本发明载药技术领域，具体涉及一种双载药胶束的制备方法。
背景技术：
癌症是当今全球致死率最高的疾病之一,随着其发病率的持续攀升,全世界癌症死亡人数将继续增加，目前,临床癌症治疗主要有手术治疗、放射治疗及化学治疗，但这些方法均会对正常组织或细胞产生损伤,存在医疗及药效上的缺点，如化疗药物溶解性差、毒副作用大、药代动力学差、容易产生多重耐药性等
近年来,生物可降解聚合物胶束作为纳米药物载体备受瞩目，它能包裹疏水性药物,提高药物在水中的溶解度,延长药物在血液中的循环时间，尤其是环境响应性聚合物胶束在药物和基因运载领域有着广泛的研究，环境响应性聚合物胶束是在某些信号的刺激下能够进行自反馈响应而调节其物理化学特质的一类新型胶束，作为药物控制释放载体时能够根据环境条件的变化来控制药物释放行为，由于人体内不同部位的ph存在差异,如肿瘤组织的ph(6.0~7.2)低于人体血液和正常组织(ph7.4),肿瘤细胞内的ph更低(早期核内体：ph5.0~6.0;晚期溶酶体：ph4.0~5.0),使得ph响应性纳米载体被广泛应用于药物载体研究。
技术实现要素：
本发明目的在于提供一种能够自组装形成胶束并包封紫杉醇等疏水药物，阿霉素和紫杉醇在载药胶束中均能够持续释放，且降低环境ph值能加快2种药物的释放速度，实现多种药物的协同治疗的一种双载药胶束的制备方法。
本发明一种双载药胶束的制备方法，包括以下步骤：
第一步，氧化葡聚糖的制备；将葡聚糖溶于去离子水中，naio4溶于去离子水，将二者混合，室温下避光搅拌后,加入丙三醇，继续搅拌至反应停止，将反应液转移到截留分子量为8~12kda的透析袋中，用去离子水透析72h，每6h换一次水，将保留液冷冻干燥，得到白色絮状产物氧化葡聚糖；
第二步，氧化葡聚糖-阿霉素的合成；取氧化葡聚糖溶于二甲基亚砜中，搅拌溶解备用，取盐酸阿霉素溶于二甲基亚砜中,加入三乙胺，室温下搅拌4h后立即将溶液滴加到氧化葡聚糖的二甲基亚砜溶液中，室温搅拌反应，将混合溶液转移到截留分子量为8~12kda的透析袋中透析4d，将保留液冷冻干燥,获得氧化葡聚糖-阿霉素复合物；
第三步，双载药胶束的合成，取氧化葡聚糖-阿霉素复合物和紫杉醇溶于二甲基亚砜中，然后滴加到磷酸盐缓冲溶液中，继续搅拌，将混合溶液转移到截留分子量为8~12kda的透析袋中透析4d将保留液冷冻干燥，得双载药胶束。
优选地，第一步中葡聚糖1g溶于去离子水30ml中，naio40.6g溶于去离子水20ml中，室温下避光搅拌24h后，加入丙三醇0.6g,继续搅拌15min后停止反应，然后用去离子水透析。
优选地，第二步中，氧化葡聚糖0.8g溶于50ml二甲基亚砜中；
盐酸阿霉素0.1g溶于20ml二甲基亚砜中,加入15ul的三乙胺,室温下搅拌4h后立即将溶液滴加到氧化葡聚糖的二甲基亚砜溶液中，室温搅拌反应24h。
优选地，第三步中，氧化葡聚糖-阿霉素复合物24mg和4mg紫杉醇溶于3ml二甲基亚砜中，过夜搅拌，然后滴加到15ml磷酸盐缓冲溶液中，继续搅拌6h。
优选地，naio4中葡聚糖与高碘酸钠投料物质的量比为1:0.5。
本发明以氧化葡聚糖为基础材料，制备了ph响应的双载药胶束，通过ph敏感的亚胺键将阿霉素药物分子与氧化葡聚糖相结合，合成阿霉素-氧化葡聚糖前药分子，该前药分子在水溶液中能够自组装形成胶束并包封紫杉醇等疏水药物，实现多种药物的协同治疗，由于肿瘤组织具有低ph值的生理微环境特点,该双载药胶束的这种低ph值触发式药物释放行为对于肿瘤的治疗具有积极意义，可用于发展新型抗肿瘤药物体系。
具体实施方式
实施例一：
本发明一种双载药胶束的制备方法，包括以下步骤：
第一步，氧化葡聚糖的制备；将葡聚糖溶于去离子水中，naio4溶于去离子水，将二者混合，室温下避光搅拌后,加入丙三醇，继续搅拌至反应停止，将反应液转移到截留分子量为8~12kda的透析袋中，用去离子水透析72h，每6h换一次水，将保留液冷冻干燥，得到白色絮状产物氧化葡聚糖；
第二步，氧化葡聚糖-阿霉素的合成；取氧化葡聚糖溶于二甲基亚砜中，搅拌溶解备用，取盐酸阿霉素溶于二甲基亚砜中,加入三乙胺，室温下搅拌4h后立即将溶液滴加到氧化葡聚糖的二甲基亚砜溶液中，室温搅拌反应，将混合溶液转移到截留分子量为8~12kda的透析袋中透析4d，将保留液冷冻干燥,获得氧化葡聚糖-阿霉素复合物；
第三步，双载药胶束的合成，取氧化葡聚糖-阿霉素复合物和紫杉醇溶于二甲基亚砜中，然后滴加到磷酸盐缓冲溶液中，继续搅拌，将混合溶液转移到截留分子量为8~12kda的透析袋中透析4d将保留液冷冻干燥，得双载药胶束。
实施例二：
本发明一种双载药胶束的制备方法，包括以下步骤：
第一步，氧化葡聚糖的制备；将葡聚糖溶于去离子水中，naio4溶于去离子水，将二者混合，室温下避光搅拌后,加入丙三醇，继续搅拌至反应停止，将反应液转移到截留分子量为8~12kda的透析袋中，用去离子水透析72h，每6h换一次水，将保留液冷冻干燥，得到白色絮状产物氧化葡聚糖；
第二步，氧化葡聚糖-阿霉素的合成；取氧化葡聚糖溶于二甲基亚砜中，搅拌溶解备用，取盐酸阿霉素溶于二甲基亚砜中,加入三乙胺，室温下搅拌4h后立即将溶液滴加到氧化葡聚糖的二甲基亚砜溶液中，室温搅拌反应，将混合溶液转移到截留分子量为8~12kda的透析袋中透析4d，将保留液冷冻干燥,获得氧化葡聚糖-阿霉素复合物；
第三步，双载药胶束的合成，取氧化葡聚糖-阿霉素复合物和紫杉醇溶于二甲基亚砜中，然后滴加到磷酸盐缓冲溶液中，继续搅拌，将混合溶液转移到截留分子量为8~12kda的透析袋中透析4d将保留液冷冻干燥，得双载药胶束。
第一步中葡聚糖1g溶于去离子水30ml中，naio40.6g溶于去离子水20ml中，室温下避光搅拌24h后，加入丙三醇0.6g,继续搅拌15min后停止反应，然后用去离子水透析。
第二步中，氧化葡聚糖0.8g溶于50ml二甲基亚砜中；
盐酸阿霉素0.1g溶于20ml二甲基亚砜中,加入15ul的三乙胺,室温下搅拌4h后立即将溶液滴加到氧化葡聚糖的二甲基亚砜溶液中，室温搅拌反应24h。
第三步中，氧化葡聚糖-阿霉素复合物24mg和4mg紫杉醇溶于3ml二甲基亚砜中，过夜搅拌，然后滴加到15ml磷酸盐缓冲溶液中，继续搅拌6h。
实施例三：
本发明一种双载药胶束的制备方法，包括以下步骤：
第一步，氧化葡聚糖的制备；将葡聚糖溶于去离子水中，naio4溶于去离子水，将二者混合，室温下避光搅拌后,加入丙三醇，继续搅拌至反应停止，将反应液转移到截留分子量为8~12kda的透析袋中，用去离子水透析72h，每6h换一次水，将保留液冷冻干燥，得到白色絮状产物氧化葡聚糖；
第二步，氧化葡聚糖-阿霉素的合成；取氧化葡聚糖溶于二甲基亚砜中，搅拌溶解备用，取盐酸阿霉素溶于二甲基亚砜中,加入三乙胺，室温下搅拌4h后立即将溶液滴加到氧化葡聚糖的二甲基亚砜溶液中，室温搅拌反应，将混合溶液转移到截留分子量为8~12kda的透析袋中透析4d，将保留液冷冻干燥,获得氧化葡聚糖-阿霉素复合物；
第三步，双载药胶束的合成，取氧化葡聚糖-阿霉素复合物和紫杉醇溶于二甲基亚砜中，然后滴加到磷酸盐缓冲溶液中，继续搅拌，将混合溶液转移到截留分子量为8~12kda的透析袋中透析4d将保留液冷冻干燥，得双载药胶束。
第一步中葡聚糖1g溶于去离子水30ml中，naio40.6g溶于去离子水20ml中，室温下避光搅拌24h后，加入丙三醇0.6g,继续搅拌15min后停止反应，然后用去离子水透析。
第二步中，氧化葡聚糖0.8g溶于50ml二甲基亚砜中；
盐酸阿霉素0.1g溶于20ml二甲基亚砜中,加入15ul的三乙胺,室温下搅拌4h后立即将溶液滴加到氧化葡聚糖的二甲基亚砜溶液中，室温搅拌反应24h。
第三步中，氧化葡聚糖-阿霉素复合物24mg和4mg紫杉醇溶于3ml二甲基亚砜中，过夜搅拌，然后滴加到15ml磷酸盐缓冲溶液中，继续搅拌6h。
naio4中葡聚糖与高碘酸钠投料物质的量比为1:0.5。
本发明以氧化葡聚糖为基础材料，制备了ph响应的双载药胶束，通过ph敏感的亚胺键将阿霉素药物分子与氧化葡聚糖相结合，合成阿霉素-氧化葡聚糖前药分子，该前药分子在水溶液中能够自组装形成胶束并包封紫杉醇等疏水药物，实现多种药物的协同治疗，由于肿瘤组织具有低ph值的生理微环境特点,该双载药胶束的这种低ph值触发式药物释放行为对于肿瘤的治疗具有积极意义，可用于发展新型抗肿瘤药物体系。