脆弱拟杆菌在制备防治鼻炎的药物或食品中的应用的制作方法

本发明涉及脆弱拟杆菌的应用技术领域，特别是涉及一种脆弱拟杆菌或其提取物在制备防治鼻炎的药物或食品中的应用。

背景技术：

鼻炎(rhinitis)是发生在鼻腔黏膜的炎性疾病。鼻炎又可分为变应性鼻炎(过敏性鼻炎，allergicrhinitis,ar)和非变应性鼻炎(非过敏性鼻炎，non-allergicrhinitis,nar)。

变应性鼻炎(allergicrhinitis,ar)是鼻炎中最常见的类型。近十年来ar患病率明显增加，大约影响到全球10％～25％的人群，尤其在工业发达的国家其患病率更高。目前美国ar患病率为5％～22％，大约有超过5千万人被诊断为ar，每年治疗费用高达55～77亿美元。一项在亚洲11个国家进行的调查显示，调查人群中成人ar患病率达到10％～30％，儿童为10％～46％。我国ar的患病率近年来也有显著增加，可能与经济发展、工业化进程加速、生活方式改变有关。尽管ar不会危及生命，但会影响生活质量，造成个人及社会的经济负担，儿童会因此影响学习成绩，严重者出现阻塞性睡眠呼吸障碍，甚至影响到颌面部发育。

遗传和环境因素被认为是ar的病因学因素。特应性体质的人群若反复接触环境中致敏的变应原后可发生变应性疾病。近年提出“卫生假说”，如果婴儿早期暴露于多种微生物及其他环境，可促使机体ⅰ型免疫反应成熟，减少后期特应性和哮喘发生。

传统上ar分为季节性与常年性变应性鼻炎。前者与花粉有关，包括风媒授粉的牧草、树、杂草及真菌芽孢，后者则常由尘螨、动物皮屑等引起。ar是由ige介导的ⅰ型超敏反应，常表现家族易感性。目前已证实机体产生ige的水平与hlaⅱ类等位基因型关联。多种细胞因子、化学增活素、细胞黏附分子、炎症介质等参与了ar的发病过程。rantes是与变应性疾病有关的、研究最广泛的一个趋化性细胞因子。有研究发现，rantes启动子区(-403g/a和-28c/g)有2个多态现象，ar患者rantes-403a和-28g等位基因出现频率明显高于正常人群，提示其可用于基因组分析及预测ar的发生。制瘤素m(oncostatinm,osm)是il-6家族的一个多功能细胞因子，此前已证实它与哮喘气道重建有重要关联，最近的一项研究表明：osm在ar患者鼻粘膜上的表达上调，提示它在ar炎症反应损伤修复中起一定作用。

ar治疗一般包括避免接触变应原、药物治疗、免疫疗法及手术疗法等。ar伴发慢性鼻塞、下鼻甲腺样增生、肥大时可考虑手术。第一代抗组胺药有中枢抑制作用，临床已不推荐使用。新一代抗组胺药如地氯雷他啶、左西替利嗪、非索非那定作用更持久，不良反应少。而抗ige(单克隆抗体、白三烯受体拮抗剂(leukotrienereceptorantagonists,ltras)、改良的免疫疗法(包括变应原免疫刺激序列)、脂质体胶囊、dna疫苗、抗-il-4抗体、抗-il-5抗体、抗-vla-4抗体，抗-ccr抗体是目前临床应用研究较多的治疗方法。

非变应性鼻炎(non-allergicrhinitis，nar)是一组鼻部炎症性疾病的总称，由于病人的临床症状的多变及非特异性，因此很难给出确切定义。由于缺乏具体的诊断和排除标准，nar的分类也五花八门。一般而言，除ar外的各类型鼻炎均可纳入nar范畴，主要分为特发性鼻炎，非变应性鼻炎伴嗜酸性粒细胞增多综合征，药物性鼻炎，激素性鼻炎，味觉性鼻炎及职业性鼻炎等等。

在治疗nar中，病人可以控制或改变生活环境，避免接触一些刺激性的因素，如香水，香烟，烟雾，清洁用品，以及某些食物等，职业暴露可以通过戴上口罩和保护措施消除。但有些环境因素是无法改变的，如暴露的触发物质往往无法避免接触，因此相关的药物治疗必不可少，药物治疗可用于nar的症状控制，如鼻内糖皮质激素(topicalnasalsteroids)；抗组胺药物(antihistamines)，如氮卓斯汀；抗胆碱能药物(anticholinergicnasalspray)，如溴化异丙托品；鼻腔冲洗(nasalsaline)。对于鼻中隔偏曲、鼻甲肥厚、鼻窦息肉和其他形式的局部解剖障碍导致的慢性鼻炎，可采用外科手术进行治疗。

近十年来鼻炎患病率明显增加，严重影响患者的生活质量，研究新型的能够治疗鼻炎的有效药物具有重要意义。

脆弱拟杆菌(bacteroidesfragilis)是革兰氏阴性厌氧细菌中拟杆菌属的成员，属于拟杆菌门，完全不同于厚壁菌门的双歧杆菌、乳酸菌等。拟杆菌属有25个菌种，仅来自人类的有10个菌种，仅来自动物的有10个菌种，来自人和动物的有5个菌种。脆弱拟杆菌是一种专性厌氧细菌，依培养基的不同和生长阶段的不同，菌体形态呈现多形性，一般条件下菌体为杆状、两端钝圆、着色深，中间色浅且不均匀，有荚膜、无芽胞、无动力，有些有空泡，菌体长短不一。依据能否合成、分泌脆弱拟杆菌肠毒素(bft)可将其分为产肠毒素型脆弱拟杆菌(enterotoxigenicbacteroidesfragilis，etbf)和非产肠毒素型脆弱拟杆菌(nontoxigenicbacteroidesfragilis，ntbf)。脆弱拟杆菌作为人及动物肠道正常菌群的一部分，主要存在于结肠中。此外，呼吸道、胃肠道及泌尿生殖道粘膜也可定植生长。脆弱拟杆菌作为一种条件致病菌，当宿主粘膜受损时，可侵犯粘膜下层，引起感染，也可经血液流动，引起身体其它器官，如肠道、腹腔、肝、肺、脑组织、软组织、骨髓等的化脓性感染并伴发脓肿。

技术实现要素：

基于此，本发明提供了一种脆弱拟杆菌(bacteroidesfragilis)及其提取物的新应用。具体技术方案如下：

脆弱拟杆菌在制备防治鼻炎的药物或食品中的应用。

脆弱拟杆菌提取物在制备防治鼻炎的药物或食品中的应用，所述脆弱拟杆菌提取物中含有脆弱拟杆菌荚膜多糖a。

在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌荚膜多糖a的分子量为5～75kd。

在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌荚膜多糖a的分子量为15kd～65kd；

在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌荚膜多糖a的分子量为25kd～55kd。

在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌荚膜多糖a的分子量为35kd～45kd。

在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌提取物中脆弱拟杆菌荚膜多糖a的含量为60-75wt％。

在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌为保藏编号为cgmccno.10685的脆弱拟杆菌zy-312。

在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌提取物的制备方法包括以下步骤：

(1)将发酵培养后的脆弱拟杆菌菌液离心沉淀，收集第一沉淀物，取所述第一沉淀物加入65-72℃的水，溶解后再加入苯酚溶液，保持65-72℃搅拌25-35min，离心，收集第一上清液；

(2)将步骤(1)中收集的第一上清液用乙醚萃取去除苯酚，再去除残留的乙醚，收集水相溶液；

(3)在步骤(2)中收集到的水相溶液中加入无水乙醇至乙醇的终浓度为75-85v/v％，醇沉，离心，收集第二沉淀物；

(4)取所述第二沉淀物，加水配制成混悬液，再调节ph为6.5-7.5，离心，收集第二上清液，透析除盐，冷冻干燥，即得所述脆弱拟杆菌提取物。

在其中一些实施例中，步骤(1)中在所述第一沉淀物中加入的水、所述苯酚溶液以及所述第一沉淀物的配比为3-5ml：3-5ml：1g；所述苯酚溶液的质量浓度为70-80％。

在其中一些实施例中，步骤(3)所述醇沉为在0-8℃的温度下醇沉8-16小时。

在其中一些实施例中，步骤(4)包括：取所述第二沉淀物，加水配制成质量浓度为8-12％的混悬液，再加入质量浓度为8-12％的冰乙酸水溶液，加热至沸，搅拌反应1.5-2.5小时，调节ph为6.5-7.5，离心，收集第二上清液，透析除盐，冷冻干燥，即得所述脆弱拟杆菌提取物。

在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌提取物的制备方法还包括降解的步骤：将步骤(4)中得到的脆弱拟杆菌提取物通过超声的方法进行降解，所述超声的条件为：180-210khz，15-25℃。

在其中一些实施例中，所述药物的剂型包括丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊、口服液或管饲制剂。所述药物包括人用药或动物用药，可用于人或动物。

所述的脆弱拟杆菌或其提取物可以单独进行预防性或治疗性给药，也可以与其它益生菌和/或益生材料一起给药。组合给药时，可以以单一制剂或分开的制剂，同时或不同时，使用相同或不同的给药途径进行给药。

所述食品包括奶粉、干酪、凝乳、酸奶酪、冰激凌或发酵谷类食品。所述食品还可以是动物食品，比如饲料等。所述食品还可以为婴儿食品或宠物食品。

本发明还提供了一种防治鼻炎的药物或食品。具体技术方案如下：

一种防治炎鼻炎的脆弱拟杆菌提取物或者药物或者食品，所述药物或食品中含有脆弱拟杆菌提取物，所述脆弱拟杆菌提取物中含有脆弱拟杆菌荚膜多糖a。

在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌荚膜多糖a的分子量为5～75kd。

在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌荚膜多糖a的分子量为15kd～65kd；

在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌荚膜多糖a的分子量为25kd～55kd。

在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌荚膜多糖a的分子量为35kd～45kd。

在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌提取物中脆弱拟杆菌荚膜多糖a的含量为60-75wt％。

在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌为保藏编号为cgmccno.10685的脆弱拟杆菌zy-312。

在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌提取物的制备方法包括以下步骤：

(1)将发酵培养后的脆弱拟杆菌菌液离心沉淀，收集第一沉淀物，取所述第一沉淀物加入65-72℃的水，溶解后再加入苯酚溶液，保持65-72℃搅拌25-35min，离心，收集第一上清液；

(2)将步骤(1)中收集的第一上清液用乙醚萃取去除苯酚，再去除残留的乙醚，收集水相溶液；

(3)在步骤(2)中收集到的水相溶液中加入无水乙醇至乙醇的终浓度为75-85v/v％，醇沉，离心，收集第二沉淀物；

(4)取所述第二沉淀物，加水配制成混悬液，再调节ph为6.5-7.5，离心，收集第二上清液，透析除盐，冷冻干燥，即得所述脆弱拟杆菌提取物。

在其中一些实施例中，步骤(1)中在所述第一沉淀物中加入的水、所述苯酚溶液以及所述第一沉淀物的配比为3-5ml：3-5ml：1g；所述苯酚溶液的质量浓度为70-80％。

在其中一些实施例中，步骤(3)所述醇沉为在0-8℃的温度下醇沉8-16小时。

在其中一些实施例中，步骤(4)包括：取所述第二沉淀物，加水配制成质量浓度为8-12％的混悬液，再加入质量浓度为8-12％的冰乙酸水溶液，加热至沸，搅拌反应1.5-2.5小时，调节ph为6.5-7.5，离心，收集第二上清液，透析除盐，冷冻干燥，即得所述脆弱拟杆菌提取物。

在其中一些实施例中，所述脆弱拟杆菌提取物的制备方法还包括降解的步骤：将步骤(4)中得到的脆弱拟杆菌提取物通过超声的方法进行降解，所述超声的条件为：180-210khz，15-25℃。

在其中一些实施例中，所述药物的剂型包括丸剂、片剂、颗粒剂、胶囊、口服液或管饲制剂。所述药物包括人用药或动物用药，可用于人或动物。

所述药物中可包含以下药物可接受的辅料中的一种或多种：稀释剂、赋形剂、粘合剂、润滑剂、助悬剂、包衣剂和增溶剂等。药物可接受的辅料的实例包括：水、盐溶液、醇、硅酮、蜡、凡士林、植物油、聚乙二醇、丙二醇、脂质体、糖类、明胶、乳糖、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石粉、表面活性剂、硅酸、粘性石蜡、芳香油、单脂肪酸甘油酯和二脂肪酸甘油酯、石化(petroethral)脂肪酸酯、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。

所述药物可以通过以下任何一种或多种方式给药：以微型泵或鼻腔喷雾剂或吸入型气雾剂等进行吸入给药，以栓剂或阴道栓剂的形式给药，以洗剂、溶液剂、乳膏剂、软膏剂或喷粉的形式局部给药，通过使用皮肤贴剂给药，以含有诸如淀粉或乳糖的赋形剂的片剂的形式或者以单独或与赋形剂混合在胶囊或卵状小体中的形式口服给药，或以含有调味剂或着色剂的酏剂、溶液剂或混悬剂形式给药，或者以肠胃外注射，例如海绵体内、静脉内、肌内或皮下注射给药。肠胃外注射给药时，所述药物最好以无菌水溶液形式使用，其可以含有其它物质，例如足够的盐或单糖以使得该溶液与血液等渗。含服或舌下给药时，所述药物可以以常规方法配制的片剂或锭剂的形式给药。

所述食品包括奶粉、干酪、凝乳、酸奶酪、冰激凌或发酵谷类食品。所述食品还可以是动物食品，比如饲料等。所述食品还可以为婴儿食品或宠物食品。

本发明的脆弱拟杆菌zy-312，已于2015年4月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，其保藏编号为cgmccno.10685，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明的发明人经过长期经验积累以及大量创造性实验研究，发掘了脆弱拟杆菌新的用途，开拓了一个新的应用领域。发明人发现脆弱拟杆菌具有预防/治疗鼻炎的功能。并且通过大量实验研究获得了脆弱拟杆菌提取物(主要成分为荚膜多糖a)的制备方法，通过进一步实验研究发现本发明的脆弱拟杆菌荚膜多糖a具有显著的防治鼻炎的功效。进一步地，发明人通过对分子量为70kd的脆弱拟杆菌荚膜多糖a进行降解，获得了分子量为5～70kd的脆弱拟杆菌荚膜多糖a，并且意外地发现分子量为5～70kd的荚膜多糖a具有更好的防治鼻炎的功能，其效果远好于从脆弱拟杆菌nctc9343中提取得到分子量为110kd的荚膜多糖a。本发明提供的脆弱拟杆菌或其提取物对鼻炎的防治效果好且对机体没有副作用，同时还可以与其他预防/治疗鼻炎的药物联合使用。本发明提供的脆弱拟杆菌提取物具有很好的食用和药用前景，为临床提供了一种适合人体服食的保健和防治鼻炎的良品。

附图说明

图1为实施例1的脆弱拟杆菌zy-312的菌落特征图；

图2为实施例1的脆弱拟杆菌zy-312进行革兰氏染色后的显微镜观察图。

图3为实施例1的荚膜多糖a核磁共振波谱仪分析的1h谱；

图4为实施例1的荚膜多糖a核磁共振波谱仪分析的13c谱；

图5为实施例1的荚膜多糖a核磁共振波谱仪分析的cosy谱；

图6为实施例1的荚膜多糖a核磁共振波谱仪分析的hsqc谱；

图7为实施例1的荚膜多糖a核磁共振波谱仪分析的hmbc谱图；

图8为实施例1制备得到的脆弱拟杆菌荚膜多糖a的化学结构式。

具体实施方式

下面通过具体实施例对本发明做进一步详细说明，这些实施例仅用来说明本发明，并不限制本发明的范围。

以下实施例中所用的脆弱拟杆菌为脆弱拟杆菌zy-312(bacteroidesfragiliszy-312)，于2015年4月2日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(cgmcc)，其保藏编号为cgmccno.10685，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

实施例1脆弱拟杆菌提取物的制备

(1)脆弱拟杆菌的发酵培养

将菌种划线接种于血平皿，厌氧培养48h。观察菌落形态特征、染色特性、大小、球杆状和分布情况等。

菌落特征：脆弱拟杆菌zy-312在血平皿上培养48h后，呈现圆形微凸、半透明、白色、表面光滑、不溶血，菌落直径在1-3mm之间，参见图1。

显微镜下形态：脆弱拟杆菌zy-312进行革兰氏染色镜检，为革兰阴性细菌，呈现典型的杆状，两端钝圆而浓染，菌体中间不着色部分形如空泡，参见图2。

选取单个菌落接种于胰蛋白胨肉汤中进行发酵培养8小时(温度为37℃)，所得菌液离心沉淀，转速3000r/min，离心15min，去上清，收集沉淀物。

(2)脆弱拟杆菌提取物的制备

1)取脆弱拟杆菌菌泥(上述步骤(1)获得的沉淀物)200g，加入68℃超纯水750ml，溶解后，再加入体积分数为75％苯酚溶液750ml，混合均匀，保持68℃搅拌萃取30min，15000g离心20min，取上层清液。

2)上层清液用等体积乙醚(1.5l)萃取去除苯酚，收集上层清液，重复萃取至无苯酚残留。水浴加热去除乙醚，收集水相。

3)水相15000g离心20min后测定体积，加入无水乙醇，至乙醇终浓度为80％(体积分数)，4℃醇沉过夜(12小时)，15000g离心20min，取沉淀。

4)称量步骤3)中的沉淀的质量，加入一定体积的去离子水将沉淀配制成质量浓度为10％的混悬液，搅拌混合均匀，加入质量浓度为10％的冰乙酸水溶液，加热至沸，持续搅拌反应2h后，调节ph至7.0，15000g离心20min，收集上清液。将所得上清液透析除盐(10kd透析袋)，冷冻干燥，得到脆弱拟杆菌提取物。

5)称量30mg步骤4)所述的脆弱拟杆菌提取物，溶于0.5mld2o，加入1μl丙酮(1h，2.22；13c，30.89)定标。采用500mhzbruker核磁共振波谱仪分析1h、13c、cosy、hsqc、hmbc谱(图3)，确证步骤4)收集的脆弱拟杆菌提取物为荚膜多糖a，纯度约为70％。通过gpc(凝胶渗透色谱)分析，结果显示上述荚膜多糖a的重复单元分子量为781，单元重复数目n值为89，分子量约为70kd，分子式为-[c31n3o20h47]91-，化学结构见图4。

(3)不同分子量大小荚膜多糖a的制备

本实施例通过对(2)中制备的荚膜多糖a进行降解，所述的降解方法包括但不限于化学降解法、物理降解法和生物降解法。本实施例采用超声的方法，所述超声方法为将荚膜多糖a于195khz，20℃的条件分别处理3小时、2小时、0.5小时和0小时，分别收集得到分子量大小为2kd、5kd、40kd、70kd的荚膜多糖a。使用(2)的方法从脆弱拟杆菌nctc9343(购自美国atcc)中提取得到分子量为110kd的荚膜多糖a。

实施例2脆弱拟杆菌荚膜多糖a对大鼠鼻炎模型的影响(口服)

一、实验方法

为了验证实施例1提供的脆弱拟杆菌提取物(主要成分为荚膜多糖a)对于预防/治疗鼻炎的效果，本实施例选用60只sd大鼠进行实验，雌雄各半，每只实验用大鼠均分配有一个唯一编号。在对动物进行分组之前，应在鼠笼的标签上标注项目编号、种属/品系、性别、笼号及动物号。使用biobook软件根据sd大鼠的初始体重进行随机分组，分为6组，即正常组(group1)，模型组(group2)，辛芩颗粒组(group3)，实施例1提供的脆弱拟杆菌荚膜多糖a低(group4)、中(group5)、高(group6)剂量组，每组sd大鼠10只。本实施例以分子量为40kd的脆弱拟杆菌荚膜多糖a为例。

sd大鼠鼻炎模型构建：基础致敏：ova和al(oh)3以1∶30的比例溶于生理盐水，使ova浓度为0.1％，作为致敏剂溶液。group2～6腹腔注射上述致敏剂溶液1ml，每日1次，连续10天。正常组以等量生理盐水溶液代替。

局部激发:间隔5日后，group2～6以含5％ova的生理盐水溶液滴鼻激发，每侧鼻孔滴加50μl，隔日1次，连续5次。正常组以等量生理盐水代替。

于局部激发第3次当日开始给药，group3为辛芩颗粒对照组、group4为脆弱拟杆菌荚膜多糖a低剂量组、group5为脆弱拟杆菌荚膜多糖a中剂量组，group6为脆弱拟杆菌荚膜多糖a高剂量组，正常组与模型组灌服同等容积的生理盐水。每日1次，连续7天。具体实验分组和给药方案见表1：

表1实验分组和给药方案

行为学观察：末次给药后30min内，记录sd大鼠鼻涕分泌量、喷嚏及搔鼻次数，采用叠加量化计分法进行计分。即鼻痒:无挠鼻为0分，轻度挠鼻为1分，频繁挠鼻为2分，挠鼻不止为3分；喷嚏:30min内无喷嚏为0分，打喷嚏1～3个为1分，4～10个为2分，＞11个为3分；鼻涕:无鼻涕为0分，流至前鼻孔为1分，超出前鼻孔为2分，涕流满面为3分。具体结果见表2。

各组在末次给药1h后，利用戊巴比妥钠(戊巴比妥钠(sigma公司，批号xs－20081118－00600)进行麻醉，肝门静脉采血，按照试剂盒(haelisa试剂盒，美国rapidbio公司，批号12280517；igeelisa试剂盒，天津千叶生物技术有限公司，批号000421)说明书指导，分别对给药1h后各实验组鼻炎sd大鼠血清中组胺(ha)和ige的含量测定。具体测定结果如表3。

二、结果与分析

口服脆弱拟杆菌荚膜多糖a对ar大鼠影响结果见表2、表3。

表2脆弱拟杆菌荚膜多糖a对ar大鼠行为学的影响

注:与模型组比较，**p＜0.01，*p＜0.05。

如表2所示，模型组大鼠出现大量清涕、频繁喷嚏、剧烈挠鼻等典型ar症状，说明造模成功。脆弱拟杆菌荚膜多糖a高、中剂量组症状积分明显低于模型组(p＜0.01)，与辛芩颗粒对照组相当；脆弱拟杆菌荚膜多糖a低剂量组症状积分低于模型组(p＜0.05)。说明本发明提供的脆弱拟杆菌荚膜多糖a可有效减轻变应性鼻炎的症状，对变应性鼻炎具有良好的预防/治疗效果。

表3脆弱拟杆菌荚膜多糖a对鼻炎sd大鼠血清中ha和ige含量的影响

注:与模型组比较，**p＜0.01，*p＜0.05。

从表3结果可以看出，模型组arsd大鼠血清中的ha和ige水平明显高于正常组(p＜0.01)；脆弱拟杆菌荚膜多糖a低剂量组ar大鼠血清中的ha和ige水平比模型组的低(p＜0.05)，具有统计学意义；而脆弱拟杆菌荚膜多糖a中、高剂量组(group5、group6)ar大鼠血清中的ha和ige水平均明显低于模型组(p＜0.01)，且差异显著，具有统计学意义。说明本发明提供的脆弱拟杆菌荚膜多糖a对变应性鼻炎具有良好的预防/治疗效果。

实施例3脆弱拟杆菌荚膜多糖a对大鼠鼻炎模型的影响(滴鼻)

一、实验方法

本实施例的给药途径采用滴鼻的形式，给予实施例1制备的含有分子量为70kd的脆弱拟杆菌荚膜多糖a的提取物。除给药途径和给予的脆弱拟杆菌荚膜多糖a的分子量不一样外，其他步骤与实施例2相同。本实施例的具体实验分组和给药方案见表4：

表4实验分组和给药方案

二、结果与分析

脆弱拟杆菌荚膜多糖a通过滴鼻途径给药对ar大鼠影响的具体观察结果见表5、表6：

表5脆弱拟杆菌荚膜多糖a对ar大鼠行为学的影响

注:与模型组比较，**p＜0.01，*p＜0.05。

如表5所示，模型组大鼠出现大量清涕、频繁喷嚏、剧烈挠鼻等典型ar症状，说明造模成功。经滴鼻给药之后，脆弱拟杆菌荚膜多糖a高、中剂量组症状积分明显低于模型组(p＜0.01)，与辛芩颗粒对照组相当；脆弱拟杆菌荚膜多糖a低剂量组的症状积分低于模型组(p＜0.05)。说明本发明提供的脆弱拟杆菌荚膜多糖a可用于滴鼻给药，能有效减轻鼻炎的症状，对鼻炎具有良好的预防/治疗效果。

表6脆弱拟杆菌荚膜多糖a对鼻炎sd大鼠血清中ha和ige含量的影响

注:与模型组比较，**p＜0.01，*p＜0.05。

从表6结果可以看出，模型组arsd大鼠血清中的ha和ige水平明显高于正常组(p＜0.01)；脆弱拟杆菌荚膜多糖a低剂量组ar大鼠血清中的ha和ige水平比模型组的低(p＜0.05)，具有统计学意义；而脆弱拟杆菌荚膜多糖a中、高剂量组(group5、group6)ar大鼠血清中的ha和ige水平均明显低于模型组(p＜0.01)，且差异显著，具有统计学意义。说明本发明提供的脆弱拟杆菌荚膜多糖a对变应性鼻炎具有良好的预防/治疗效果。

实施例4不同分子量的脆弱拟杆菌荚膜多糖a对大鼠鼻炎模型的影响(滴鼻)

一、实验方法

本实施例的给药途径采用滴鼻的形式，给予含有不同分子量(2kd、5kd、40kd、70kd和110kd)的脆弱拟杆菌荚膜多糖a的脆弱拟杆菌提取物，浓度均为0.5mg/ml。2kd、5kd、40kd、70kd和110kd的荚膜多糖a由实施例1制备所得。其他步骤与实施例2相同。本实施例的具体实验分组和给药方案见表7：

表7实验分组和给药方案

二、结果与分析

脆弱拟杆菌荚膜多糖a通过滴鼻途径给药对ar大鼠影响的具体观察结果见表8、表9：

表8脆弱拟杆菌荚膜多糖a对ar大鼠行为学的影响

注:与模型组比较，**p＜0.01，*p＜0.05。

如表8所示，模型组大鼠出现大量清涕、频繁喷嚏、剧烈挠鼻等典型ar症状，说明造模成功。经滴鼻给药之后，group4～6组大鼠ar症状积分明显低于模型组(group2)(p＜0.01)；group4～6组大鼠ar症状积分低于group3、group7组(p＜0.05)。

表9脆弱拟杆菌荚膜多糖a对鼻炎sd大鼠血清中ha和ige含量的影响

注:与模型组比较，**p＜0.01，*p＜0.05。

从表9结果可以看出，模型组arsd大鼠血清中的ha和ige水平明显高于正常组(p＜0.01)；group3～6组ar大鼠血清中的ha和ige水平比模型组的低(p＜0.05)，具有统计学意义；group4～6组ar大鼠血清中的ha和ige水平均明显低于group3、group7组，且差异显著(p＜0.05)，具有统计学意义。

本实施例的检测结果说明本发明提供的不同分子量的脆弱拟杆菌荚膜多糖a对变应性鼻炎具有良好的预防/治疗效果。本发明通过对脆弱拟杆菌荚膜多糖a进行降解，意想不到地发现降解后的脆弱拟杆菌荚膜多糖a(分子量为5kd-70kd)对鼻炎具有更好的预防/治疗效果(详见表8、表9group3～7的检测结果)。

实施例5不同脆弱拟杆菌菌株荚膜多糖a对鼻炎的疗效

本实施例使用实施例1记载的超声方法对分子量为110kd的荚膜多糖a进行降解(超声条件：195khz，25℃，0.5小时)，并收集分子量为70kd的荚膜多糖a，记为nctc9343-70kd组，并与从zy-312中提取得到的分子量为70kd的荚膜多糖a(记为zy-312-70kd组)进行对比，评价其对arsd大鼠模型的疗效。本实施例参考实施例4记载的方法，分别检测高浓度(0.5mg/ml)脆弱拟杆菌荚膜多糖a对ar大鼠行为学、血清中ha和ige含量的变化情况，具体结果如下：

表10不同脆弱拟杆菌菌株荚膜多糖a对鼻炎的疗效

从上述结果可以看出，nctc9343-70kd组和zy-312-70kd组的脆弱拟杆菌荚膜多糖a对ar大鼠行为学、血清中ha和ige含量的影响无差别，即将从nctc9343菌株中提取得到分子量为110kd的荚膜多糖a进行降解，可以实现与从zy-312菌株提取的荚膜多糖a对鼻炎相近的治疗效果。

由以上实验结果可见，本发明提供的脆弱拟杆菌荚膜多糖a可以通过口服、滴鼻等多种途径给药，均可以有效减轻鼻炎的症状，同时能有效抑制血清中ha和ige的释放。通过对脆弱拟杆菌荚膜多糖a进行降解，意想不到地发现5kd～70kd的脆弱拟杆菌荚膜多糖a对鼻炎具有更好的预防/治疗效果。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。