本发明涉及从薤白中提取分离皂苷类成分的方法，尤其是薤白分组皂苷的制备方法，属于中药或天然药物化学研究领域。
背景技术：
薤白是指百合科植物小根蒜alliummacrostemonbge.的干燥鳞茎。夏，秋二季采挖，洗净，除去须根，蒸透或置沸水中烫透，晒干。具有通阳散结，行气导滞之功能；用于胸痹心痛，腕腹痞满胀痛，泻痢后重。
到目前为止人们从薤白中分得多种甾体皂苷，包括呋甾型甾体皂苷和螺甾型甾体皂苷，这些皂苷是薤白的主要有效成分。薤白中含有的呋甾型甾体皂苷和螺甾型甾体皂苷，不仅在化学结构、理化性质上有区别，而且在生物活性以及毒性等方面也有差别。因此从薤白中分别制备呋甾型甾体皂苷的混合物以及螺甾型甾体皂苷的混合物，然后再根据它们的生物活性去研制开发相应的医药用途是一件非常有意义的工作。但是到目前为止尚没有从薤白中分别制备呋甾型甾体皂苷的混合物以及螺甾型甾体皂苷的混合物即薤白总呋甾皂苷及制备总螺甾皂苷的文献报道。目前从薤白中提取分离皂苷类成分的最常用的方法是大孔吸附树脂法。即将薤白加水煎煮提取，提取液过大孔吸附树脂吸附(或者是用乙醇水溶液回流提取，提取液回收溶剂后再过大孔吸附树脂吸附)，用水洗净后用乙醇、甲醇、丙酮等的水溶液进行洗脱，洗脱液回收溶剂，获得薤白中皂苷类成分的混合物，即薤白总皂苷。这样获得的总皂苷是薤白中呋甾型甾体皂苷及螺甾型甾体皂苷的混合物。
技术实现要素：
本发明所述薤白不仅指百合科植物小根蒜alliummacrostemonbge.的干燥鳞茎，也包括其新鲜鳞茎，新鲜或干燥地上部分，还包括新鲜或干燥全草。
本发明把从薤白中分得的呋甾型甾体皂苷的混合物及螺甾型甾体皂苷的混合物分别称作薤白总呋甾皂苷及薤白总螺甾皂苷，把两者统称为薤白分组皂苷，两者加在一起的混合物称为薤白总皂苷。
本发明提供一种从薤白中提取分离薤白分组皂苷的新方法及薤白分组皂苷的应用。
如背景技术部分所述，目前从薤白中提取分离皂苷类成分的最常用的方法是大孔吸附树脂法。即薤白加水煎煮提取，提取液过大孔吸附树脂吸附(或者是用乙醇、甲醇、丙酮等的水溶液回流提取，提取液回收有机溶剂后再过大孔吸附树脂吸附)，用乙醇、甲醇、丙酮等的水溶液进行洗脱，洗脱液回收溶剂，获得薤白总皂苷。在上述洗脱过程中通常直接使用较高浓度的乙醇水溶液洗脱，所以全部皂苷被洗脱下来，得到的是薤白总皂苷。我们通过研究发现，如果将乙醇(或者甲醇、丙酮)的浓度调得较低，即用较低浓度的乙醇的水溶液(比如30％)洗脱，洗脱下来的成分是薤白中的呋甾型甾体皂苷，而螺甾型甾体皂苷仍然被吸附在大孔吸附树脂上。经过认真细致的研究后发现用20％至40％的乙醇水溶液洗脱，将洗脱下来的成分进行tlc检验，发现洗脱下来的成分是薤白中的呋甾型甾体皂苷，将呋甾型甾体皂苷洗脱完全后，用大于45％的乙醇水溶液洗脱，将洗脱下来的成分进行tlc检验,发现洗脱下来的成分是薤白中的螺甾型甾体皂苷。同样发现用体积百分比浓度大于15％至小于40％的甲醇水溶液洗脱时洗脱下来的成分是薤白中的呋甾型甾体皂苷，用大于40％的甲醇水溶液洗脱时洗脱下来的成分是薤白中的螺甾型甾体皂苷；用大于15％小于至40％丙酮水溶液洗脱时洗脱下来的成分是薤白中的呋甾型甾体皂苷，用大于40％的丙酮水溶液洗脱时洗脱下来的成分是薤白中的螺甾型甾体皂苷；用大于17％至小于40％的正丙醇或异丙醇水溶液洗脱时洗脱下来的成分是薤白中的呋甾型甾体皂苷，用大于40％的正丙醇或异丙醇水溶液洗脱时洗脱下来的成分是薤白中的螺甾型甾体皂苷。
上述研究结果表明，将薤白水提取物用大孔吸附树脂吸附后先用低浓度的有机溶剂的水溶液洗脱可以获得主要由呋甾皂苷组成的薤白总呋甾皂苷，待呋甾皂苷洗脱完全后改用高浓度的有机溶剂的水溶液洗脱可以获得主要由螺甾皂苷组成的薤白总螺甾皂苷。不同的有机溶剂及不同的大孔吸附树脂要求的浓度有事不同，但差别不大。
所述的大孔吸附树脂选自ab-8、d4020、d101、d102、d103、860021、hp20的一种或它们的两种或两种以上的混合树脂。
所述的有机溶剂选自乙醇、甲醇、丙酮、正丙醇、异丙醇或它们中的一种或两种或两种以上混合溶剂。
所述的低浓度有机溶剂的水溶液是指体积百分比浓度小于等于40％的有机溶剂水溶液，所述的高浓度有机溶剂的水溶液是体积百分比浓度大于40％的有机溶剂的水溶液。
取干燥薤白1kg粉碎，用10倍水煎煮提取3次，煎煮时间分别为2h、1.5h、1h，合并提取液，过滤，浓缩，过d4020大孔吸附树脂柱吸附，用去离子水洗至无色，用6倍柱体积的15％的乙醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点薄层板，用氯仿-甲醇-水(7:4:0.7)系统展开，用a试剂(50ml醋酸使0.5ml茴香醛溶解，加硫酸1ml)和e试剂(1％对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液：浓盐酸(4：1)检查，结果没有出现甾体皂苷斑点，说明15％的乙醇溶液不能将呋甾皂苷和螺甾皂苷洗脱下来(a试剂对呋甾、螺甾都显黄色，e试剂只对呋甾显粉色)；接着用17％的乙醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点薄层板，用氯仿-甲醇-水(7:4:0.7)系统展开，用a试剂显色，硅胶板出现若干个黄色斑点，用e试剂显色，硅胶板出现若干个粉色斑点，且黄色斑点和粉色斑点能够完全对应，说明17％的乙醇溶液能将呋甾皂苷洗脱下来而不能将螺甾皂苷洗脱下来。再分别用6倍柱体积的23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、40％的乙醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点硅胶板，用氯仿-甲醇-水(7:4:0.7)系统展开，用a试剂显色，硅胶板出现若干个黄色斑点，用e试剂显色，硅胶板出现若干个粉色斑点，且黄色斑点和粉色斑点能够完全对应，说明17％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、40％的乙醇溶液能将呋甾皂苷洗脱下来而不能将螺甾皂苷洗脱下来。再用41％、43％、45％乙醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点硅胶板，用氯仿-甲醇-水(10:4:0.5)系统展开，用a试剂显色，硅胶板出现若干个黄色斑点，用e试剂显色，硅胶板出现粉色斑点，说明当乙醇浓度大于41％时将呋甾皂苷和螺甾皂苷一起洗脱下来。
取薤白1kg粉碎，用10倍水煎煮提取3次，煎煮时间分别为3h、2h、1h合并提取液，过滤、浓缩、过ab-8大孔吸附树脂柱吸附，用去离子水洗至无色，用6倍柱体积的15％的甲醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点薄层板，用氯仿-甲醇-水(7:4:0.7)系统展开，用a试剂(50ml醋酸使0.5ml茴香醛溶解，加硫酸1ml)和e试剂(1％对二甲氨基苯甲醛甲醇溶液：浓盐酸(4：1)检查，结果没有出现甾体皂苷斑点，说明15％的甲醇溶液不能将呋甾皂苷和螺甾皂苷洗脱下来(a试剂对呋甾、螺甾都显黄色，e试剂只对呋甾显粉色)；接着用17％的甲醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点薄层板，用氯仿-甲醇-水(7:4:0.7)系统展开，用a试剂显色，硅胶板出现若干个黄色斑点，用e试剂显色，硅胶板出现若干个粉色斑点，且黄色斑点和粉色斑点能够完全对应，说明17％的甲醇溶液能将呋甾皂苷洗脱下来而不能将螺甾皂苷洗脱下来。再分别用6倍柱体积的19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、40％的甲醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点硅胶板，用氯仿-甲醇-水(7:4:0.7)系统展开，用a试剂显色，硅胶板出现若干个黄色斑点，用e试剂显色，硅胶板出现若干个粉色斑点，且黄色斑点和粉色斑点能够完全对应，说明17％、19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、40％的甲醇溶液能将呋甾皂苷洗脱下来而不能将螺甾皂苷洗脱下来。再用41％、43％、45％甲醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点硅胶板，用氯仿-甲醇-水(10:4:0.5)系统展开，用a试剂显色，硅胶板出现若干个黄色斑点，用e试剂显色，硅胶板出现粉色斑点，说明当甲醇浓度大于41％时将呋甾皂苷和螺甾皂苷一起洗脱下来。
取薤白1kg粉碎，用10倍水煎煮提取3次，煎煮时间分别为3h、2h、1h合并提取液，过滤、浓缩、过hp20大孔吸附树脂柱吸附，用去离子水洗至无色，用6倍柱体积的15％的丙酮溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点薄层板，用氯仿-丙酮-水(7:4:0.7)系统展开，用a试剂(50ml醋酸使0.5ml茴香醛溶解，加硫酸1ml)和e试剂(1％对二甲氨基苯甲醛甲醇溶液：浓盐酸(4：1)检查，结果没有出现甾体皂苷斑点，说明15％的丙酮溶液不能将呋甾皂苷和螺甾皂苷洗脱下来(a试剂对呋甾、螺甾都显黄色，e试剂只对呋甾显粉色)；接着用17％的丙酮溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点薄层板，用氯仿-甲醇-水(7:4:0.7)系统展开，用a试剂显色，硅胶板出现若干个黄色斑点，用e试剂显色，硅胶板出现若干个粉色斑点，且黄色斑点和粉色斑点能够完全对应，说明17％的丙酮溶液能将呋甾皂苷洗脱下来而不能将螺甾皂苷洗脱下来。再分别用6倍柱体积的19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、40％的丙酮溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点硅胶板，用氯仿-丙酮-水(7:4:0.7)系统展开，用a试剂显色，硅胶板出现若干个黄色斑点，用e试剂显色，硅胶板出现若干个粉色斑点，且黄色斑点和粉色斑点能够完全对应，说明17％、19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、40％的丙酮溶液能将呋甾皂苷洗脱下来而不能将螺甾皂苷洗脱下来。再用41％、43％、45％丙酮溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点硅胶板，用氯仿-甲醇-水(10:4:0.5)系统展开，用a试剂显色，硅胶板出现若干个黄色斑点，用e试剂显色，硅胶板出现粉色斑点，说明当丙酮浓度大于41％时将呋甾皂苷和螺甾皂苷一起洗脱下来。
取薤白1kg粉碎，用10倍水煎煮提取3次，煎煮时间分别为3h、2h、1h合并提取液，过滤、浓缩、过hp20大孔吸附树脂柱吸附，用去离子水洗至无色，用6倍柱体积的15％的异丙醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点薄层板，用氯仿-异丙醇-水(7:4:0.7)系统展开，用a试剂(50ml醋酸使0.5ml茴香醛溶解，加硫酸1ml)和e试剂(1％对二甲氨基苯甲醛甲醇溶液：浓盐酸(4：1)检查，结果没有出现甾体皂苷斑点，说明15％的异丙醇溶液不能将呋甾皂苷和螺甾皂苷洗脱下来(a试剂对呋甾、螺甾都显黄色，e试剂只对呋甾显粉色)；接着用17％的异丙醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点薄层板，用氯仿-甲醇-水(7:4:0.7)系统展开，用a试剂显色，硅胶板出现若干个黄色斑点，用e试剂显色，硅胶板出现若干个粉色斑点，且黄色斑点和粉色斑点能够完全对应，说明17％的异丙醇溶液能将呋甾皂苷洗脱下来而不能将螺甾皂苷洗脱下来。再分别用6倍柱体积的19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、40％的异丙醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点硅胶板，用氯仿-异丙醇-水(7:4:0.7)系统展开，用a试剂显色，硅胶板出现若干个黄色斑点，用e试剂显色，硅胶板出现若干个粉色斑点，且黄色斑点和粉色斑点能够完全对应，说明17％、19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、40％的异丙醇溶液能将呋甾皂苷洗脱下来而不能将螺甾皂苷洗脱下来。再用41％、43％、45％异丙醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点硅胶板，用氯仿-甲醇-水(10:4:0.5)系统展开，用a试剂显色，硅胶板出现若干个黄色斑点，用e试剂显色，硅胶板出现粉色斑点，说明当异丙醇浓度大于41％时将呋甾皂苷和螺甾皂苷一起洗脱下来。
取薤白1kg粉碎，用10倍水煎煮提取3次，煎煮时间分别为3h、2h、1h合并提取液，过滤、浓缩、过hp20大孔吸附树脂柱吸附，用去离子水洗至无色，用6倍柱体积的15％的正丙醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点薄层板，用氯仿-正丙醇-水(7:4:0.7)系统展开，用a试剂(50ml醋酸使0.5ml茴香醛溶解，加硫酸1ml)和e试剂(1％对二甲氨基苯甲醛甲醇溶液：浓盐酸(4：1)检查，结果没有出现甾体皂苷斑点，说明15％的正丙醇溶液不能将呋甾皂苷和螺甾皂苷洗脱下来(a试剂对呋甾、螺甾都显黄色，e试剂只对呋甾显粉色)；接着用17％的正丙醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点薄层板，用氯仿-甲醇-水(7:4:0.7)系统展开，用a试剂显色，硅胶板出现若干个黄色斑点，用e试剂显色，硅胶板出现若干个粉色斑点，且黄色斑点和粉色斑点能够完全对应，说明17％的正丙醇溶液能将呋甾皂苷洗脱下来而不能将螺甾皂苷洗脱下来。再分别用6倍柱体积的19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、40％的正丙醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点硅胶板，用氯仿-正丙醇-水(7:4:0.7)系统展开，用a试剂显色，硅胶板出现若干个黄色斑点，用e试剂显色，硅胶板出现若干个粉色斑点，且黄色斑点和粉色斑点能够完全对应，说明17％、19％、21％、23％、25％、27％、29％、31％、33％、35％、37％、39％、40％的正丙醇溶液能将呋甾皂苷洗脱下来而不能将螺甾皂苷洗脱下来。再用41％、43％、45％正丙醇溶液洗脱，将洗脱液浓缩后点硅胶板，用氯仿-甲醇-水(10:4:0.5)系统展开，用a试剂显色，硅胶板出现若干个黄色斑点，用e试剂显色，硅胶板出现粉色斑点，说明当正丙醇浓度大于41％时将呋甾皂苷和螺甾皂苷一起洗脱下来。
为了获得纯度更高的薤白总呋甾皂苷将薤白提取物用大孔吸附树脂吸附后先用体积百分比浓度低于15％的有机溶剂的水溶液洗脱除去杂质，然后用体积百分比浓度大于15％至小于40％的有机溶剂的水溶液洗脱获得主要由呋甾皂苷组成的薤白总呋甾皂苷，待呋甾皂苷洗脱完全后用体积百分比浓度大于40％的有机溶剂的水溶液洗脱获得主要由螺甾皂苷组成的薤白总螺甾皂苷。
同样为了获得纯度更高的薤白总呋甾皂苷也可以将薤白提取物用大孔吸附树脂吸附后用体积百分比浓度低于15％的有机溶剂的水溶液洗脱之前先用ph值为9-13的碱水溶液洗脱，水洗至中性，然后用体积百分比浓度低于15％的有机溶剂的水溶液洗脱，再然后用体积百分比浓度大于15％至小于40％的有机溶剂的水溶液洗脱获得纯度更高的主要由呋甾皂苷组成的薤白总呋甾皂苷，最后用体积百分比浓度大于40％的有机溶剂的水溶液洗脱获得主要由螺甾皂苷组成的薤白总螺甾皂苷。
在这里所述的碱可以利用碱金属或碱土金属的氢氧化物，最好是氢氧化钠或氢氧化钾或氢氧化钙,碱水溶液的ph值为9-13。上述制备方法获得的薤白分组皂苷可以用于制备药物组合物、保健食品以及制备单体皂苷。
本发明的有益效果在于用大孔吸附树脂和乙醇将呋甾皂苷和螺甾皂苷进行分离，具有方法简单，操作容易，分离效果好，溶剂循环使用，不造成环境污染等优点。
具体实施方式
实施例1
取干燥薤白3kg粉碎，用10倍水煎煮提取3次，煎煮时间分别为3h、2h、1h，合并提取液，过滤，浓缩，过d101大孔吸附树脂柱吸附，用35％的乙醇溶液将呋甾皂苷洗脱完全，再用85％乙醇溶液将螺甾皂苷洗脱完全，减压回收溶剂，干燥，获得薤白总呋甾皂苷24.2克，薤白总螺甾皂苷27.0克。生物活性研究结果表明，上述薤白总呋甾皂苷和薤白总螺甾皂苷均具有抗血小板聚集活性，且薤白总呋甾皂苷的活性比薤白总螺甾皂苷强。
实施例2
取干燥薤白地上部分3kg粉碎，用10倍水煎煮提取3次，煎煮时间分别为3h、2h、1h，合并提取液，过滤，浓缩，过d101大孔吸附树脂柱吸附，用35％的乙醇溶液将呋甾皂苷洗脱完全，再用85％乙醇溶液将螺甾皂苷洗脱完全，减压回收溶剂，干燥，获得薤白总呋甾皂苷22.3克，薤白总螺甾皂苷24.5克。
实施例3
取干燥薤白全草3kg粉碎，用10倍水煎煮提取3次，煎煮时间分别为3h、2h、1h合并提取液，过滤，浓缩，过ab-8大孔吸附树脂柱吸附，用去离子水洗至无色，用35％的乙醇溶液将呋甾皂苷洗脱完全，再用85％乙醇溶液将螺甾皂苷洗脱完全，减压回收溶剂，干燥，获得薤白总呋甾皂苷23.2克，薤白总螺甾皂苷26.6克。
实施例4
取新鲜薤白地上部分10kg匀浆，用10倍水煎煮提取3次，煎煮时间分别为3h、2h、1h，合并提取液，过滤，浓缩，回收乙醇，用水稀释后过ab-8大孔吸附树脂柱吸附，用35％的乙醇溶液将呋甾皂苷洗脱完全，再用85％乙醇溶液将螺甾皂苷洗脱完全，减压回收溶剂，干燥，获得薤白总呋甾皂苷24.2克，薤白总螺甾皂苷27.0克。
实施例5
取新鲜薤白12kg捣碎，用10倍85％乙醇回流提取3次，提取时间分别为3h、2h、1h，合并提取液，过滤，回收乙醇，用水稀释后过d101大孔吸附树脂柱吸附，用35％的乙醇溶液将呋甾皂苷洗脱完全，再用85％乙醇溶液将螺甾皂苷洗脱完全，减压回收溶剂，干燥，获得薤白总呋甾皂苷30.2克，薤白总螺甾皂苷34.0克。
实施例6
取干燥薤白3kg粉碎，用10倍水煎煮提取3次，煎煮时间分别为3h、2h、1h，合并提取液，过滤，浓缩，过d101大孔吸附树脂柱吸附，先用6倍柱体积的10％的甲醇溶液洗脱，弃去，接着用30％的甲醇溶液将呋甾皂苷洗脱完全，再用85％甲醇溶液将螺甾皂苷洗脱完全，减压回收溶剂，干燥，获得更高纯度的薤白总呋甾皂苷21.3克，薤白总螺甾皂苷22.6克。
实施例7
取干燥薤白3kg粉碎，用10倍水煎煮提取3次，煎煮时间分别为3h、2h、1h，合并提取液，过滤，浓缩，过d102大孔吸附树脂柱吸附，先用ph值为10的氢氧化钠水溶液洗脱至无色，弃去；用水洗至中性，再用6倍柱体积的10％的乙醇溶液洗脱，弃去；接着用30％的乙醇溶液将呋甾皂苷洗脱完全，再用80％乙醇溶液将螺甾皂苷洗脱完全，减压回收溶剂，干燥，获得更高纯度的薤白总呋甾皂苷19.8克，薤白总螺甾皂苷21.4克。
实施例8
取干燥薤白地上部分3kg粉碎，用10倍水煎煮提取3次，煎煮时间分别为3h、2h、1h，合并提取液，过滤，浓缩，过hp20大孔吸附树脂柱吸附，用ph值为13的氢氧化钠水洗至无色，再水洗至中性，用6倍柱体积的12％的丙酮溶液洗脱，弃去；接着用35％的丙酮溶液将呋甾皂苷洗脱完全，再用75％丙酮溶液将螺甾皂苷洗脱完全，减压回收溶剂，干燥，获得薤白总呋甾皂苷24.3克，薤白总螺甾皂苷26.8克。