一种黄瓜提取物及其在制备抗心血管药物中的应用的制作方法

本发明属于天然提取物领域，具体涉及一种黄瓜提取物及其抗氧化、降血脂功效。

背景技术：

心血管疾病是严重威胁当今人类生命健康的疾病之一，已成为世界大多数国家第一、二位死亡原因。国家心血管病中心近日发布的《中国心血管病报告2017》推算，我国心血管病患病人数已达2.9亿，其中脑卒中1300万，冠心病1100万，肺源性心脏病500万，心力衰竭450万，风湿性心脏病250万，先天性心脏病200万，高血压2.7亿。《报告》指出，总体上看，中国心血管病患病率及死亡率仍处于上升阶段，且今后10年心血管病患病人数仍将快速增长。随着社会老龄化和城市化进程加快，居民不健康生活方式流行，我国居民心血管病危险因素普遍暴露，呈现在低龄化、低收入群体中快速增长及个体聚集趋势。心血管疾病为我国医疗事业带来了巨大的经济压力，针对心血疾病的防治进行开发具有重要的意义。在胆固醇水平与冠心病的病因研究中发现，固醇调节元件结合蛋白-2(sterolregulatoryelementbindingprotein，srebp2)作为一种膜结合转录因子，在胆固醇的代谢中起中心作用。刘晓丽等.在"srebp-2基因多态与胆固醇水平的关联研究."中国分子心脏病学杂志8.4(2008):203-207.中研究了一般社区人群中srebp2基因rs4822063多态与血脂水平的关系，研究表明两者存在相关关系。

心血管疾病多发于50岁以上的中老年群体中，疾病恢复期长，预后较差，不论是从预防疾病的角度还是从疾病治疗康复的角度，除遵医嘱服药外，避免诱发因素及加重因素都极为重要。因此，对于心血管疾病患者，日常养护显得尤为关键。心血管病人需要戒烟戒酒，日常饮食应当少油少盐，多吃绿叶蔬菜、大豆、鱼肉等食物，可以起到预防心血管疾病发病的效果。日常生活中，坚持每日锻炼，有利于加速血液循环，增强血管弹性，同时消耗体内多余的脂肪，降低血液粘稠度。

黄瓜作为明星减肥食物，具有清热、解渴、利尿作用，能加速血液的新陈代谢，排出体内多余的盐分。黄瓜中的大量水溶性维生素，能够起到美容养颜、防止色素沉淀、减少皱纹的作用。因此，黄瓜提取物被大量添加至护肤品中，具有很高的美容价值。事实上，黄瓜还具有很高的药用价值，专利cn1742777a公开了一种具有治疗酒精肝、脂肪肝效果的黄瓜提取物。

黄瓜中含有大量的纤维素，能够促进肠道蠕动，排除体内的食物残渣，减少胆固醇的吸收。除此之外，黄瓜中的营养成分也不容小觑，黄瓜中富含丙醇二酸，能够阻止糖类转化为脂肪，起到降血压、降血脂的效果。专利cn105815785a中公开了一种从黄瓜中提取丙醇二酸制备除脂粉的方法，通过将黄瓜中的丙醇二酸与冬瓜、苦瓜、青菜等食物结合，制备具有减肥效果的除脂粉。另外，黄瓜中还含有丰富的蛋白质、矿物质及不饱和脂肪酸，对促进血液的新陈代谢、血管软化及肌肉组织的生长发育都具有一定的功效。专利cn105061189a中公开了一种从黄瓜籽中提取亚油酸的方法，通过向黄瓜籽中加入脂肪酶和蛋白酶，提取得到黄瓜籽中的亚油酸成分。侯冬岩等.在"水黄瓜营养成分的研究."鞍山师范学院学报8.2(2006):28-30.中对黄瓜中的营养成分进行了研究，采用索氏提取法对水黄瓜中脂肪酸进行了提取,进行甲酯化处理；用同时蒸馏-萃取法提取水黄瓜中挥发性物质，测得水黄瓜挥发油的含量为1.0％，用gc/ms法从水黄瓜中分离并确定出5种脂肪酸，主要为：十六酸10.17％，9,12-十八碳二烯酸15.41％，9,12,15-十八碳三烯酸24.24％；挥发油鉴定出32个化合物，占总检出量的93.02％。

动脉粥样硬化、高血脂、糖尿病等病人的饮食有着严格的限制，每日需食用一定的蛋白、钙质及蔬菜水果。水果往往只能食用黄瓜和西红柿这种热量极低的食物。由于患者多为老年人，而水果属于寒凉的食物，长期食用许多患者会出现肠胃的不耐受。另外，黄瓜的瓜把部分最具营养价值，富含葫芦素c，具有良好的排毒养颜效果，还具有抗肿瘤功效。但是瓜把带有明显的苦味，日常使用过程中往往将其舍弃，造成浪费，提供一种适用于中老年心血管疾病患者的特殊医用食物具有重要的意义。

技术实现要素：

基于上述技术问题，本申请研究得到一种黄瓜提取物，该提取物制备过程中尽可能保留了黄瓜中的各种水溶性维生素、脂溶性不饱和脂肪酸及纤维素等，该提取物能够提高hepg2细胞模型中srebp-2活性，具有良好的抗氧化、降血脂、改善血管壁脂质沉积的效果，能够有效降低模型组血液中的血脂综合指数(lci)，适合心血管疾病患者日常服用，有望减轻动脉粥样硬化程度。

为了实现以上技术目的，本发明提供如下技术方案：

本发明第一方面，提供一种黄瓜提取物的制备方法，该制备方法步骤如下：

(1)向黄瓜中加入适量清水后打浆，将黄瓜破碎得到黄瓜汁，过滤，保留液体部分a；

(2)将过滤完成后的黄瓜残渣包入滤纸筒中，加入石油醚溶液，低温提取一段时间，挥干大部分溶剂后得到液体部分b；

(3)回收步骤(2)回流完成后的黄瓜残渣，加低浓度氢氧化钠溶液煮沸一段时间，待溶液温度稍降，加入少量蒸馏水洗涤残渣至中性，合并滤液及洗液，得到液体部分c，加入少量乙酸调节ph至中性；

(4)合并液体部分a、b和c，低温挥干溶剂后获得干燥提取物。

优选的，步骤(1)中选取新鲜的黄瓜放入足量清水中，加入农药去除剂后反复揉搓黄瓜表面，直至将小刺尽数洗去，将黄瓜清洗干净后备用。

清洗后的黄瓜切块放入搅拌机中，加入清水打成浆液，其中黄瓜与清水的比例为1～2kg：1～1.5l。由于黄瓜皮、瓜把质地较为坚韧，加入适量清水有利于黄瓜打浆更为均匀。打浆过程中，少量多次的向容器内加入清水，以使黄瓜浆液研磨更加均匀。

进一步优选的，黄瓜与清水的比例为1.5kg：1l。该比例下，再尽可能少加清水保证提取液浓度的前提下，能够将黄瓜充分匀浆。

优选的，步骤(2)中，将过滤完成后的固体部分包入滤纸筒中，放入索式提取器中加入石油醚，与65～78℃水浴中回流提取10～14h，其中残渣与石油醚的体积比为100～200g/l。

降温后，将回流得到的石油醚提取液置于通风橱中，使大部分溶剂自然挥干。

进一步优选的，在70℃水浴中回流提取12h，黄瓜残渣与石油醚的体积比为170g/l。

优选的，步骤(3)中索式提取完成后的残渣加入浓度为5％的氢氧化钠溶液，加入比例为180～220g/l，升温至100℃回流提取1～2h。回流完毕后，待溶液将至室温，向提取液中加入浓度为0.1m的乙酸溶液，将溶液ph调至中性。由于植物中的纤维素是由葡萄糖组成的大分子多糖，不溶于水及一般的有机溶剂，采用低浓度碱液有利于破坏细胞壁的组成，使纤维素成分充分溶出。

优选的，将上述提取过程中得到液体部分b倒入旋转蒸发仪器中，溶剂完全挥干后加入少量纯乙醇，再次蒸干，重复该操作3～5次。将蒸干后的固体转移至真空烘箱中，37～40℃烘6～9h，得到样品b。本领域公知，石油醚属于易挥发试剂，通风橱中即可快速挥发，为避免试剂的残留，本申请制备过程中将液体b加入旋蒸仪中去除溶剂，并另外加入脂溶性易挥发溶剂，多次旋蒸，以便将样品中的有机溶剂尽数除去。

进一步优选的，将提取液a，c和样品b混合，其混合比例为1：1：1，挥干溶剂既得黄瓜提取物。

本发明第二方面，提供上述制备方法得到的黄瓜提取物。

本发明第三方面，提供上述黄瓜提取物在制备抗心血管疾病药物中的应用。

本发明第四方面，提供一种用于预防和治疗动脉粥样硬化或高脂血症的药物组合物，该药物组合物以上述黄瓜提取物作为活性成分。

本发明第五方面，提供一种适用于血管疾病患者或动脉粥样硬化患者或高脂血症患者的特殊医用食品，该特殊医用食品包含上述黄瓜提取物。

本发明的有益效果

1.本申请提供了一种具有降血脂功效的黄瓜提取物，本申请制备的黄瓜提取物，在不添加矫味剂的前提下，消除了黄瓜本身的苦涩味道，不再具有寒凉之性，可替代日常水果及作为特殊医用食品的成分。

2.本领域公知，黄瓜中含有维生素、纤维素及不饱和脂肪酸类等有益减肥的物质。本发明研究过程中首次确认了黄瓜提取物具有抗氧化、修复心脏损伤的效果。另外，本申请研究过程中通过不同的提取方式分别提取了黄瓜中的水溶性维生素、脂肪酸及纤维素类成分，而动物模型试验结果表明，上述三类物质复合时的降血脂效果超过了同等剂量下的单一成分，该研究结论在以往的研究过程中未被披露，为降血脂医用食品的研究提供了新的方向。

3.本申请提出的黄瓜提取物食用安全，无副作用，坚持每天食用在一定程度上能够降低体重，有效降低血脂综合指数，缓解高血脂症状，有望开发成为降血脂药物。

附图说明

构成本申请的一部分的说明书附图用来提供对本申请的进一步理解，本申请的示意性实施例及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。

图1为本申请制备的黄瓜提取物图；

图2为hepg2细胞模型中srebp-2含量相对变化柱状图；

图3为高血脂小鼠模型试验体重变化折线图；

图4为高血脂小鼠血脂综合指数变化柱状图。

具体实施方式

应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本申请提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本申请所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。

需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本申请的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。

正如背景技术所介绍的，黄瓜作为高血脂病人少数可以使用的水果，具有清热、利尿、减肥的功效，但是黄瓜本身较为寒凉，不适于老年患者每日食用，且黄瓜多具有苦涩味道，影响使用口感。针对上述问题，本申请提出了一种黄瓜提取物，并对该提取物的抗氧化及降血脂效果进行了研究。

为了使得本领域技术人员能够更加清楚地了解本申请的技术方案，以下将结合具体的实施例与对比例详细说明本申请的技术方案。

实施例1

称取1.5kg新鲜黄瓜，放入盐水中反复揉搓，将黄瓜表面的小刺尽数洗去，将黄瓜清洗干净后切小块投入榨汁机中，榨汁过程中少量多次将1l清水加入容器中，将黄瓜全部打成淡绿色浆状。

将黄瓜汁真空抽滤，保留澄清液体部分a。剩余的黄瓜残渣包入滤纸筒中，放入索式提取器中，加入1.2l石油醚于70℃水浴中回流提取12h，回流提取完毕后将液体部分置于通风橱中，待大部分溶剂自然挥发，得到液体部分b。

将滤纸内的黄瓜残渣置于通风橱中晾干2h，将晾干后的黄瓜残渣转移至原地烧瓶中，加入浓度为5％的氢氧化钠溶液1l，升温至100℃回流提取75min，回流完毕后，将反应溶液真空抽滤，向提取液中加入浓度为0.1m的乙酸溶液，将溶液ph调至中性，得到液体部分c。

将液体部分b置于旋转蒸发仪中，将溶剂尽数除去，蒸干后，加入少量纯乙醇继续蒸干，重复上述操作直至样品b中不含醇味。将蒸干后的的固体转移至真空烘箱中，37℃烘8h，得到样品b。

将液体部分a和c加入烘干后的样品b中充分混合，挥干溶剂既得黄瓜提取物。

实施例2

称取1.5kg新鲜黄瓜，放入盐水中反复揉搓，将黄瓜表面的小刺尽数洗去，将黄瓜清洗干净后切小块投入榨汁机中，榨汁过程中少量多次将1l清水加入容器中，将黄瓜全部打成淡绿色浆状。将黄瓜汁真空抽滤，保留澄清液体部分a，将溶剂挥干后获得样品a。

实施例3

称取1.5kg新鲜黄瓜，放入盐水中反复揉搓，将黄瓜表面的小刺尽数洗去，将黄瓜清洗干净后切小块投入榨汁机中，榨汁过程中少量多次将1l清水加入容器中，将黄瓜全部打成淡绿色浆状。

将黄瓜汁真空抽滤，保留澄清液体部分a。剩余的黄瓜残渣包入滤纸筒中，放入索式提取器中，加入1.2l石油醚于70℃水浴中回流提取12h，回流提取完毕后将液体部分置于通风橱中，待大部分溶剂自然挥发，得到液体部分b。

将滤纸内的黄瓜残渣置于通风橱中晾干2h，将晾干后的黄瓜残渣转移至原地烧瓶中，加入浓度为5％的氢氧化钠溶液1l，升温至100℃回流提取75min，回流完毕后，将反应溶液真空抽滤，向提取液中加入浓度为0.1m的乙酸溶液，将溶液ph调至中性，得到液体部分c，将液体部分c中溶剂挥干后获得样品c部分。

实施例4细胞模型及srebp-2活性检测

将计数后的hepg2细胞加入dmem培养基(10％fbs,100u/ml青霉素，100μg/ml链霉素)中，37℃培养、5％co2培养箱中常规培养至对数生长期，配置相同浓度的实施例1-3中得到样品a,b,c及黄瓜提取样品加入至细胞培养液中，培养24h后处理细胞，检测细胞中的srebp-2活性。检测结果如图2所示，黄瓜中的三种成分a,b,c相比模型组提高效果不显著，三种成分复合之后，细胞中srebp-2活性具有明显的提升，表明黄瓜提取物能够激活细胞中胆固醇代谢相关途径，有利于缓解高血脂状况。

实施例5本发明中黄瓜提取物对小鼠心脏的抗氧化作用实验

为了验证本发明中黄瓜提取物对于心脏抗氧化作用的修复效果，通过制备小鼠心脏损伤模型，选取总sod、mda、gsh-px为评价指标，考察本发明中营养冲剂对于小鼠心脏损伤的修复效果。

本实施例中小鼠购于济南朋悦实验动物繁育有限公司，选取6～8周龄的昆明小鼠随机分为6组，每组12只，分别为模型对照组，实施例1-3组及对比例1-2组，另外设置两组12月龄的老年组。

腹腔注射d-半乳糖500mg·kg^-1·d^-1，连续给药6周，实施例1-3组、对比例组及老年组投食剂量为每只5g，每天投喂一次，模型对照组投喂相同剂量的小鼠饲料，老年实验组投喂实施例1中的营养粉剂，投喂时加入相统计量的水使其成糊状。试验结束后，脱颈椎处死小鼠，取出心脏组织冲洗干净后称重，加入生理盐水研磨成匀浆，离心得到组织匀浆液。

dtnb直接法测定gshpx的活性；以邻苯三酚自氧化法测定超氧化物歧化酶(sod)活性；以tba比色法测定脂质过氧化产物(mda)含量，检测结果如表1所示：

表1小鼠心脏sod、mda、gsh-px检测结果

注：*p<0.05；**p<0.01。

本实验进行过程中，未出现小鼠非正常死亡，说明本发明的提取物食用安全，无毒性。

由表1中数据可以看出，服用样品组小鼠心脏中抗氧化酶指数相比模型组均有一定程度的改善，改善效果具有统计学意义。三组提取物均有一定的抗氧化、修复心肌细胞的功效，其中，样品a、b、c复合后的产物对心脏的修复效果更加显著，证明三种提取物具有一定的协同效果。

实验组老年组抗氧化酶指标相比空白组具有显著性的提高，证明本发明中黄瓜提取物可以用于老年人，切实具有心脏修护效果。

实施例6黄瓜提取物对高脂小鼠模型血脂综合指数的影响

取昆明雌鼠，基础饲料适应性饲喂一周后，将基础饲料改为高脂饲料(基础饲料78.8％，胆固醇1％，胆盐0.2％，猪油10％，蛋黄粉10％)，饲喂四周时间制作高脂模型。造模期间，每周称量体重，记录小鼠体重增长状况。

剔除体重异常增长的小鼠后，将剩余小鼠随机分为6组，每组12只，分别为模型组，样品a组、样品b组、样品c组、提取物组及阳性对照组。其中模型组继续饲喂普通饲料，样品a组饲喂75％普通饲料+15％的样品a，样品b组饲喂75％的普通饲料+15％的样品b，样品c组饲喂75％的普通饲料+15％样品c，提取物组饲喂75％的普通饲料+15％的黄瓜提取物，即样品a/样品b/样品c/提取物的给药剂量为15g/kg，阳性对照组为洛伐他汀+普通饲料，给药剂量100mg/kg。饲喂九周时间，每周称重一次。各组小鼠体重变化情况如表2所示：

表2小鼠体重变化

注：*p<0.05；**p<0.01。

根据图3可以清楚的看出，模型组小鼠在九周的实验过程中体重持续上升，样品a组小鼠体重变化趋势与模型组基本相同。样品b，c组小鼠体重相比模型组增长稍缓慢。而复合提取物组的小鼠体重在饲喂第五周开始出现明显的下降，说明服用单一成分可能不具备降体脂的效果，而本申请中的黄瓜提取物具有一定程度的减肥效果，样品a，b，c之间存在协同作用。

九周后，各组小鼠饲喂的当晚，所有小鼠禁食不禁水12h，称重后心脏取全血，加入抗凝剂后静置分离血浆，通过全自动生化分析仪测定血浆中的总胆固醇含量(tc)、甘油三酯(tg)、高密度脂蛋白胆固醇(hdl-c)、低密度脂蛋白胆固醇(ldl-c)，并计算血脂综合指数(lci)及动脉粥样硬化指数(ai)，计算公式如下：

经统计，各组小鼠血脂指标如下表3所示：

表3小鼠血脂指标

注：*p<0.05；**p<0.01。

通过图4可以清楚地看出，血脂指标分析结果与上述实验趋势较为一致：模型组在九周的实验过程中，血脂综合指数升高，血液中各项胆固醇指标均有一定程度的升高，样品a,b,c组血浆中胆固醇含量变化不明显，但是黄瓜提取物组的血脂综合指数明显下降。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。