本发明属于医药制剂技术领域，具体涉及了一种注射用阿扎胞苷冻干粉。
背景技术
阿扎胞苷(azacitidine)最早由捷克斯洛伐克科学家piskala和sorm合成，后来又从拉达克链轮丝菌(streptoverticilliumladakanus)发酵液中被分离得到。化学名为1-(β-d-呋喃核基)-4-氨基-1,3,5-三嗪-2(1h)-酮，又名5-氮杂胞苷、氮杂胞苷，商品名维达扎(vidaza)，为白色针状结晶；是由美国pharmion公司研发的dna甲基转移酶抑制剂，2004年7月首次在美国上市；是作用于s期的细胞周期特异性药，能迅速磷酸化并渗入rna(核糖核酸)和dna(脱氧核糖核酸)通过破坏核酸顺利翻译为蛋白质，而抑制蛋白质的合成，还可通过抑制乳清酸核苷酸脱羧酶而影响嘧啶的合成；临床上主要用于治疗骨髓增生异常综合征，包括难治性贫血、难治性贫血伴有环形铁粒幼细胞增多，如同时伴有中性粒细胞减少症、血小板减少症或需要输血、难治性贫血伴有原始细胞增多、难治性贫血伴有原始细胞增多–转变型和慢性骨髓单核细胞性白血病5种亚型。
骨髓增生异常综合征(myelodysplasticsyndromes，mds)是一种以骨髓干细胞造血功能障碍为特征的恶性血液系统疾病，可致外周血细胞减少症，其中很多患者进展为急性髓细胞性白血病(aml)。按照《国际预后评分系统》判为中级-2和高危(统称为高风险)的mds患者的中位生存期仅分别为1.2和0.4年，且进展为aml的风险高。此前，除同种基因造血干细胞移植(hsct)外，没有其他治疗方法可以有效干预mds的自然进程。
2004年5月，阿扎胞苷成为美国fda批准上市的第一个mds治疗药物，适应证为所有5种french-american-british(fab)分类亚型的mds，包括难治性贫血(ra)、带有翼状成高铁红细胞的难治性贫血(rars)、带有过量原始粒细胞的难治性贫血(raeb)、带有过量转化中的原始粒细胞的难治性贫血(raeb-t)和慢性粒细胞-单核细胞性白血病(cmmol)患者。新的who分类系统将raeb-t归入aml。
2008年12月，阿扎胞苷也在欧盟获得了批准，成为欧洲第一个可显著延长中级-2和高危mds和aml患者总生存期的治疗药物。2011年3月，日本新药株式会社又在日本上市了阿扎胞苷，用于治疗msd。阿扎胞苷在欧、美、日均享有罕见病用药地位(orphandrugdesignation)。
2009年8月，美国国家癌症综合(nationalcomprehensivecancernetwork)将阿扎胞苷列为中级-2和高危mds患者的一类(最高级别)推荐治疗药物。2011年2月，英国国家健康与临床研究所(nationalinstituteforhealthandclinicalexcellence)作出最终评价结论认为，阿扎胞苷为一种创新性的、可延长生命且性价比高的药物。
阿扎胞苷是一种胞嘧啶核苷类似物，在水中极易水解，制剂的稳定性很难控制，因而对于临床用药的安全性和有效性造成了潜在的影响。根据原研说明书信息可知，注射用阿扎胞苷有肌内注射和静脉注射两种用法，肌内注射要求加4ml注射用水使阿扎胞苷成为均匀的混悬液使用，静脉注射是加10ml注射用水溶解后再加入氯化钠注射液或葡萄糖注射液中静脉滴注给药，作为混悬液使用时对阿扎胞苷混悬液的粒子大小、沉降速度，沉降体积比有严格的要求，要求粒子大小符合要求，粒度均匀，粒子的沉降速度应很慢，沉降后不应有结块现象，轻摇后应迅速均匀分散，沉降体积比应不低于0.9。
专利cn101632643a提供了一种注射用阿扎胞苷冻干粉针及其制备方法，其主要是通过加入维生素c来提高阿扎胞苷水溶液的稳定性，维生素c作为一种还原保护剂对产品的稳定性有一定的作用，但按照此专利的方法制得的样品粒度较大，并且沉降速度过快。
专利cn104739778a也公开了一种注射用阿扎胞苷冻干粉针及其制备方法，其主要是通过加入磷酸缓冲盐来提高阿扎胞苷水溶液的稳定性，磷酸缓冲盐对提高药物的稳定性有一定的帮助，但其在制备过程中没有对药物的配制温度进行控制，阿扎胞苷水溶液在0～10℃时是最稳定的，高于10℃时有关物质明显增大。并且用此专利方法制得的样品沉降后有结块现象，轻摇后不能迅速均匀分散。
专利cn105769775a也公开了一种注射用阿扎胞苷冻干粉针及其制备方法，其主要是通过控制配药温度、充氮来控制药物的水解，提高产品的稳定性，在低温下配药，充氮灌装对提高阿扎胞苷水溶液的稳定性有一定的作用，但是用此专利方法制得的样品粒子较大，粒度分布不均匀，不符合原研注射剂的粒度要求。
因此，综合以上现有技术，很有必要提供一种新的解决方案来克服以上缺陷和不足。
技术实现要素：
基于以上现有技术的弊端和本品的研发难点，本发明的目的在于提供一种质量稳定、外观良好，复溶性好，制成混悬液后粒子大小符合要求，粒子的沉降速度较慢，沉降体积比不低于0.9，沉降后无结块现象，轻摇后迅速均匀分散的注射用阿扎胞苷冻干制剂。
经研究发现阿扎胞苷原料在水中略溶，而且在水中不稳定容易水解，对临床用药的安全性和有效性存在潜在影响，所以我们要提高其在水中的溶解速度和稳定性。本发明通过加醋酸钠及控制配药温度来提高阿扎胞苷水溶液的稳定性，并通过原料药的过筛处理提高原料药在水中的溶解速度，另外发明人还发现原料药过筛还能使阿扎胞苷制剂的粒度分布更均匀。本发明还通过冻干曲线的优化得到一种加注射用水制成混悬液使用时粒子大小符合要求，沉降速度较慢，沉降体积比合适，混悬均匀的冻干粉针剂。
本发明的具体技术方案如下：
一种注射用阿扎胞苷冻干粉，其特征在于，该冻干粉由阿扎胞苷、甘露醇和醋酸钠组成；优选地，阿扎胞苷：甘露醇：醋酸钠＝20:20:1；更优选地，每支阿扎胞苷冻干粉针剂含阿扎胞苷100mg、甘露醇100mg和醋酸钠5mg。
所述的一种注射用阿扎胞苷冻干粉针剂的制备方法包括如下的步骤：
(1)称取处方量的甘露醇、醋酸钠于80％处方量的注射用水中，搅拌溶解；
(2)将活性炭加入步骤(1)所得溶液中，搅拌5～30min，脱炭后，所得滤液降温至0～10℃；
(3)称取处方量的阿扎胞苷原料，过筛，缓慢加入步骤(2)所得溶液中，搅拌溶解，加0～10℃注射用水至全量；
(4)将步骤(3)所得溶液用0.22μm滤器除菌过滤，所得滤液分装于西林瓶中，半压塞；
(5)将上述灌装好半压塞西林瓶送入冻干箱内，按预设温度进行冷冻干燥；
(6)干燥完成后，压塞、轧盖、包装即得。
所述一种注射用阿扎胞苷冻干粉针剂的制备方法，步骤(3)中原料药要进行过筛处理，所用药典筛为24目、50目、65目、80目，优选所用药典筛为24目、50目、65目，更优选所用药典筛为50目、65目，特别优选所用药典筛为50目。
所述一种阿扎胞苷冻干粉针剂的制备方法，步骤(5)中冷冻干燥包括如下步骤：
a.反复预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-40℃～-50℃，并维持30min；再以10℃/h升温至-5℃～-10℃，维持30min；再全速降温至-40℃～-50℃并维持30min；再以10℃/h升温至-5℃～-10℃，维持30min；再全速降温至-40℃～-50℃并维持240min；
b.升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.15±0.02mbar，将样品以10℃/h升温至-20℃，维持2～4h；稍后以5℃/h升温至-10℃，维持20h；
c.解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将样品的温度升至35～40℃，持续干燥4～6h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
预冻是将溶液中的自由水固化且恒压降温的过程。预冻过程可使干燥后的产品与干燥前有相同的形态，以防止真空干燥时起泡、浓缩、收缩和溶质移动等不可逆变化产生，减少因温度下降引起的物质溶解性降低或生物活性的变化。若预冻过程中制剂没有被冻实，则在升华时抽真空容易使西林瓶内的药品喷射出来，且制剂冻干后的形状不好，易塌陷或有许多泡状物。而且，冻干产品中晶核的形成在预冻期，其结晶形态直接影响干燥效率、产品的复溶及澄清度。
本发明采用反复预冻的方式，改变了制剂内部热量的传导方式，形成较小的温度差，有利于制品中晶核的形成，形成的晶型细小，在升华干燥以及解析干燥阶段，经本发明预冻的样品可以在较高真空的情况下，将样品中的水分迅速升华而不影响产品的外观及复溶，明显缩短了冻干周期。
本发明预冻的最终温度控制在-40℃～-50℃，以加大制品与冻干机中隔板的温差，以利于冰晶升华，由此也进一步提高了制品的复溶速度。
采用本发明制备的注射用阿扎胞苷冻干粉外观良好，复溶性好，制成混悬液后粒子大小符合要求，粒子的沉降速度很慢，沉降后无结块现象，轻摇后迅速均匀分散、质量稳定，符合临床用药的要求。
具体实施方式
下面通过实施例来进一步说明本发明，但并非是对本发明的限制，所以，在本发明的方法前提下对本发明的简单改进均属本发明要保护的范围。
实施例1
(一)处方
(二)注射用阿扎胞苷冻干粉针的制备：
1.阿扎胞苷水溶液的制备：
称取处方量的甘露醇、醋酸钠于80％处方量的注射用水中，搅拌使之溶解。将活性炭加入上述溶液中，搅拌30min，脱炭后将滤液降温至0～10℃。称取处方量的阿扎胞苷原料过24目筛后缓慢加入上述溶液中，搅拌溶解，溶解时间为8min，加0～10℃注射用水至全量。将上述溶液过0.22μm滤器除菌过滤，过滤后分装于西林瓶中，半压塞、放入冻干机冻干。
2.注射用阿扎胞苷冻干粉针的冻干程序为：
(a)反复预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-50℃，并维持30min，再以10℃/h升温至-6℃，维持30min，再全速降温至-50℃并维持30min，再以10℃/h升温至-6℃，维持30min，再全速降温至-50℃并维持120min。
(b)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.15±0.02mbar，将样品的温度以10℃/h升温至-20℃，维持4h；稍后以5℃/h升温至-10℃，维持20h。
(c)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将温度升至40℃，持续干燥6h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
实施例2
(一)处方
(二)注射用阿扎胞苷冻干粉针的制备：
1.阿扎胞苷水溶液的制备：
同实施例1；制备过程中原料过50目筛处理，原料的溶解时间为5min。
2.注射用阿扎胞苷冻干粉针的冻干程序为：
(a)反复预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-48℃，并维持30min，再以10℃/h升温至-7℃，维持30min，再全速降温至-48℃并维持30min，再以10℃/h升温至-7℃，维持30min，再全速降温至-48℃并维持240min。
(b)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.15±0.02mbar，将样品的温度以10℃/h升温至-20℃，维持2h；稍后以5℃/h升温至-10℃，维持20h。
(c)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将温度升至40℃，持续干燥4h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
实施例3
(一)处方
(二)注射用阿扎胞苷冻干粉针的制备：
1.阿扎胞苷水溶液的制备：
同实施例1；制备过程中原料过65目筛处理，原料的溶解时间为5min。
2.注射用阿扎胞苷冻干粉针的冻干程序为：
(a)反复预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-45℃，并维持30min，再以10℃/h升温至-10℃，维持30min，再全速降温至-45℃并维持30min，再以10℃/h升温至-10℃，维持30min，再全速降温至-45℃并维持240min。
(b)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.15±0.02mbar，将样品的温度以10℃/h升温至-20℃，维持3h；稍后以5℃/h升温至-10℃，维持20h。
(c)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将温度升至35℃，持续干燥6h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
实施例4
(一)处方
(二)注射用阿扎胞苷冻干粉针的制备：
1.阿扎胞苷水溶液的制备：
同实施例1；制备过程中原料过80目筛处理，原料的溶解时间为5min。
2.注射用阿扎胞苷冻干粉针的冻干程序为：
(a)反复预冻：先将待冻干样品溶液全速降温至-40℃，并维持30min，再以10℃/h升温至-10℃，维持30min，再全速降温至-40℃并维持30min，再以10℃/h升温至-10℃，维持30min，再全速降温至-40℃并维持240min。
(b)升华干燥：冻干机内抽真空并维持0.15±0.02mbar，将样品的温度以10℃/h升温至-20℃，维持3h；稍后以5℃/h升温至-10℃，维持20h。
(c)解析干燥：冻干机内抽真空并维持0.10±0.02mbar，将温度升至40℃，持续干燥5h，再极限真空2h，在真空状态下压塞，出箱。
对比实施例1
(一)处方
(二)制备过程
按上述处方，称取10g阿扎胞苷原料、10g甘露醇、1g维生素c，用2400ml的注射用水溶解；加入溶解后药液体积量1％的活性炭，脱色，过滤除炭；用上述注射用水稀释至配制量，测定药液浓度，药液ph范围为3.5～6.0；除菌过滤、分装，半加塞；将上述灌装好半加塞的西林瓶放入冻干箱内，预冻至-55℃，保持7h，此时冻干箱体内不抽真空，以20℃/h升温至20℃，保持10h，真空度为40～50umhg，在n2保护下压塞出箱，轧盖包装即得。
对比实施例2
(一)处方
(二)制备过程
称取处方量的阿扎胞苷、甘露醇和磷酸缓冲盐，缓慢加入注射用水中，搅拌溶解。称取0.5g活性炭，加入上述溶液中，搅拌15min。脱炭后，用0.22μm滤器除菌过滤，取样，测定中间体含量。根据中间体检测结果将药液灌装于西林瓶中，半加塞；将上述灌装好半加塞的西林瓶送入冻干箱内，预冻至-40℃，保持4h；隔板温度以10℃/h升温至-20℃，保持2h；以5℃/h升温至-10℃，保持20h；以5℃/h升温至30℃，保持8h，压塞出箱，轧盖包装即得。
对比实施例3
(一)处方
阿扎胞苷10g
甘露醇10g
注射用水至2300ml
100瓶
(二)制备过程
称取80％注射用水，温度控制在2℃；加入甘露醇，搅拌至完全溶解，温度控制在2℃；加入阿扎胞苷，搅拌至完全溶解，温度控制在2℃；过滤后进行分装，半加塞；将上述灌装好半加塞的西林瓶送入冻干箱内，预冻至-35℃，保持2h；隔板温度以15℃/h升温至-10℃，保持15h；以20℃/h升温至30℃，保持18h；充氮后压塞，轧盖，包装即得。
对比实施例4
(一)处方
(二)制备过程
按照实施例1进行药液配制。将灌装好半加塞的西林瓶放入冻干箱内，预冻至-55℃，保持7h，此时冻干箱体内不抽真空，以20℃/h升温至20℃，保持10h，真空度为40～50umhg，在n2保护下压塞出箱，轧盖包装即得。
对比实施例5
(一)处方
(二)制备过程
按照实施例1进行药液配制。将灌装好半加塞的西林瓶送入冻干箱内，预冻至-40℃，保持4h；隔板温度以10℃/h升温至-20℃，保持2h；以5℃/h升温至-10℃，保持20h；以5℃/h升温至30℃，保持8h，压塞出箱，轧盖包装即得。
验证实施例
将上述实施例和对比实施例样品放置于40℃±2℃，rh75％±5％条件下进行加速试验，分别于0、6个月后取样检测，结果如下：
表140℃±2℃，rh75％±5％条件下的加速结果
原研产品的粒度d(50)为50-60μm，d(90)为110-120μm。
加速试验结果表明：采用本发明制备的注射用阿扎胞苷冻干粉针实施例1、实施例2、实施例3、实施例4外观良好，复溶快，有关物质较小，制成混悬剂后粒子与原研产品一致，沉降速度较慢，沉降后无结块现象，轻摇后迅速均匀分散，沉降体积比符合要求，质量稳定，符合临床用药的要求。
对比实施例1、对比实施例2、对比实施例3所得样品复溶时间长，有关物质比较大，制成混悬剂后粒子较原研产品明显增大，沉降速度较快，沉降体积比不符合混悬剂的质量要求，对比实施例2有结块现象，轻摇后不能快速均匀分散，不符合临床用药的要求。对比实施例4、对比实施例5虽然有关物质较对比实施例1、对比实施例2、对比实施例3有所减小，但是复溶时间、粒度方面没有得到改善。
40℃±2℃，rh75％±5％加速试验后，实施例1、实施例2、实施例3、实施例4所得样品和0天相比无明显变化，说明用本发明制备的样品质量稳定，适合临床用药的要求。对比实施例1、对比实施例2、对比实施例3、对比实施例4、对比实施例5所得样品复溶时间明显延长，有关物质明显增大。制成混悬剂后粒子较0天有增大趋势，沉降速度更快，沉降体积比不符合要求，质量不稳定，不符合临床用药的要求。