药物硝苯地平的新用途的制作方法

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种药物硝苯地平的新用途。

背景技术：

烟草依赖是一种慢性、高复发性、成瘾性疾病。世界卫生组织指出目前世界吸烟者有5亿人，其中我国的吸烟者就占了3.6亿，也就是每4个中国人里就有一个是烟民。全球范围内每年因吸烟导致相关疾病死亡人数大约为600万，而其中我国因吸烟导致相关疾病死亡的人数超过100万，占各种原因死亡人数的16.4%。虽然吸烟危害很大，但是大多数吸烟者都无法或者很难成功戒烟，我国仅从2006年到2012年底中央财政就拨款600亿进行戒烟行动但收效甚微；目前世界范围内第一次戒烟成功的比率只有5%；而即使戒烟成功，复吸的几率也高达70%以上。戒烟失败的原因主要有两个，一个是尼古丁依赖：烟草中含有的主要成分尼古丁，跟其他依赖性药物如可卡因、海洛因一样，可以在人和动物引起耐受和依赖；另一个是烟草戒断综合征，也就是停止吸烟导致的不适反应，比如生理方面的头晕目眩、头痛等和心理方面的易怒、抑郁等。目前临床上针对戒烟的措施包括心理和行为治疗以及药物治疗，药物治疗主要包括尼古丁替代疗法和非尼古丁类戒烟药，如烟碱型乙酰胆碱受体拮抗剂；但目前的治疗效果并不十分理想，只有15-25%的吸烟者可以完全彻底戒烟。由于烟草中最主要致瘾成分为尼古丁，因此急需寻找能有效帮助人们预防尼古丁成瘾以及尼古丁成瘾后有效戒断同时不会复吸的安全有效的预防和治疗药物。

硝苯地平（nifedipine）是一种二氢吡啶类l型钙离子通道阻滞剂，已作为治疗高血压和心绞痛的一线药品在国外和国内的临床上应用数十年。分子式为c17h18n2o6，分子量为346.34，化学结构式如下：

。

有文献研究发现，l型钙离子通道广泛分布于中枢神经系统，l型钙离子通道抑制剂对于帕金森病有良好的作用，但目前还不清楚l型钙离子通道抑制剂对于尼古丁成瘾是否有预防和治疗作用。在我们前期发表的研究中，我们发现l型钙离子通道的不同亚型可以介导中脑腹侧背盖区（此为大脑参与回报与药物成瘾通路中的一个脑区）多巴胺细胞的放电行为调节，其中cav1.3亚型既介导多巴胺细胞的规律放电又介导多巴胺细胞的簇状放电，而cav1.2亚型只单纯介导多巴胺细胞的簇状放电[文章cav1.2andcav1.3l-typecalciumchannelsregulatedopaminergicfiringactivityinthemouseventraltegmentalarea（journalofneurophysiology，yudanliu，meghanharding，andreapittman，julesdore，jörgstriessnig，anjalirajadhyaksha，xihuachen）]。之后，我们进一步研究发现，l型钙离子通道的不同亚型在尼古丁诱发的条件性位置偏爱行为中有不同的作用，cav1.2而不是cav1.3亚型介导尼古丁诱发的条件性位置偏爱行为[文章cav1.2,butnotcav1.3,l-typecalciumchannelsubtypemediatesnicotine-inducedconditionedplacepreferenceinmice（progressinneuro-psychopharmacology&biologicalpsychiatry,yudanliu,meghanharding,julesdore,xihuachen）]。结合现有技术，这两篇文章仅能得出l型钙离子通道的不同亚型在调节中脑腹侧背盖区细胞的放电行为以及在诱发尼古丁介导的条件性位置偏爱行为中有一定的作用，但对于药物硝苯地平以及其他l型钙离子通道拮抗剂是否对尼古丁成瘾的预防和治疗有用，是否可以帮助尼古丁成瘾患者戒烟以及防止复吸，尚无从得知。

技术实现要素：

本发明发现相对于其他l型钙离子通道抑制剂，硝苯地平可以有效防止尼古丁成瘾的形成，同时可以有效促进尼古丁成瘾的戒断并防止复吸，有望成为尼古丁成瘾预防和治疗的有力治疗药物。

本发明的第一目的在于提供药物硝苯地平的新用途，用于制备预防和治疗尼古丁成瘾的药物。

本发明的第二目的在于提供针对上述新用途的用于制备预防和治疗尼古丁成瘾的药物，其中含有硝苯地平。

本发明中所述的硝苯地平是指与商品名相同结构的化合物，硝苯地平可通过商业渠道购买，也可以通过合成技术的标准方法来制备。

硝苯地平药学上可接受的盐、酯、溶剂合物在制备预防和治疗尼古丁成瘾中的用途。

一种预防和/或治疗尼古丁成瘾的药物，该药物中治疗有效量的活性成分和辅料。

一种预防和/或治疗尼古丁成瘾的药物，其活性成分为硝苯地平或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物。

在上述方案的基础上，本发明的硝苯地平一般以药物组合物的形式使用，这种组合物含有治疗有效量的作为活性成分的硝苯地平和药用辅料，所述的辅料包括乳糖、淀粉、微晶纤维素中的一种或多种、碳酸氢钠、交联羧甲基纤维素钠、羟丙纤维素、羟丙甲基纤维素、水、二氧化硅、硬脂酸镁和滑石粉。

所述预防和/或治疗尼古丁成瘾的药物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜

组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机体。

所述预防和/或治疗尼古丁成瘾的药物，能够用于预防和治疗尼古丁成瘾、并能够在尼古丁成瘾后有效戒断同时不会复吸。

需要的时候，在上述药物中还可以加入一种或多种药学上可接受的载体。所述载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。

用硝苯地平或其药学上可接受的盐、酯、溶剂合物为活性成分制备的预防和/或治疗尼古丁成瘾的药物可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。

本发明的有益效果在于：本发明经过系统的实验证实硝苯地平是一种潜在的预防和治疗尼古丁成瘾的药物。以硝苯地平作为预防和治疗尼古丁成瘾药物有以下四个优点：(1)治疗尼古丁成瘾的临床常用药物治疗效果并不十分理想，只有15-25%的吸烟者可以完全彻底戒烟。硝苯地平能预防尼古丁成瘾，加速戒断过程，预防复吸，效果显著；(2)硝苯地平是在临床应用数十年的治疗高血压和心绞痛的一线用药，作为一种新药使用，硝苯地平在预防和治疗尼古丁成瘾方面不会出现耐药现象（其作用机制也与临床现有治疗尼古丁成瘾的药物不同，主要是侧重于对多巴胺能神经元的放电行为的调节，因此不会出现交叉耐药现象)；(3)由于硝苯地平是临床上已上市药物，因此作为预防和治疗尼古丁成瘾药物研究中，可以大大降低临床前研究中的研究成本，节约资源、缩短研发周期。所有实验数据证明硝苯地平有良好的预防和治疗尼古丁成瘾的效果，具有潜在的临床应用前景。(4)硝苯地平在动物实验中工作浓度均未见有毒性。

附图说明

图1为硝苯地平而非地尔硫卓或维拉帕米可以防止尼古丁诱发的条件性位置偏爱现象的产生的示意图；其中a为尼古丁诱发条件性位置偏爱的过程图示，b为l型钙离子通道抑制剂硝苯地平、地尔硫卓、维拉帕米对于尼古丁诱发的条件性位置偏爱分数的影响图（**代表p<0.01；***代表p<0.001）。

图2为硝苯地平而非地尔硫卓或维拉帕米可以加快尼古丁诱发的条件性位置偏爱现象的戒断过程的示意图；其中a为尼古丁诱发的条件性位置偏爱现象戒断的过程图示，b为l型钙离子通道抑制剂硝苯地平、地尔硫卓、维拉帕米对于尼古丁诱发的条件性位置偏爱现象戒断时间的影响图（****代表p<0.0001）。

图3为硝苯地平而非地尔硫卓或维拉帕米可以防止尼古丁诱发的条件性位置偏爱现象的复吸的示意图；其中a为尼古丁诱发的条件性位置偏爱现象复吸的过程图示，b为空间局限诱发复吸中l型钙离子通道抑制剂硝苯地平、地尔硫卓、维拉帕米对于尼古丁诱发的条件性位置偏爱复吸率的影响图，c为小剂量尼古丁诱发复吸中l型钙离子通道抑制剂硝苯地平、地尔硫卓、维拉帕米对于尼古丁诱发的条件性位置偏爱复吸率的影响图（*代表p<0.05）。

图4为硝苯地平可以改变尼古丁行为敏化的表达的示意图；其中a为尼古丁行为敏化行为诱发和表达的过程图示，b为硝苯地平在诱发期、表达期、表达后期对于总运动行为的影响图（***代表p<0.001，****代表p<0.0001）。

图5为硝苯地平治疗组中脑腹侧背盖区多巴胺细胞放电频率明显减少的示意图；其中a为代表性多巴胺细胞给予尼古丁前后的放电行为的原始图，b为中脑腹侧背盖区多巴胺细胞放电频率示意图（**代表p<0.01）。

具体实施方式

在研究现有治疗尼古丁成瘾药物治疗成功率低等问题时，运用公认的药物成瘾的行为学实验（条件性位置偏爱实验和行为敏化实验）发现了硝苯地平对尼古丁成瘾的预防和治疗作用；同时进一步运用脑内电生理记录技术，评价了硝苯地平治疗作用的具体脑区，为硝苯地平作为尼古丁成瘾的预防和治疗药物提供了详实而充分的数据支持。下面结合附图与实施例对本发明作进一步说明。

实验材料：c57/b6j小鼠购自中国医科大学动物中心，均为雄性，8周；尼古丁，购自glenthamlifescience公司；硝苯地平、地尔硫卓、维拉帕米，购自大连美仑生物技术有限公司。小鼠条件性位置偏爱实验箱和小鼠行为测试系统购于上海移数信息科技有限公司。

实验方法：

1.条件性位置偏爱实验：采用非偏向式cpp箱（侧板为横或竖黑白条纹，底板为条状或者洞型）进行测试。条件性位置偏爱测试时，将小鼠首先放入cpp的中间箱5分钟，之后打开中间箱的两侧箱门，小鼠自由探索15分钟，用视频记录。药物成瘾训练时，小鼠上午注射成瘾药物后立刻放入某一侧箱体内20分钟，之后取出；下午注射生理盐水后放入另一侧箱体内20分钟，之后取出；经过训练后小鼠会喜欢在给药侧停留。

2.尼古丁行为敏化动物模型：行为测试采用photocellactivitycages的行为箱，动物随着每天不断给药（每天剂量不变）自主活动会增加。

3.中脑腹侧背盖区电生理记录：通过脑定位手术在小鼠vta区进行电极定位（脑内定位（单位：毫米）：ap-3.2；ml-0.5；dv-3.7)，将电极插入进行细胞自发放电信号采集，并根据多巴胺细胞自身放电特征进行识别和分析（频率<10hz，动作电位持续时间>2.5ms）。在尼古丁条件性位置偏爱实验动物模型中第1、7天进行记录，每次记录4-6个小时，所有自发电活动都记录下来。神经元在体自发放电行为分析，采用wpi公司的在体多通道神经电生理记录分析系统进行记录和分析，bursting认定标准为：bursting中的两个动作电位间时间间隔<80毫秒，bursting最后一个动作电位与下一个动作电位间时间间隔>160毫秒。计算平均放电频率，簇状放电比率、每秒钟bursting个数、每bursting内平均动作电位个数以及burst内放电频率等。

4.尼古丁条件性位置偏爱实验动物模型构建：小鼠环境适应3天后，第1天进行条件性位置偏爱实验测试，之后2-6天连续5天上午皮下注射尼古丁0.5毫克/千克（空白对照组皮下注射生理盐水10毫升/千克；l型钙离子通道抑制剂组在注射尼古丁前10分钟腹腔内注射硝苯地平5或10毫克/千克或者地尔硫卓10或20毫克/千克或者维拉帕米10或20毫克/千克），下午注射生理盐水10毫升/千克。第7天进行条件性位置偏爱实验测试。进行戒断实验的小鼠，尼古丁成瘾阶段的2-6天只注射尼古丁或者生理盐水，之后8-12天不注射任何药物（除了l型钙离子通道抑制剂治疗组，其需注射硝苯地平5或10毫克/千克或者地尔硫卓10或20毫克/千克或者维拉帕米10或20毫克/千克后10分钟进行条件性位置偏爱测试）戒断直到条件性位置偏爱现象消失为止。进行复吸实验的小鼠（l型钙离子通道抑制剂治疗组处理与戒断实验组相同），在戒断成功后一天皮下注射尼古丁0.1毫克/千克或者空间局限小鼠5分钟，之后进行条件性位置偏爱测试。

5.尼古丁行为敏化动物模型：小鼠适应自主活动箱3天（每天60分钟），之后连续10天腹腔内注射尼古丁（0.4毫克/千克）或生理盐水（10毫升/千克），每天注射药物开始进行活动测试，每次测试60分钟，此为诱发期。之后30天戒断，每天只腹腔内注射生理盐水，每天进行活动测试，此为戒断期。之后进入表达期，尼古丁组进行腹腔内注射尼古丁，连续25天。之后进入表达后期，同样进行尼古丁腹腔内注射，连续15天。硝苯地平单独实验组，从第一天到表达后期的最后一天，每天腹腔内注射硝苯地平10毫克/千克，10分钟之后进行生理盐水注射，之后进行运动测试。硝苯地平治疗尼古丁成瘾组的小鼠，在戒断期和表达期腹腔内注射硝苯地平10毫克/千克10分钟后进行尼古丁注射，之后进行运动测试。

实验结果：

1.硝苯地平而非地尔硫卓或维拉帕米可以防止尼古丁诱发的条件性位置偏爱现象的产生。如图1所示，连续皮下注射尼古丁0.5毫克/千克5天后，动物条件性位置偏爱分数与空白对照组（连续皮下注射生理盐水5天）相比明显增高（p<0.001）。注射尼古丁前10分钟腹腔内注射硝苯地平5或者10毫克/千克明显降低了动物的条件性位置偏爱分数（5毫克：p<0.01；10毫克：p<0.001），但注射尼古丁前10分钟腹腔内注射地尔硫卓（10毫克/千克）或者维拉帕米（10毫克/千克）并不显著降低动物的条件性位置偏爱分数（p均大于0.05）。此外，单独腹腔内注射硝苯地平（5或者10毫克/千克）连续5天并不会引起条件性位置偏爱分数的变化（p均大于0.05）。数据均以均数±标准误表示，n=11。**代表p<0.01；***代表p<0.001。

2.硝苯地平而非地尔硫卓或维拉帕米可以加快尼古丁诱发的条件性位置偏爱现象的戒断过程。如图2所示，连续皮下注射尼古丁0.5毫克/千克5天后诱发出条件性位置偏爱现象，之后在戒断期，腹腔内注射硝苯地平5或者10毫克组戒断时间明显比地尔硫卓、维拉帕米以及非药物干预组短（p<0.0001）。数据均以均数±标准误表示，n=11。****代表p<0.0001。

3.硝苯地平而非地尔硫卓或维拉帕米可以防止尼古丁诱发的条件性位置偏爱现象的复吸。如图3所示，戒断期连续5天每天腹腔内注射硝苯地平10毫克/千克后，无论对于空间局限还是小剂量尼古丁注射诱发复吸，动物明显复吸率减少（p<0.05），而地尔硫卓、维拉帕米以及非药物干预组均有复吸发生（p均大于0.05）。数据均以均数±标准误表示，n=11。*代表p<0.05。

4.硝苯地平可以改变尼古丁行为敏化的表达。如图4所示，尼古丁连续10天腹腔内注射0.4毫克/千克后，自主运动明显增加（p<0.001），戒断30天后，自主运动恢复正常水平，再在表达期重新给予腹腔内注射0.4毫克/千克25天后，自主运动又重新明显增加（p<0.0001）,表达后期给予尼古丁15天，自主运动持续增加（p<0.0001）。在戒断期和表达期腹腔内注射5或者10毫克硝苯地平，有效抑制了尼古丁导致的表达期和表达后期的运动增加（5毫克，p<0.001；10毫克，p<0.0001）。空白对照组以及硝苯地平对照组，对自主运动均没有任何影响（p值均大于0.05）。数据均以均数±标准误表示，n=11。***代表p<0.001。****代表p<0.0001。

5.硝苯地平治疗组中脑腹侧背盖区多巴胺细胞放电频率明显减少。如图5所示，中脑腹侧背盖区电生理记录显示尼古丁组多巴胺细胞放电频率明显增加（p<0.01），而硝苯地平治疗组多巴胺细胞放电频率恢复正常水平（与尼古丁组相比，p<0.01）。数据均以均数±标准误表示，n=11。**代表p<0.01。

6.硝苯地平对于尼古丁成瘾的预防、治疗效果与硝苯地平的剂量有关。

7.在条件性位置偏爱实验中，使用不同的三个剂量2.5、5、10毫克/千克的硝苯地平腹腔内注射，其中2.5毫克/千克没有作用，而在剩下的5和10毫克/千克组别中，10毫克/千克的组别无论是对于预防诱发还是加快戒断以及预防复吸都有更明显的作用。

综上，本发明应用条件性位置偏爱实验、行为敏化实验和中脑多巴胺细胞电生理记录发现，硝苯地平，而非地尔硫卓或者维拉帕米，可以抑制尼古丁诱发的条件性位置偏爱现象，同时减少戒断时间，有效防止条件性位置偏爱的复发；此外，硝苯地平可以有效降低在表达期和表达后期尼古丁引起的自主运动增多，抑制了行为敏化的表达；硝苯地平可以有效抑制尼古丁导致的中脑多巴胺细胞的放电频率增加。因此，本发明首次发现了临床药物硝苯地平可通过抑制中脑多巴胺细胞的放电频率而预防尼古丁成瘾的发生，加速尼古丁成瘾的戒断过程，同时降低尼古丁复吸率，提示硝苯地平是预防和治疗尼古丁成瘾的潜在药物。

上述虽然结合附图对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。