犬尿喹啉酸或其衍生物在制备改善慢性精神应激相关病理损伤药物中的应用的制作方法

本发明公开了犬尿喹啉酸或其衍生物在制备改善慢性精神应激相关病理损伤药物中的应用，属于药物新用途技术领域。

背景技术：

慢性精神心理应激在现代社会的人群中普遍存在,被发现与多种疾病(如精神病、冠心病、炎症性肠病)发病率的增加或复发密切相关。研究表明,慢性精神心理应激可引起中枢和外周内分泌-炎症-免疫反应失调,伴随情绪低落、学习记忆能力降低、胃肠功能紊乱等全身性的异常症状。随着生活节奏的进一步加快，慢性社会心理压力相关的社会和经济负担将进一步加剧，寻找有效的干预手段已成为亟待解决的科学和社会问题。

越来越多的的证据显示慢性精神心理应激下内源性小分子代谢物的改变参与到多器官功能异常的发生发展。通过恢复代谢通路或其网络的平衡可以有助于改善情绪异常、血管内皮损伤、肠道炎症等多个病理环节，从而有效抵抗慢性精神应激带来的健康损害。因此，纠正内源性小分子代谢失衡的调控策略在改善慢性精神应激相关病理过程方面具有潜在的应用价值。

犬尿喹啉酸是体内犬尿氨酸在犬尿氨酸氨基转移酶(kynurenineaminotransferase,kat)作用下的代谢产物，文献报道其可以作用于n-甲基-d-天门冬氨酸受体(n-methyl-d-aspartatereceptor,nmdar)、α7烟碱型胆碱能受体(α7nicotinecholinergicsubtypealpha7receptor,α7nachr)及g蛋白偶联受体(g-proteincoupledreceptor35,gpr35)，具有一定的神经活性与免疫调节作用。目前的基础和临床研究表明，犬尿喹啉酸水平在多种中枢疾病状态下出现异常。犬尿喹啉酸的一个重要的体内过程特征其对生理屏障的通透性差，外周循环中的犬尿喹啉酸不能够通过血脑屏障。基于药物必须高效分布于脑内而调节中枢病理进程的传统认识，目前的报道均关注于通过脑内注射给药或者增加其前体犬尿氨酸水平的方法调节其脑内水平从而调节认知障碍等疾病。

技术实现要素：

发明目的：本发明目的是公开犬尿喹啉酸或其衍生物在制备改善慢性精神应激相关病理损伤药物中的应用，本发明通过相关研究证实，犬尿喹啉酸口服后有着良好的改善慢性精神应激相关社交障碍、中枢炎症紊乱、脾脏免疫失调的作用。

技术方案：为达到上述发明目的，本发明采用以下技术方案：

犬尿喹啉酸或其衍生物在制备改善慢性精神应激相关病理损伤药物中的应用。

所述犬尿喹啉酸化学名称为4-羟基喹啉-2-甲酸(4-hydroxyquinoline-2-carboxylicacid)，分子式为c10h7no3，分子量为189.17g/mol，其化学结构式如下：

所述改善慢性精神应激相关病理损伤，是指改善慢性精神应激诱导的社交躲避及脑与脾脏等部位的免疫紊乱。

所述药物是以犬尿喹啉酸为单一成分所制成的药物。

或者，所述药物是以犬尿喹啉酸或其衍生物为活性成分，加上药学上可接受的辅料，所制成的药物。

所述药物的剂型为普通片剂、普通胶囊剂、口服液、糖浆、颗粒、滴丸、口腔崩解片、缓释片、控释片、缓释胶囊剂、控释胶囊剂、注射剂或输液剂。

本发明所述药学上可接受的辅料，是指制备不同剂型时加入所需的各种常规辅料，例如稀释剂、黏合剂、崩解剂、助流剂、润滑剂、矫味剂、包合材料、吸附材料等以常规的制剂方法制备成任何一种常用的制剂。

技术效果：相对于现有技术，本发明公开了犬尿喹啉酸或其衍生物在制备改善慢性精神应激相关病理损伤药物中的应用，本发明通过相关研究证实，犬尿喹啉酸有着良好的改善慢性精神应激相关社交障碍、中枢炎症紊乱、脾脏免疫失调的作用。

附图说明

图1：犬尿喹啉酸对慢性社交应激小鼠后社交躲避行为的影响，control为正常对照组小鼠，csds为慢性社交应激组小鼠，csds+ka为慢性社交应激中给予ka小鼠，csds只给予空白溶媒；结果表明ka能够明显增加小鼠在中央社交区域内的停留时间(图a,#p<0.05,与csds组比较)和次数(图b,#p<0.05,与csds组比较)。

图2：犬尿喹啉酸对慢性社交应激小鼠脑内促炎性单核细胞浸润的影响，control为正常对照组小鼠，csds为慢性社交应激组小鼠，csds+ka为慢性社交应激中给予ka小鼠，csds只给予空白溶媒；结果表明ka能够显著降低海马区ly6c^hi促炎性单核细胞的浸润(图a，cd11b⁺ly6c^hi细胞分群图；图b，ly6c^hi促炎性单核细胞比例的统计图，*p<0.05)。

图3：犬尿喹啉酸对慢性社交应激诱导的小鼠中枢炎症介质紊乱的影响，control为正常对照组小鼠，csds为慢性社交应激组小鼠，csds+ka为慢性社交应激中给予ka小鼠，csds只给予空白溶媒；结果表明ka能够显著降低海马区炎症因子ccl2(图a,#p<0.05,与csds组比较)和il6(图b,#p<0.05,与csds组比较)的mrna水平。

图4：犬尿喹啉酸对慢性社交应激诱导的小鼠脾脏免疫细胞浸润的影响，control为正常对照组小鼠，csds为慢性社交应激组小鼠，csds+ka为慢性社交应激中给予ka小鼠，csds只给予空白溶媒；结果表明ka对cd4⁺t细胞的比例无明显影响(图a)，但能够显著增加慢性社交应激小鼠脾脏中cd8⁺t细胞(图b,*p<0.05)并降低nk1.1细胞的比例(图b,***p<0.001)。

具体实施方式

下面结合具体实施例，对本发明进行进一步详细的说明。

实施例1：犬尿喹啉酸对慢性社交应激诱导小鼠社交躲避行为的调节作用

(1)材料：c57bl/6j小鼠(雄性，8周龄)，适应环境1周后，随机分为三组，分别为正常对照组(control组，n＝6)、慢性社交应激模型组(csds组,n＝8)和犬尿喹啉酸干预组(csds+ka组,n＝8)。每天下午16:00点将接受应激的小鼠放置于攻击鼠一侧，接受10分钟的攻击，而后将其转移到同一鼠笼另一侧24小时；每天重复以上操作1次共计10天；正常对照组小鼠仅单笼饲养而不接受社交应激。干预组小鼠于每天应激前0.5小时灌胃给予犬尿喹啉酸(20mg/kg,用1mnaoh调节ph溶解于纯水)，每日给药一次。于第11天进行社交实验评价。

(2)社交躲避实验：实验分为两个阶段，第一阶段将空的带孔小鼠笼置于旷场的社交区域，放入待测小鼠，使其在社交旷场中自由穿行，记录其150秒内的轨迹及其在社交区域停留的时间，随后取出小鼠和带孔小鼠笼，清洗擦拭后将装有攻击鼠的带孔小鼠笼重新放回社交区域(同一位置)，将同一只c57小鼠再次放入社交旷场，记录其150秒内的运动轨迹及其在社交区域停留的时间，比较两次150s内小鼠运动轨迹的差异，同时计算社交区域(interactionzone)的停留时间与次数。

(3)数据分析方法：实验数据以mean±sd表示，并采用graphpadprism6(graphpadsoftwareinc.)软件对结果进行分析处理，数据采用one-wayanova进行分析，p<0.05表示数据差异具有统计意义。

实施例2：犬尿喹啉酸对对慢性社交应激诱导小鼠中枢炎症紊乱的调节作用

(1)材料：具体方法同实施例1。

(2)脑部免疫细胞的分离及流式细胞术考察了小鼠脑内cd45^hicd11b⁺ly6c^hi单核细胞的浸润：小鼠处死后，经左心室灌流20ml冰pbs溶液移除血液，直至肝脏发白，小心分离脑组织，将其取出放置于冰的无抗rpmi1640培养基中。随后转移至5ml玻璃匀浆器中，每个脑组织中加入3ml冰pbs溶液进行匀浆，匀浆液补足至7ml后与100％percoll溶液混匀制成含30％percoll的细胞悬液(10ml)，匀速缓慢加至2ml70％percoll分离液上方，在18℃条件下500g离心30min，用吸管缓慢小心移出30％与70％percoll分界面处的浑浊层，即可得到淋巴细胞群。用pbs溶液洗涤两次后用染色缓冲液重悬成100μl细胞悬液进行流式抗体孵育。向100μl细胞悬液中加入1μlanti-cd16/32抗体，在冰浴中避光封闭10min。无需洗涤直接加入相应特异性流式抗体(anti-cd45-pe，anti-cd11b-apc，anti-ly6c-fitc)，冰浴避光孵育45min，随后用冰pbs溶液洗涤3次(在4℃条件下400g离心5min)，最后用4％多聚甲醛重悬固定，并于次日上机检测。选择合适的通道进行流式分析，相关流式数据采用flowjo软件分析。

(3)海马区炎症因子mrna的pcr分析：将小鼠单侧的海马体取出至离心管中，加入1.0mltrizol后冰浴超声进行匀浆，静置后加入250μl的氯仿，颠倒混匀20s，充分乳化后静置10min；在4℃条件下12,000g离心15min，转出无色上清液体(300μl)至新的离心管中；加入等体积的异丙醇，继续颠倒混匀20s，静置10min；在4℃条件下12,000g离心10min；小心倒出上清，留下离心管底部的沉淀；缓慢加入冰75％乙醇(rnase-free水配制)1ml，颠倒洗涤底部沉淀；在4℃条件下12,000g离心5min，倒出上清，室温放置10min等待75％乙醇溶液挥发，用10μlrnase-free水溶解底部沉淀，待完全溶解后可放于-80℃保存或进行浓度测定。根据逆转录试剂盒说明书将500ngmrna逆转录成cdna，随后根据sybrgreen实时定量pcr使用说明书要求进行操作。以gapdh为参照基因，使用2^-δδct法半定量分析不同样本中目的基因表达的相对差异。

实施例3：犬尿喹啉酸对慢性社交应激诱导小鼠脾脏免疫紊乱的调节作用

(1)材料：具体方法同实施例1。

(2)脾脏免疫细胞的分离及流式细胞术：将小鼠脾脏放置于70μm细胞筛网中，加入2mlpbs溶液,采用5ml注射器活塞挤压研磨脾脏成细胞悬液，缓慢加至lympholyte-m单核细胞分离液上(2ml，v/v1：1)，室温条件下以1200g的速度离心20min，用吸管缓慢移出中间白色浑浊细胞，即可得到淋巴细胞群，用pbs溶液洗涤两次。若有残留红细胞可使用红细胞裂解液去除。用流式染色液重悬成100μl细胞悬液进行流式抗体孵育,方法同实施例2。