本发明属于医药领域，具体涉及一种青钱柳和核桃叶提取物组合。
技术背景
糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢病，分为i型糖尿病和ii型糖尿病，其中90％以上为ii型糖尿病。随着我国社会的进步、经济的发展、人们工作生活方式的改变，我糖尿病的发病率逐年提高，目前全国有糖尿病患者9000多万，还有超过1.4亿的糖尿病前期患者，严重影响患者的生活质量，同时糖尿病还会引发心脏、肾、神经等多器官组织的并发症，危及患者生命。ii型糖尿病的治疗困难较大，往往需要长期用药，目前西药和中药两种治疗手段，西药治疗虽然起效快，但副作用大，效果不理想。中药虽然起效慢，但由于是多种成分的组合，往往几种成分的作用机制不同，存在协同增效作用，从宏观、系统的层面上治疗，往往能取得良好的治疗效果。
青钱柳有较好的降血糖作用，其所含的黄酮、多糖和三萜对降糖有重要贡献，但对青钱柳的开发仍处于低层次的农产品阶段，主要是各种青钱柳茶。然而青钱柳单味药的降血糖作用和治疗ii型糖尿病的效果有限，只适合于预防和辅助治疗。
核桃有疏通经络、补血养气、润燥化痰、健脑明目等功效，是人们常食的坚果。常见的核桃属于胡桃科胡桃属或山核桃属，这些植物全身都是宝，除果仁可食用外，其叶、枝、皮、青皮、壳、花均可人药，具有重要的经济和药用价值。目前对这些植物的化学成分和活性成分的研究多集中在果实、青皮和枝皮上而对叶的化学成分和活性成分报道较少见。《核桃属植物叶的化学成分及生物活性研究进展》(西北林学院学报，2010，25(4):165～169)中公开了核桃叶中含有脂肪醇、醌类、多种萜类、长链的烷烃类化合物、脂肪酸类化合、黄酮类、酚类(包括有机酚酸)、鞣质类物质以及挥发油等成分。这些成分具有抗肿瘤、抗氧化清除氧自由基作用、止痛、消炎活性，此外对农作物还具有抑制生长繁殖、杀虫、抗植物病毒的作用。
技术实现要素：
本发明针对单味青钱柳产品单一、治疗效果不够理想等方面的不足，基于药物之间的相互作用与协同增效原理，将青钱柳提取物与同样具有降糖作用的核桃叶提取物进行复配，获得了具有协同降糖作用的组合物，对更好的利用青钱柳和核桃叶资源，开发新型治疗ii型糖尿病的产品具有重要的意义。
本发明的技术方案如下：
一种青钱柳和核桃叶提取物组合，所述青钱柳提取物和核桃叶提取物的质量比为4-0.25:1，所述青钱柳提取物和核桃叶提取物分别为青钱柳干叶和核桃干叶的溶剂热提物。
上述青钱柳干叶和核桃干叶的溶剂热提物为青钱柳干叶和核桃干叶分别在溶剂存在下加热浸提，过滤，合并滤液，减压蒸馏，干燥，获得的青钱柳提取物浸膏和核桃叶提取物浸膏。
优选的，上述提取物组合中青钱柳提取物和核桃叶提取物的质量比为4-0.25:1，更优选为1.3:1。
优选的，所述溶剂选自水、乙醇、乙酸乙酯、丙酮中的一种或几种，更优选为乙醇-水的混合溶剂，进一步的，所述青钱柳提取物采用乙醇浓度为50％的乙醇-水的混合溶剂，所述核桃叶提取物采用乙醇浓度为70％的乙醇-水的混合溶剂。
优选的，上述提取物的制备过程中，青钱柳干叶或核桃干叶与溶剂的质量体积之比为1：10-40，更优选的，青钱柳干叶与溶剂的质量体积之比为1:25，所述核桃干叶与溶剂的质量体积之比1:25(g/ml)。
优选的，上述提取物的制备过程中，青钱柳干叶和核桃干叶分别在溶剂中40-90℃浸提2-30h。
本发明另一目的在于提供本发明所述的青钱柳和核桃叶提取物组合在制备降血糖药物中的应用。
本发明另一目的在于提供一种药物组合物，含有本发明所述的青钱柳和核桃叶提取物组合。
一个具体的操作为：青钱柳干叶或核桃干叶在46℃下干燥2-5h，粉碎，过20目筛，每克青钱柳或核桃叶粉加溶剂10-40ml，在搅拌下升温至40-90℃，并在该温度下搅拌2-30h，过滤，滤渣继续提取2次，合并滤液，减压蒸去溶剂，真空干燥，得褐色半固态的青钱柳提取物浸膏(ⅰ)或核桃叶提取物浸膏(ⅱ)。
将上述青钱柳提取物浸膏(ⅰ)、核桃叶提取物浸膏(ⅱ)溶于一定量的蒸馏水中，以糖尿病模型小鼠为实验动物，以上述提取物喂养小鼠2周，以等量蒸馏水喂养的小鼠作为对照组，测定对照组和药物组小鼠的血糖值。优选的，青钱柳提取物浸膏(ⅰ)和核桃叶提取物浸膏(ⅱ)的质量之比为4-0.25:1，更优的配比为1.3:1，剂量可低至110mg·kg-1·d-1，降糖率可以达到99％，增效系数可以达到7.538。
本发明优点：
本发明分别以青钱柳和核桃叶为原料，通过溶剂提取，得到青钱柳和核桃叶提取物组合，发现该组合具有显著降糖增效作用，青钱柳提取物和核桃叶提取物的质量之比为1.3:1时，提取物组合的增效系数接近8，剂量在低至110mg·kg-1·d-1的情况下，降糖率仍可达到99％，相比茶饮产品，降糖活性和治疗效果大大提高，剂量大大降低，具有准确的剂量和良好的预后效果，同时，大大降低原料的消耗，降低了生产成本。
具体实施方式
以下通过实施例说明本发明的具体步骤，但不受实施例限制。
在本发明中使用的术语，除非另有说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体实施例并参照数据进一步详细描述本发明，应理解，这些实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
在以下实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法。
本发明以青钱柳、核桃叶降糖成分的提取和活性评价为例进一步详细说明本发明，但应注意本发明的范围并不受这些实施例的任何限制。
实施例1:青钱柳提取物的制备
将100克青钱柳干叶在46℃下干燥3h，粉碎，过20目筛，按照下表的条件分别选取不同的溶剂，以及料液比、提取温度和提取时间，在搅拌下提取，过滤，滤渣用上法再提取2次，合并滤液，减压蒸去溶剂，真空干燥，得褐色半固态的青钱柳提取物浸膏(ⅰ)，计算提取率，研究结果见表1，提取率按下式计算：
表1不同提取条件下青钱柳提取物的提取率。
注：料液比为质量体积比，*表示乙醇浓度，相应的料液比为1:25。
从表中可以看出：乙醇-水混合溶剂对提取有利，具有较高的提取率，当乙醇浓度为60％，料液质量体积比为1:25，提取温度为60℃时，提取时间为6h，提取率可以达到8.6％；乙酸乙酯等溶剂对提取不利。在上述研究的基础上，继续以乙醇-水为溶剂，对上述较优条件的一定范围内的条件，包括料液比做了进一步优化，得到如下最佳提取条件：
将100克青钱柳干叶在46℃下干燥3h，粉碎，过20目筛，以50％的乙醇水溶液为提取剂，每克青钱柳叶粉加溶剂25ml，在搅拌下升温至70℃，继续提取6h，过滤，滤渣用上法再提取2次，合并滤液，减压蒸去溶剂，真空干燥，得褐色半固态的青钱柳提取物浸膏(ⅰ)10.6克，提取率为10.6％。
实施例2核桃叶提取物的制备
参考实施例1的方法，对核桃叶提取物的提取条件进行了探索，获得了最佳的提取条件如下：
乙醇-水混合溶剂是最佳提取溶剂，乙醇浓度为70％，料液质量体积比为1:25，提取温度为65℃时，提取时间为7h，得褐色半固态的核桃叶提取物浸膏(ⅱ)，提取率为10.9％。
实施例3青钱柳和核桃叶混合叶提取物的制备
青钱柳或核桃干叶在46℃下干燥2-5h，将干燥后的青钱柳或核桃干叶按质量比为3:1进行混合，粉碎，过20目筛，每克青钱柳和核桃叶干粉加乙醇-水混合溶剂30ml，在搅拌下升温至70℃，并在该温度下搅拌6h，过滤，滤渣继续提取2次，合并滤液，减压蒸去溶剂，真空干燥，得褐色半固态青钱柳和核桃叶组合物浸膏(ⅲ)，提取率为10.3％。
实施例3：提取物降糖活性测定
以昆明种小鼠为实验动物，用注射四氧嘧啶溶液造小鼠，将糖尿病小鼠随机分为糖尿病模型对照组、给药组，给药组分高、中、低三个剂量组，每组大约12只，另取同批次的12只未造模小鼠作为正常对照组，给药组分为青钱柳提取物(ⅰ)，核桃叶提取物(ⅱ)和青钱柳和核桃叶混合叶提取物(ⅲ)以及青钱柳-核桃叶提取物(ⅰ+ⅱ)。高、中和低剂量组分别按提取物500、350、200mg·kg-1·d-1的剂量给药，用时配成等体积不同浓度水溶液(每10g小鼠灌胃0.1ml)，每天上午空腹给药1次，连续灌胃15天，模型对照组和正常对照组给等量生理盐水，采用尾静脉取血法采样，采样前禁食不禁水12h。采用葡萄糖氧化酶—过氧化物酶法测定血糖，按照血糖试剂盒中说明书操作，溶液显色后，在505nm处测量吸光度，根据标准曲线计算血糖值，按下述公式计算提取物的降糖率：
其中增效系数按如下公式进行计算：
其中的预计降糖率按如下公式进行计算：
预计降糖率＝提取物a的降糖率×a的含量+提取物b的降糖率×b的含量
各提取物的降糖效果如表2所示。
表2提取物的降糖率与组合物的协同增效作用。
注：上述提取物均为最佳提取条件下的提取物。
从表2可以看出，将青钱柳和核桃叶混合后提取，虽然具有较好的降糖作用，但是协同增效作用不明显，甚至少数混合比例有减效作用，而青钱柳提取物和核桃叶提取物形成的组合物，在所有比例下都表现出一定的协同增效作用。
表2中青钱柳提取物和核桃叶提取物的组合物，当配比为2:1时，增效系数最高达到1.216，也就是活性是预测值的2倍多。因此，在上述研究的基础上，对青钱柳提取物和核桃叶提取物的组合物配比在4:1和1:1间进行优化，剂量在200mg·kg-1·d-1和50mg·kg-1·d-1之间进行优化，优化的结果：青钱柳提取物和核桃叶提取物的组合物配比为1.3:1，剂量为110mg·kg-1·d-1时，降糖率可以达到99％，增效系数可以达到7.538。