用于灭活革兰氏阳性菌和细菌孢子的组合物及其制备和使用方法与流程

用于灭活革兰氏阳性菌和细菌孢子的组合物及其制备和使用方法
1.相关申请的交叉引用
2.本申请要求2019年7月10日提交的美国临时申请第62/695867号的优先权和利益。该申请的内容通过引用并入本文。


背景技术：

3.革兰氏阳性菌是潜在的威胁，因为它们与人类疾病和食物腐败有关。革兰氏阳性菌的某些属，例如芽孢杆菌和梭状芽孢杆菌可以形成高度抗性和休眠的结构，称为孢子。孢子独特的特性使它们成为特定工业加工食品如巴氏杀菌食品中潜在的唯一存活和生长的污染物。例如，脂环酸芽孢杆菌属孢子是果汁的巴氏杀菌中存活并能够在这种果汁的酸性ph环境中生长的唯一生物体。除了造成食物腐败，革兰氏阳性菌还可以对人类致病。单核细胞性李斯特菌、金黄色葡萄球菌和产孢菌、蜡样芽孢杆菌和肉毒梭菌是食品腐败的重要威胁。


技术实现要素：

4.本发明人已经发现，由从植物香脂树属的物种中获得的树脂制备的特定组合物通常不仅能够控制革兰氏阳性菌，而且还出人意料地能够控制这种细菌的孢子的生长。而且，与获得自香脂树属物种的树脂不同，所述树脂不适用于在食品工业中使用，因为它们给食物带来苦味，当前要求保护的组合物可用于例如控制革兰氏阳性菌，包括产孢的革兰氏阳性菌，而不带来这种味道。下面将更详细地描述这种组合物、其生产和用途。
5.已经发现了本文要求保护的组合物杀死与食物腐败有关的革兰氏阳性菌，包括革兰氏阳性病菌，例如单核细胞性李斯特菌、蜡样芽孢杆菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(mrsa)。还发现该组合物杀死孢子形式的革兰氏阳性菌。形成孢子的细菌代表了食品工业的特殊问题。土传孢子形成细菌和食品污染物之间有明显的联系。涉及的产孢菌属于严格厌氧的(“梭菌”)和需氧的(芽孢杆菌属和相关属)微生物系统发育组。已经提出了几种原因来解释为什么产孢菌变成食品工业的问题，并且大部分解释与孢子的一些共性有关：它们在土壤中无处不在；它们在常见的工业过程如巴氏杀菌中的抵抗性；它们附着于加工设备的特定孢子的黏附特性；和/或它们在有利条件下萌发和生长的能力。
6.特定土传物种的孢子和营养细胞的协同特性使它们在特定工业加工食品中成为唯一可能存活和生长的污染物。其中一些最近才受到关注，这可能是特定形成孢子的物种的孢子或营养细胞对先前假设的阻止生长(低温或低ph)或使所有活性物质失活(超高温热处理(uht)和商业灭菌)的条件或处理的耐受性、适应性或抗性增加所导致的结果。
7.形成孢子的细菌在食品工业中导致了两类问题。首先，它们可能是食源性病菌，例如芽孢杆菌和肉毒梭菌。其次，即使形成孢子的细菌自身不是病原体，它们也可能造成保质期减少或食品腐败。食品的微生物腐败通常表现为质地的变化或异味的产生。相关的实例是脂环酸芽孢杆菌的孢子，其是造成果汁和其他饮品受到污染的腐败菌属，果汁和其他饮
品由于其高含酸量而不容易被其他微生物所污染。自1967年分离出第一种脂环酸芽孢杆菌以来的50年间，脂环酸芽孢杆菌已受到全球果汁和饮料行业的重点关注。这些形成孢子的细菌可以在商业使用的巴氏灭菌过程中存活，并且可以在酸性环境下萌发。直至今日，这种细菌已从许多种果汁和饮品以及果汁和饮料生产线的几乎所有环节中分离。今天，世界范围内对安全和高质量果汁和饮品的需求持续快速增长。然而，特别是随着果汁和饮料制造商的发展，脂环酸芽孢杆菌污染已成为一个重大的问题和挑战。由脂环酸芽孢杆菌造成的果汁腐败的特征在于由愈创木酚引起的明确的药用或防腐异味，愈创木酚是该细菌的代谢副产物。
8.病原菌和腐败菌都可以出现在食品原料中，但热处理趋于显著地减少细菌量。加工后，当食品可能暴露于食品处理环境中的病原体时，大部分食品在包装、分配和最终消费前都处于再次污染的风险中。在耐寒病原体的情况下，主要是各种李斯特菌和蜡样芽孢杆菌的种的情况下，它们可能在分配和储存直到最终消费期间在食品上生长。食品中这种病原体越多，在食品消费者中的感染风险就越高。这对于即食肉类和乳制品来说是特别值得关注的问题，因为这类食物在食用前不会被使用者再次加热或加工。在这种情况下，最可能的风险来自冷藏条件下生长良好的李斯特菌属的种。
9.根据本发明的实施方案，提供了组合物，其包含(a)克罗莱奇尼克酸(crolechinic acid)、左旋哈氏豆属酸(hardwickiic acid)、考拉维酸、黄脂酸和任选的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸(7
‑
alpha
‑
acetoxyhardwickiic acid)，和(b)任选的β
‑
石竹烯(bcp)，当β
‑
石竹烯存在时，所述克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸(当存在时)加在一起与所述β
‑
石竹烯的重量比为至少1∶1。在一些实施方案中，组合物包含7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸。在一些实施方案中，组合物基本不含bcp。
10.在一些实施方案中，克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸(如果存在)加在一起与β
‑
石竹烯的重量比为至少1.1∶1、至少1.2∶1、至少1.3∶1、至少1.4∶1、至少1.5∶1、至少1.6∶1、至少1.7∶1、至少1.8∶1、至少1.9∶1、至少2∶1、至少2.1∶1、至少2.2∶1、至少2.3∶1、至少2.4∶1、至少2.5∶1、至少2.6∶1、至少2.7、至少2.8、至少2.9∶1或至少3.0∶1。
11.在一些实施方案中，克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和如果存在的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸加在一起与β
‑
石竹烯的重量比不大于100∶1。在一些实施方案中，所述克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和如果存在的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸加在一起与所述β
‑
石竹烯的重量比不大于90∶1、不大于80∶1、不大于70∶1、不大于60∶1、不大于50∶1、不大于40∶1、不大于30∶1、不大于20∶1、不大于10∶1、不大于9∶1、不大于8∶1、不大于7∶1、不大于6∶1、不大于5∶1、不大于4∶1或不大于3∶1。
12.在一些实施方案中，7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸占7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸加在一起的量的至少7重量％。在一些实施方案中，7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸占7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸加在一起的量的至少10重量％。
13.在一些实施方案中，组合物对脂环酸芽孢杆菌的孢子具有活性。
14.在一些实施方案中，组合物基本不含己烷和二氯甲烷。
15.根据本发明的实施方案，还提供了制备如上所述的组合物的方法，相对于从香脂
树属获得的苦配巴香脂树脂中的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸加在一起的浓度，所述组合物具有降低的β
‑
石竹烯(bcp)浓度，所述方法包括用水和乙醇的混合物提取从香脂树属获得的树脂，并且收集由提取获得的上部部分，从而获得组合物。在一些实施方案中，组合物对脂环酸芽孢杆菌的孢子具有活性。
16.在一些实施方案中，苦配巴香脂树脂从古巴香胶树中获得。
17.在一些实施方案中，组合物对酸土脂环酸芽胞杆菌的孢子具有活性。
18.在一些实施方案中，混合物中乙醇和水的重量比为至少1∶1。在一些实施方案中，混合物中乙醇和水的重量比为至少1.1∶1、至少1.2∶1、至少1.3∶1、至少1.4∶1、至少1.5∶1、至少1.6∶1、至少1.7∶1、至少1.8∶1、至少1.9∶1、至少2∶1、至少2.1∶1、至少2.2∶1、至少2.3∶1、至少2.4∶1、至少2.5∶1、至少2.6∶1、至少2.7∶1、至少2.8∶1、至少2.9∶1或至少3∶1。
19.在一些实施方案中，混合物中乙醇和水的重量比为不大于4∶1、不大于3.9∶1、不大于3.8∶1、不大于3.7∶1、不大于3.6∶1、不大于3.5∶1、不大于3.4∶1、不大于3.3∶1、不大于3.2∶1或不大于3.1∶1。
20.在一些实施方案中，乙醇和水的混合物含有浓度为0.01摩尔至0.125摩尔的naoh。在一些实施方案中，naoh的浓度为至少0.02m、至少0.03m、至少0.04m、至少0.05m、至少0.06m、至少0.07m、至少0.08m、至少0.09m、至少1.0m、至少1.1m或至少1.2m。
21.在一些实施方案中，乙醇和水的混合物含有浓度为0.01摩尔至0.25摩尔的hcl。在一些实施方案中，hcl的浓度为至少0.1摩尔、至少0.2摩尔、至少0.3摩尔、至少0.4摩尔、至少0.5摩尔、至少0.6摩尔、至少0.7摩尔、至少0.8摩尔、至少0.9摩尔、至少1.0摩尔、至少1.1摩尔、至少1.2摩尔或至少0.125摩尔。
22.在一些实施方案中，乙醇和水的混合物与苦配巴香脂树脂的重量比为至少3∶1。
23.在一些实施方案中，乙醇和水的混合物与苦配巴香脂树脂的重量比为至少3.5∶1、至少4∶1、至少4.5∶1、至少5∶1、至少5.5∶1或至少6∶1。
24.在一些实施方案中，方法还包括将至少一些水和乙醇从收集的上部部分中除去。
25.在一些实施方案中，上部部分含有克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和任选的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸，并且在所述上部部分中，所述7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸(如果存在)、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸加在一起与所述bcp的重量比为至少1∶1。在一些实施方案中，在所述上部部分中，所述7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸加在一起与所述bcp的重量比为至少1.1∶1、至少1.2∶1、至少1.3∶1、至少1.4∶1、至少1.5∶1、至少1.6∶1、至少1.7∶1、至少1.8∶1、至少1.9∶1、至少2∶1、至少2.1∶1、至少2.2∶1、至少2.3∶1、至少2.4∶1或至少2.5∶1。
26.在一些实施方案中，方法还包括从存在于上部部分的二萜中通过色谱法分离残留bcp并收集二萜。
27.根据本发明的实施方案，还提供了制备组合物的方法，所述组合物对脂环酸芽胞杆菌的孢子具有活性，并且相对于由香脂树属获得的苦配巴香脂树脂中β
‑
石竹烯(bcp)的浓度具有减少的bcp浓度，方法包括用水和乙醇的混合物从香脂树属中提取树脂，并且收集从提取中获得的上部部分。在本上下文中，术语“对脂环酸芽胞杆菌的孢子具有活性”表示当以5μg/ml的浓度添加到按照根据epa标准180.1(1993年8月公布)测量的浊度不大于1浊度单位(ntu)和含有104个脂环酸芽胞杆菌孢子/ml的苹果汁样品中，并且之后保持37℃时，
组合物阻止了脂环酸芽胞杆菌再生长达至少四天，其是通过在600nm处的光密度测量确定的。
28.在一些实施方案中，苦配巴香脂树脂从古巴香胶树中获得。
29.在一些实施方案中，组合物对酸土脂环酸芽孢杆菌的孢子具有活性。
30.在一些实施方案中，混合物中乙醇和水的重量比为至少1∶1。在一些实施方案中，混合物中乙醇和水的重量比为至少1.1∶1、至少1.2∶1、至少1.3∶1、至少1.4∶1、至少1.5∶1、至少1.6∶1、至少1.7∶1、至少1.8∶1、至少1.9∶1、至少2∶1、至少2.1∶1、至少2.2∶1、至少2.3∶1、至少2.4∶1、至少2.5∶1、至少2.6∶1、至少2.7∶1、至少2.8∶1、至少2.9∶1或至少3∶1。
31.在一些实施方案中，混合物中乙醇和水的重量比为不大于4∶1、不大于3.9∶1、不大于3.8∶1、不大于3.7∶1、不大于3.6∶1、不大于3.5∶1、不大于3.4∶1、不大于3.3∶1、不大于3.2∶1或不大于3.1∶1。
32.在一些实施方案中，乙醇和水的混合物含有浓度为0.01摩尔至0.125摩尔的naoh。在一些实施方案中，naoh的浓度为至少0.02m、至少0.03m、至少0.04m、至少0.05m、至少0.06m、至少0.07m、至少0.08m、至少0.09m、至少1.0m、至少1.1m或至少1.2m。
33.在一些实施方案中，乙醇和水的混合物含有浓度为0.01摩尔至0.25摩尔的hcl。在一些实施方案中，hcl的浓度为至少0.1摩尔、至少0.2摩尔、至少0.3摩尔、至少0.4摩尔、至少0.5摩尔、至少0.6摩尔、至少0.7摩尔、至少0.8摩尔、至少0.9摩尔、至少1.0摩尔、至少1.1摩尔、至少1.2摩尔或至少0.125摩尔。
34.在一些实施方案中，乙醇和水的混合物与苦配巴香脂树脂的重量比为至少3∶1。
35.在一些实施方案中，乙醇和水的混合物与苦配巴香脂树脂的重量比为至少3.5∶1、至少4∶1、至少4.5∶1、至少5∶1、至少5.5∶1或至少6∶1。
36.在一些实施方案中，方法还包括将至少一些水和乙醇从收集的上部部分中除去。
37.在一些实施方案中，上部部分含有克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和任选的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸，并且在所述上部部分中，所述7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸(如果存在)、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸加在一起与所述bcp的重量比为至少1∶1。在一些实施方案中，在所述上部部分中，所述7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸(如果存在)、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸加在一起与所述bcp的重量比为至少1.1∶1、至少1.2∶1、至少1.3∶1、至少1.4∶1、至少1.5∶1、至少1.6∶1、至少1.7∶1、至少1.8∶1、至少1.9∶1、至少2∶1、至少2.1∶1、至少2.2∶1、至少2.3∶1、至少2.4∶1或至少2.5∶1。
38.在一些实施方案中，方法还包括从存在于上部部分的二萜中通过色谱法分离残留的bcp并收集二萜。
39.根据本发明的实施方案，还提供了通过如本文所述的提取制备的组合物，即通过包括用水和乙醇的混合物提取由香脂树属获得的树脂，并收集从提取中获得的上部部分的方法。在一些实施方案中，组合物对脂环酸芽孢杆菌的孢子具有活性。在一些实施方案中，组合物相对于由香脂树属获得的苦配巴香脂树脂中β
‑
石竹烯(bcp)浓度具有减少的bcp浓度。在一些实施方案中，苦配巴香脂树脂从古巴香胶树中获得。
40.在一些实施方案中，组合物对酸土脂环酸芽胞杆菌的孢子具有活性。
41.在一些实施方案中，混合物中乙醇和水的重量比为至少1∶1。在一些实施方案中，
混合物中乙醇和水的重量比为至少1.1∶1、至少1.2∶1、至少1.3∶1、至少1.4∶1、至少1.5∶1、至少1.6∶1、至少1.7∶1、至少1.8∶1、至少1.9∶1、至少2∶1、至少2.1∶1、至少2.2∶1、至少2.3∶1、至少2.4∶1、至少2.5∶1、至少2.6∶1、至少2.7∶1、至少2.8∶1、至少2.9∶1或至少3∶1。
42.在一些实施方案中，混合物中乙醇和水的重量比不大于4∶1、不大于3.9∶1、不大于3.8∶1、不大于3.7∶1、不大于3.6∶1、不大于3.5∶1、不大于3.4∶1、不大于3.3∶1、不大于3.2∶1或不大于3.1∶1。
43.在一些实施方案中，乙醇和水的混合物含有浓度为0.01摩尔至0.125摩尔的naoh。在一些实施方案中，naoh的浓度为至少0.02m、至少0.03m、至少0.04m、至少0.05m、至少0.06m、至少0.07m、至少0.08m、至少0.09m、至少1.0m、至少1.1m或至少1.2m。
44.在一些实施方案中，乙醇和水的混合物含有浓度为0.01摩尔至0.25摩尔的hcl。在一些实施方案中，hcl的浓度为至少0.1摩尔、至少0.2摩尔、至少0.3摩尔、至少0.4摩尔、至少0.5摩尔、至少0.6摩尔、至少0.7摩尔、至少0.8摩尔、至少0.9摩尔、至少1.0摩尔、至少1.1摩尔、至少1.2摩尔或至少0.125摩尔。
45.在一些实施方案中，乙醇和水的混合物与苦配巴香脂树脂的重量比为至少3∶1。
46.在一些实施方案中，乙醇和水的混合物与苦配巴香脂树脂的重量比为至少3.5∶1、至少4∶1、至少4.5∶1、至少5∶1、至少5.5∶1或至少6∶1。
47.在一些实施方案中，方法还包括将至少一些水和乙醇从收集的上部部分中除去。
48.在一些实施方案中，上部部分含有克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和任选的7
‑
α
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乙酰氧基哈氏豆属酸，并且在所述上部部分中，所述7
‑
α
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乙酰氧基哈氏豆属酸(如果存在)、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸加在一起与所述bcp的重量比为至少1∶1。在一些实施方案中，在所述上部部分中，所述7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸(如果存在)、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸加在一起与所述bcp的重量比为至少1.1∶1、至少1.2∶1、至少1.3∶1、至少1.4∶1、至少1.5∶1、至少1.6∶1、至少1.7∶1、至少1.8∶1、至少1.9∶1、至少2∶1、至少2.1∶1、至少2.2∶1、至少2.3∶1、至少2.4∶1或至少2.5∶1。
49.在一些实施方案中，方法还包括从存在于上部部分的二萜中通过色谱法分离残留的bcp并收集二萜。
50.根据本发明的实施方案，还提供了包括向饮料中添加组合物的方法，所述组合物包括(a)克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和任选的7
‑
α
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乙酰氧基哈氏豆属酸，以及(b)任选的β
‑
石竹烯，如本文所述。在一些实施方案中，如根据1993年8月公布的美国环境保护署方法第180.1号所测量的，饮料的浊度不大于5浊度单位(ntu)。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于4ntu。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于3ntu。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于2ntu。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于1ntu。在一些实施方案中，方法用于增强饮料巴氏杀菌的功效。在一些实施方案中，组合物对脂环酸芽孢杆菌的孢子具有活性。在一些实施方案中，组合物对酸土脂环酸芽胞杆菌的孢子具有活性。在一些实施方案中，组合物相对于由香脂树属获得的苦配巴香脂树脂中β
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石竹烯(bcp)的浓度具有减少的bcp浓度。在一些实施方案中，苦配巴香脂树脂来自古巴香胶树。在一些实施方案中，当β
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石竹烯存在时，7
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α
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乙酰氧基哈氏豆属酸(如果存在)、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸加在一起与β
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石竹烯的重量比为至少1∶1。在一些实施方案
中，将组合物以每毫升饮料至少1.25微克组合物的浓度添加到饮料中。在一些实施方案中，将组合物以每毫升饮料至少2.5微克组合物的浓度添加到饮料中。在一些实施方案中，将组合物以每毫升饮料至少3.75微克组合物的浓度添加到饮料中。在一些实施方案中，将组合物以每毫升饮料至少5.0微克组合物的浓度添加到饮料中。在一些实施方案中，将组合物以每毫升饮料不大于5.0微克组合物的浓度添加到饮料中。在一些实施方案中，使组合物与饮料接触至少两天、至少三天、至少四天或至少五天。在一些实施方案中，将组合物在巴氏杀菌前添加到饮料中。在一些实施方案中，将组合物在巴氏杀菌后添加到饮料中。在一些实施方案中，饮料是酸性的。在一些实施方案中，饮料的ph为3至6。在一些实施方案中，饮料是果汁。在一些实施方案中，果汁是苹果汁。在一些实施方案中，果汁是葡萄汁。在一些实施方案中，果汁是桃汁。在一些实施方案中，果汁是西瓜汁。在一些实施方案中，果汁是澄清的橙汁。在一些实施方案中，组合物是如上所述的组合物。在一些实施方案中，组合物通过上文所述的方法制备。
51.根据本发明的实施方案，还提供了包括将组合物添加到饮料中的方法，所述组合物的制备是通过用水和乙醇的混合物提取香脂树属树脂，并收集从提取中获得的上部部分来实现的。在一些实施方案中，如根据1993年8月公布的美国环境保护署方法第180.1号所测量的，饮料的浊度不大于5浊度单位(ntu)。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于4ntu。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于3ntu。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于2ntu。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于1ntu。在一些实施方案中，方法用于增强饮料巴氏杀菌的功效。在一些实施方案中，方法用于控制饮料中革兰氏阳性菌，包括革兰氏阳性菌的孢子的生长。在一些实施方案中，组合物对酸土脂环酸芽孢杆菌的孢子具有活性。在一些实施方案中，组合物相对于由香脂树属获得的苦配巴香脂树脂中β
‑
石竹烯(bcp)的浓度具有减少的bcp浓度。在一些实施方案中，苦配巴香脂树脂来自古巴香胶树。在一些实施方案中，组合物包含(a)克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和任选的7
‑
α
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乙酰氧基哈氏豆属酸，以及(b)任选的β
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石竹烯。在一些实施方案中，当β
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石竹烯存在时，7
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α
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乙酰氧基哈氏豆属酸(如果存在)、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸加在一起与β
‑
石竹烯的重量比为至少1∶1。在一些实施方案中，将组合物以每毫升饮料至少1.25微克组合物的浓度添加到饮料中。在一些实施方案中，将组合物以每毫升饮料至少2.5微克组合物的浓度添加到饮料中。在一些实施方案中，将组合物以每毫升饮料至少3.75微克组合物的浓度添加到饮料中。在一些实施方案中，将组合物以每毫升饮料至少5.0微克组合物的浓度添加到饮料中。在一些实施方案中，将组合物以每毫升饮料不大于5.0微克组合物的浓度添加到饮料中。在一些实施方案中，使组合物接触饮料至少两天、至少三天、至少四天或至少五天。在一些实施方案中，将组合物在巴氏杀菌前添加到饮料中。在一些实施方案中，将组合物在巴氏杀菌后添加到饮料中。在一些实施方案中，饮料是酸性的。在一些实施方案中，饮料是果汁。在一些实施方案中，果汁是苹果汁。在一些实施方案中，果汁是葡萄汁。在一些实施方案中，果汁是桃汁。在一些实施方案中，果汁是西瓜汁。在一些实施方案中，果汁是澄清的橙汁。在一些实施方案中，组合物是如上所述的组合物。在一些实施方案中，组合物通过上文所述的方法制备。
52.根据本发明的实施方案，还提供了在容器中的饮料，所述饮料含有组合物，所述组合物包含(a)克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和任选的7
‑
α
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乙酰氧基
哈氏豆属酸，以及(b)任选的β
‑
石竹烯，如本文所述。在一些实施方案中，饮料是澄清的饮料。在一些实施方案中，如根据1993年8月公布的美国环境保护署方法第180.1号所测量的，饮料的浊度不大于5浊度单位(ntu)。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于4ntu。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于3ntu。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于2ntu。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于1ntu。在一些实施方案中，组合物以每毫升饮料至少1.25微克组合物的浓度存在于饮料中。在一些实施方案中，组合物以每毫升饮料至少2.5微克组合物的浓度存在于饮料中。在一些实施方案中，组合物以每毫升饮料至少3.75微克组合物的浓度存在于饮料中。在一些实施方案中，组合物以每毫升饮料至少5.0微克组合物的浓度存在于饮料中。在一些实施方案中，组合物以每毫升饮料不大于5.0微克组合物的浓度存在于饮料中。在一些实施方案中，饮料是酸性的。在一些实施方案中，饮料是果汁。在一些实施方案中，果汁是苹果汁。在一些实施方案中，果汁是葡萄汁。在一些实施方案中，果汁是桃汁。在一些实施方案中，果汁是西瓜汁。在一些实施方案中，果汁是澄清的橙汁。在一些实施方案中，组合物是如上所述的组合物。在一些实施方案中，组合物通过上文所述的方法制备。
53.根据本发明的实施方案，还提供了在容器中的饮料，所述饮料含有组合物，所述组合物通过用水和乙醇的混合物提取香脂树属树脂，并收集从提取中获得的上部部分以获得组合物来制备。在一些实施方案中，饮料是澄清的饮料。在一些实施方案中，如根据1993年8月公布的美国环境保护署方法第180.1号所测量的，饮料的浊度不大于5浊度单位(ntu)。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于4ntu。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于3ntu。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于2ntu。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于1ntu。在一些实施方案中，组合物包含(a)克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和任选的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸，以及(b)任选的β
‑
石竹烯，如本文所述。在一些实施方案中，组合物以每毫升饮料至少1.25微克组合物的浓度存在于饮料中。在一些实施方案中，组合物以每毫升饮料至少2.5微克组合物的浓度存在于饮料中。在一些实施方案中，组合物以每毫升饮料至少3.75微克组合物的浓度存在于饮料中。在一些实施方案中，组合物以每毫升饮料至少5.0微克组合物的浓度存在于饮料中。在一些实施方案中，组合物以每毫升饮料不大于5.0微克组合物的浓度存在于饮料中。在一些实施方案中，饮料是酸性的。在一些实施方案中，饮料是果汁。在一些实施方案中，果汁是苹果汁。在一些实施方案中，果汁是葡萄汁。在一些实施方案中，果汁是桃汁。在一些实施方案中，果汁是西瓜汁。在一些实施方案中，果汁是澄清的橙汁。在一些实施方案中，组合物是如上所述的组合物。在一些实施方案中，组合物通过上文所述的方法制备。
54.根据本发明的实施方案，还提供了控制饮料中革兰氏阳性菌，包括革兰氏阳性菌孢子的生长的方法，其包括将组合物添加到饮料中，所述组合物包含(a)克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和任选的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸，以及(b)任选的β
‑
石竹烯，如本文所述。在一些实施方案中，饮料是澄清的饮料。在一些实施方案中，如根据1993年8月公布的美国环境保护署方法第180.1号所测量的，饮料的浊度不大于5浊度单位(ntu)。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于4ntu。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于3ntu。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于2ntu。在一些实施方案中，饮料的浊度不大于1ntu。在一些实施方案中，将组合物以每毫升饮料至少1.25微克组合物的浓度添加到饮料中。在一些实施方案中，将组合物以每毫升饮料至少2.5微克组合物的浓度添加到饮料中。
在一些实施方案中，将组合物以每毫升饮料至少3.75微克组合物的浓度添加到饮料中。在一些实施方案中，将组合物以每毫升饮料至少5.0微克组合物的浓度添加到饮料中。在一些实施方案中，将组合物以每毫升饮料不大于5.0微克组合物的浓度添加到饮料中。在一些实施方案中，使组合物与饮料接触至少两天、至少三天、至少四天或至少五天。在一些实施方案中，将组合物在巴氏杀菌前添加到饮料中。在一些实施方案中，将组合物在巴氏杀菌后添加到饮料中。在一些实施方案中，饮料是酸性的。在一些实施方案中，饮料是果汁。在一些实施方案中，果汁是苹果汁。在一些实施方案中，果汁是葡萄汁。在一些实施方案中，果汁是桃汁。在一些实施方案中，果汁是西瓜汁。在一些实施方案中，果汁是澄清的橙汁。在一些实施方案中，果汁是西瓜汁。在一些实施方案中，组合物是如上所述的组合物。在一些实施方案中，组合物通过上文所述的方法制备。
55.附图的简要说明
56.结合附图将更好地理解本发明的实施方案，其中：
57.图1a显示了粗苦配巴香脂树脂和从其中获得的上部提取物的hplc洗脱曲线；图1b显示了从其中获得的上部和下部提取物的hplc洗脱曲线；
58.图2显示了从苦配巴香脂树脂中获得的提取物的hplc洗脱曲线；
59.图3显示了在增加的ph值下从苦配巴香脂树脂中获得的提取物的hplc洗脱曲线；
60.图4显示了在降低的ph值下从苦配巴香脂树脂中获得的提取物的hplc洗脱曲线；
61.图5显示从苦配巴香脂树脂中获得的提取物的hplc洗脱曲线，其具有标记为1至7的七个主峰；
62.图6显示了对应于图5中峰3的物质的质谱图；
63.图7显示了甲基化后对应于图5中峰3的物质的质谱图；
64.图8显示了甲基化后对应于图5中峰4的一些物质的质谱图；
65.图9显示了甲基化后对应于图5中峰4的一些物质的质谱图；
66.图10显示了甲基化后对应于图5中峰6的物质的质谱图；
67.图11显示了甲基化后对应于图5中峰7的物质的质谱图；
68.图12显示了甲基化后对应于图5中峰7的物质的质谱图；
69.图13显示了部分1对四种形成孢子的细菌菌株生长的影响，如通过在600nm处的光密度测量的；
70.图14显示了部分1对商业苹果汁中酸土脂环酸芽胞杆菌孢子的影响，如通过在600nm处的光密度测量的；
71.图15显示了部分1对脑心浸液培养基中单核细胞性李斯特菌菌株dp
‑
l861的影响，如通过在600nm处的光密度测量的；以及
72.图16显示了从粗苦配巴香脂树脂的不同来源中获得的上部提取物的hplc洗脱曲线。
具体实施方式
73.如上所述，根据本发明的实施方案，提供了制备组合物的方法，所述组合物对脂环酸芽孢杆菌的孢子具有活性，并且相对于从香脂树属获得的苦配巴香脂树脂具有降低的β
‑
石竹烯浓度。该方法包括用水和乙醇的混合物提取从香脂树属中获得的树脂。通常乙醇和
水的混合物将含有50重量％至80重量％的乙醇，并且每体积香脂树属树脂使用一至十体积的混合物。下面提供了这种提取的实施例。当允许相有足够的时间分离时(通常约20分钟)，会产生两个部分，上部部分和下部部分。已经发现有时在本文中称为“部分1”的上部部分杀死革兰氏阳性菌，包括与食物有关的细菌病原体，例如单核细胞性李斯特菌、蜡样芽孢杆菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，以及杀死孢子形式的细菌。
74.详见下文，对组分1的分析显示，它含有五种不同的抗菌二萜化合物：7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸。这表明任何细菌产生对部分1的抗性的可能性极其低。另外，发现部分1耐热，即使在121℃下热处理15分钟仍保持活性。
75.由于这种耐热性，目前列举的组合物可以在巴氏杀菌之前添加到果汁和其他澄清的饮料中，以避免巴氏杀菌后存活的孢子长出，尽管在巴氏杀菌之后添加是可能的。已经发现将组合物混合在饮料中有助于组合物的功效，并且预期当在工业规模上使用时，无论组合物是以连续的方式添加到饮料中，例如当饮料通过导管时，还是组合物是分批添加的，将使用合适的混合方式。经常，当在工业规模上制造饮料时，将饮料浓缩物在水中混合，有时与另外的成分混合，然后巴氏灭菌。根据本发明的实施方案的组合物可以在混合相的过程中添加到饮料中，使得所述组合物混合到饮料中；为了本目的，在此阶段添加组合物构成将组合物添加到饮料中，并且所得混合物构成已经添加了组合物的饮料。还应当理解，将组合物添加到大量饮料中，例如添加到含有上百升甚至上千升饮料的大桶中，或可以将它添加到盛装饮料的单个容器中，例如添加到包括例如2000ml、1000ml、500ml、330ml或250ml饮料的瓶子、纸盒或其他包装中。
76.为了本目的，当涉及澄清的饮料时，意味着(a)饮料的浊度不大于3浊度单位(ntu)，如根据1993年8月公布的美国环境保护署方法第180.1号所测的，其内容通过引用整体并入本文。除了澄清的果汁如澄清苹果汁、澄清葡萄汁、澄清桃汁、澄清西瓜汁之外，澄清的饮料包括例如满足浊度标准的冰茶和目前在以色列市场上作为“果水”销售的甜饮料。这些饮料通常是酸性的，并且含有糖，例如果糖，其可以作为细菌的营养物。因此，这种饮料的实例具有94％的水、果糖、调味剂、柠檬酸钠和食用酸，如磷酸和柠檬酸。
77.以下实施例是说明了本发明的实施方案。
78.实施例1：来自古巴香胶树的油的液
‑
液提取
79.苦配巴香脂树脂(有时也称为苦配巴油)是由属于香脂树属的树木的树干渗出而产生的。该树脂有特有的香脂气味和芳香、苦涩、刺鼻的味道。药理研究表明，苦配巴香脂树脂具有抗菌活性。该树脂主要由贡献其特有的气味和味道的倍半萜烯和具有抗微生物活性的二萜组成。倍半萜烯，β
‑
石竹烯，是苦配巴香脂树脂中最丰富的分子，约占树脂重量的40％。本实施例使用了从生长在巴西北部阿克里(ac)、亚马孙(am)、帕拉(pa)和隆多尼亚(ro)等州的古巴香胶树中获得的树脂。
80.以乙醇/水与苦配巴香脂树脂为5∶1的重量比，使75％乙醇的水溶液的混合物与从古巴香胶树中获得的粗苦配巴香脂树脂混合20分钟。使得到的混合物静置，直到形成两个明显的相；通常2小时至12小时是足够的。下部相具有类似于粗苦配巴油的黄色，并且上部相(下文称为“部分1”)是澄清和无色的。如将在下面说明的，相对于粗树脂，部分1富含二萜，含有相对少量的倍半萜烯。从部分1中除去乙醇和水显示从使用的每克粗树脂中回收了
约250mg的物质。
81.使用放大程序也获得了类似结果：使用5升水中的75％乙醇来提取1000g古巴香胶树树脂，通过使液体混合30分钟，然后使它们沉淀几小时以实现相分离。从上部相中除去溶剂，产生25g物质。
82.使用从其他香脂树属来源中获得的苦配巴香脂树脂获得了类似结果。
83.实施例2：
84.使用dionex ultimate 3000系统(thermo scientific)和phenomenex c
‑
18(4.6x25 mm)luna柱，对粗苦配巴香脂树脂的部分1和下部部分(10mg/ml)的样品分别进行了反相高效液相色谱(rp
‑
hplc)分析。样品溶于具有1％磷酸的90％乙腈的水溶液中，并以1ml/分钟的流速注射。柱的温度为22℃，检测在210nm处进行。用于hplc分析的最终条件如下：
[0085][0086]
图1所示的结果显示，相对于粗树脂和相对于下部部分，部分1富含在前20分钟内洗脱的物质，之后洗脱的物质较少。在本图和所有其他显示洗脱曲线的图中，轴上的数字表示以分钟为单位的时间。
[0087]
上述在比例增大的提取物中获得的物质的洗脱曲线基本相同，如图2所示。
[0088]
图16显示了在从其他香脂树属物种的树脂中提取后，在用于古巴香胶树的相同提取条件和hplc条件下获得的上部相的hplc洗脱曲线。
[0089]
实施例3：ph的作用
[0090]
发现在实施例2所述条件下，通过添加naoh，浓度最高为0.125摩尔naoh提高提取混合物的ph，增加了部分1的产率，同时保持了类似的rp
‑
hplc洗脱曲线，如图3所示。
[0091]
如图4所示，如在实施例2所述条件下获得的rp
‑
hplc洗脱曲线所示，通过添加hcl，浓度最高为0.25摩尔hcl降低提取混合物的ph值也增加了部分1的产率，并显著降低了其中β
‑
石竹烯的存在。
[0092]
实施例4：部分1的主要组分鉴定
[0093]
部分1的七个主要组分(见图5)鉴定如下：
[0094]
首先，使用dionex ultimate 3000系统和phenomenex c
‑
18(10x250mm)luna柱，通过半制备rp
‑
hplc从部分1中收集了一定量的每种组分。每种样品溶于具有0.05％甲酸的90％乙腈的水溶液中，并以5ml/分钟的流速注射。柱的温度为22℃，检测在210nm处进行。用于半制备hplc的最终条件如下：
[0095][0096]
然后，如实施例2中所述，通过rp
‑
hplc对每个收集的部分进行纯化。如下所述，测试七个部分对酸土脂环酸芽胞杆菌的孢子的活性。然后使用质谱和核磁共振(nmr)鉴定四个最具活性的这些部分中的化合物，如下所示：
[0097]
峰3：对分离的化合物进行了质谱分析(ms)，其显示主要组分的质荷比(m/z)为397.15[m+na]+(见图6)。根据准确的质量，374.22g/摩尔，预测分子式为c
22
h
30
o6。
[0098]
将化合物用三甲基甲硅烷基重氮甲烷甲基化后(tms
‑
重氮甲烷，描述于hashimoto等人，chem.pharm.bull，1981，29，1475
‑
1478)，对甲基化的化合物进行气相色谱分析
‑
ms(gc
‑
ms)。ms/ms裂解模式分析显示了m/z为388.22的小峰(对应于甲基化的分子)和m/z为346.21的子峰(见图7)。
[0099]
游离酸的1h
‑
13
c和二维核磁共振谱(2d
‑
nmr)的分析(见下表，其显示了
13
c
‑
nmr的结果)，结果确定了分子结构。发现分离的化合物是7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸。
[0100][0101]
峰4：
[0102]
用tms
‑
重氮甲烷使该部分中的物质甲基化。甲基化物质的gc
‑
ms分析(下文所述条件，适用于本实施例和本文的其他实施例)显示，该分离的hplc峰实际上含有两种化合物。gc
‑
ms色谱图中的第一个峰(保留时间26.9分钟)具有以下碎裂模式：m/z 332、273、237、205、177、96(见图8)；这种碎裂模式与克罗莱奇尼克酸的甲酯一致。第二个峰在27.1分钟时检测到，并显示以下碎裂模式：m/z 330、283、235、203、139、96(见图9)。通过与国家标准与技术研究所数据库中的谱图进行比较，该化合物被鉴定为左旋哈氏豆属酸甲酯，即左旋哈氏豆属酸的甲酯。另外，根据两种相应甲酯的准确质量332.2346g/摩尔和330.2189g/摩尔，
预测甲基化的化合物的分子式分别为c
21
h
32
o3和c
21
h
30
o3。通过1h、
13
c和2d
‑
nmr确认游离酸的预测结构，参见紧接其后的表，该表提供了约3∶7摩尔比的克罗莱奇尼克酸与左旋哈氏豆属酸的混合物的数据。
[0103][0104]
因此属于峰4的分离部分含有比分别为约1∶2的克罗莱奇尼克酸和左旋哈氏豆属酸的混合物。
[0105]
气相色谱：agilent gc 7890b，样品入口gc(注射源pal取样器，进样量1微升)，烘箱温度初始为50℃，保持时间3分钟，以10℃/分钟升高至280℃，保持时间10分钟，以20℃/分钟升高至300℃，保持时间7分钟，ss入口模式分流，载气氦气，加热器250℃，分流比10∶1，分流流速10ml/分钟，传输管线温度280℃，agilent db
‑
5ms duraguard 30m x 250微米x 0.25微米(+10m保护)，流速1ml/分钟。
[0106]
质谱分析：agilent 7200q
‑
tof光谱仪，电离模式ei，源温度230℃，ei能量70ev，四极温度150℃，溶剂延迟5分钟，质量范围40amu至700amu，采集速率5个谱/秒，阈值100个计数。
[0107]
峰6：
[0108]
使用tms
‑
重氮甲烷使对应于峰6的部分甲基化。甲基化的化合物的gc
‑
ms分析产生了ms碎裂模式，其显示m/z 318处的分子离子对应于式c
21
h
34
o2(见图10)。未甲基化的化合物的1h
‑
13
c和2d
‑
nmr谱的分析(见下表)，并与文献(pacheco,molecules 2009,14(3),第1245至1262页；salah,j.agr.&food chem.2003,51(26),第7607至7610页)中报导的值进行比较，表明分离的化合物是考拉维酸。
[0109][0110]
峰7：
[0111]
使用tms
‑
重氮甲烷使对应于峰7的部分甲基化。甲基化的化合物的gc
‑
ms分析产生ms碎裂模式，显示m/z 318.25处的分子离子(见图11)，表明分子式为c
21
h
34
o2。通过将碎裂模式与nist数据进行比较，确定其对应于黄脂酸甲酯，即黄脂酸的甲酯。这个结果被液相色谱
‑
质谱所证实。裂解模式显示m/z 607的主峰，对应于黄脂酸的去质子化的二聚体(见图12)。
[0112]
实施例5：苦配巴香脂树脂原料与部分1中组分的相对量的比较
[0113]
使用如上所述的分析rp
‑
hplc，并使用chromeleon 7.0软件(thermo fisher scientific)来计算峰的曲线下面积，发现了以上所列五种酸中每一种和β
‑
石竹烯的以下相对量，但应理解，这些数字仅提供了这六种组分相对量的近似值：
[0114]
化合物粗苦配巴香脂树脂％部分1的％7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸1.023.65左旋哈氏豆属酸+克罗莱奇尼克酸2.796.03考拉维酸4.146.89黄脂酸9.0715.51β
‑
石竹烯33.9412.58
[0115]
应当理解，鉴于本公开，rp
‑
hplc可用于测定香脂树属树脂的给定样品用于提取以获得本文所述组合物的适用性。
[0116]
实施例6：测试实施例4中收集的部分
[0117]
通过在苹果汁中与酸土脂环酸芽胞杆菌(jcm目录编号21547，iam培养物保藏中心第15086号)孵育下表中所示的时间，测试实施例4中收集的部分以及部分1和目前在工业中常用的防腐剂乳酸链球菌素的活性。最小抑制浓度(mic)通过在600nm处的光密度测量和菌落形成单位计数(cfu)来测定，如下所示：在37℃培养4天后，以10倍增量(10倍、100倍、1000
倍等)连续稀释果汁样品并铺在马铃薯葡萄糖琼脂(pda)上。将平板在45℃下孵育至少48小时，对菌落计数以测定cfu/ml。所发现的mic如表中所示。
[0118][0119]
实施例7
[0120]
对四种形成孢子的细菌菌株测试部分1：蜡状芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌(py79)。通过将这些菌株的孢子(104个孢子/ml)接种于37℃的luria
‑
bertani(lb)液体培养基中而触发复苏。一小时后，将部分1以每1毫升的液体培养基中5μg部分1的浓度添加。光密度为600nm(od600)时的吸光度代表生长。可以在图13中看出，与未经处理的孢子(对照)相比，如通过降低od600所示，经处理的孢子被部分1杀死。
[0121]
实施例8
[0122]
在商业苹果汁中对部分1进行了针对酸土脂环酸芽胞杆菌孢子(jcm21547)的测试。向果汁补充浓度为5μg/ml的部分1，加入104个孢子/ml进行污染，并在37℃下孵育。如通过在七天内测量od600所示，部分1阻断了酸土脂环酸芽胞杆菌孢子生长，参见图14。
[0123]
相比之下，仅在20微克/ml的浓度下，衍生自部分1的粗苦配巴香脂树脂达到了相似的活性水平。
[0124]
对图16所示的部分进行类似测试，发现所有部分都对酸土脂环酸芽胞杆菌具有活性。
[0125]
还进行了部分1对其他澄清饮料中酸土脂环酸芽胞杆菌的活性的测试，并发现具有活性。
[0126]
实施例9
[0127]
在4℃的脑心浸液培养基中，针对单核细胞性李斯特菌菌株dp
‑
l861测试部分1。将培养物稀释至0.05的od600，用浓度为15μg/ml的部分1处理，并在4℃下孵育7天。如通过od600测量所测定的，部分1阻断了冷藏温度下单核细胞性李斯特菌的生长，参见图15。
[0128]
根据本发明的概念1，因此提供了组合物，其包含(a)克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和任选的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸，和(b)任选的β
‑
石竹烯(bcp)，当β
‑
石竹烯存在时，所述克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和如果存在的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸加在一起与所述β
‑
石竹烯的重量比为至少1∶1。
[0129]
发明构思2。发明构思1的组合物，其包含7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸。
[0130]
发明构思3。发明构思1或2的组合物，其基本上不含bcp。
[0131]
发明构思4。发明构思1至3中任一项的组合物，其中克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和如果存在的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸加在一起与β
‑
石竹烯的重量比为至少1.1∶1、至少1.2∶1、至少1.3∶1、至少1.4∶1、至少1.5∶1、至少1.6∶1、至少1.7∶1、
至少1.8∶1、至少1.9∶1、至少2∶1、至少2.1∶1、至少2.2∶1、至少2.3∶1、至少2.4∶1、至少2.5∶1、至少2.6∶1、至少2.7、至少2.8、至少2.9∶1或至少3.0∶1。
[0132]
发明构思5。发明构思1至4中任一项的组合物，其中克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和如果存在的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸加在一起与β
‑
石竹烯的重量比不大于100∶1。
[0133]
发明构思6。发明构思5的组合物，其中克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和如果存在的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸加在一起与β
‑
石竹烯的重量比不大于90∶1、不大于80∶1、不大于70∶1、不大于60∶1、不大于50∶1、不大于40∶1、不大于30∶1、不大于20∶1、不大于10∶1、不大于9∶1、不大于8∶1、不大于7∶1、不大于6∶1、不大于5∶1、不大于4∶1或不大于3∶1。
[0134]
发明构思7。发明构思1至6中任一项的组合物，其中7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸占7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸加在一起的量的至少7重量％。
[0135]
发明构思8。发明构思7的组合物，其中7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸占7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸加在一起的量的至少10重量％。
[0136]
发明构思9。发明构思1至8中任一项的组合物，其中组合物对脂环酸芽胞杆菌的孢子有活性。
[0137]
发明构思10。发明构思1至9中任一项的组合物，其中组合物基本上不含己烷和二氯甲烷。
[0138]
根据发明构思11，还提供了制备发明构思1至10中任一项的组合物的方法，相对于从香脂树属获得的苦配巴香脂树脂中的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸加在一起的浓度，所述组合物具有降低的β
‑
石竹烯(bcp)浓度，所述方法包括用水和乙醇的混合物提取由香脂树属获得的树脂，并且收集从提取获得的上部部分，从而获得所述组合物。
[0139]
发明构思12。发明构思11的方法，其中组合物对脂环酸芽胞杆菌的孢子有活性。
[0140]
发明构思13。发明构思11或12的方法，其中苦配巴香脂树脂从古巴香胶树中获得。
[0141]
发明构思14。发明构思11至13中任一项的方法，其中组合物对酸土脂环酸芽胞杆菌的孢子有活性。
[0142]
发明构思15。发明构思11至14中任一项的方法，其中混合物中乙醇和水的重量比为至少1∶1。
[0143]
发明构思16。发明构思15的方法，其中混合物中乙醇和水的重量比为至少1.1∶1、至少1.2∶1、至少1.3∶1、至少1.4∶1、至少1.5∶1、至少1.6∶1、至少1.7∶1、至少1.8∶1、至少1.9∶1、至少2∶1、至少2.1∶1、至少2.2∶1、至少2.3∶1、至少2.4∶1、至少2.5∶1、至少2.6∶1、至少2.7∶1、至少2.8∶1、至少2.9∶1或至少3∶1。
[0144]
发明构思17。发明构思11至16中任一项的方法，其中混合物中乙醇和水的重量比不大于4∶1、不大于3.9∶1、不大于3.8∶1、不大于3.7∶1、不大于3.6∶1、不大于3.5∶1、不大于3.4∶1、不大于3.3∶1、不大于3.2∶1或不大于3.1∶1。
[0145]
发明构思18。发明构思11至17中任一项的方法，其中乙醇和水的混合物含有浓度
为0.01摩尔至0.125摩尔的naoh。
[0146]
发明构思19。发明构思18的方法，其中naoh的浓度为至少0.02m、至少0.03m、至少0.04m、至少0.05m、至少0.06m、至少0.07m、至少0.08m、至少0.09m、至少1.0m、至少1.1m或至少1.2m。
[0147]
发明构思20。发明构思11至17中任一项的方法，其中乙醇和水的混合物含有浓度为0.01摩尔至0.25摩尔的hcl。
[0148]
发明构思21。发明构思20的方法，其中hcl的浓度为至少0.1摩尔、至少0.2摩尔、至少0.3摩尔、至少0.4摩尔、至少0.5摩尔、至少0.6摩尔、至少0.7摩尔、至少0.8摩尔、至少0.9摩尔、至少1.0摩尔、至少1.1摩尔、至少1.2摩尔或至少0.125摩尔。
[0149]
发明构思22。发明构思11至21中任一项的方法，其中乙醇和水的混合物与苦配巴香脂树脂的重量比为至少3∶1。
[0150]
发明构思23。发明构思23的方法，其中乙醇和水的混合物与苦配巴香脂树脂的重量比为至少3.5∶1、至少4∶1、至少4.5∶1、至少5∶1、至少5.5∶1或至少6∶1。
[0151]
发明构思24。发明构思11至23中任一项的方法，其中方法还包括将至少一些水和乙醇从收集的上部部分中除去。
[0152]
发明构思25。发明构思11至24中任一项的方法，其中上部部分含有克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和任选的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸，并且在所述上部部分中，所述7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸(如果存在)、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸加在一起与所述bcp的重量比为至少1∶1。
[0153]
发明构思26。发明构思25的方法，其中在所述上部部分中，所述7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸加在一起与所述bcp的重量比为至少1.1∶1、至少1.2∶1、至少1.3∶1、至少1.4∶1、至少1.5∶1、至少1.6∶1、至少1.7∶1、至少1.8∶1、至少1.9∶1、至少2∶1、至少2.1∶1、至少2.2∶1、至少2.3∶1、至少2.4∶1或至少2.5∶1。
[0154]
发明构思27。发明构思11至26中任一项的方法，其中方法还包括从存在于上部部分的二萜中通过色谱法分离残留的bcp并收集二萜。
[0155]
根据发明构思28，还提供了制备组合物的方法，所述组合物对脂环酸芽胞杆菌的孢子具有活性，并且相对于从香脂树属获得的苦配巴香脂树脂中β
‑
石竹烯(bcp)的浓度具有减少的bcp浓度，方法包括用水和乙醇的混合物从香脂树属中提取树脂，并且收集从提取中获得的上部部分。在本上下文中，术语“对脂环酸芽胞杆菌的孢子具有活性”表示，当以5μg/ml的浓度添加到按照根据epa标准180.1(1993年8月公布)测量的浊度不大于1浊度单位(ntu)和含有104个的脂环酸芽胞杆菌孢子/ml的苹果汁样品中，并且之后保持37℃时，该组合物阻止了脂环酸芽胞杆菌再生长达至少四天，其是通过在600nm处的光密度测量所确定的。
[0156]
发明构思29。发明构思28的方法，其中苦配巴香脂树脂从古巴香胶树中获得。
[0157]
发明构思30。发明构思28或29的方法，其中组合物对酸土脂环酸芽胞杆菌的孢子有活性。
[0158]
发明构思31。发明构思28至30中任一项的方法，其中混合物中乙醇和水的重量比为至少1∶1。
[0159]
发明构思32。发明构思31的方法，其中混合物中乙醇和水的重量比为至少1.1∶1、
至少1.2∶1、至少1.3∶1、至少1.4∶1、至少1.5∶1、至少1.6∶1、至少1.7∶1、至少1.8∶1、至少1.9∶1、至少2∶1、至少2.1∶1、至少2.2∶1、至少2.3∶1、至少2.4∶1、至少2.5∶1、至少2.6∶1、至少2.7∶1、至少2.8∶1、至少2.9∶1或至少3∶1。
[0160]
发明构思33。发明构思28至32中任一项的方法，其中混合物中乙醇和水的重量比不大于4∶1、不大于3.9∶1、不大于3.8∶1、不大于3.7∶1、不大于3.6∶1、不大于3.5∶1、不大于3.4∶1、不大于3.3∶1、不大于3.2∶1或不大于3.1∶1。
[0161]
发明构思34。发明构思28至33中任一项的方法，其中乙醇和水的混合物含有浓度为0.01摩尔至0.125摩尔的naoh。
[0162]
发明构思35。发明构思34的方法，其中naoh的浓度为至少0.02m、至少0.03m、至少0.04m、至少0.05m、至少0.06m、至少0.07m、至少0.08m、至少0.09m、至少1.0m、至少1.1m或至少1.2m。
[0163]
发明构思36。发明构思28至33中任一项的方法，其中乙醇和水的混合物含有浓度为0.01摩尔至0.25摩尔的hcl。
[0164]
发明构思37。发明构思36的方法，其中hcl的浓度为至少0.1摩尔、至少0.2摩尔、至少0.3摩尔、至少0.4摩尔、至少0.5摩尔、至少0.6摩尔、至少0.7摩尔、至少0.8摩尔、至少0.9摩尔、至少1.0摩尔、至少1.1摩尔、至少1.2摩尔或至少0.125摩尔。
[0165]
发明构思38。发明构思28至37中任一项的方法，其中乙醇和水的混合物与苦配巴香脂树脂的重量比为至少3∶1。
[0166]
发明构思39。发明构思38的方法，其中乙醇和水的混合物与苦配巴香脂树脂的重量比为至少3.5∶1、至少4∶1、至少4.5∶1、至少5∶1、至少5.5∶1或至少6∶1。
[0167]
发明构思40。发明构思28至39中任一项的方法，其中方法还包括将至少一些水和乙醇从收集的上部部分中除去。
[0168]
发明构思41。发明构思28至40中任一项的方法，其中上部部分含有克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和任选的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸，并且在所述上部部分中，所述7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸(如果存在)、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸加在一起与所述bcp的重量比为至少1∶1。
[0169]
发明构思42。发明构思41的方法，其中在所述上部部分中，所述7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸(如果存在)、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸加在一起与所述bcp的重量比为至少1.1∶1、至少1.2∶1、至少1.3∶1、至少1.4∶1、至少1.5∶1、至少1.6∶1、至少1.7∶1、至少1.8∶1、至少1.9∶1、至少2∶1、至少2.1∶1、至少2.2∶1、至少2.3∶1、至少2.4∶1或至少2.5∶1。
[0170]
发明构思43。发明构思28至42中任一项的方法，其中方法还包括从存在于上部部分的二萜中通过色谱法分离残留的bcp并收集二萜。
[0171]
根据发明构思44，还提供了通过如本文所述的提取制备的组合物，即通过包括用水和乙醇的混合物提取从香脂树属获得的树脂，并收集从提取中获得的上部部分的方法。
[0172]
发明构思45。发明构思44的组合物，其中组合物对脂环酸芽胞杆菌的孢子有活性。
[0173]
发明构思46。发明构思44或45的组合物，其中组合物相对于由香脂树属获得的苦配巴香脂树脂中β
‑
石竹烯(bcp)的浓度具有减少的bcp浓度。
[0174]
发明构思47。发明构思44至46中任一项的组合物，其中苦配巴香脂树脂从古巴香
胶树中获得。
[0175]
发明构思48。发明构思44至47中任一项的组合物，其中组合物对酸土脂环酸芽胞杆菌的孢子有活性。
[0176]
发明构思49。发明构思44至48中任一项的组合物，其中混合物中乙醇和水的重量比为至少1∶1。
[0177]
发明构思50。发明构思49的组合物，其中混合物中乙醇和水的重量比为至少1.1∶1、至少1.2∶1、至少1.3∶1、至少1.4∶1、至少1.5∶1、至少1.6∶1、至少1.7∶1、至少1.8∶1、至少1.9∶1、至少2∶1、至少2.1∶1、至少2.2∶1、至少2.3∶1、至少2.4∶1、至少2.5∶1、至少2.6∶1、至少2.7∶1、至少2.8∶1、至少2.9∶1或至少3∶1。
[0178]
发明构思51。发明构思44至50中任一项的组合物，其中混合物中乙醇和水的重量比不大于4∶1、不大于3.9∶1、不大于3.8∶1、不大于3.7∶1、不大于3.6∶1、不大于3.5∶1、不大于3.4∶1、不大于3.3∶1、不大于3.2∶1或不大于3.1∶1。
[0179]
发明构思52。发明构思44至51中任一项的组合物，其中乙醇和水的混合物含有浓度为0.01摩尔至0.125摩尔的naoh。
[0180]
发明构思53。发明构思52的组合物，其中naoh的浓度为至少0.02m、至少0.03m、至少0.04m、至少0.05m、至少0.06m、至少0.07m、至少0.08m、至少0.09m、至少1.0m、至少1.1m或至少1.2m。
[0181]
发明构思54。发明构思44至51中任一项的组合物，其中乙醇和水的混合物含有浓度为0.01摩尔至0.25摩尔的hcl。
[0182]
发明构思55。发明构思54的组合物，其中hcl的浓度为至少0.1摩尔、至少0.2摩尔、至少0.3摩尔、至少0.4摩尔、至少0.5摩尔、至少0.6摩尔、至少0.7摩尔、至少0.8摩尔、至少0.9摩尔、至少1.0摩尔、至少1.1摩尔、至少1.2摩尔或至少0.125摩尔。
[0183]
发明构思56。发明构思44至55中任一项的组合物，其中乙醇和水的混合物与苦配巴香脂树脂的重量比为至少3∶1。
[0184]
发明构思57。发明构思56的组合物，其中乙醇和水的混合物与苦配巴香脂树脂的重量比为至少3.5∶1、至少4∶1、至少4.5∶1、至少5∶1、至少5.5∶1或至少6∶1。
[0185]
发明构思58。发明构思44至57中任一项的方法，其中方法还包括将至少一些水和乙醇从收集的上部部分中除去。
[0186]
发明构思59。发明构思44至58中任一项的组合物，其中上部部分含有克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和任选地7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸，并且在所述上部部分中，所述7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸(如果存在)、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸加在一起与所述bcp的重量比为至少1∶1。
[0187]
发明构思60。发明构思59的组合物，其中在所述上部部分中，所述7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸(如果存在)、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸加在一起与所述bcp的重量比为至少1.1∶1、至少1.2∶1、至少1.3∶1、至少1.4∶1、至少1.5∶1、至少1.6∶1、至少1.7∶1、至少1.8∶1、至少1.9∶1、至少2∶1、至少2.1∶1、至少2.2∶1、至少2.3∶1、至少2.4∶1或至少2.5∶1。
[0188]
发明构思61。发明构思44至60中任一项的组合物，其中方法还包括从存在于上部部分的二萜中通过色谱法分离残留的bcp并收集二萜。
[0189]
发明构思61.1。发明构思44至60中任一项的组合物，其中组合物基本上不含己烷和二氯甲烷。
[0190]
根据发明构思62，还提供了包括向饮料中添加组合物的方法，所述组合物包含(a)克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和任选的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸，以及(b)任选的β
‑
石竹烯。
[0191]
发明构思63。发明构思62的方法，其中组合物是如发明构思1至10或44至61.1中任一项所述的组合物。
[0192]
发明构思64。发明构思62或63的方法，其中如根据1993年8月公布的美国环境保护署方法第180.1号所测量的，饮料的浊度不大于5浊度单位(ntu)。
[0193]
发明构思65。发明构思62至64中任一项的方法，其中饮料的浊度不大于4ntu。
[0194]
发明构思66。发明构思62至65中任一项的方法，其中饮料的浊度不大于3ntu。
[0195]
发明构思67。发明构思62至66中任一项的方法，其中饮料的浊度不大于2ntu。
[0196]
发明构思68。发明构思62至67中任一项的方法，其中饮料的浊度不大于1ntu。
[0197]
发明构思69。发明构思62至68中任一项的方法，其中方法用于增强饮料巴氏杀菌的功效。
[0198]
发明构思70。发明构思62至69中任一项的方法，其中组合物对脂环酸芽胞杆菌的孢子有活性。
[0199]
发明构思71。发明构思70的方法，其中组合物对酸土脂环酸芽胞杆菌的孢子有活性。
[0200]
发明构思72。发明构思62至71中任一项的方法，其中组合物相对于由香脂树属获得的苦配巴香脂树脂中β
‑
石竹烯(bcp)的浓度具有减少的bcp浓度。
[0201]
发明构思73。发明构思62至72中任一项的方法，其中苦配巴香脂树脂来自古巴香胶树。
[0202]
发明构思74。发明构思62至73中任一项的方法，其中当β
‑
石竹烯存在时，7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸(如果存在)、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸加在一起与β
‑
石竹烯的重量比为至少1∶1。
[0203]
发明构思75。发明构思62至74中任一项的方法，其中将组合物以每毫升饮料至少1.25微克组合物的浓度添加到饮料中。
[0204]
发明构思76。发明构思75的方法，其中将组合物以每毫升饮料至少2.5微克组合物的浓度添加到饮料中。
[0205]
发明构思77。发明构思76的方法，其中将组合物以每毫升饮料至少3.75微克组合物的浓度添加到饮料中。
[0206]
发明构思78。发明构思77的方法，其中将组合物以每毫升饮料至少5.0微克组合物的浓度添加到饮料中。
[0207]
发明构思79。发明构思62至78中任一项的方法，其中将组合物以每毫升饮料不大于5.0微克组合物的浓度添加到饮料中。
[0208]
发明构思80。发明构思62至79中任一项的方法，其中使组合物与饮料接触至少两天、至少三天、至少四天或至少五天。
[0209]
发明构思81。发明构思62至80中任一项的方法，其中将组合物在巴氏灭菌之前添
加到饮料中。
[0210]
发明构思82。发明构思62至80中任一项的方法，其中将组合物在巴氏灭菌之后添加到饮料中。
[0211]
发明构思83。发明构思62至82中任一项的方法，其中饮料是酸性的。
[0212]
发明构思84。发明构思83的方法，其中饮料的ph为3至6。
[0213]
发明构思85。发明构思62至84中任一项的方法，其中饮料是果汁。
[0214]
发明构思86。发明构思85的方法，其中果汁是苹果汁。
[0215]
发明构思87。发明构思85的方法，其中果汁是葡萄汁。
[0216]
发明构思88。发明构思85的方法，其中果汁是桃汁。
[0217]
发明构思89。发明构思85的方法，其中果汁是西瓜汁。
[0218]
发明构思90。发明构思85的方法，其中果汁是澄清的橙汁。
[0219]
发明构思91。发明构思62至90中任一项的方法，其中组合物通过发明构思11至43中任一项的方法制备。
[0220]
根据发明构思92，还提供了包括将组合物添加到饮料中的方法，所述组合物的制备是通过用水和乙醇的混合物提取香脂树属树脂，并收集从提取中获得的上部部分来实现的。
[0221]
发明构思93。发明构思92的方法，其中如根据1993年8月公布的美国环境保护署方法第180.1号所测量的，饮料的浊度不大于5浊度单位(ntu)。
[0222]
发明构思94。发明构思93的方法，其中饮料的浊度不大于4ntu。
[0223]
发明构思95。发明构思94的方法，其中饮料的浊度不大于3ntu。
[0224]
发明构思96。发明构思95的方法，其中饮料的浊度不大于2ntu。
[0225]
发明构思97。发明构思96的方法，其中饮料的浊度不大于1ntu。
[0226]
发明构思98。发明构思92至97中任一项的方法，其中方法用于增强饮料巴氏杀菌的功效。
[0227]
发明构思99。发明构思92至97中任一项的方法，其中方法用于控制饮料中革兰氏阳性菌，包括革兰氏阳性菌的孢子的生长。
[0228]
发明构思100。发明构思92至99中任一项的方法，其中组合物对酸土脂环酸芽胞杆菌的孢子有活性。
[0229]
发明构思101。发明构思92至100中任一项的方法，其中组合物相对于由香脂树属获得的苦配巴香脂树脂中β
‑
石竹烯(bcp)的浓度具有减少的bcp浓度。
[0230]
发明构思102。发明构思92至101中任一项的方法，其中苦配巴香脂树脂来自古巴香胶树。
[0231]
发明构思103。发明构思92至102中任一项的方法，其中组合物包含(a)克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和任选的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸，以及(b)任选的β
‑
石竹烯。
[0232]
发明构思104。发明构思103的方法，其中当β
‑
石竹烯存在时，7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸(如果存在)、克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸和黄脂酸加在一起与β
‑
石竹烯的重量比为至少1∶1。
[0233]
发明构思105。发明构思92至104中任一项的方法，其中将组合物以每毫升饮料至
少1.25微克组合物的浓度添加到饮料中。
[0234]
发明构思106。发明构思105的方法，其中将组合物以每毫升饮料至少2.5微克组合物的浓度添加到饮料中。
[0235]
发明构思107。发明构思106的方法，其中将组合物以每毫升饮料至少3.75微克组合物的浓度添加到饮料中。
[0236]
发明构思108。发明构思107的方法，其中将组合物以每毫升饮料至少5.0微克组合物的浓度添加到饮料中。
[0237]
发明构思109。发明构思92至108中任一项的方法，其中将组合物以每毫升饮料不大于5.0微克组合物的浓度添加到饮料中。
[0238]
发明构思110。发明构思92至109中任一项的方法，其中使组合物与饮料接触至少两天、至少三天、至少四天或至少五天。
[0239]
发明构思111。发明构思92至110中任一项的方法，其中将组合物在巴氏灭菌之前添加到饮料中。
[0240]
发明构思112。发明构思92至110中任一项的方法，其中将组合物在巴氏灭菌之后添加到饮料中。
[0241]
发明构思113。发明构思92至112中任一项的方法，其中饮料是酸性的。
[0242]
发明构思114。发明构思92至113中任一项的方法，其中饮料是果汁。
[0243]
发明构思115。发明构思114的方法，其中果汁是苹果汁。
[0244]
发明构思116。发明构思114的方法，其中果汁是葡萄汁。
[0245]
发明构思117。发明构思114的方法，其中果汁是桃汁。
[0246]
发明构思118。发明构思114的方法，其中果汁是西瓜汁。
[0247]
发明构思119。发明构思114的方法，其中果汁是澄清的橙汁。
[0248]
发明构思120。发明构思92至119中任一项的方法，其中组合物是发明构思1至10或44至61.1中任一项所述的组合物。
[0249]
发明构思121。发明构思92至120中任一项的方法，其中组合物通过发明构思11至43中任一项的方法制备。
[0250]
根据发明构思122，还提供了在容器中的饮料，该饮料含有组合物，根据发明构思1至10或44至61.1中任一项，所述组合物包含(a)克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和任选的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸，以及(b)任选的β
‑
石竹烯。
[0251]
发明构思122.1。发明构思122的饮料，其中组合物包含7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸。
[0252]
发明构思123。发明构思122或122.1的饮料，其中饮料是澄清的饮料。
[0253]
发明构思124。发明构思122至123中任一项的饮料，其中如根据1993年8月公布的美国环境保护署方法第180.1号所测量的，饮料的浊度不大于5浊度单位(ntu)。
[0254]
发明构思125。发明构思124的饮料，其中饮料的浊度不大于4ntu。
[0255]
发明构思126。发明构思125的饮料，其中饮料的浊度不大于3ntu。
[0256]
发明构思127。发明构思126的饮料，其中饮料的浊度不大于2ntu。
[0257]
发明构思128。发明构思127的饮料，其中饮料的浊度不大于1ntu。
[0258]
发明构思129。发明构思122至128中任一项的饮料，其中组合物以每毫升饮料至少1.25微克组合物的浓度存在于饮料中。
[0259]
发明构思130。发明构思129的饮料，其中组合物以每毫升饮料至少2.5微克组合物的浓度存在于饮料中。
[0260]
发明构思131。发明构思130的饮料，其中组合物以每毫升饮料至少3.75微克组合物的浓度存在于饮料中。
[0261]
发明构思132。发明构思131的饮料，其中组合物以每毫升饮料至少5.0微克组合物的浓度存在于饮料中。
[0262]
发明构思133。发明构思122至132中任一项的饮料，其中组合物以每毫升饮料不大于5.0微克组合物的浓度存在于饮料中。
[0263]
发明构思134。发明构思122至133中任一项的饮料，其中饮料是酸性的。
[0264]
发明构思134.1。发明构思122至134中任一项的饮料，其中饮料是果汁。
[0265]
发明构思135。发明构思134.1的饮料，其中果汁是苹果汁。
[0266]
发明构思136。发明构思134.1的饮料，其中果汁是葡萄汁。
[0267]
发明构思136.1。发明构思134.1的饮料，其中果汁是桃汁。
[0268]
发明构思137。发明构思134.1的饮料，其中果汁是西瓜汁。
[0269]
发明构思138。发明构思134.1的饮料，其中果汁是澄清的橙汁。
[0270]
发明构思139。发明构思122至138中任一项的饮料，其中组合物是根据发明构思1至10或44至61.1中任一项所述的组合物。
[0271]
发明构思140。发明构思122至139中任一项的饮料，其中组合物通过发明构思11至43中任一项的方法制备。
[0272]
根据发明构思141，还提供了在容器中的饮料，所述饮料含有组合物，所述组合物的制备是通过用水和乙醇的混合物提取香脂树属树脂，并收集从提取中获得的上部部分来实现的。
[0273]
发明构思142。根据发明构思141的饮料，其中组合物包含(a)克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和任选的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸，以及(b)任选的β
‑
石竹烯。
[0274]
发明构思143。根据发明构思141或142的饮料，其中组合物包含7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸。
[0275]
发明构思143.1。发明构思141至143中任一项的饮料，其中如根据1993年8月公布的美国环境保护署方法第180.1号所测量的，饮料的浊度不大于5浊度单位(ntu)。
[0276]
发明构思143.2。发明构思143.1的饮料，其中饮料的浊度不大于4ntu。
[0277]
发明构思143.3。发明构思143.2的饮料，其中饮料的浊度不大于3ntu。
[0278]
发明构思143.4。发明构思143.3的饮料，其中饮料的浊度不大于2ntu。
[0279]
发明构思143.5。发明构思143.4的饮料，其中饮料的浊度不大于1ntu。
[0280]
发明构思144。根据发明构思141至143.5中任一项的饮料，其中组合物以每毫升饮料至少1.25微克组合物的浓度存在于饮料中。
[0281]
发明构思145。根据发明构思144的饮料，其中组合物以每毫升饮料至少2.5微克组合物的浓度存在于饮料中。
[0282]
发明构思146。根据发明构思145的饮料，其中组合物以每毫升饮料至少3.75微克组合物的浓度存在于饮料中。
[0283]
发明构思147。根据发明构思146的饮料，其中组合物以每毫升饮料至少5.0微克组合物的浓度存在于饮料中。
[0284]
发明构思148。根据发明构思141至147中任一项的饮料，其中组合物以每毫升饮料不大于5.0微克组合物的浓度存在于饮料中。
[0285]
发明构思149。根据发明构思141至148中任一项的饮料，其中饮料是酸性的。
[0286]
发明构思150。根据发明构思141至149中任一项的饮料，其中饮料是果汁。
[0287]
发明构思151。根据发明构思150的饮料，其中果汁是苹果汁。
[0288]
发明构思152。根据发明构思150的方法，其中果汁是葡萄汁。
[0289]
发明构思153。根据发明构思150的饮料，其中果汁是桃汁。
[0290]
发明构思154。根据发明构思150的方法，其中果汁是西瓜汁。
[0291]
发明构思155。根据发明构思150的饮料，其中果汁是澄清的橙汁。
[0292]
发明构思156。发明构思141至155中任一项的饮料，其中组合物是根据发明构思1至10或44至61.1中任一项的组合物。
[0293]
发明构思157。发明构思141至156中任一项的饮料，其中组合物通过发明构思11至43中任一项的方法制备。
[0294]
根据发明构思158，还提供了控制饮料中革兰氏阳性菌，包括革兰氏阳性菌孢子的生长的方法，其包括将组合物添加到饮料中，所述组合物包含(a)克罗莱奇尼克酸、左旋哈氏豆属酸、考拉维酸、黄脂酸和任选的7
‑
α
‑
乙酰氧基哈氏豆属酸，以及(b)任选的β
‑
石竹烯。
[0295]
发明构思159。发明构思158的方法，其中将组合物以每毫升饮料至少1.25微克组合物的浓度添加到饮料中。
[0296]
发明构思160。发明构思159的方法，其中将组合物以每毫升饮料至少2.5微克组合物的浓度添加到饮料中。
[0297]
发明构思161。发明构思160的方法，其中将组合物以每毫升饮料至少3.75微克组合物的浓度添加到饮料中。
[0298]
发明构思162。发明构思161的方法，其中将组合物以每毫升饮料至少5.0微克组合物的浓度添加到饮料中。
[0299]
发明构思163。发明构思158至162中任一项的方法，其中将组合物以每毫升饮料不大于5.0微克组合物的浓度添加到饮料中。
[0300]
发明构思164。发明构思158至163中任一项的方法，其中使组合物与饮料接触至少两天、至少三天、至少四天或至少五天。
[0301]
发明构思165。发明构思158至164中任一项的方法，其中将组合物在巴氏灭菌之前添加到饮料中。
[0302]
发明构思166。发明构思158至164中任一项的方法，其中将组合物在巴氏灭菌之后添加到饮料中。
[0303]
发明构思167。发明构思158至166中任一项的方法，其中饮料是酸性的。
[0304]
发明构思168。发明构思158至167中任一项的方法，其中饮料是果汁。
[0305]
发明构思169。发明构思168的方法，其中果汁是苹果汁。
[0306]
发明构思170。发明构思168的方法，其中果汁是葡萄汁。
[0307]
发明构思171。发明构思168的方法，其中果汁是桃汁。
[0308]
发明构思172。发明构思168的方法，其中果汁是西瓜汁。
[0309]
发明构思173。发明构思168的方法，其中果汁是澄清的橙汁。
[0310]
发明构思173.1。发明构思158至173中任一项的饮料，其中如根据1993年8月公布的美国环境保护署方法第180.1号所测量的，饮料的浊度不大于5浊度单位(ntu)。
[0311]
发明构思173.2。发明构思173.1的饮料，其中饮料的浊度不大于4ntu。
[0312]
发明构思173.3。发明构思173.2的饮料，其中饮料的浊度不大于3ntu。
[0313]
发明构思173.4。发明构思173.3的饮料，其中饮料的浊度不大于2ntu。
[0314]
发明构思173.5。发明构思173.4的饮料，其中饮料的浊度不大于1ntu。
[0315]
发明构思174。发明构思158至173.5中任一项的方法，其中组合物是根据发明构思1至10或44至61.1中任一项的组合物。
[0316]
发明构思175。发明构思158至174中任一项的方法，其中组合物通过发明构思11至43中任一项的方法制备。