少一种副作用和/或不良事件的量和/或强度相比，与服用至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂、nmda受体拮抗剂和/或姜黄素的对象相关的至少一种副作用和/或不良事件减少。
本文公开的是增加姜黄素和/或其功能衍生物摄入到对象血清中的方法。在一些实施方案中，该方法包括向对象施用本文公开的组合物中的任一个，其中与施用姜黄素和/或其功能衍生物而无生物标志1至16、18或19中的任一个相比，姜黄素和/或其功能衍生物的摄入增加。在一些实施方案中，在对象中治疗或预防活体外、活体内和/或临床研究中展现通过姜黄素治疗或预防的疾病、病症、病状、其病因和/或其症状。
本文公开的是增加姜黄素和/或其功能衍生物摄入到对象脑脊髓液中的方法。在一些实施方案中，该方法包括向对象施用本文公开的组合物中的任一个，其中与施用姜黄素和/或其功能衍生物而无生物标志1至16、18或19中的任一个相比，姜黄素和/或其功能衍生物的摄入增加。在一种情况下，该方法包括其中向对象施用本文公开的组合物中的任一个向该对象的脑脊髓液中提供至少1mg姜黄素和/或其功能衍生物。在一些实施方案中，在对象中治疗或预防活体外、活体内和/或临床研究中展现通过姜黄素治疗或预防的疾病、病症、病状、其病因和/或其症状。
本文公开的是向对象的脑脊髓液中提供生物标志1至16、18或19中的至少一个的方法。在一些实施方案中，该方法包括向对象施用本文公开的组合物中的任一个，其中生物标志1至16、18或19中的至少一个进入该对象的脑脊髓液。
本文公开的是标记淀粉状蛋白的方法。在一些实施方案中，该方法包括使淀粉状蛋白与本文公开的组合物中的任一个接触。在一些实施方案中，该方法包括其中所标记的淀粉状蛋白是β淀粉状蛋白。
本文公开的是标记τ蛋白质的方法。在一些实施方案中，该方法包括使τ与本文公开的组合物中的任一个接触。
本文公开的是制备本文公开的组合物的方法。在一些实施方案中，该方法包括其中该制备方法制备生物标志的相对丰度至少90％、优选至少95％或至少98％批次间化学一致的组合物。
在本发明的一些方面，组合物可进一步包含一或多于一种营养品和/或药学上可接受的载体或稀释剂。这些载体/稀释剂可以是佐剂、赋形剂或载剂，诸如保藏剂、填充剂、崩解剂、湿润剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、抗菌剂、抗真菌剂、润滑剂、维生素、聚合物、含硅氧烷的化合物、精油、结构化剂和分配剂。各载体在与制剂的其他成分相容且对对象无害的意义上是可接受的。在本发明的一些方面，载体可以包括至少一种选自以下的亲水性聚合化合物：树胶、纤维素醚、丙烯酸类树脂、碳水化合物载体、滑石、乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、水、明胶、蛋白质衍生化合物、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂酸镁及其任意组合。稀释剂/载体的非限制性实例在整个本说明书中鉴别出并以引用的方式并入该章节中。这些成分的量按组合物的重量或体积计可以为0.0001％至99.9％，或是本说明书的其他章节(其以引用的方式并入该段落中)中公开的之间的任何整数或范围。
组合物在室温下可以储存1个月、6个月、12个月、18个月或24个月。在本发明的一些方面，组合物配制为用于经口施用的粉末、片剂、凝胶帽、珠子、可食用片剂、食品、食品中、可溶解膜、能够通过空气分散的液体、明胶、乳液、经皮贴片或液体溶液。在本发明的一些方面，配制的组合物可以包含在固体纳米颗粒、含脂质的纳米颗粒、基于脂质的载体、密封管道、吸管、密封袋或其任意组合中。在本发明的其他方面，可以配制组合物用于通过注射施用。
还预期包含本发明组合物的试剂盒。在某些实施方案中，组合物包含在容器中。容器可以是瓶子、分配器、包装或吸管。容器可分配预定量的组合物。在某些方面，组合物分配为丸剂、片剂、胶囊、经皮贴片、可食用咀嚼物、乳膏、乳液、凝胶、喷雾、雾状物、块状物、粉末或液体。容器可以包括其表面上的标记。标记可以是字、缩写、图片或符号。
预期在本说明书中论述的任何实施方案可利用本发明的任何方法或组合物实施，且反之亦然。另外，本发明的组合物可用于实现本发明的方法。
还预期的是包含本发明组合物的产品。在非限制性方面，产品可以是营养产品。营养产品可以是本说明书的其他章节中所描述的那些产品或本领域技术人员已知的那些产品。在其他非限制性方面，产品可以为医药产品。医药产品和/或营养产品可以是本说明书的其他章节中所描的那些产品或本领域技术人员已知的那些产品。产品的非限制性实例包括丸剂、片剂、可食用咀嚼物、胶囊、乳膏、乳液、凝胶、喷雾、雾状物、溶解膜、经皮贴片或液体等。
还公开了本发明的以下实施方案1至107。实施方案1是一种包含以下的组合物：姜黄素和/或姜黄素的功能衍生物，和精确质量为120.094amu且相对丰度为至少2.17％的生物标志1；其中在姜黄中发现该生物标志1；且其中该相对丰度是相对于掺入溶解在乙醇中的0.5mg/ml组合物中的25mg/ml水杨酸。实施方案2是实施方案1的组合物，其进一步包含以下额外的生物标志中的任一个或任意组合或所有：精确质量为134.110amu且相对丰度为至少0.31％的生物标志2；精确质量为200.157amu且相对丰度为至少0.47％的生物标志6；和精确质量为232.146amu且相对丰度为至少2.38％的生物标志12，其中在姜黄中发现这些生物标志，且其中相对丰度是相对于掺入溶解在乙醇中的0.5mg/ml组合物中的25mg/ml水杨酸。实施方案3是实施方案2的组合物，其具有生物标志1、2、6和12中的至少2种、3种或4种。实施方案4是实施方案1至3中任一个的组合物，其中该组合物进一步包含以下中的一个或更多个：精确质量为150.104amu且浓度为至少0.04重量％的生物标志3；精确质量为176.120amu且相对丰度为至少0.96％的生物标志4；精确质量为192.091amu且相对丰度为至少1.74％的生物标志5；精确质量为202.172amu且相对丰度为至少0.87％的生物标志7；精确质量为204.188amu且相对丰度为至少0.30％的生物标志8；精确质量为216.151amu且相对丰度为至少10.75％的生物标志9；精确质量为218.203amu且相对丰度为至少4.00％的生物标志10；精确质量为220.183amu且相对丰度为至少0.72％的生物标志11；精确质量为234.162amu且相对丰度为至少3.52％的生物标志13；精确质量为256.240amu且相对丰度为至少0.25％的生物标志14；精确质量为308.105amu且浓度为至少1.50重量％的生物标志15；精确质量为338.115amu且浓度为至少1.67重量％的生物标志16；精确质量为372.157amu且浓度为至少0.88重量％的生物标志18；和精确质量为450.261amu且相对丰度为至少0.61％的生物标志19，其中在姜黄中发现各生物标志，且其中该相对丰度是相对于掺入溶解在乙醇中的0.5mg/ml组合物中的25mg/ml水杨酸。实施方案5是实施方案1至4中任一个的组合物，其中各生物标志的质量是通过实时直接分析-tof(dart-tof)质谱仪确定的质量。实施方案6是实施方案1至5中任一个的组合物，其中生物标志中的至少一个以合成方式获得。实施方案7是实施方案1至6中任一个的组合物，其中生物标志中的至少一个从植物中分离。实施方案8是实施方案7的组合物，其中生物标志中的至少一个从姜黄中分离。实施方案9是实施方案1至8中任一个的组合物，其中该组合物的生物标志相对丰度具有至少90％、优选至少95％或至少98％的批次间化学一致性。实施方案10是实施方案1至9中任一个的组合物，其中该组合物进一步包含至少一种药物。实施方案11是实施方案1至10中任一个的组合物，其中该组合物进一步包含至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂和/或n-甲基-d-天冬氨酸酯(nmda)受体拮抗剂。实施方案12是实施方案11的组合物，其中该至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂是多奈哌齐、他克林、加兰他敏、利凡斯的明、其盐或其任意组合和/或其中该至少一种nmda受体拮抗剂是美金刚。实施方案13是实施方案1至12中任一个的组合物，其中该组合物进一步包含至少一种消炎药。实施方案14是实施方案13的组合物，其中该至少一种消炎药是非类固醇消炎药。实施方案15是实施方案14的组合物，其中该非类固醇消炎药是乙酰水杨酸、布洛芬、酮基布洛芬或萘普生、其盐或其任意组合。实施方案16是实施方案1至15中任一个的组合物，其中配制该组合物用于鼻内施用。实施方案17是实施方案16的组合物，其中该组合物作为干燥粉末施用和/或通过喷雾器施用。实施方案18是实施方案1至15中任一个的组合物，其中配制该组合物用于局部施用、通过注射施用和/或经口施用。实施方案19是实施方案18的组合物，其中配制该组合物用于经口施用。实施方案20是实施方案19的组合物，其中该组合物为锭剂、粉末、片剂、凝胶帽、明胶、液体溶液、食品、食品中和/或可溶解膜。实施方案21是实施方案1至20中任一个的组合物，其中生物标志中的至少一个能够结合至淀粉状蛋白。实施方案22是实施方案1至21中任一个的组合物，其中生物标志中的至少一个能够预防淀粉状蛋白聚集。实施方案23是实施方案1至22中任一个的组合物，其中配制该组合物以减少淀粉状蛋白分泌。实施方案24是实施方案1至23中任一个的组合物，其中配制该组合物以降低可溶和不可溶淀粉状蛋白水平。实施方案25是实施方案1至24中任一个的组合物，其中配制该组合物以减少τ。实施方案26是实施方案1至25中任一个的组合物，其中配制该组合物以减少磷酸化的τ和/或τ的磷酸化。实施方案27是实施方案1至26中任一个的组合物，其中配制该组合物以减少神经炎症、蛋白质错误折叠和/或蛋白质聚集。实施方案28是实施方案1至27中任一个的组合物，其中配制该组合物以增加il-4与il-2的比率。实施方案29是实施方案1至28中任一个的组合物，其中配制该组合物以增加认知。实施方案30是实施方案1至29中任一个的组合物，其中配制该组合物以抑制cox1和/或cox2或其路径。实施方案31是实施方案1至30中任一个的组合物，其中配置该组合物以抑制5lox或其路径。实施方案32是实施方案1至31中任一个的组合物，其中配制该组合物以具有抗氧化活性。实施方案33是实施方案1至32中任一个的组合物，其中配制该组合物以清除自由基。实施方案34是实施例1至33中任一个的组合物，其中配制该组合物以增加th2反应。实施方案35是实施方案1至34中任一个的组合物，其中配制该组合物以治疗和/或预防神经疾病、病症和/或病状。实施方案36是实施方案35的组合物，其中配制该组合物以治疗和/或预防退行性/蛋白质错误折叠疾病、病症和/或病状、脑血管疾病、病症和/或病状、发炎疾病、病症和/或病状、创伤/闭合性头部损伤、癫痫症和/或赘生物。实施方案37是实施方案35的组合物，其中配制该组合物以治疗和/或预防阿尔茨海默病、帕金森病、路易体疾病、额颞叶型退化症、进行性核上麻痹、肌萎缩性侧索硬化、多系统萎缩症、大脑淀粉样变性、脊髓小脑萎缩症、缺血性中风、再灌注损伤、大脑血管痉挛、多发性硬化症、cns狼疮、震荡、挫伤、慢性创伤性脑病、全身性癫痫病症、局部癫痫病症、转移性肿瘤和/或原发性cns肿瘤。实施方案38是实施方案35的组合物，其中配制该组合物以治疗和/或预防阿尔茨海默病。实施方案39是实施方案1至38中任一个的组合物，其中将该组合物配制为止吐药。实施方案40是实施方案1至39中任一个的组合物，其中配制该组合物以治疗与服用至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂、nmda受体拮抗剂和/或姜黄素的对象相关的副作用和/或不良事件。实施方案41是实施方案1至39中任一个的组合物，其中配制该组合物以预防与服用至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂、nmda受体拮抗剂和/或姜黄素的对象相关的副作用和/或不良事件。实施方案42是实施方案1至41中任一个的组合物，其中当与无生物标志1至16、18和/或19中的任一个时摄入的姜黄素和/或其类似物相比，配制该组合物以增加姜黄素和/或其类似物摄入到对象中。实施方案43是实施方案1至42中任一个的组合物，其中该组合物进一步包含至少一种姜黄酮，并且姜黄素和/或其类似物与姜黄酮的重量比为0.5至0.9。实施方案44是实施方案1至43中任一个的组合物，其中配制该组合物以向经施用该组合物的人类血清中提供该组合物中所存在的至少30％姜黄素和/或其功能衍生物。实施方案45是实施方案1至44中任一个的组合物，其中配制该组合物以向经施用该组合物的人类血清中提供至少10mg姜黄素和/或其功能衍生物。实施方案46是实施方案1至45中任一个的组合物，其中配制该组合物以在向对象施用后在该人类对象的血清中针对姜黄素和/或其功能衍生物提供20分钟至120分钟的tmax。实施方案47是实施方案1至46中任一个的组合物，其中配制该组合物以在向对象施用后在该人类对象的血清中针对姜黄素和/或其功能衍生物提供至少5微摩尔的cmax。实施方案48是实施方案1至47中任一个的组合物，其中配制该组合物以在向对象施用后在该人类对象的血清中针对生物标志1提供5分钟至120分钟的tmax。实施方案49是实施方案2至48中任一个的组合物，其中配制该组合物以在向对象施用后在该人类对象的血清中针对生物标志2提供2分钟至60分钟的tmax。实施方案50是实施方案2至49中任一个的组合物，其中配制该组合物以在向对象施用后在该人类对象的血清中针对生物标志6提供10分钟至180分钟的tmax。实施方案51是实施方案2至50中任一个的组合物，其中配制该组合物以在向对象施用后在该人类对象的血清中针对生物标志12提供5分钟至20分钟的tmax。实施方案52是实施方案1至51中任一个的组合物，其中配制该组合物以向经施用该组合物的人类脑脊髓液中提供该组合物中所存在的姜黄素和/或其功能衍生物。实施方案53是实施方案1至52中任一个的组合物，其中配制该组合物以向经施用该组合物的人类脑脊髓液中提供至少1mg姜黄素和/或其功能衍生物。实施方案54是实施方案1至53中任一个的组合物，其中配制该组合物以向经施用该组合物的人类脑脊髓液中提供生物标志1至16、18或19中的至少一个。实施方案55是实施方案1至54中任一个的组合物，其进一步包含显像剂。实施方案56是实施方案55的组合物，其中该显像剂共价键合至生物标志1至16、18或19中的至少一个。实施方案57是实施方案55的组合物，其中该显像剂不共价键合至生物标志1至16、18或19中的任一个。实施方案58是一种治疗处于神经疾病、病症和/或病状风险和/或患有神经疾病、病症和/或病状的对象的方法，该方法包括向该对象施用实施方案1至57的组合物中的任一个，且其中该神经疾病、病症和/或病状在该对象中得以改善和/或与如果患者未经治疗，该神经疾病、病症和/或病状的预期发作相比，发作延迟。实施方案59是实施方案58的方法，其中该神经疾病、病症和/或病状是退行性/蛋白质错误折叠疾病、病症和/或病状、脑血管疾病、病症和/或病状、发炎疾病、病症和/或病状、创伤/闭合性头部损伤、癫痫症和/或赘生物。实施方案60是实施方案58的方法，其中该神经疾病、病症和/或病状是阿尔茨海默病、帕金森病、路易体疾病、额颞叶型退化症、进行性核上麻痹、肌萎缩性侧索硬化、多系统萎缩症、大脑淀粉样变性、脊髓小脑萎缩症、缺血性中风、再灌注损伤、大脑血管痉挛、多发性硬化症、cns狼疮、震荡、挫伤、慢性创伤性脑病、全身性癫痫病症、局部癫痫病症、转移性肿瘤和/或原发性cns肿瘤。实施方案61是实施方案58的方法，其中该神经疾病、病症和/或病状是阿尔茨海默病。实施方案62是实施方案61的方法，其中该对象被鉴别为具有淀粉状蛋白分泌、淀粉状蛋白聚集、τ过磷酸化、神经炎症或认知下降或其任意组合。实施方案63是实施方案58至62中任一个的方法，其中该对象在24小时期间被施用总量为1mg至10000mg、10mg至5000mg、50mg至2500mg或100mg至1000mg的组合物。实施方案64是实施方案58至63中任一个的方法，其中生物标志1至16、18或19中的至少一个以合成方式获得。实施方案65是实施方案58至64中任一个的方法，其中生物标志1至16、18或19中的至少一个从植物中分离。实施方案66是实施方案65的方法，其中生物标志中的至少一个从姜黄中分离。实施方案67是实施方案58至66中任一个的方法，其中该组合物的生物标志相对丰度具有至少95％的批次间化学一致性。实施方案68是实施方案58至67中任一个的方法，其中该组合物进一步包含乙酰胆碱酯酶抑制剂和/或n-甲基-d-天冬氨酸酯(nmda)受体拮抗剂。实施方案69是实施方案68的方法，其中该乙酰胆碱酯酶抑制剂是多奈哌齐、他克林、加兰他敏、利凡斯的明、其盐或其任意组合和/或其中该至少一种nmda受体拮抗剂是美金刚。实施方案70是实施方案69的方法，其中该乙酰胆碱酯酶抑制剂是多奈哌齐、其盐或其任意组合。实施方案71是实施方案58至70中任一个的方法，其中该组合物经鼻内施用。实施方案72是实施方案58至71中任一个的方法，其中该组合物作为干燥粉末施用和/或通过喷雾器施用。实施方案73是实施方案58至70中任一个的方法，其中该组合物局部施用、通过注射施用和/或经口施用。实施方案74是实施方案73的方法，其中该组合物经口施用。实施方案75是实施方案74的方法，其中该组合物作为锭剂、粉末、片剂、凝胶帽、明胶、液体溶液、食品、食品中和/或可溶解膜施用。实施方案76是实施方案61至75中任一个的方法，其中生物标志中的至少一个结合至淀粉状蛋白。实施方案77是实施方案61至76中任一个的方法，其中淀粉状蛋白聚集减少。实施方案78是实施方案77的方法，其中与针对所施用组合物中各个生物标志所预期的淀粉状蛋白聚集中的累积减少量相比，所施用组合物中生物标志在减少淀粉状蛋白聚集中协同起作用。实施方案79是实施方案61至78中任一个的方法，其中淀粉状蛋白分泌减少。实施方案80是实施方案79的方法，其中与针对所施用组合物中各个生物标志所预期的淀粉状蛋白分泌中的累积减少量相比，所施用组合物中生物标志在减少淀粉状蛋白分泌中协同起作用。实施方案81是实施方案61至79中任一个的方法，其中可溶和不可溶淀粉状蛋白水平降低。实施方案82是实施方案61至81中任一个的方法，其中τ水平降低。实施方案83是实施方案61至82中任一个的方法，其中磷酸化的τ水平和/或τ的磷酸化减少。实施方案84是实施方案58至83中任一个的方法，其中反应性氧物质水平和/或自由基水平降低，蛋白质聚集减少和/或蛋白质错误折叠减少。实施方案85是实施方案58至83中任一个的方法，其中神经炎症减少。实施方案86是实施方案58至85中任一个的方法，其中il-4与il-2的比率增加。实施方案87是实施方案58至86中任一个的方法，其中认知增加。实施方案88是实施方案58至87中任一个的方法，其中当与无生物标志1至16、18和/或19中的任一个时摄入的姜黄素和/或其功能衍生物相比，摄入到对象中的姜黄素和/或其功能衍生物增加。实施方案89是实施方案58至88中任一个的方法，其中该组合物进一步包含至少一种姜黄酮，并且姜黄素和/或其功能衍生物与姜黄酮的重量比为0.5至0.9。实施方案90是实施方案58至89中任一个的方法，其中该组合物中所存在的至少30％姜黄素和/或其功能衍生物进入该对象的血清中。实施方案91是实施方案58至90中任一个的方法，其中至少10mg姜黄素和/或其功能衍生物进入该对象的血清中。实施方案92是实施方案58至91中任一个的方法，其中在向对象施用后该对象的血清中针对姜黄素和/或其功能衍生物的tmax为20分钟至120分钟、20分钟至110分钟、30分钟至150分钟、25分钟至100分钟或30分钟至90分钟。实施方案93是实施方案58至92中任一个的方法，其中在向对象施用后该对象的血清中针对姜黄素和/或其功能衍生物的cmax为至少5微摩尔、至少6微摩尔、至少10微摩尔或至少11微摩尔。实施方案94是实施方案58至93中任一个的方法，其中在向对象施用后该对象的血清中针对生物标志1的tmax为5分钟至120分钟、2分钟至100分钟、7分钟至150分钟或10分钟至100分钟。实施方案95是实施方案58至94中任一个的方法，其中在向对象施用后该对象的血清中针对生物标志2的tmax为2分钟至60分钟、1分钟至45分钟、5分钟至120分钟或5分钟至50分钟。实施方案96是实施方案58至95中任一个的方法，其中在向对象施用后该对象的血清中针对生物标志6的tmax为10分钟至180分钟、5分钟至150分钟、15分钟至210分钟或15分钟至150分钟。实施方案97是实施方案58至96中任一个的方法，其中在向对象施用后该对象的血清中针对生物标志12的tmax为5分钟至20分钟、2分钟至15分钟、7分钟至30分钟或7分钟至15分钟。实施方案98是一种治疗与服用至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂、nmda受体拮抗剂和/或姜黄素的对象相关的副作用和/或不良事件的方法，该方法包括向对象施用实施方案1至57的组合物中的任一个，其中与服用至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂、nmda受体拮抗剂和/或姜黄素的对象相关的至少一种副作用和/或不良事件减少。实施方案99是一种预防与服用至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂、nmda受体拮抗剂和/或姜黄素的对象相关的副作用和/或不良事件的方法，该方法包括向对象施用实施方案1至57的组合物中的任一个，其中与如果对象未服用实施方案1至57的组合物中的任一个，所预期的至少一种副作用和/或不良事件的量和/或强度相比，与服用至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂、nmda受体拮抗剂和/或姜黄素的对象相关的至少一种副作用和/或不良事件减少。实施方案100是一种增加姜黄素和/或其功能衍生物摄入到对象的血清中的方法，该方法包括向对象施用实施方案1至57的组合物中的任一个，其中与施用姜黄素和/或其功能衍生物而无生物标志1至16、18或19中的任一个相比，姜黄素和/或其功能衍生物的摄入增加。实施方案101是一种增加姜黄素和/或其功能衍生物摄入到对象的脑脊髓液中的方法，该方法包括向对象施用实施方案1至57的组合物中的任一个，其中与施用姜黄素和/或其功能衍生物而无生物标志1至16、18或19中的任一个相比，姜黄素和/或其功能衍生物的摄入增加。实施方案102是实施方案101的方法，其中向对象施用实施方案1至57的组合物中的任一个向该对象的脑脊髓液中提供至少1mg姜黄素和/或其功能衍生物。实施方案103是一种向对象的脑脊髓液中提供生物标志1至16、18或19中的至少一个的方法，该方法包括向该对象施用实施方案1至57的组合物中的任一个，其中生物标志1至16、18或19中的至少一个进入该对象的脑脊髓液。实施方案104是一种标记淀粉状蛋白的方法，该方法包括使淀粉状蛋白与实施方案1至57中任一个的组合物接触。实施方案105是实施方案104的方法，其中该标记的淀粉状蛋白为β淀粉状蛋白。实施方案106是一种标记τ蛋白质的方法，该方法包括使τ与实施方案1至57中任一个的组合物接触。实施方案107是一种制备实施方案1至57中任一个的组合物的方法，其中该制备方法所制备的组合物的生物标志相对丰度具有至少90％、优选至少95％或至少98％的批次间化学一致性。
“治疗剂”涵盖本文明确要求保护的化合物。其还涵盖此类化合物以及营养品和/或其药学上可接受的盐。适用的盐是本领域技术人员已知的且包括与无机酸、有机酸、无机碱或有机碱的盐。适用于本发明的治疗剂是那些不论单独或与其他营养品和/或药物赋形剂或惰性成分组合向人类或动物施用后，会产生所期望的、有利的且经常为药理学效应的化合物。
术语“生物标志”是指定义为生物标志、其类似物、其衍生物、其盐形式或其任意类似物或衍生物的盐形式的化合物。
术语“精确质量”是指以实验方式确定的已知电荷的离子的所测量分子的质量。用于精确质量的单位包括原子质量单位(amu)和毫统一原子质量单位(mmu)。术语“分子量”是指化合物中所存在的所有不同同位素成分但加权其天然丰度的分子的平均重量。
术语“相对丰度”是指相对于参考化合物的丰度的所关注化合物的丰度。在特定方面，相对丰度是所关注化合物的质谱分析峰的原始强度相对于参考化合物的质谱分析峰的原始强度。在一个非限制性实例中，质谱分析峰可通过使用dart-tof质谱分析获得。在另一个特定方面，参考化合物是掺入或掺杂至含有所关注化合物的样品中的化合物。在又一个特定方面，参考化合物是在其添加至用于确定相对丰度的样品之前不存在于样品中的化合物。在另一个特定方面，参考化合物可以是水杨酸。
术语“基本上”及其变化形式定义为如本领域技术人员所理解的大部分但不必全部是所指定的，且在一个非限制性实施方案中，基本上指在10％内、在5％内、在1％内或在0.5％内的范围。
“患者”、“对象”“个体”是指哺乳动物(例如人类、灵长类、狗、猫、牛、绵羊、猪、马、小鼠、大鼠、仓鼠、兔子或天竺鼠)。在特定的方面，患者、对象或个体是人类。
“抑制”或“减少”或这些术语的任何变化形式包括实现所期望结果的任何可测量的减少或完全抑制。
“有效”或“治疗”或“预防”或这些术语的任何变化形式表示足以实现所期望、所预期或想要的结果。
当指化合物时，“类似物”指经改性的化合物，其中一个或多于一个原子已经被其他原子取代，或其中该化合物中缺失一个或多于一个原子，或其中一个或多于一个原子已经被添加至该化合物，或这些修饰的任意组合。这些原子的添加、缺失或取代可以在任何点或多个点处沿着包含该化合物的原始结构进行。
关于母体化合物的“衍生物”指化学改性的母体化合物或其类似物，其中至少一个取代基不存在于该母体化合物或其类似物中。一个这种非限制性实例是经共价改性的母体化合物。典型修饰为酰胺、碳水化合物、烷基、酰基、酯、聚乙二醇化等。
“治疗上等效的”化合物是在治疗疾病或病状中具有与一种或多于一种其他化合物基本上相同效应的化合物。治疗上等效的化合物可以是或可以不是化学上等效的、生物上等效的或一般等效的。
“肠胃外注射”指通过注射在一个或多于一个皮肤层或动物(诸如人类)的黏膜下或穿过一个或多于一个皮肤层或动物(诸如人类)的黏膜施用小分子药物。
“生物可用性”指从制剂吸收治疗剂的程度。
“药学上可接受的载体”指用于将本发明的组合物或药物化合物递送至诸如动物或人类的哺乳动物的药学上可接受的溶剂、悬浮剂或载剂。
“营养学可接受的载体”指用于将本发明化合物递送至诸如哺乳动物或人类的动物的营养学可接受的溶剂、悬浮剂或载剂。
“药学上可接受的”成分、赋形剂或组分是与合理的益处/风险比相匹配的适用于人类和/或动物而无过度的不良副作用(诸如毒性、刺激和过敏性反应)的成分、赋形剂或组分。
“营养学可接受的”成分、赋形剂或组分是与合理的益处/风险比相匹配的适用于人类和/或动物而无过度的不良副作用(诸如毒性、刺激及过敏性反应)的成分、赋形剂或组分。
术语“约”或“大约”或“基本上不变的”定义为本领域技术人员所理解的接近于，且在一个非限制性实施方案中该术语定义为在10％内、优选在5％内、更优选在1％内且最优选在0.5％内。另外，“基本上非水性的”指按水的重量或体积计少于5％、4％、3％、2％、1％或更少。
当与术语“包含”结合用于权利要求和/或本说明书中时，要素前无数量词可以表示“一个”，但其也符合“一个或更多个”、“至少一个”和“一个或多于一个”的含义。
如本说明书和权利要求中所使用的，词语“包含”、“具有”、“包括”或“含有”是包括性或开放式的且不排除额外、未列出的要素或方法步骤。
组合物和其使用方法可以“包含”在整个说明书中公开的成分或步骤中的任一个、“基本上由其构成”或“由其构成”。在一个非限制性方面，相对于过渡阶段“基本上由其构成”，本说明书中公开的组合物和方法的基本和新颖的特征包括组合物减少或预防阿尔茨海默病和/或相关病因和/或症状，诸如(但不限于)炎症、蛋白质错误折叠和/或蛋白质聚集的能力。
本发明的其他目的、特征及优点由以下详细描述会变得显而易见。然而，应理解详细描述和实施例虽然表示了本发明的特定实施方案，但其仅以说明的方式给出。另外，预期根据该详细描述，在本发明的精神和范围内的变化和修改对于本领域技术人员将变得显而易见。
附图说明
以下附图形成本说明书的一部分且包括在此以进一步显示本发明的某些方面。参照这些附图中的一个或多于一个，结合本文呈现的特定实施方案的详细描述，可以更好地理解本发明。
图1人类血清中来自口服剂量的hsrx-888的姜黄素和生物标志1、2、6和12的检测。
图2人类血清中来自口服剂量的50mghsrx-888(含有35mg姜黄素)的姜黄素(5名对象的平均值)的检测。
图3人类血清中来自口服剂量的hsrx-888的生物标志1(5名人类对象的平均值)的检测。
图4人类血清中来自口服剂量的hsrx-888的生物标志2(5名人类对象的平均值)的检测。
图5人类血清中来自口服剂量的hsrx-888的生物标志6(5名人类对象的平均值)的检测。
图6人类血清中来自口服剂量的hsrx-888的生物标志12(5名人类对象的平均值)的检测。
图7hsrx-888(hsg0888)显示了对β-淀粉状蛋白聚集的剂量依赖性抑制。hsrx-888在微摩尔(μm)浓度下有效抑制aβ1-42。利用与hsrx-888、hsg0838、hsg0848或单分子标准物(姜黄素(cur)、去甲氧基姜黄素(dmc)、双去甲氧基姜黄素(bdmc)和四氢姜黄素(thc))—起培养的合成aβ1-42肽以0μg/ml至30μg/ml的变化浓度进行aβ聚集分析。在单一处理事件后5天通过硫代黄素t方法测量聚集。
图8hsrx-888(hsg0888)以浓度依赖性方式显著减少β-淀粉状蛋白产生。hsrx-888以浓度依赖性方式显著减少sweappn2a细胞中的aβ产生，aβ1-40和aβ1-42肽产生均减少。sweappn2a细胞经3μg/ml至30μg/ml的浓度范围(各化合物持续12小时)处理，且aβ1-40，42肽在来自sweappn2a细胞的条件培养基中通过elisa分析。
图9a和9bhsrx-888(hss-888)减少tg2576小鼠中的大脑淀粉样变性。hsrx-888向8个月大的tg2576小鼠经口施用。与对照和thc处理相比，hsrx-888处理显著减少这些小鼠中的aβ沉积。a-aβ沉积的扣带皮层和内嗅皮层的染色。b-内嗅皮层(ec)、海马体(h)和扣带皮层(cc)中以具有标准误差的平均值％计的斑块负荷。
图10a和10bhsrx-888(hss-888)减少tg2576小鼠脑匀浆中的可溶和不可溶β-淀粉状蛋白水平。通过elisa分析小鼠脑匀浆的aβ水平。与可溶和不可溶对照相比，经口施用的hsrx-888显著减少aβ1-40，42的可溶和不可溶形式(分别为a和b)。
图11a和11bhsrx-888(hss-888)减少tg2576小鼠中磷酸化的τ蛋白质。经hsrx-888处理的小鼠显示相对于对照小鼠，pτ减少80％。来自经处理小鼠的前四分之一脑匀浆通过蛋白质印迹分析。**＝p<0.01。
图12a和12bhsrx-888(hss-888)增加th2细胞免疫反应。hsrx-888处理增加显示hsrx-888的细胞因子il-2和il-4经由特定细胞因子的抗炎性活性提供小神经胶质细胞保护。在处死小鼠后从该小鼠建立小神经胶质细胞的原始培养，且将其利用抗cd3抗体刺激24h。数据表示为各细胞因子每总胞内蛋白质(mg)的pg。**＝p<0.01。
图13a和13b提出用于减少β-淀粉状蛋白聚集的非结合机制。在βa(1-42)单体与生物标志15(bdmc)之间的相互作用模型。在tyr10与生物标志1之间发生强分子间相互作用，其允许生物标志15包围有效防止phe19与phe20结合并形成寡聚物(a)的his13和his14。生物标志15还可结合至扰乱βa(1-42)寡聚物(b)的分子间相互作用稳定的gly33、met35和gly37。
图14通过hsrx-888对2-二苯基-1-苦肼基自由基分析(dpph)的剂量依赖性抑制。hsrx-888ic50值为19.2μgml-1(r2＝0.731，n＝10)。
图15a、15b和15c通过hsrx888对cox1(a)、cox2(b)和5lox(c)的剂量依赖性抑制。hsrx-888ic50值分别为100.6μgml-1(r2＝0.907，n＝36)、23.0μgml-1(r2＝0.874，n＝24)和256.3μgml-1(r2＝0.999，n＝8)。
具体实施方式
本发明人出人意料地发现可以在姜黄中发现的数种化合物的组合可预防和治疗阿尔茨海默病、炎症、蛋白质错误折叠和蛋白质聚集。本发明人还发现特定相对浓度的化合物用于增强组合的化合物预防和治疗阿尔茨海默病、炎症、蛋白质错误折叠和蛋白质聚集的能力。另外，本发明人已发现使用具有额外药物的本发明化合物增强组合的化合物预防和治疗阿尔茨海默病、炎症、蛋白质错误折叠和蛋白质聚集的能力。不希望受理论束缚，认为本文公开的化合物和组合物通过以下能力可以是有效的：增加姜黄素摄入到对象(包括人类对象血浆和脑脊髓液)中的能力、组合物的抗炎性能力、组合物结合淀粉状蛋白的能力、组合物减少淀粉状蛋白聚集的能力和组合物减少淀粉样变性的能力。
本文公开的化合物和组合物能够治疗、改善和预防与阿尔茨海默病和炎症相关的症状以及与服用治疗阿尔茨海默病和炎症的药物相关的副作用，诸如恶心。阿尔茨海默病的症状和/或病因的非限制性实例包括淀粉状蛋白聚集、增加的淀粉状蛋白分泌、增加的淀粉状蛋白产生、神经炎斑块、淀粉状蛋白的正常生理学功能损失、τ的过磷酸化、增加的神经原纤维缠结、τ的增加有毒物质、增加的τ水平、神经炎症等。阿尔茨海默病的症状的其他非限制性实例包括认知下降、记忆损伤、意识模糊、视觉损伤、空间识别损伤、减少的词汇、抑郁、情绪改变等。
本文公开的化合物和组合物能够减少蛋白质聚集和蛋白质错误折叠，在治疗和/或预防神经退化病症，诸如阿尔茨海默病(β-淀粉状蛋白和磷酸化的τ蛋白质)、帕金森病(α-突触核蛋白)、路易体痴呆(β-淀粉状蛋白、磷酸化的τ和a-突触核蛋白)、额颞叶型痴呆(τ蛋白质)、海绵状脑病(朊病毒蛋白质)中以及在许多其他中枢和全身性淀粉样变性中提供益处。
另外，本文公开的组合在治疗和/或预防其他神经疾病、病症和/或病状，诸如(但不限于)退行性/蛋白质错误折叠病症、脑血管疾病、发炎性疾病、创伤/闭合性头部损伤、癫痫和/或赘生物中提供益处。退行性/蛋白质错误折叠疾病、病症和/或病状的非限制性实例包括阿尔茨海默病、帕金森病、路易体病、额颞叶型退化症、进行性核上麻痹、肌萎缩性侧索硬化、多系统萎缩症、大脑淀粉样变性、脊髓小脑萎缩症。脑血管疾病、病症和/或病状的非限制性实例包括缺血性中风、再灌注损伤和大脑血管痉挛。发炎性疾病、病症和/或病状的非限制性实例包括多发性硬化症和cns狼疮。创伤/闭合性头部损伤的非限制性实例包括震荡、挫伤和慢性创伤性脑病。癫痫的非限制性实例包括全身性癫痫病症和局部癫痫病症。赘生物的非限制性实例包括转移性和原发性cns肿瘤。
a.组合物的化合物
本发明的组合物可以包含姜黄素(368.126amu)和姜黄中发现的由以下精确质量限定的生物标志中的一个或多于一个：120.094amu(生物标志1)、134.110amu(生物标志2)、150.104amu(生物标志3)、176.120amu(生物标志4)、192.091amu(生物标志5)、200.157amu(生物标志6)、202.172amu(生物标志7)、204.188amu(生物标志8)、216.151amu(生物标志9)、218.203amu(生物标志10)、220.183amu(生物标志11)、232.146amu(生物标志12)、234.162amu(生物标志13)、256.240amu(生物标志14)、308.105amu(生物标志15)、338.115amu(生物标志16)、372.157amu(生物标志18)和450.261amu(生物标志19)及其组合。不希望受理论束缚，认为生物标志增加姜黄素摄入到对象的血清和/或对象的脑脊髓液中、结合淀粉状蛋白、减少蛋白质聚集、减少蛋白质错误折叠和减少炎症。
在特定的实施方案中，生物标志或生物标志的组合的生物标志相对丰度具有90％的批次间化学一致性。在另一个特定的实施方案中，化合物或化合物的组合的生物标志相对丰度具有95％和/或98％的批次间化学一致性。
在本发明的一些方面，组合物的化合物和衍生物及类似物可以通过已知的合成方法制备。在本发明的一些方面，组合物的化合物和/或组合物可以根据化学合成领域技术人员已知的方法通过制备化合物和/或组合物以合成方式获得。在一些方面，化合物和/或组合物通过有机化学方法合成。
在本发明的一些方面，组合物的化合物和/或组合物可以从生物体(诸如果实、植物、动物、真菌、细菌和/或古菌)的萃取物中分离。植物的非限制性实例包括姜黄。组合物的化合物或组合物可以使用诸如以下已知的萃取方法从生物体中萃取：使萃取物与co2在40℃至80℃和80巴至900巴下接触，或使萃取物与h2o或etoh:h2o的任意组合接触，并用任何利用聚合物分离的方法来分离萃取物。用于聚合物分离的聚合物的非限制性实例包括ads5聚合物(南开大学，中国)。萃取物可以包括姜黄素和在姜黄中发现的由以下精确质量限定的化合物中的任一个或组合：120.094amu(生物标志1)、134.110amu(生物标志2)、150.104amu(生物标志3)、176.120amu(生物标志4)、192.091amu(生物标志5)、200.157amu(生物标志6)、202.172amu(生物标志7)、204.188amu(生物标志8)、216.151amu(生物标志9)、218.203amu(生物标志10)、220.183amu(生物标志11)、232.146amu(生物标志12)、234.162amu(生物标志13)、256.240amu(生物标志14)、308.105amu(生物标志15)、338.115amu(生物标志16)、372.157amu(生物标志18)和450.261amu(生物标志19)。
在本发明的一些方面，组合物的化合物、其衍生物和类似物中的一个或多于一个可以通过本领域技术人员已知的已知合成方法制备，且组合物的化合物及其衍生物和类似物中的一个或多于一个可以从其他来源，诸如(但不限于)果实和植物的萃取物中分离。
b.由darttof/ms限定的活性物
本文描述的精确质量和相对丰度是基于使用特定工具和特定设置的实验，且可随仪器不同而改变。各个测量中存在变化。因此，精确质量和相对丰度定义为如本领域技术人员所理解的接近于。在一个非限制性实施方案中，该术语定义为在30％内、优选在20％内、优选在10％内、优选在5％内、更优选在1％内和最优选在0.5％内。在一个非限制性实施方案中，精确质量具有在+/-20mmu内、优选10mmu、更优选在5mmu内和最优选在1mmu内的误差。在一个非限制性实施方案中，相对丰度具有+/-20％、优选10％、优选在5％内和更优选在1％内和最优选在0.5％内的误差。
在非限制性实例中，本发明的化合物可以使用实时直接分析(dart)飞行时间/质谱分析(tof/ms)鉴别。具体地，可以使用来自peabody，ma的jeolusa(jms-t100lc)的jeoldarttmaccutof-质谱仪。精确质量可以通过样品产生的所测量离子质量减去质子质量(1.007825amu)来确定。化合物的质量可以在样品中通过将样品通过dip-it取样器和dip-it取样器固持器(ionsensetm)直接引入离子流中确定。尽管没有样品制备需要用dart进行简单分析，但化学掺杂/掺入溶液可用于相对于已知数量进行定量。作为非限制性实例，参考化合物在样品中并不存在，直到添加作为参考物为止，因此可以用于产生生物活性分子的定量化学特征曲线。用于dart离子源的设定可以如下：
气体：he
流量：在50psi下2.52lpm
温度：250℃
针电压(needlevoltage):3000v
栅极电压：250v
放电电极电压：400v
用于jeolaccutofms的设定可以如下：
峰电压：1000v
孔口1温度：120℃
检测器电压：2600v
反射器电压：990.0v
样品可以通过dart-tofms在六个复制品中分析。可以分析这六个复制品以产生样品的单一、平均、过滤且统计显著的dart指纹。该经处理的指纹然后可用于通过比较质量来确定生物活性标志物的存在。由于初始发现和鉴别这些生物活性标志物，简单的质量比较足以确定任何化学物质的萃取物或混合物中它们的存在。
所有ms具有质量公差，即预测的[m+h]或[m-h]值周围的可接受的报道质量的范围。对于accutof，质量公差小于20毫质量单位(mmu)(预测的质量+/-10mmu)。考虑到相同样品和离子源，其他tof-ms可以具有更高或更低的质量公差。
在另一个非限制性实例中，本发明的化合物可以通过darttof/ms使用来自peabody，ma的jeolusa(jms-t100lc)在阳离子模式([m+h]+)中执行的jeoldarttmaccutof-质谱仪使用以下用于dart离子源的设定来确定：
气体：he
流量：3.98l/分钟
针电压：3500v
温度：300℃
电极1电压：150v
电极2电压：250v，
用于jeolaccutofms的设定可以如下：
峰电压：1000v
孔口1电压：20v
环透镜电压：5v
孔口2电压：5v
检测器电压：2550v
校正可以在内部利用各样品使用来自northkingston，ri的ultrachemical的peg600的10％(重量/体积)溶液进行，该溶液在整个所要质量范围100amu至1000amu中提供质量标志物。校准公差可保持为5mmu。使用硼硅酸盐玻璃熔点毛细管的封闭端将样品引入darthe等离子体中，直到在总离子层析图(tic)中获得信号。然后当tic返回基线水平时，可引入下一个样品。
c.治疗或预防阿尔茨海默病或其症状的药剂
预期本发明的组合物可以包括治疗或预防阿尔茨海默病或其症状的药剂。这些药剂是用于减少阿尔茨海默病的症状或病因的化合物或组合物。阿尔茨海默病的症状或病因的非限制性实例包括淀粉状蛋白聚集、增加的淀粉状蛋白分泌、增加的淀粉状蛋白产生、神经炎斑块、淀粉状蛋白的正常生理学功能损失、τ的过磷酸化、增加的神经原纤维缠结、τ的增加有毒物质、增加的τ水平、神经炎症等。阿尔茨海默病的症状的其他非限制性实例包括认知下降、记忆损伤、意识模糊、视觉损伤、空间识别损伤、减少的词汇、抑郁、情绪改变等。
治疗或预防阿尔茨海默病或其症状的药剂的非限制性实例包括乙酰胆碱酯酶抑制剂、nmda受体拮抗剂和/或姜黄素。乙酰胆碱酯酶抑制剂用于抑制乙酰胆碱酯酶。乙酰胆碱酯酶分解神经传递质乙酰胆碱。乙酰胆碱酯酶抑制剂的非限制性实例包括多奈哌齐、他克林、加兰他敏和利凡斯的明。nmda受体拮抗剂的非限制性实例包括美金刚。一些乙酰胆碱酯酶抑制剂具有诸如恶心的副作用。施用大量姜黄素还可引起肠胃问题，包括恶心。在一个实施方案中，本文公开的组合物进一步包括至少一种乙酰胆碱酯酶抑制剂，其可为(但不限于)多奈哌齐、他克林、加兰他敏和利凡斯的明。在一些实施方案中，组合物经配制以减少乙酰胆碱酯酶抑制剂和/或姜黄素的副作用，该副作用可能为(但不限于)恶心。在一个实施方案中，本文公开的组合物进一步包含至少一种nmda受体拮抗剂，其可为(但不限于)美金刚。
d.消炎剂
预期本发明的组合物可以包含消炎剂。消炎剂是用于减少对象中发炎反应或减少发炎反应的作用的化合物或组合物。消炎剂的非限制性实例包括皮质类固醇和非类固醇消炎药。非类固醇消炎药的非限制性实例包括乙酰水杨酸、布洛芬、酮基布洛芬和萘普生。一些消炎药抑制cox1或cox2或其路径。一些消炎药抑制5lox或5lox路径。一些消炎剂增加抗炎性细胞因子，诸如il-2和il-4。一些消炎剂减少th1反应和/或增加th2反应。在一些实施方案中，本文公开的组合物进一步包含至少一种额外的消炎剂，其可为(但不限于)乙酰水杨酸、布洛芬、酮基布洛芬和萘普生。
e.成分的量
预期本发明的组合物可以包含任何量的本说明书中所论述的成分。组合物还可以包含任何数目的在整个本说明书中所描述的额外成分的组合(例如稳定剂、填充剂、药学上和/或营养学可接受的盐和/或其他药学和/或营养学成分)。在组合物内任何成分的浓度可以改变。在非限制性实施方案中，例如，组合物可以包含例如至少约0.0001％、0.0002％、0.0003％、0.0004％、0.0005％、0.0006％、0.0007％、0.0008％、0.0009％、0.0010％、0.0011％、0.0012％、0.0013％、0.0014％、0.0015％、0.0016％、0.0017％、0.0018％、0.0019％、0.0020％、0.0021％、0.0022％、0.0023％、0.0024％、0.0025％、0.0026％、0.0027％、0.0028％、0.0029％、0.0030％、0.0031％、0.0032％、0.0033％、0.0034％、0.0035％、0.0036％、0.0037％、0.0038％、0.0039％、0.0040％、0.0041％、0.0042％、0.0043％、0.0044％、0.0045％、0.0046％、0.0047％、0.0048％、0.0049％、0.0050％、0.0051％、0.0052％、0.0053％、0.0054％、0.0055％、0.0056％、0.0057％、0.0058％、0.0059％、0.0060％、0.0061％、0.0062％、0.0063％、0.0064％、0.0065％、0.0066％、0.0067％、0.0068％、0.0069％、0.0070％、0.0071％、0.0072％、0.0073％、0.0074％、0.0075％、0.0076％、0.0077％、0.0078％、0.0079％、0.0080％、0.0081％、0.0082％、0.0083％、0.0084％、0.0085％、0.0086％、0.0087％、0.0088％、0.0089％、0.0090％、0.0091％、0.0092％、0.0093％、0.0094％、0.0095％、0.0096％、0.0097％、0.0098％、0.0099％、0.0100％、0.0200％、0.0250％、0.0275％、0.0300％、0.0325％、0.0350％、0.0375％、0.0400％、0.0425％、0.0450％、0.0475％、0.0500％、0.0525％、0.0550％、0.0575％、0.0600％、0.0625％、0.0650％、0.0675％、0.0700％、0.0725％、0.0750％、0.0775％、0.0800％、0.0825％、0.0850％、0.0875％、0.0900％、0.0925％、0.0950％、0.0975％、0.1000％、0.1250％、0.1500％、0.1750％、0.2000％、0.2250％、0.2500％、0.2750％、0.3000％、0.3250％、0.3500％、0.3750％、0.4000％、0.4250％、0.4500％、0.4750％、0.5000％、0.5250％、0.0550％、0.5750％、0.6000％、0.6250％、0.6500％、0.6750％、0.7000％、0.7250％、0.7500％、0.7750％、0.8000％、0.8250％、0.8500％、0.8750％、0.9000％、0.9250％、0.9500％、0.9750％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4.0％、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％、4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9％、5.0％、5.1％、5.2％、5.3％、5.4％、5.5％、5.6％、5.7％、5.8％、5.9％、6.0％、6.1％、6.2％、6.3％、6.4％、6.5％、6.6％、6.7％、6.8％、6.9％、7.0％、7.1％、7.2％、7.3％、7.4％、7.5％、7.6％、7.7％、7.8％、7.9％、8.0％、8.1％、8.2％、8.3％、8.4％、8.5％、8.6％、8.7％、8.8％、8.9％、9.0％、9.1％、9.2％、9.3％、9.4％、9.5％、9.6％、9.7％、9.8％、9.9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、或99％或其中任何可获得范围的以其最终形式的至少一种在整个说明书和权利要求中提及的成分、基本由其构成或由其构成。在非限制性方面，可通过总组合物的重量或体积或相对丰度来计算百分比。本领域普通技术人员将理解浓度可取决于给定组合物中成分的添加、取代和/或减少而变化。
f.额外成分
本发明的化合物可以配制成任何合适的组合物形式用于向人类或非人类动物患者施用。
根据施用方式和剂型的性质而定，组合物可以仅由要求保护的化合物构成或可以包含化合物和任何合适的额外成分，诸如一种或多于一种药学上和/或营养学可接受的载体、稀释剂、佐剂、赋形剂或载剂，诸如保藏剂、填充剂、崩解剂、湿润剂、乳化剂、悬浮剂、甜味剂、调味剂、芳香剂、抗菌剂、抗真菌剂、润滑剂和分配剂。各载体必须在与制剂的其他成分相容且对患者无害的意义上是可接受的。
1.赋形剂
本发明的组合物中所采用的赋形剂可以是固体、半固体、液体或其组合。优选地，赋形剂是固体。含有赋形剂的本发明的组合物可以通过任何已知的技术制备，该技术包括例如将赋形剂与要求保护的化合物混合。本发明的药物组合物含有期望量的要求保护的化合物/剂量单位，如果想要经口施用，则可呈以下形式：例如片剂、胶囊片、丸剂、硬胶囊或软胶囊、锭剂、扁囊剂、可分配粉末、颗粒剂、悬浮液、酏剂、分散液或经合理调适用于这样施用的任何其他形式。如果想要鼻内施用，则其可呈以下形式：例如干燥粉末、喷雾器或经合理调适用于这样施用的任何其他形式。如果想要肠胃外施用，则其可呈例如悬浮液或经皮贴片的形式。如果想要经直肠施用，则其可呈例如栓剂形式。当前特别的是口服剂型，其为各含有预定量的要求保护的化合物的离散剂量单位(诸如片剂或胶囊)。
2.载体/稀释剂
合适的载体或稀释剂示例性地包括(但不限于)个别地或呈组合形式的乳糖，包括无水乳糖和单水合乳糖；淀粉，包括可直接压缩的淀粉和水解淀粉(例如celutabtm和emdextm)、甘露糖醇、山梨糖醇、木糖醇、右旋糖(例如cerelosetm2000)和单水合右旋糖、二水合磷酸氢钙、基于蔗糖的稀释剂、糖粉、单水合硫酸二氢钙、二水合硫酸钙、粒状三水合乳酸钙、葡萄糖结合剂、肌醇、水解谷类固体、直链淀粉、纤维素(包括微晶纤维素、α-纤维素和非晶纤维素的食品级来源(例如rexcelj)、粉末纤维素、羟丙基纤维素(hpc)和羟丙基甲基纤维素(hpmc))、碳酸钙、甘胺酸、黏土、膨润土、嵌段共聚物、聚乙烯吡咯烷酮等。这些载体或稀释剂(如果存在)构成组合物的总重量的总计约5％至约99.999％、约10％至约85％和20％至约80％。所选择的载体、稀释剂优选显示合适的流动特性且其中片剂期望具有可压缩性。
3.崩解剂
本发明的组合物可以任选地包含一种或多于一种药学上和/或营养学可接受的崩解剂作为赋形剂特别用于片剂配制。合适的崩解剂包括(但不限于)个别地或呈组合形式的淀粉(包括羟基乙酸淀粉钠和预胶凝化的玉米淀粉)、黏土、纤维素(诸如纯化纤维素、微晶纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素和羧甲基纤维素钠、交联羧甲纤维素钠)、海藻酸盐、交联聚维酮和树胶(诸如琼脂、瓜尔胶)、刺槐豆、刺梧桐树胶、果胶和黄蓍胶)。可以在制备组合物期间，尤其在粒化之前或在压缩之前的润滑步骤期间以任何适合步骤添加崩解剂。这些崩解剂(如果存在)构成组合物的总重量的总计优选约0.2％至约30％、优选约0.2％至约10％且更优选约0.2％至约5％。
4.黏合剂
本发明的组合物可以包含特别用于片剂配制的黏合剂或胶黏剂。这些黏合剂和胶黏剂优选将足够的黏结性赋予制成片的粉末以允许正常处理操作，诸如涂胶、润滑、压缩和封装，但仍允许片剂崩解且允许组合物在摄入后被吸收。一旦盐溶解于溶液中，这些黏合剂还可预防或抑制本发明的共晶体的结晶或再结晶。合适的黏合剂和胶黏剂包括(但不限于)个别地或呈组合形式的阿拉伯树胶；黄蓍、蔗糖、明胶、葡萄糖、淀粉(诸如(但不限于)预胶凝化的淀粉)、纤维素(诸如(但不限于)甲基纤维素和羧甲基纤维素钠)、海藻酸和海藻酸的盐；硅酸镁铝、peg、瓜尔豆胶、多醣酸、膨润土、聚维酮、聚甲基丙烯酸酯、hpmc、羟丙基纤维素和乙基纤维素。这些黏合剂和/或胶黏剂(如果存在)构成药物组合物的总重量的总计优选约0.5％至约25％、优选约0.75％至约15％和更优选约1％至约10％。许多黏合剂是包含酰胺、酯、醚、醇或酮基的聚合物，且因此可以包含在本发明的药物组合物中。聚乙烯吡咯烷酮是用于缓慢释放片剂的黏合剂的非限制性实例。聚合黏合剂可以具有变化的分子量、交联程度和聚合物级别。聚合黏合剂还可以是共聚物，诸如含有环氧乙烷和环氧丙烷单元的混合物的嵌段共聚物。给定聚合物中这些单元的比率的变化可以影响特性和性能。
5.湿润剂
湿润剂可以用于本发明的组合物中。可以选择湿润剂以维持晶体与水紧密结合，其是可以改善组合物的生物可用性的条件。这些湿润剂还可以适用于溶解晶体或增加晶体的溶解度。表面活性剂可以用作湿润剂。在本发明的组合物中可以用作湿润剂的表面活性剂的非限制性实例包括季铵化合物，例如氯化苯甲烃铵、苄索氯铵和氯化十六烷基吡啶；磺琥珀酸钠二辛酯；聚氧乙烯烷基苯基醚；泊洛沙姆(聚氧乙烯和聚氧丙烯嵌段共聚物)；聚氧乙烯脂肪酸甘油酯和油，例如聚氧乙烯(8)辛酸/癸酸单甘油酯和二甘油酯、聚氧乙烯(35)蓖麻油和聚氧乙烯(40)氢化蓖麻油；聚氧乙烯烷基醚，例如聚氧乙烯(20)十六基十八基醚；聚氧乙烯脂肪酸酯，例如聚氧乙烯(40)硬脂酸酯；聚氧乙烯脱水山梨糖醇酯，例如聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80；丙二醇脂肪酸酯，例如丙二醇月桂酸酯、月桂基硫酸钠；脂肪酸及其盐，例如油酸、油酸钠和三乙醇胺油酸酯；甘油基脂肪酸酯，例如单硬脂酸甘油酯；脱水山梨糖醇酯，例如脱水山梨糖醇单月桂酸酯、脱水山梨糖醇单油酸酯、脱水山梨糖醇单棕榈酸酯和脱水山梨糖醇单硬脂酸酯；泰洛沙泊；及其混合物。这些湿润剂(如果存在)构成药物组合物的总重量的总计优选约0.25％至约15％、优选约0.4％至约10％和更优选约0.5％至约5％。
6.润滑剂
润滑剂可以包含在本发明的组合物中。合适的润滑剂包括(但不限于)个别地或呈组合形式的山嵛酸甘油酯、硬脂酸及其盐，包括硬脂酸镁、硬脂酸钙和硬脂酸钠；氢化植物油、胶态二氧化硅、滑石、蜡、硼酸、苯甲酸钠、乙酸钠、反丁烯二酸钠、氯化钠、dl-亮氨酸、peg(例如dowchemicalcompany的carbowaxtm4000和carbowaxtm6000)、油酸钠、月桂基硫酸钠和月桂基硫酸镁。这些润滑剂(如果存在)构成组合物的总重量的总计优选约0.1％至约10％、优选约0.2％至约8％和更优选约0.25％至约5％。
7.其他剂
表面活性剂、乳化剂或泡腾剂可以用于组合物中。乳化剂可以用于帮助溶解软明胶胶囊内的成分。表面活性剂、乳化剂或泡腾剂的非限制性实例包括d-山梨糖醇、乙醇、角叉菜胶、羧基乙烯基聚合物、羧甲基纤维素钠、瓜尔豆胶、甘油、甘油脂肪酸酯、胆固醇、白蜂蜡、磺琥珀酸钠二辛酯、蔗糖脂肪酸酯、硬脂醇、硬脂酸、聚乙二醇40硬脂酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯、鲸蜡醇、明胶、脱水山梨糖醇脂肪酸酯、滑石、脱水山梨糖醇三油酸酯、石蜡、马铃薯淀粉、羟丙基纤维素、丙二醇、丙二醇脂肪酸酯、果胶、聚氧乙烯(105)聚氧丙烯(5)二醇、聚氧乙烯(160)聚氧丙烯(30)二醇、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯氢化蓖麻油40、聚氧乙烯氢化蓖麻油60、聚乙二醇35蓖麻油、聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯60、聚山梨醇酯80、聚乙二醇400、豆蔻酸辛基十二烷基酯、甲基纤维素、脱水山梨糖醇单油酸酯、甘油单硬脂酸酯、脱水山梨糖醇单棕榈酸酯、脱水山梨糖醇单月桂酸酯、月桂基二甲胺氧化物溶液、月桂基硫酸钠、聚桂醇、干燥碳酸钠、酒石酸、氢氧化钠、纯化的大豆卵磷脂、大豆卵磷脂、碳酸钾、碳酸氢钠、中长链三酸甘油酯、柠檬酸酐、棉籽油-大豆油混合物和液体石蜡。
g.载剂
各种递送系统是本领域中已知的，且可用于施用治疗剂或本发明的组合物，例如在脂质体、微粒、微胶囊、受体介导的内吞作用中包封。施用方法包括(但不限于)肠胃外、动脉内、肌内、静脉内、鼻内和经口途径。组合物可以片剂、锭剂、颗粒剂、胶囊、丸剂、安瓿、栓剂或喷雾剂形式提供。组合物还可以含活性成分的水性或非水性稀释剂、糖浆、颗粒或粉末的悬浮液、溶液和乳液形式提供。
h.配制和施用
组合物还可以是例如药物组合物(药剂)和非处方药组合物(otc)、营养品等。根据本发明的组合物包括适用于经鼻、经口或肠胃外途径的制剂。特定途径的非限制性实例包括皮内、皮下、肌内、静脉内、局部注射、经直肠、鼻内吸入、吹入、局部(包括经皮、口腔和舌下)、经阴道、肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内和皮内)和经肺施用。制剂可便利地以单位剂型呈递并可通过本领域技术人员众所周知的任何方法来制备。这些方法包括使活性成分(或成分)与构成一种或多于一种附属成分的载体结合的步骤。一般而言，制剂通过将活性成分均匀地且紧密地与合适的载体(诸如液体载体或细粉状固体载体或两者)结合，然后(必要时)对产品进行成形来制备。适用于经口施用的本发明的制剂可呈离散单元形式，诸如胶囊、扁囊剂或片剂，各含有预定量的活性成分；或水包油液体乳液、油包水液体乳液；或在水溶液(例如茶)内的补充剂。活性成分还可呈药丸、药糖剂或膏状物。合适的可注射制剂包括含化合物组合物的水性或油性载剂的无菌悬浮液、溶液或乳液。组合物还可含有配制剂，诸如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。用于注射的制剂可呈单位剂型形式，例如在安瓿中或在多剂量容器中，且可含有所添加的防腐剂。或者，可注射的制剂可呈粉末形式提供以在使用前利用合适的载剂(包括(但不限于)无菌无热原质水、缓冲液、右旋糖溶液等)重构。为此，化合物组合物可通过任何本领域已知的技术(诸如冻干)干燥，并在使用前重构。
适用于口中局部施用的制剂包括在调味基(通常为蔗糖和阿拉伯树胶或黄蓍)中包含活性成分的锭剂；在惰性基(诸如明胶和甘油，或蔗糖和阿拉伯树胶)中包含活性成分的片剂；在合适的液体载体中包含活性成分的漱口水；和包含活性成分的巧克力。
根据本发明适用于局部使用的制剂可配制为软膏、乳膏、悬浮液、乳液、粉末、溶液、膏状物、凝胶、喷雾、喷雾剂或油。或者，制剂可包含贴片或敷料(诸如绷带或浸渍有活性成分的绊创膏)和任选地一种或多于一种赋形剂或稀释剂。局部用制剂优选包含促进活性成分通过皮肤吸收并进入血流中的化合物。
适用于鼻内施用的制剂(其中载体为固体)包括粒径例如为约20微米至约500微米的粗糙粉末，其以服用鼻烟的方式，即通过与鼻保持接近的粉末容器经由鼻孔快速吸入施用。用于鼻内施用(诸如通过喷雾器的非限制性实例)的其中载体为液体的合适制剂包括药剂的水性或油性溶液。制剂优选可包括促进活性成分通过皮肤吸收并进入血流中的化合物。
适用于肠胃外施用的制剂包括水性和非水性等张无菌注射溶液，其可含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和使得制剂与想要的接受者的血液等张的溶质；以及水性和非水性无菌悬浮液，其可包含悬浮剂和增稠剂，以及脂质体或经设计以使化合物靶向血液组分或一个或多于一个器官的其他微粒系统。可使制剂存于单位剂量或多剂量密封容器(例如安瓿和小瓶)中，且可以在经冷冻干燥(冻干)的条件下储存，仅需要在即将使用前添加无菌液体载体(例如水)用于注射。可由上述种类的无菌粉末、颗粒剂和片剂制备即用型注射溶液和悬浮液。
用于经口施用的液体制剂可呈例如酏剂、溶液、糖浆或悬浮液的形式，或其可呈用于在使用前用水或其他合适的媒剂构成的干燥产品。这些液体制剂可通过常规方式利用以下物质制备：药学上和/或营养学可接受的添加剂，诸如悬浮剂(例如山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化可食用脂肪)；乳化剂(例如卵磷脂或阿拉伯树胶)；非水性载剂(例如杏仁油、油性酯、乙醇或分馏的植物油)；和防腐剂(例如对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯或山梨酸)。制剂还可适当含有缓冲盐、防腐剂、调味剂、着色剂和甜味剂。
用于口腔施用的组合物可采用以常规方式配制的片剂或锭剂的非限制性实例的形式。
用于经直肠和经阴道途径施用的化合物组合物可配制为溶液(用于保留灌肠)栓剂或含有常规栓剂基质(诸如可可脂或其他甘油酯)的软膏。
用于经鼻施用或通过吸入或吹入施用的化合物组合物可便利地由加压包装或喷雾器的气溶胶喷雾形式递送，其中使用合适的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、碳氟化合物、二氧化碳或其他合适的气体。在加压气溶胶的情况下，剂量单位可通过提供阀以递送所计量的量来确定。可配制用于吸入器或吹入器的胶囊和药筒(例如由明胶组成的胶囊和药筒)使其含有化合物的粉末混合物和诸如乳糖或淀粉的合适粉末基质。
用于长期递送的化合物组合物可以配制为药性持久的制剂用于通过植入或肌内注射施用。化合物组合物可与合适的聚合材料或疏水性材料(例如呈含乳液的可接受油)或离子交换树脂一起配制，或配制为微溶性衍生物，例如配制为微溶性盐。或者，可以使用制造为黏性片或贴片的经皮递送系统，其缓慢释放化合物组合物用于经皮吸收。为此，渗透增强剂可用于促进化合物组合物经皮渗透。合适的经皮贴片在例如美国专利第5407713号；美国专利第5352456号；美国专利第5332213号；美国专利第5336168号；美国专利第5290561号；美国专利第5254346号；美国专利第5164189号；美国专利第5163899号；美国专利第5088977号；美国专利第5087240号；美国专利第5008110号；和美国专利第4921475号中描述。
或者，可采用其他递送系统。脂质体和乳液是可用于递送化合物组合物的递送载剂的众所周知的实例。尽管通常代价为更大的毒性，但也可采用某些有机溶剂，诸如二甲基亚飒(dmso)。
应理解除了上文特别提及的成分以外，考虑到所讨论的制剂类型，适用于本发明的制剂可以包含本领域常规的其他药剂。例如，适用于经口施用的制剂可以包含其他药剂，诸如甜味剂、增稠剂和调味剂。还旨在本发明的药剂、组合物和方法与其他合适的组合物和疗法组合。
在一个实施方案中，本发明的药物组合物和/或营养学组合物可以局部施用至需要治疗的区域；例如可通过局部输注、通过注射或通过导管实现这种局部施用。在另一个实施方案中，本发明的化合物或组合物以使得在疾病位点处实现活性化合物的峰浓度的方式施用。例如可以通过静脉内注射任选在盐水中的药剂，或经口施用例如含有活性成分的片剂、胶囊或糖浆实现在疾病位点处的峰浓度。
i.其他药物和/或营养剂
本发明的药物、otc和/或营养学制剂可与其他药物或生物学上的活性剂一起同时或依次施用。实例包括(但不限于)抗氧化剂、自由基清除剂、镇痛剂、麻醉剂、肛门直肠剂、抗组织胺、消炎剂(包括非类固醇消炎药)、抗生素、抗真菌剂、抗病毒剂、抗菌剂、抗癌活性剂、抗肿瘤药、生物学上的活性蛋白质和肽、酶、止血剂、类固醇(包括激素和皮质类固醇)等。
j.治疗方法和剂量
特定单位剂量制剂是含有日剂量或单位、日次剂量或其合适部分的药剂的那些制剂。治疗性量可凭经验确定并将随正治疗的病理学、正治疗的对象和药剂的功效和毒性而变化。类似地，施用药剂的合适剂量制剂和方法可以通过本领域技术人员容易地确定。
在一些实施方案中，本发明的治疗方法可包括通过向患有这种疾病或病状的对象施用治疗该疾病、病状或病症有效量的如本文所描述的稳定制剂来治疗该疾病、病状或病症。在一些实施方案中，向对象施用包含本文要求保护的化合物的稳定制剂。该疾病、病状或病症可以是阿尔茨海默病、炎症、蛋白质错误折叠和蛋白质聚集疾病或病状，和/或具有类似症状的疾病以及相关疾病、病状和病症。用于预防性施用时，可以向处于发展上述其中一种病状风险的患者施用该组合物。
施用组合物的量将取决于多个因素，包括(例如)正治疗的特定适应症、施用方式(不管所期望的好处是预防性还是治疗性)、正治疗的适应症的严重性、和患者的年龄及体重等。确定有效的剂量在本领域技术人员的能力内。在本发明的一些方面，化合物组合物的总剂量将通常为约0.0001mg/kg患者/天或0.001mg/kg患者/天或0.01mg/kg患者/天至约100mg/kg患者/天，但可以更高或更低，尤其根据成分的活性、其生物可用性、施用方式和如上文所述的各种因素而定。可个别地调节剂量和时间间隔，以提供足以维持治疗性或预防性作用的化合物的血浆浓度。例如，尤其根据施用方式、正治疗的特定适应症和处方医师的判断而定，可每周一次、每周几次(例如每隔一天)、每天一次或每天多次施用化合物。技术人员无需过度实验即能够最优化有效的局部剂量。
k.试剂盒
在本发明的另一个方面，本文描述了用于治疗疾病、病状或病症的试剂盒。例如，本发明的组合物可以包含在试剂盒中。试剂盒可以包括容器。容器可以包括瓶子、金属管、层压管、塑料管、分配器、吸管、加压容器、屏障容器、包装、隔室或其他类型的容器，诸如使分散液或组合物或期望的瓶子、分配器或包装保留在其中的注射或吹塑模制塑料容器。试剂盒和/或容器可以包括在其表面上的标记。标记可以是例如词、短语、缩写、图片或符号。
容器可以分配预定量的组合物。在其他实施方案中，可以挤压容器(例如金属管、层压管或塑料管)以分配期望量的组合物。组合物可以分配为喷雾、气溶胶、液体、流体、半固体或固体。在特定的实施方案中，组合物分配为片剂或锭剂。容器可以具有喷雾、泵或挤压机制。试剂盒还可以包括关于使用试剂盒部件以及使用包含在容器中的任何其他组合物的说明书。说明书可以包括如何应用、使用和维持组合物的说明。如果需要，组合物可以在含有一种或多于一种单位剂型(含有化合物)的包装或分配器装置中存在。包装例如可以包括金属或塑料箔，诸如罩板包装。包装或分配器装置可伴有施用说明书。
实施例
将通过具体的实施例更详细地描述本发明。以下实施例是出于说明的目的提供的，并不旨在以任何方式限制本发明。本领域技术人员将容易地识别多个可改变或修改以产生基本上相同的结果的非关键参数。
实施例1
通过精确质量、相对丰度和重量百分比表征化合物
本发明人出人意料地发现几种化合物的组合可以预防和治疗阿尔茨海默病、蛋白质聚集、蛋白质错误折叠和炎症。本发明人还发现特定的相对浓度的化合物用于增强组合的化合物预防和治疗这些疾病的能力。本发明的化合物包括姜黄素和由姜黄中发现的化合物限定的具有以下精确质量的生物标志化合物：120.094amu(生物标志1)、134.110amu(生物标志2)、150.104amu(生物标志3)、176.120amu(生物标志4)、192.091amu(生物标志5)、200.157amu(生物标志6)、202.172amu(生物标志7)、204.188amu(生物标志8)、216.151amu(生物标志9)、218.203amu(生物标志10)、220.183amu(生物标志11)、232.146amu(生物标志12)、234.162amu(生物标志13)、256.240amu(生物标志14)、308.105amu(生物标志15)、338.115amu(生物标志16)、372.157amu(生物标志18)和450.261amu(生物标志19)。这些化合物可以合成方式产生或从生物体诸如(但不限于)姜黄中分离。可以通过本领域技术人员已知的方法表征化合物。
本文所描述的精确质量和相对丰度是基于使用特定工具和特定设定的实验，且可随仪器不同而改变。各测量中存在变化。因此，精确质量和相对丰度被定义为如本领域普通技术人员所理解的“接近于”。
用于精确质量的方法：使用与飞行时间/质谱分析(tof-ms)组合的实时直接分析(dart)离子源表征化合物和确定相对丰度。具体地，darttof-ms是来自peabody，ma的jeolusa(jms-t100lc)的jeoldarttmaccutof-质谱仪。化合物的质量在姜黄萃取物样品中通过将样品由dip-it取样器和dip-it取样器固持器(ionsensetm)直接引入离子流来确定。
用于dart离子源的设定如下：
气体：he
流量：在50psi下2.52lpm
温度：250℃
针电压：3000v
栅极电压：250v
放电电极电压：400v
用于jeolaccutofms的设定如下：
峰电压：1000v
孔口1温度：120℃
检测器电压：2600v
反射器电压：990.0v
通过dart-tofms在六个复制品中分析萃取物样品。分析这六个复制品以产生萃取物的单一、平均、过滤且统计显著的dart指纹。该经处理的指纹然后用于通过比较质量来确定生物活性标志物的存在。由于最初发现和鉴别这些生物活性标志物，简单的质量比较足以确定任何化学物质的萃取物或混合物中它们的存在。对于accutof，质量公差小于20毫质量单位(mmu)(预测的质量+/-10mmu)。考虑到萃取物和离子源相同，其他tof质量光谱仪可以具有更高或更低的质量公差。
用于相对丰度的方法：尽管没有样品制备需要用dart进行简单分析，但水杨酸掺杂/掺入的溶液用于通过相对于已知数量进行定量来确定测试组合物的相对丰度。众所周知且天然存在于姜黄中的标准物，诸如姜黄素将改变给定任何数目的影响，生长条件、采集时间、植物健康等。出于量化生物标志的目的，姜黄素(或其他天然存在的标准物)的天然差异使其不可接受用作生物标志的绝对定量的基准。为了去掉不一致性，非姜黄原生的化合物(在此情况下为水杨酸)被用作生物活性分子的定量化学特征曲线的基准。
为了确定具有未知浓度的本文公开的生物标志的样品的相对丰度，将乙醇中0.5mg/ml公开的组合物的样品掺杂/掺入25mg/ml水杨酸中。然后通过以上使用的dart-tof方法分析样品。
用于确定重量百分比的方法：使用用于相对丰度的darttof方法确定重量百分比；然而水杨酸被生物标志的可用标准物替代。
表1公开了在包含生物标志1至16、18、19和姜黄素(生物标志17)的组合物的非限制性特定实施方案中发现的本文公开的生物标志的重量百分比和相对丰度。
表1.使用标准物确定的重量百分比，以及使用掺入25mg/ml水杨酸的0.5mg/ml组合物确定的生物标志特别是活性组合物中的相对丰度。
实施例2
用于实施例3至8的制剂
hsrx-888(公开的组合物的特定实施方案)通常根据shytle等人，2009和shytle等人，2012中描述的方法制备，其包含剂量可靠的姜黄萃取物，包含55重量％的姜黄素和生物标志1至16、18和19，其中0.06重量％的生物标志3，2.15重量％的生物标志15，2.39重量％的生物标志16和1.26重量％的生物标志18，以及生物标志1的相对丰度为3.11％、生物标志2的相对丰度为0.44％、生物标志4的相对丰度为1.37％、生物标志5的相对丰度为2.49％、生物标志6的相对丰度为0.68％、生物标志7的相对丰度为1.24％、生物标志8的相对丰度为0.43％、生物标志9的相对丰度为15.35％、生物标志10的相对丰度为5.72％、生物标志11的相对丰度为1.02％、生物标志12的相对丰度为3.39％、生物标志13的相对丰度为5.03％、生物标志14的相对丰度为0.35％和生物标志19的相对丰度为0.87％，并且具有相对于阿尔茨海默病、蛋白质错误折叠、蛋白质聚集和炎症的病因和症状的活体外和活体内活性。
一般而言，研磨姜黄并将其用co2在40℃至80℃和80巴至900巴下萃取，使用ads5聚合物(南开大学，中国)分离聚合物。收集的级分可以在50℃下干燥过夜，得到结晶粉末。重复过程多次以确保萃取物的再现性。
实施例3
在人类对象中的血清pk和耐受性研究
该实施例涉及从研究中获得的数据，该研究检测正常人类志愿者对象中实施例2的制剂的血清药物动力学(pk)。向志愿者人类对象经口施用50mg制剂。50mg制剂含有35mg姜黄素。在向5名人类志愿者经口施用后，在t＝0、5分钟、10分钟、20分钟、30分钟、40分钟、60分钟、120分钟、180分钟、240分钟和480分钟下抽出血液并测试。通过darttof-ms确定血浆中关于姜黄素和/或姜黄素和生物标志1、2、6和12的峰强度。
绘制在各时间点的峰以确定姜黄素的最大浓度(cmax)以及姜黄素和各生物标志1、2、6和12的最大浓度时间(tmax)(图1至图6)。使用在各时间点的平均峰强度凭经验确定cmax和tmax。
确定50mg单一经口剂量的hsrx-888在血液中产生的微摩尔水平的游离的未经修饰的姜黄素(图2，其中cmax为11.3微摩尔)。姜黄素的tmax显示为大约40分钟至120分钟。关于生物标志1、2、6和12的tmax为生物标志1大约5分钟至120分钟，生物标志2大约5分钟至60分钟，生物标志6大约5分钟至240分钟，生物标志12大约1分钟至30分钟。
另外，发现施用hsrx-888是耐受性好的。
实施例4
抑制活体外淀粉状蛋白聚集
如shytle等人，2009中显示的，hsrx-888(hsg0888)展现活体外在微摩尔浓度下对β-淀粉状蛋白(aβ)聚集的剂量依赖性抑制(图7)。aβ聚集分析利用与hsrx-888、其他专属姜黄萃取物(hsg0838、hsg0848)或单分子标准物(姜黄素(cur)、15％去甲氧基姜黄素(dmc)、5％双去甲氧基姜黄素(bdmc)和四氢姜黄素(thc))—起培养的合成aβ1-42肽以0μg/ml至30μg/ml的变化浓度进行。在通过如shytle等人，2009中所描述的硫代黄素t方法的单一治疗事件后5天测量聚集。硫代黄素t方法检测大体上成熟的β折叠片淀粉状蛋白纤维。
方法论：“在溶液中通过如先前描述的硫代黄素t荧光(moore等人，2004；levine，1993)监测aβ1-42纤维的存在。简而言之，在存在或不存在优化姜黄萃取物([hsg0888、hsg0838、hsg0848])或姜黄素标准物(cur、dmc、bdcm和thc)的情况下以0μg/ml至30μg/ml的浓度在37℃下培养肽溶液最多120小时后，除去三份在50mmtris-hcl缓冲液(ph7.4)中的15μlaβ1-42(25μm，95μg/ml)样品。将这些肽溶液各自添加至黑壁96孔板中的50mm甘氨酸/naoh缓冲液(ph9.0)中100μl10μm硫代黄素t，在25℃下培养30分钟，然后在硫代黄素t结合至淀粉状蛋白纤维之后通过使用moleculardevicesspectramaxgemini板读取器监测(ex450nm和em482nm)荧光的特征性改变。在添加肽溶液之前和紧接在其之后扫描三次三份样品。结果显示三份样品的平均值±在那些平均值之间的差值。”shytle等人，2009。
结果：与其他姜黄萃取物，诸如hsg0838和hsg0848相比，hsrx-888是对活体外aβ1-42聚集的有效抑制剂(图7)。另外，结果显示当以与全部hsrx-888组合物(例如与15微克姜黄素相比，15微克/毫升hsrx-888)相同的剂量使用个别生物标志时，hsrx-888抑制聚集的程度比在hsrx-888(姜黄素、dmc、bcmc和thc)中发现的个别生物标志更大或类似。然而，在hsrx-888中以低得多的浓度发现这些个别生物标志(参见表1)，这强有力地表明hsrx-888中的生物标志协同起作用。另外，由该数据和本文公开的其他数据预期本文公开的组合物具有抗蛋白质聚集和抗蛋白质错误折叠的特性，其将在治疗和/或预防诸如以下神经退行性病症中是有利的：阿尔茨海默病(β-淀粉状蛋白和磷酸化的τ蛋白质)、帕金森病(α-突触核蛋白蛋)、路易体痴呆(β-淀粉状蛋白、磷酸化的τ蛋白质和α-突触核蛋白)、额颞叶型痴呆(τ蛋白质)、海绵状脑病(朊病毒蛋白质)以及许多其他中枢和全身性淀粉样变性。
实施例5
抑制活体内淀粉状蛋白产生
如shytle等人，2009中所示，hsrx-888(hsg0888)以浓度依赖性方式显著减少sweappn2a细胞中aβ(aβ1-40和aβ1-42肽)产生(图8)。如shytle等人，2009中所解释的，sweappn2a细胞经3μg/ml至30μg/ml的浓度范围处理，其中各化合物持续12小时，且aβ1-40，42肽在来自sweappn2a细胞的条件培养基中通过elisa分析。
方法论：“收集条件培养基，并将其使用如先前所描述的方法(tan等人，2002)以1:1稀释分析，且值报道为相对于对照物分泌的aβ1-42百分比(来自未经处理的n2asweapp细胞的条件培养基)。根据公布的方法(marambaud等人，2005；obregon等人2006)进行总体aβ种类的定量。简而言之，将6e10(捕捉抗体)以2μg/ml在磷酸盐缓冲盐水(pbs；ph7.4)中涂布至96孔免疫分析板中在4℃下过夜。将板用0.05％(v/v)tween-20在pbs中洗涤五次，并用阻断缓冲液(含1％bsa、5％[v/v]马血清的pbs)在室温下阻断2h。
将条件培养基或aβ标准物添加至板中并在4℃下培养过夜。在3次洗涤后，将生物素标记的抗体、4g8(0.5μg/ml在含1％[w/v]bsa的pbs中)添加至板中，并在室温下培养2h。在5次洗涤后，将抗生蛋白链菌素-辣根过氧化酶(于含1％bsa的pbs中1:200稀释)在室温下30min添加至96孔中。
将四甲基联苯胺(tmb)底物添加至板中，并在室温下培养15分钟。将停止溶液(2nn2so4)的50μl等分试样添加至板的各孔中以停止反应。紧接着在酶标仪上在o.d.450nm下确定各孔的光密度。aβ水平表示为对照物(来自未经处理的n2asweapp细胞的条件培养基)的百分比。”shytle等人，2009。
结果：未经处理的sweappn2a细胞分泌总计128pg的aβ1-40和aβ1-42肽。hsrx-888以浓度依赖性方式显著减少分泌的aβ1-40和aβ1-42肽的量(图8)。其他姜黄萃取物显示无抑制至极少抑制。姜黄素还显示显著抑制(图8)。另外，结果显示当以与全部hsrx-888组合物(例如与15微克姜黄素相比，15微克/毫升hsrx-888)相同的剂量使用个别生物标志时，hsrx-888抑制分泌的程度比在hsrx-888(姜黄素、dmc、bcmc和thc)中发现的个别生物标志更大或类似。然而，在hsrx-888中以低得多的浓度发现这些个别生物标志(参见表1)，这强有力地表明hsrx-888中的生物标志协同起作用。
实施例6
tg2576小鼠中大脑淀粉样变性的减少
如shytle等人，2012中所示，hsrx-888(hss-888)减少tg2576小鼠中的大脑淀粉样变性(图9a和9b)。如shytle等人中所解释的，hsrx-888向8个月大的tg2576小鼠经口施用，通过利用兔子多株抗人类aβ抗体对大脑冠状冷冻切片染色来分析这些小鼠中的aβ沉积(图9a)，并使用定量图像分析进行定量(图9b)。
方法论：“在8个月大时开始活体内处理，将tg2576处理小鼠在nih31食物或仅nih3i食物(对照物)中施用优化姜黄萃取物[hsrx-888](0.1％w/w)或thc(0.1％w/w)持续6个月[n＝20(10只雌性/10只雄性)]。所有小鼠在14个月大时被处死以根据上述方法(garcia-alloza等人，2006)分析大脑中aβ水平和aβ负荷。
免疫组织化学-小鼠用异荧烷(isofluorane)麻醉，并经心脏灌注含有肝素(10u/ml)的冰冷生理学盐水。快速分离出大脑，并使用小鼠脑切片机(muromachikikaico.,tokyo,japan)切成四份。将第一和第二前四分之一均质化进行如下所述的elisa和蛋白质印迹分析，第三和第四后四分之一用于薄片切片机或低温恒温器切片。然后将脑固定在pbs中的4％(w/v)多聚甲醛，在4℃下过夜，并在石蜡中在病理科(departmentofpathology)(usfcollegeofmedicine)的核心设备中经常规处理。选择各脑切片间隔为约150μm的五个系列冠状切片(5μm)用于免疫组织化学染色和图像分析。将切片经常规地去石蜡，且在一系列梯度usp乙醇中水合，然后在环境温度下用无血清蛋白质阻断(dakocytomation,glostrup,denmark)进行预阻断30分钟。ap免疫组织化学染色使用抗人类p-抗体(克隆4g8，1:100)以及与二胺基联苯胺底物一起的vectastainelitetmabc试剂盒进行。4gb阳性ap沉积物在亮场下使用olympusbx-51显微镜检测。常规地进行定量图像分析(常规“aβ负荷”分析)用于4g8免疫组织化学。数据报道为所捕获的免疫标记面积(正像素)除以所捕获的完整面积(总像素)的百分比。
图像分析-定量图像分析(常规“aβ负荷”分析)使用立体逻辑方法进行以获得用于来自经口施用thc、hsrx-888或nih31对照食物的tg2576小鼠的脑的4g8免疫组织化学和刚果红组织化学。使用olympusbx-51显微镜获得图像，并将其使用随附的magnafiretm成像系统(olympus，东京，日本)数字化。简而言之，捕获来自各解剖感兴趣区域(海马体或皮层区)间隔约150μm的五个系列切片(5μm)的图像，并获得辨别染色形式背景的临限值光密度。手动编辑各区域用于除去伪影。数据报道为所捕获的免疫标记面积(正像素)除以所捕获的完整面积(总像素)的百分比。定量图像分析通过对样品标识不知情的单一检查员进行。”shytle等人，2012。
结果：如图9a-aβ沉积的扣带皮层和内嗅皮层的染色和图9b-在内嗅皮层(ec)、海马体(h)和扣带皮层(cc)中具有标准差的平均值％计的斑块负荷所示，hsrx-888减少了tg2576小鼠中的大脑淀粉样变性。
由该数据和本文所提供的其他数据预期本文公开的组合物拥有抗蛋白质聚集和抗蛋白质错误折叠的特性，其将在治疗和/或预防诸如以下神经退化病症中是有利的：阿尔茨海默病(β-淀粉状蛋白和磷酸化的τ蛋白质)、帕金森病(α-突触核蛋白)、路易体痴呆(β-淀粉状蛋白、磷酸化的τ蛋白质和α-突触核蛋白)、额颞叶型痴呆(τ蛋白质)、海绵状脑病(朊病毒蛋白质)以及许多其他中枢和全身性淀粉样变性。
实施例7
减少tg2576小鼠中可溶和不可溶的淀粉状蛋白水平
如shytle等人，2012中所示，hsrx-888(hss-888)减少了tg2576小鼠脑匀浆中的可溶和不可溶的β-淀粉状蛋白水平(图10a和10b)。通过elisa分析小鼠脑匀浆的aβ水平。与可溶和不可溶的对照物相比，经口施用的hsrx-888显著减少aβ1-40,42的可溶和不可溶形式(分别为10a和10b)。
方法论：“小鼠脑在无菌条件下在冰上分离，并置于如先前所述的冰冷的溶解缓冲液(20mmtris，ph7.5，150mmnacl，1mmedta，1mmegta，1％[v/v]tritonx-100，2.5mm焦磷酸钠，1mmp-甘油磷酸酯，1mmna3vo4，1μ,/ml亮抑酶肽，1mmpmsf)(johnson-wood等人1997)中。然后将脑在冰上经音波处理大约3分钟，使其在4℃下静置15分钟，并以15000rpm离心15分钟。在5m胍缓冲液(rezai-zadeh等人2008)中通过酸萃取脑匀浆，然后1:10稀释于溶解缓冲液中侦测到不可溶aβ1-40,42物质。在用上文所述的溶解缓冲液通过1:10稀释制备的脑匀浆中直接检测到可溶aβ1-40,42。在稀释前，匀浆样品的蛋白质水平通过bca蛋白质分析归一化。除了在一些情况下标准物包括0.5m胍缓冲液之外，aβ1-40,42使用免疫-生物实验室非辨别aβelisa试剂盒根据制造商的说明书定量。”shytle等人，2012。
结果：与可溶和不可溶的对照物相比，经口施用的hsrx-888显著减少aβ1-40,42的可溶和不可溶形式(分别为图10a和10b)。
实施例8
tg2576小鼠中磷酸化的τ蛋白质的减少
如shytle等人，2012中所示，hsrx-888(hss-888)减少tg2576小鼠中磷酸化的τ蛋白质(图11a和11b)。来自经处理小鼠的前四分之一脑匀浆通过蛋白质印迹分析法分析。
方法论：“如先前描述获得脑匀浆。用于τ分析的对应于100μg总蛋白质的等分试样使用10％tris凝胶进行电泳分离。然后将电泳蛋白质转移至硝化纤维素膜(bio-rad，richmond，ca)，在ddh20中洗涤，并在环境温度下在含有5％(w/v)脱脂奶粉的tris缓冲盐水(tbs)中阻断1h。在阻断后，在环境温度下利用各种一级抗体使膜杂交1h。然后将膜在ddh20中洗涤3次，各持续5分钟，并在环境温度下与合适的hrp结合二级抗体(1:1000，piercebiotechnology，woburn，ma)u起培养1h。将所有抗体在含有5％(w/v)脱脂干燥牛奶的tbs中稀释。使用鲁米诺试剂(piercebiotechnology，woburn，ma)使点显影。使用具有quantityonetm软件(biorad，hercules，ca)(rezai-zadeh等人，2005)的fluorsmultiimager如先前所述完成密度分析。”shytle等人，2012
结果：经hsrx-888处理的小鼠显示相对于对照小鼠，p-τ减少80％(图11a和11b)。
实施例9
在来自tg2576小鼠的经培养的小神经胶质细胞中th2反应的减少
如shytle等人，2012中所示，hsrx-888(hss-888)增加th2细胞免疫反应，其类似于利用姜黄素所显示的情况，其中免疫反应由th1变成th2免疫(kang等人1999)(图12a和12b)。具体地，hsrx-888处理增加il-4与il-2的比率，表示由th1(发炎)切换至th2(非发炎)反应。另外，hsrx-888处理增加细胞因子il-2和il-4，表示hsrx-888经由特定细胞因子的抗炎性活性提供了小神经胶质保护(图12a和12b)。在处死小鼠后由该小鼠建立小神经胶质细胞的初级培养物，并将其用抗cd3抗体刺激24h。
方法论：“在处死处理和对照组后，由这些小鼠建立小神经胶质的初级培养物，并将其用抗cd3抗体刺激24h。”shytle等人，2012。“如先前研究(tan等人journalofimmunology，1999；tan等人science，1999)中所描述的，收集细胞培养的小神经胶质用于通过市售细胞因子elisa试剂盒测量细胞因子。同时，制备细胞溶解物用于测量总体细胞蛋白质。数据表示为对于所产生的各细胞因子的ng/mg总细胞蛋白质。使用可商购获得的elisa(biosourceinternational，inc.，camarillo，ca)定量细胞因子，以允许检测il-2和il-4。”shytle等人，2012。
结果：与对照(分别为143ng/ml和129ng/ml)相比，经hsrx-888处理的小鼠显示细胞因子il-4和il-2分别增加3倍和2倍。图12a。另外，与对照相比，在来自经hsrx-888处理的小鼠的细胞中，il-4与il-2的比率从0.73增加至1.11。图12b。具体地，hsrx-888处理增加il-4与il-2的比率，表示从th1(发炎)变成th2(非发炎)反应。与th1反应相比，th2反应的比率增加预期减少与免疫反应相关的炎症。因此，由该数据预期本文公开的组合物具有抗炎特性。
实施例10
直接结合至淀粉状蛋白
任何提出的通过本文公开的组合物减少β-淀粉状蛋白聚集的非结合作用机制不排除以下可能性：本文公开的生物标志中的至少一个结合淀粉状蛋白，并通过它减少β-淀粉状蛋白聚集。显示生物标志15(bdmc)被预期结合βa(1-42)。
简而言之，使用chem3dultra(cambridgesoft，cambridge，ma)分子建模软件包的三维自由能最小化用于使用分子力学两个理论水平进行生物标志15的自由能最小化。
结果：最小自由能建模分析揭示在tyr10与生物标志15之间发生强分子间相互作用，其允许生物标志15包围his13和his14，从而有效地防止phe19和phe20结合并形成寡聚物(图13a)。生物标志15还可结合至扰乱βa(1-42)寡聚物的分子间相互作用稳定的gly33、met35和gly37(图13b)。
实施例11
脑脊髓液溶解性
预期当与通过任何施用方式向对象施用时相比，施用本文公开的组合物将来自这种组合物的生物标志提供至脑脊髓液。施用可以包括(但不限于)经口、静脉内(iv)或体腔内(ic)施用。作为载体，在实施例3中，在经口施用到人类中后，在血清中可以发现来自hsrx-888的生物标志。另外，实施例6、7和8显示经口施用hsrx-888的小鼠在大脑中关于阿尔茨海默病的标志物减少，强有力地表明来自hsrx-888的生物标志进入脑脊髓液中。另外，已表明在血清中发现的一些化合物有可能使其进入脑脊髓液中(nau等人，2010)。
最后，为了显示hsrx-888是可溶的和在脑脊髓液中可侦测的，显示hsrx-888可溶于活体外脑脊髓液中(未示出)。另外，使用dart-tof，其显示可以在hsrx-888与活体外脑脊髓液的混合物中检测到hsrx-888生物标志。
当前计划的临床试验进一步显示向人类对象经口施用本文公开的组合物将来自这种组合物的生物标志提供至对象的脑脊髓液。参见实施例12。
实施例12
在人类对象中的临床试验
本实施例关于使用hsrx-888的计划临床试验以确定hsrx-888的安全性和耐受性以及其在轻度至中度阿尔茨海莫比(ad)中对脑脊髓生物标志的作用。具体地，研究经设计为：1)检查与安慰剂相比两个剂量的姜黄衍生营养补充剂hsrx-888在患有轻度至中度ad的患者中的安全性和耐受性；2)确定在多个剂量的hsrx-888后，姜黄素是否可在患有ad的人的脑脊髓液中检测到；和3)检查hsrx-888相对于安慰剂对ad的生物标志(包括淀粉状蛋白-42、τ和磷酸-τ)的作用。表2概述了在研究中遵循的程序。
方法论：在50岁至90岁年龄患有轻度至中度ad的45名对象(14至28名的简易智能评估(minimentalstateexamination(mmse))接受稳定剂量的经批准的乙酰胆碱酯酶抑制剂将参与大约56周的研究。研究将为随机、双盲、安慰剂对照设计。
对象将接受两个容器的呈胶囊形式的研究性产品。每个胶囊将含有175mg的hsrx-888或当量的不可区分的惰性安慰剂粉末。对象将受到指令在饮食之前每天三次服用两个丸剂。错过剂量不应稍后替换为双重剂量。安慰剂组将每天三次接受两个安慰剂胶囊。低剂量hsrx-888组将一日三次接受一个安慰剂胶囊和一个hsrx-888胶囊。高剂量hsrx-888组将一日三次接受两个hsrx-888胶囊。
总体研究持续时间将为一年并包括以下组成部分：
1)对象将随机分配为1:1:1的比率每天三次接受给药175mghsrx-888、350mghsrx-888或匹配安慰剂。头9名对象(包含来自各组的3名)将在基线且在接受1个月的研究补充剂后经历腰椎穿刺(lp)。在9名对象完成两次lp后，将进行期中分析以确定血液和脑脊髓液(csf)中姜黄素和葡萄糖醛酸苷化姜黄素的水平。
2)如果姜黄素确认存在于头6名接受hsrx-888的对象的脑脊髓液中，则剩余36名对象将随机接受两个剂量的hsrx-888或安慰剂中的一个持续1年。如果在csf中未发现姜黄素，或以较低剂量发现饱和量，或如果在csf中发现次优量的姜黄素，则将告知主办人和irb，且如果认为合适，则将请求利用调节剂量的hsrx-888测试另外九名对象。
3)36名额外对象将参与研究，并将在基线和在随机化后6个月经历腰椎穿刺。将分析其csf的游离姜黄素和姜黄素代谢物以及经验证的阿尔茨海默病生物标志(淀粉状蛋白-42、τ和磷酸-τ181)。当18名对象完成6个月的研究产品时，将进行对ad生物标志的期中分析。
4)所有45名对象将接受其随机分配的研究性补充剂或安慰剂持续一年。在整年中，对象将经历周期性生理、神经和临床评定以及常规实验室测试以评定其对研究性补充剂的耐受性，并获得其他关于该补充剂在患有阿尔茨海默病的人中的安全性信息。
测量结果：将在该临床试验中测量以下结果。
安全性：(1年，所有对象)所测量的安全性结果将包括不良事件/严重不良事件；临床实验室测试(cbc，生物化学特征曲线)；生命体征；重量/bmi；生理和神经检查；老年抑郁量表(gds)；经改良的简易智能评估(3ms)；adcs-adl量表；神经精神目录(npi)。纳入3ms、adcs-adl、gds和npi检查对与研究产品相关认知、日常功能、情绪或行为是否存在任何不良效应。研究的该组成部分也可提供适用于为未来功效研究提供动力的数据。
6个月生物标志终点(在36名对象中6个月hsrx-888或安慰剂和2次lp):在6个月预约时，所测量的初级结果将包括在6个月的研究补充剂后csfaβ-42的改变。所测量的二级结果将包括在6个月施用研究补充剂后csfτ、磷酸-τ和姜黄素的改变。
额外探索性端点：(所有对象的csf和血清)将测量的额外端点包括在研究补充剂后血清中生物活性姜黄素的水平改变；在研究补充剂后血液和csf中其他姜黄衍生物质的水平改变；和在研究补充剂后血液和csf中葡萄糖醛酸苷化姜黄素的水平改变。
第一期中分析(在头9名对象中在1个月的hsrx-888或安慰剂和两次lp后)：所测量的第一期中分析结果将包括在一个月后脑脊髓液中姜黄素的水平改变和在一个月后血液中姜黄素的水平改变。
第二期中分析(在18名对象中在6个月的hsrx-888或安慰剂和两次lp后)：所测量的第二期中分析结果将包括在六个月的每天三次施用后脑脊髓液中生物活性姜黄素的水平自基线的改变；在六个月的每天三次使用后血液中姜黄素浓度自基线的改变；和在csfaβ-42/τ和磷酸-τ中自基线的改变。
统计分析：描述性统计资料将用于表征整体研究人口并检查整个研究组中的不平衡。克拉斯卡-瓦立斯测试或类似的非参数测试将用于评定脑脊髓姜黄素水平中自基线至三个月的差值的显著性用于头9名对象的期中分析。将使用末次观测值结转法用于设算遗漏数据进行anova以用于在6个月的hsrx-888或安慰剂后的生物标志分析。在整个研究组中年龄、基线mmse或其他人口统计测量存在显著差异的情况下，将采用ancova调节不平衡。安全性结果将制成表用于整体研究，并由研究组分类。将在接受hsrx-888相对于安慰剂的对象之间在ae的频率和严重性上进行比较。
表2：程序表
实施例13
抗氧化能力
本实施例涉及关于使用2,2-二苯基-1-苦肼基(dpph)方法论的hsrx-888抗氧化能力获得的数据。
方法论：简而言之，将hsrx-888的储备溶液溶解在纯乙醇(usp)和/或tris-hcl缓冲液(ph7.4)中。制备连续稀释液并将100μl各稀释液添加至96孔板中的一式两份孔中。阳性对照孔和合适的样品孔含有100μltris-hc1缓冲液和纯乙醇中的100μl500μmdpph。将tris-hcl缓冲液添加至空白样品孔，在各空白孔中获得200μl总体积。在黑暗中在室温下振荡板20分钟，并在517nm下使用bioteksynergy酶标仪(biotek，winooski，vt)测量吸收。dpph自由基清除活性定义为在空白和含有样品孔的dpph之间相对于dpph阳性对照的吸收差异。
结果：确定hsrx-888以剂量依赖性方式抑制2-二苯基-1-苦肼基自由基(dpph)。hsrx-888ic50值为19.2μgml-1(r2＝0.731，n＝10)。(图14)
实施例14
抗炎特性
苯实施例涉及关于抑制cox1、cox2和5lox所获得的数据。该数据显示hsrx-888的抗炎性。
cox1和cox2分析
方法论：简而言之，所有试剂和溶液均根据由caymanchemicals(annarbor，mi)建立的方案制备用于cox-1和cox-2抑制分析。利用两个程序评价cox1/2特异性和非特异性活性。
前列腺素产生抑制：将姜黄萃取物溶解在纯二甲基亚飒(dmso)中，然后在反应缓冲液中稀释至1％(v/v)的最终dmso浓度。将反应用cox-1(绵羊)或cox-2(人类重组)酶在血红素存在下进行。制备含有姜黄萃取物的孔、100％酶活性、背景孔(加热失活酶)和合适的空白。在进行反应前，将溶液置于37℃保温箱中15分钟。添加二十碳四烯酸并反应2分钟。通过添加1mhc1中止反应。使用eia定量前列腺素f2产物。
用eia定量前列腺素：在caymanchemicals筛选试剂盒中提供分析板(eia)。将来自前列腺素产生的等分试样(50μl)反应产物(pgf2)添加至其各孔中。总活性和空白孔接受150μleia缓冲液，非特异性结合孔接受100μleia缓冲液，最大结合孔接受50μleia缓冲液。cox100％活性孔、非特异性结合、背景、最大结合、标准物和姜黄萃取物孔接受50μl示踪剂。cox100％活性、背景、最大结合、标准物和姜黄萃取物孔还接受50μl抗血清。在室温下进行eia板反应18h。板用洗涤缓冲剂洗涤，并将200μl埃尔曼氏试剂添加至所有孔，然后添加5μl示踪剂至总活性孔。通过使用bioteksynergy酶标仪在409nm的吸光度下定量显色。
结果：确定hsrx-888以剂量依赖性方式抑制cox1和cox2。hsrx-888ic50值针对cox1为100.6μgml-1(r2＝0.907，n＝36)(图15a)，针对cox2为23.0μgml-1(r2＝0.874，n＝24)(图15b)。
5-lox分析
方法论：简而言之，5-脂肪加氧酶(5-lox)活性通过根据用于脂肪加氧酶抑制剂筛选分析试剂盒(caymanchemical，annarbor，mi)的制造商方案监测纯化马铃薯5-lox来确定。将姜黄萃取物溶解在纯dmso中，并在所有孔中在反应缓冲液中连续稀释至1％(v/v)的最终dmso浓度。反应根据制造商说明书进行，并进行对照以建立不干扰反应的1％(v/v)dmso。通过在添加色素原成像试剂后使用bioteksynergy板读取器(winooski，vt)测量在495nm下的吸光度来定量5-脂肪加氧酶活性抑制。
结果：确定hsrx-888以剂量依赖性方式抑制5lox。hsrx-888ic50值为针对5lox的256.3μgml-1(r2＝0.999，n＝8)(图15c)。
实施例15
协同作用
如前所提及，在本文中实验结果表明在本文公开的生物标志之间的协同作用。另外，由于预测方法对本文公开的生物标志的作用，认为生物标志将与其他化合物协同起作用，其通过治疗或预防阿尔茨海默病、蛋白质错误折叠/聚集疾病和病状和/或炎症的各机制起作用。为了进一步确认该协同作用并确定与其他化合物/组合物的协同作用，本文公开的生物标志中的一个或多于一个可以与本文公开的其他生物标志和/或一种或多于一种药物和/治疗中的一种或多于一种组合测试。组合研究可以显示用于细胞培养物、动物研究、人类研究等中治疗和/或预防疾病和/或病状和/或其症状的竞争性、累积性或协同性相互作用。研究的非限制性实例可以包括上文所述的那些研究以及本领域技术人员已知的那些研究。作为非限制性实例，可以测试hsrx-888和nsaid、nmda受体拮抗剂和/或乙酰胆碱酯酶抑制剂的组合。
可以进行确定组合的竞争性、累积性或协同性相互作用的组合分析的非限制性实例可以利用通常用于查看药物相互作用和协同作用的相互作用基质。在一种情况下，相互作用基质用于细胞培养物中阿尔茨海默病、蛋白质错误折叠、蛋白质聚集或炎症的预防或治疗研究。简而言之，实验可以具有25个样品：4个仅具有第一测试化合物/组合物(诸如hsrx-888)、4个仅具有第二测试化合物/组合物、1个无化学物质和剩余16个可以是第一和第二测试化合物/组合物的组合。可以测试来自起始浓度(诸如针对hsrx-888为1mg/ml)的第一测试化合物/组合物的1:4稀释液和来自起始浓度的第二测试化合物/组合物的1:4稀释液。减少炎症标志物、减少淀粉状蛋白分泌、减少淀粉状蛋白聚集、减少τ的磷酸化等的能力可以在抑制性化合物持续存在下发生。以这种方式，实验同时模拟患者关于预防性治疗，测试通过以一系列浓度的仅第一测试化合物/组合物、仅第二测试化合物/组合物和两者组合来预防疾病发作。可利用berenbaum的方法论分析数据以确定竞争性、累积性或协同性相互作用。(berenbaum1977)。
实施例16
预期治疗和/或预防多种神经病症
基于本文公开的益处和利用姜黄素的治疗益处，包括非人类模型和活体外中展现的那些益处，本文公开的组合在治疗和/或预防多种疾病、病症和病状中提供益处。如本文中所显示的，本文公开的生物标志组合可增加姜黄素摄入到人类对象中，可溶于脑脊髓液中，拥有抗炎特性，拥有抗氧化能力，且拥有减少蛋白质退化症和/或错误折叠的能力。基于尤其这些特性，预期本文公开的组合可向人类对象提供增加量的生物可用姜黄素、增加的抗炎性益处、增加的抗氧化益处、减少的蛋白质退化症益处和减少的蛋白质错误折叠益处。
对于至少所描述和显示的那些原因，本文公开的组合在治疗和/或预防包括(但不限于)以下的神经病症、疾病和病状中提供益处：退行性/蛋白质错误折叠病症、脑血管疾病、发炎性疾病、创伤/闭合性头部损伤、癫痫和/或赘生物。退行性/蛋白质错误折叠病症的非限制性实例包括阿尔茨海默病、帕金森病、路易体病、额颞叶型退化症、进行性核上麻痹、肌萎缩性侧索硬化、多系统萎缩症、大脑淀粉样变性、脊髓小脑萎缩症。脑血管疾病的非限制性实例包括缺血性中风、再灌注损伤和大脑血管痉挛。发炎性疾病的非限制性实例包括多发性硬化症和cns狼疮。创伤/闭合性头部损伤的非限制性实例包括震荡、挫伤和慢性创伤性脑病。癫痫的非限制性实例包括全身性癫痫病症和局部癫痫病症。赘生物的非限制性实例包括转移性和原发性cns肿瘤。
另外，如在本文中公开和显示的，本文公开的生物标志组合可以增加姜黄素摄入到人类对象中。至少出于此原因和上文所描述的那些原因，本文公开的生物标志与姜黄素的组合将向人类对象提供在活体外、活体内和/或临床试验中显示的与姜黄素相关的益处。
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本文中公开或要求保护的所有组合物和/或方法可以根据本发明在无不当实验的情况下制备和执行。虽然已根据特定实施方案描述了本发明的组合物和方法，但本领域技术人员应领会可以在不背离本发明的概念、精神和范围的情况下应用改变于本文所述的组合物和/或方法和方法的步骤或步骤顺序中。更特别地，显而易见的，在化学上和生理上相关的某些药剂可取代本文所描述的药剂，同时获得相同或类似的结果。对本领域技术人员显而易见的是所有这些类似取代和修改被视为在由随所附权利要求限定的本发明的精神、范围和概念内。
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