本发明涉及医药，特别是一种泽兰多糖制备方法及其应用。
背景技术：
：泽兰为唇形科植物毛叶地瓜儿苗（LycopuslucidusTurcz.Var.HirtusRegel）的干燥地上部分。别名地瓜儿苗、地笋、地参等，始载于《神农本草经》，历代本草均有记载，是一种用途广泛的传统中药材，收载于《中华人民共和国药典》2015年版一部。泽兰广泛分布于黑龙江、吉林、辽宁、安徽、江苏、浙江、湖北、四川、山西等地。众多文献报道表明泽兰具有丰富的生物活性成分和多种药理作用，极具应用价值。泽兰味苦、辛，微温，归肝、脾经，具有活血调经、祛瘀消痈、利水消肿之功效，用于治疗月经不调、经闭、经痛、产后瘀血腹痛、水肿等。现代药理作用研究表明泽兰具有抗凝血、降血脂、保肝利胆等生理活性，还有改善免疫力、活血化瘀、抗氧化等生理功能，能防治冠心病、高血压、肝硬化等疾病。目前文献大多报道泽兰中三萜酸类、酚酸类、黄酮类、挥发油等化学成分提取分离及药理作用。但是到目前为止，还没有泽兰多糖具有促进肠道菌群增殖和改善便秘功能和用途的相关报道，也没有如何从泽兰中将泽兰多糖提取的公开报导。技术实现要素：针对上述情况，为克服现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种泽兰多糖制备方法及其应用，可有效解决泽兰多糖的制备及其在制备调节肠道菌群失调及改善便秘药物中的应用。本发明解决的技术方案是，泽兰多糖的制备方法是，将泽兰饮片粉碎后过20～60目筛，在50～80℃下以料水质量比1:5～20进行超声微波提取0.5～2h，得提取液，提取液经8000～12000rpm高速离心20～30min，取上清液，得第一次上清液，加入第一次上清液体积3～5倍的Sevag试剂，震荡0.5～1h，8000～12000rpm高速离心20～30min，取上清液，得第二次上清液，第二次上清液减压浓缩至相对密度为1.0～1.2的浓缩液，浓缩液加入3～5倍体积的95%乙醇沉淀，得沉淀物，干燥即得泽兰多糖；该泽兰多糖可有效用于制备调节肠道菌群失调及改善便秘的药物，从而实现泽兰多糖在制备调节肠道菌群失调及改善便秘药物中的应用。本发明制备方法简单，易生产制备，成本低，效率高，有效用于从泽兰中提取泽兰多糖，并实现泽兰多糖在制备调节肠道菌群失调及改善便秘药物中的应用，还可用于制备保健品、食品，开拓了泽兰新的药价值，有良好的经济和社会效益。具体实施方式以下结合具体情况对本发明的具体实施方式作详细说明。本发明制备方法可由以下实施例给出。实施例1本发明在具体实施中，泽兰多糖的制备方法是，将泽兰饮片粉碎，过30目筛，以料水质量比1：8，在70℃下进行超声微波提取1.5h，超声提取功率为500w，频率为25KHz，微波功率为600W，频率为2450KHz，提取液经10000rpm高速离心25min，取上清液，得第一次上清液，加入第一次上清液3倍体积的Sevag试剂，震荡0.5h，10000rpm高速离心25min，取上清液，得第二次上清液，减压浓缩至相对密度为1.15的浓缩液，浓缩液加入3倍体积的95%乙醇沉淀，得沉淀物，干燥即得泽兰多糖。实施例2本发明在具体实施中，泽兰多糖的制备方法是，将泽兰饮片粉碎，过20目筛，以料水质量比1：10，在80℃下进行超声微波提取1h，超声提取功率为600w，频率为25KHz，微波功率为800W，频率为2450KHz，提取液经12000rpm高速离心20min，取上清液，得第一次上清液，加入第一次上清液4倍体积的Sevag试剂，震荡0.6h，12000rpm高速离心20min，取上清液，得第二次上清液，减压浓缩至相对密度为1.18的浓缩液，浓缩液加入4倍体积的95%乙醇沉淀，得沉淀物，干燥即得泽兰多糖。实施例3本发明在具体实施中，泽兰多糖的制备方法是，将泽兰饮片粉碎，过40目筛，以料水质量比1：15，在85℃下进行超声微波提取1h，超声提取功率为800w，频率为25KHz，微波功率为700W，频率为2450KHz，提取液经9000rpm高速离心30min，取上清液，得第一次上清液，加入第一次上清液5倍体积的Sevag试剂，震荡0.8h，9000rpm高速离心30min，取上清液，得第二次上清液，减压浓缩至相对密度为1.16的浓缩液，浓缩液加入5倍体积的95%乙醇沉淀，得沉淀物，干燥即得泽兰多糖。实施例4本发明在具体实施中，泽兰多糖的制备方法是，将泽兰饮片粉碎，过24目筛，以料水质量比1：20，在60℃下进行超声微波提取1h，超声提取功率为900w，频率为25KHz，微波功率为900W，频率为2450KHz，提取液经10000rpm高速离心25min，取上清液，得第一次上清液，加入第一次上清液5倍体积的Sevag试剂，震荡1h，10000rpm高速离心25min，取上清液，得第二次上清液，减压浓缩至相对密度为1.2的浓缩液，浓缩液加入5倍体积的95%乙醇沉淀，得沉淀物，干燥即得泽兰多糖。上述方法所制备的泽兰多糖可有效用于制备调节肠道菌群失调及改善便秘的药物和制备治疗便秘、肥胖的保健品及食品，其中泽兰多糖在治疗便秘、肥胖的保健品及食品中的质量含量为40-80%，在制备调节肠道菌群失调及改善便秘的药物时，其药物为片剂、颗粒剂、胶囊剂、散剂、口服液，其中泽兰多糖质量含量为40-80%，并经试验和实地应用取得了非常好的有益技术效果，有关试验资料如下：实验1将泽兰多糖分别以2.5%、5%、10%比例（质量含量）混合于大鼠饲料中。SD大鼠60只，随机分为5组，分别为生理盐水组、高脂饲料组、2.5%、5%、10%（质量含量）剂量组。生理盐水组正常饲料喂养，其余大鼠经灌胃连续给予高脂饲料15天，通过聚合酶链式反应（PCR）技术检测粪便菌群丰度，当硬壁菌门：拟杆菌门的比例大于1:1时，提示菌群开始失调，大鼠饲料更换为含有泽兰多糖的饲料14天后，收集粪便，PCR测定细菌丰度。结果如下表1、表2所示。表1显示泽兰多糖对肠道菌群紊乱的调节作用，表2显示了泽兰多糖对肠道菌群中拟杆菌、梭杆菌和乳杆菌的影响。由表1、表2可见，高脂饲料组大鼠粪便硬壁菌门丰度显著升高，拟杆菌门丰度明显减小，给予泽兰多糖的大鼠粪便中硬壁菌门丰度显著下降，梭杆菌丰度显著下降，益生菌丰度明显增加，显示出明显地改善肠道菌群失调的作用。表1泽兰多糖对大鼠粪便硬壁菌门和拟杆菌门的影响组别动物数硬壁菌门拟杆菌门比例生理盐水123.8±0.464.0±0.520.9高脂饲料125.8±0.683.7±0.491.5泽兰多糖（2.5%）123.9±0.534.0±0.611.0*泽兰多糖（5%）123.5±0.494.6±0.570.7**泽兰多糖（10%）123.1±0.354.9±0.620.6***P﹤0.05，**P﹤0.01VS高脂饲料表2泽兰多糖对大鼠粪便中拟杆菌、梭杆菌和乳杆菌的影响组别动物数拟杆菌梭杆菌乳杆菌生理盐水120.35±0.0231.3±0.232.8±0.33高脂饲料120.62±0.0672.9±0.460.7±0.06泽兰多糖（2.5%）120.68±0.0762.6±0.520.9±0.09泽兰多糖（5%）120.65±0.0821.5±0.26*2.1±0.35*泽兰多糖（10%）120.69±0.0971.1±0.31**2.6±0.43***P﹤0.05，**P﹤0.01VS高脂饲料实验2将泽兰多糖分别以2%、4%、8%比例（质量含量）混合于大鼠饲料中。SD大鼠60只，随机分为5组，分别为生理盐水组、高脂饲料组、2%、4%、8%（质量含量）剂量组。生理盐水组正常饲料喂养，其余大鼠经灌胃连续给予高脂饲料15天，通过聚合酶链式反应（PCR）技术检测粪便菌群丰度，当硬壁菌门：拟杆菌门的比例大于1:1时，提示菌群开始失调，大鼠饲料更换为含有泽兰多糖的饲料14天后，收集粪便，PCR测定细菌丰度。结果如下表3、表4所示。表3显示泽兰多糖对肠道菌群紊乱的调节作用，表4显示了泽兰多糖对肠道菌群中拟杆菌、梭杆菌和乳杆菌的影响。由表3、表4可见，高脂饲料组大鼠粪便硬壁菌门丰度显著升高，拟杆菌门丰度明显减小，给予泽兰多糖的大鼠粪便中硬壁菌门丰度显著下降，梭杆菌丰度显著下降，益生菌丰度明显增加，显示出明显地改善肠道菌群失调的作用。表3泽兰多糖对大鼠粪便硬壁菌门和拟杆菌门的影响组别动物数硬壁菌门拟杆菌门比例生理盐水123.7±0.393.9±0.480.9高脂饲料125.3±0.723.4±0.571.5泽兰多糖（2%）124.0±0.464.1±0.531.0*泽兰多糖（4%）123.6±0.394.5±0.490.8*泽兰多糖（8%）123.2±0.314.8±0.560.6***P﹤0.05，**P﹤0.01VS高脂饲料表4泽兰多糖对大鼠粪便中拟杆菌、梭杆菌和乳杆菌的影响组别动物数拟杆菌梭杆菌乳杆菌生理盐水120.38±0.0261.2±0.312.7±0.43高脂饲料120.67±0.0582.8±0.420.8±0.07泽兰多糖（2%）120.65±0.0612.5±0.460.9±0.08泽兰多糖（4%）120.68±0.0731.7±0.31*2.2±0.42*泽兰多糖（8%）120.69±0.0711.3±0.26**2.5±0.38***P﹤0.05，**P﹤0.01VS高脂饲料实验3将泽兰多糖分别以1.25%、2.5%、5%比例（质量含量）混合于大鼠饲料中。SD大鼠60只，随机分为5组，分别为生理盐水组、高脂饲料组、1.25%、2.5%、5%（质量含量）剂量组。生理盐水组正常饲料喂养，其余大鼠经灌胃连续给予高脂饲料15天，通过聚合酶链式反应（PCR）技术检测粪便菌群丰度，当硬壁菌门：拟杆菌门的比例大于1:1时，提示菌群开始失调，大鼠饲料更换为含有泽兰多糖的饲料14天后，收集粪便，PCR测定细菌丰度。结果如下表5、表6所示。表5显示泽兰多糖对肠道菌群紊乱的调节作用，表6显示了泽兰多糖对肠道菌群中拟杆菌、梭杆菌和乳杆菌的影响。由表5、表6可见，高脂饲料组大鼠粪便硬壁菌门丰度显著升高，拟杆菌门丰度明显减小，给予泽兰多糖的大鼠粪便中硬壁菌门丰度显著下降，梭杆菌丰度显著下降，益生菌丰度明显增加，显示出明显地改善肠道菌群失调的作用。表5泽兰多糖对大鼠粪便硬壁菌门和拟杆菌门的影响组别动物数硬壁菌门拟杆菌门比例生理盐水123.6±0.413.9±0.420.9高脂饲料125.9±0.623.8±0.361.5泽兰多糖（2.5%）123.8±0.373.9±0.431.0*泽兰多糖（5%）123.3±0.424.8±0.430.7**泽兰多糖（10%）123.1±0.294.9±0.410.6***P﹤0.05，**P﹤0.01VS高脂饲料表6泽兰多糖对大鼠粪便中拟杆菌、梭杆菌和乳杆菌的影响组别动物数拟杆菌梭杆菌乳杆菌生理盐水120.34±0.0211.2±0.212.7±0.29高脂饲料120.66±0.0752.8±0.520.8±0.09泽兰多糖（2.5%）120.67±0.0582.5±0.431.1±0.12泽兰多糖（5%）120.66±0.0691.4±0.36*2.2±0.43*泽兰多糖（10%）120.65±0.0831.2±0.29**2.7±0.48***P﹤0.05，**P﹤0.01VS高脂饲料实验4昆明小鼠60只，随机分为4组，分别为生理盐水组、泽兰多糖低、中、高剂量组。经灌胃给药，每天一次，连续7天，末次给药后，灌胃给予碳素墨水0.1ml/10g，6h后收集粪便称重；小鼠脱颈椎处死，立即取出胃肠，平铺，测定碳素墨水前端至幽门的距离及小肠全长，计算小肠推进率(小肠推进率=碳素墨水前端至幽门的距离/小肠全长×100%)。结果见表7。表7泽兰多糖对小鼠小肠运动推动作用组别动物数墨汁推进率（%）6h粪便重量（mg）生理盐水1225.5±6.256.3±8.2泽兰多糖（1000mg/kg）1236.1±5.675.1±12.6泽兰多糖（2000mg/kg）1245.5±8.1*82.3±13.5*泽兰多糖（4000mg/kg）1253.2±9.6**89.8±12.3**P﹤0.05，**P﹤0.01VS生理盐水结果表明，泽兰多糖可显著提高墨汁推进率，6h粪便总重量显著高于盐水对照组，说明泽兰多糖具有显著润肠通便作用。上述经反复试验多次，均取得了相同或相近似的结果，表明本发明方法稳定可靠，其制备物泽兰多糖具有润肠通便、改善肠道菌群失调之功效，有效用于制备调节肠道菌群失调及改善便秘药物及便秘、肥胖的保健品及食品，开拓了泽兰的新用途，与现有技术相比，本发明所具有的优势：（1）本发明在预防或治疗肠道菌群失调或便秘的药品、保健品、食品中的应用上，开辟了泽兰药材新的用途，具有较广的发展前景；（2）本发明中所使用的原料均为天然植物来源，不含防腐剂、添加剂、增白剂及西药成分，有实际的经济价值和临床价值；（3）本发明制备及实验方法简单方便，科学先进，成本低，结果准确，为此泽兰多糖在预防或治疗肠道菌群失调或便秘上的应用提供科学依据；（4）避免患者长期口服其他药物造成的毒副作用，安全性好，利于身体健康，是运用中医药在预防或治疗肠道菌群失调或便秘上的创新，并在商业上有更好的推广，利于获得商业成功，有良好的经济和社会效益。当前第1页1 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