特异性识别丛蛋白-信号素-整合素结构域的抗RON单克隆抗体的药物呈递作用及其在肿瘤治疗中的应用的制作方法

文档序号:19940933发布日期:2020-02-14 23:09阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种筛选得到的单克隆抗体及抗体结合片段,特异性识别人ron的plexin-semaphorin-integrin(psi结构域),包含人源化的h5b14和小鼠pcm5b14的单克隆抗体。

2.权利要求1的单克隆抗体或其结合片段,其中所述单克隆抗体或其结合片段包含插入人或人源化抗体框架序列之间的互补决定区(cdr)序列,其中所述的免疫球蛋白重链可变区包含cdrh1,cdrh2和cdrh3,分别来自seqidno:7,8和9的单克隆抗体序列;以及其中所述的免疫球蛋白轻链可变区包含cdrl1,cdrl2和cdrl3,分别来自seqidno:10,11和12的单克隆抗体序列。

3.权利要求1的抗体或其结合片段,其中所述的单克隆抗体或其结合片段与细胞毒性药物结合,使得抗体靶向结合到细胞表面的ron蛋白,并且使抗ron单克隆抗体和细胞毒性药物一起被内吞到细胞内部。

4.权利要求1的抗体或其结合片段,其中所述抗体或其结合片段与细胞毒性蛋白融合形成的融合蛋白。

5.权利要求1的抗体或其结合片段,还包含与抗体或其结合片段偶联的细胞毒性药物或化学治疗药物。

6.权利要求1的抗体或其结合片段,还包含如前seqidno:15和16所示的抗原结合结构域。

7.一种在宿主细胞中制备能特异性结合人ron的psi结构域的单克隆抗体或其结合片段的方法。该方法包括:表达在一定条件下特异性结合人ron的psi结构域的免疫球蛋白重链可变区或免疫球蛋白轻链可变区或两者都有,在宿主细胞表达包含免疫球蛋白重链可变区或免疫球蛋白轻链可变区或两者都有的多肽序列,从而生产源自h5b14或pcm5b14杂交瘤细胞的抗体或其结合片段,以及纯化上述的抗体或其结合片段。

8.权利要求7的方法,其中宿主细胞是h5b14或pcm5b14杂交瘤细胞。

9.权利要求7的方法,还包括将细胞毒性或化学治疗药物与抗体或其结合片段偶联,或与细胞毒性蛋白质融合制备融合蛋白的步骤。

10.权利要求7的方法,其中宿主细胞选自细菌,酵母,昆虫,植物或哺乳动物细胞。

11.权利要求7的方法,其中所述癌症来自以下组织:脑,乳腺,宫颈,胰腺,皮肤,前列腺,肝脏,膀胱,结肠,头颈,肾,肺,非小细胞肺,黑素瘤,间皮瘤,卵巢,肉瘤,胃,子宫和髓母细胞瘤等。

12.权利要求7的方法,其中人源化抗体的核酸序列包含seqidno:13和14。

13.一种分离的多肽或其结合片段,其特异性结合人ron的psi结构域,其中包含免疫球蛋白重链可变区和/或免疫球蛋白轻链可变区,与来自h5b14或pcm5b14的单克隆抗体的重链和轻链的互补决定区(cdrs)氨基酸序列至少具有95,96,97,98,99或100%同源性。

14.权利要求13的抗体,其中免疫球蛋白重链可变区包含cdrh1,cdrh2和cdrh3,分别来自seqidno:7,8和9的单克隆抗体序列,免疫球蛋白轻链可变区包含cdrl1,cdrl2和cdrl3,分别来自seqidno:10,11和12的单克隆抗体序列。

15.权利要求13的抗体,其中所述的cdrs序列之间插入人或人源化框架序列。

16.权利要求13的抗体,其中所述抗体具有seqidno:15和16序列特征。

17.一种抑制或减少癌细胞增殖的方法,包括将细胞暴露于单克隆抗体或其结合片段中,来自h5b14或pcm5b14的单克隆抗体药物偶联物特异性结合癌细胞ron的psi结构域,以有效抑制或减少癌细胞增殖。

18.权利要求17所述的方法,其中所述癌细胞可源自人或哺乳动物。

19.一种分离纯化的单克隆抗体或其结合片段如上述能结合人ron的psi结构域,其中包含与h5b14或pcm5b14的单克隆抗体具有至少95%同源性的免疫球蛋白重链可变区和/或免疫球蛋白轻链可变区。

20.权利要求19的抗体,其中免疫球蛋白重链可变区包括:

cdrh1,其包含seqidno:7的氨基酸序列。

cdrh2,其包含seqidno:8的氨基酸序列。

cdrh3,其包含seqidno:9的氨基酸序列。

21.权利要求19的抗体,其中免疫球蛋白重链可变区包括:

cdrl1,其包含seqidno:10的氨基酸序列。

cdrl2,其包含seqidno:11的氨基酸序列。

cdrl3,其包含seqidno:12的氨基酸序列。

22.权利要求19的抗体,其中所述的cdr序列之间插入人和人源化框架序列。

23.权利要求19的抗体,其中所述的cdr序列之间插入人和人源化框架序列,进一步包括插入的人类生殖系框架序列。

24.权利要求19的抗体,其中所述抗体由选自seqidno:7,8,9的重链cdr和选自seqidno:10,11,12的轻链cdr配对而成。

25.权利要求19的抗体,其中所述抗体由分别编码免疫球蛋白重链cdrh1,cdrh2,cdrh3的选自seqidno:1,2,3的核酸序列表达。

26.权利要求19的抗体,其中所述抗体由分别编码免疫球蛋白轻链cdrl1,cdrl2,cdrl3的选自seqidno:4,5,6的核酸序列表达。

27.权利要求19的抗体,其中所述的cdr序列之间插入人和人源化框架序列,其中所述的框架序列包含在氨基酸位置27,30,48,67或78中至少一处的替换,其中氨基酸编号是依照kabat编号方式。

28.权利要求19的抗体,其中所述抗体具有seqidno:15和16序列。

29.一种分离的核酸能表达特异性结合人ron的psi结构域的抗体,其中包含与h5b14或pcm5b14的单克隆抗体具有至少95%同源性的免疫球蛋白重链可变区和/或免疫球蛋白轻链可变区。

30.权利要求29分离的核酸,其中编码免疫球蛋白重链可变区序列包含:

cdrh1,其包含seqidno:1的核酸序列。

cdrh2,其包含seqidno:2的核酸序列。

cdrh3,其包含seqidno:3的核酸序列。

31.权利要求19分离的核酸,其中编码免疫球蛋白轻链可变区序列包括:

cdrl1,其包含seqidno:4的核酸序列。

cdrl2,其包含seqidno:5的核酸序列。

cdrl3,其包含seqidno:6的核酸序列。

32.权利要求29分离的核酸,其中免疫球蛋白重链可变区和/或免疫球蛋白轻链可变区进一步包含能编码细胞毒性蛋白核酸与免疫球蛋白重链可变区和/或免疫球蛋白轻链可变区或者两者融合表达形成融合蛋白。

33.权利要求29分离的核酸,其中人源化抗体的核酸序列具有seqidno:13和14。

34.一种表达载体包含权利要求29的核酸。

35.一种宿主细胞包含权利要求34的表达载体。

36.一种用于生产包含免疫球蛋白重链可变区或免疫球蛋白轻链可变区的多肽的方法,所述方法包括:(a)在一定条件下培养权利要求35的宿主细胞,使得宿主细胞表达包含免疫球蛋白重链可变区或免疫球蛋白轻链可变区的多肽,(b)纯化包含免疫球蛋白重链可变区或免疫球蛋白轻链可变区的多肽。

37.一种用于生产能结合人ron的psi结构域的抗体或抗体结合片段的方法,所述方法包括:(a)在一定条件下培养权利要求35的宿主细胞,使得宿主细胞表达包含免疫球蛋白重链可变区或免疫球蛋白轻链可变区的多肽,进一步生产抗体或抗体结合片段,(b)纯化抗体或抗体结合片段。

当前第2页1 2 3 
网友询问留言 已有0条留言
  • 还没有人留言评论。精彩留言会获得点赞!
1