专利名称：：用于治疗或预防由革兰氏阳性细菌引起的病症的方法
技术领域：
：本发明涉及革兰氏阳性感染的治疗。更具体地，它涉及通ii拖用多种组合物(其发挥作用以从生物体中和和/或除去革兰氏阳性毒素)进行治疗，以及应用这些组合物进行预防。最优选地，这些组合物包含胆汁酸或胆汁酸盐(如胆烷酸或胆烷酸盐)、中性脂质(如甘油三酯)和磷脂(如磷脂酰胆喊)，并用于治疗或预防由革兰氏阳性细菌引起的病症，比如但不仅限于脓毒症、脓毒性休克、全身炎症反应综合征(SIRS)、具有器官功能异常和/或衰竭的SIRS、器官衰竭和器官功能异常。
背景技术：
：正常的血清含有许多脂蛋白颗粒，根据它们的密度对其进行表征，即乳糜#^立、极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)。它们由游离的和酯化的胆固醇、甘油三酯、磷脂、几种其它次要的脂质组分和蛋白质组成。VLDL以甘油三酯的形式将能量运输至机体细胞用于]i&藏和利用。随着甘油三酯被递送，VLDL转化为LDL。LDL将胆固醇和其它脂溶性物质运输至机体内的细胞，而HDL将过量的或不可用的脂类运输至肝脏用于消除。通常，这些脂蛋白处于平衡状态，确保对脂溶性物质适当地递送和去除。异常低的HDL可导致许多疾病状态以及形成其它疾病的继发并发症。在正常情况下，天然HDL是表面覆盖有磷脂单层的固体颗粒，所述磷脂单层封入疏水的核心。载脂蛋白A-I和A-II通过其a螺旋结构域疏水面的相互作用附着于所&面。以其新生的或新分泌的形式，所述颗粒是圆盘形的并接受游离胆固醇i^其双层内。通过卵磷脂:胆固醇g转移酶(LCAT)的作用，胆固醇被酯化并被移至所述圆盘的中心内。胆固醇酯移动至所述中心是双层内空间和溶解度限制的结果。随着越来越多的胆固醇被酯化并移到所述中心，HDL颗粒"膨胀"成球形颗粒。然后，集中在HDL"膨胀核心"的胆固醇酯和其它水不溶性脂质通itfr脏被清除。Anantharamaiah在Segrest等人的Meth.Enzymol.128:627-647(1986)中描述了一系列形成"螺旋轮"的肽，其由该肽中氛基酸的彼此相互作用所致。这些螺旋轮在它们的构型中表现出非极性面和极性面。该参考文献显示，通常，肽可以替换这些颗粒中的脱辅基蛋白质。Jonasetal.，Meth.Enzym.128A:553-582(1986)已制备多种与HDL类似的重建颗粒。所述技术包括通过标准方法对HDL进行分离和脱脂(Hatchetal"Adv.Lip.Res.6:1-68(1968);Scanuetal"Anal.Biochem.44:576-588(1971))以获得脱辅基HDL蛋白质。使用去垢剂透析，将脱辅基蛋白质分级分离并与磷脂以及与或不与胆固醇进行重建。Matzetal"J.Biol.Chem.257(8):4535-4540(1982)描述了磷脂酰^5^与载脂蛋白Al的胶束。描述了多种比例的该两种组分，并提示所述方法可用于制造其它胶束。同时还提示使用所述胶束作为酶底物，或作为HDL分子的模型。然而，该文献未讨论应用所述微团除去胆固醇，也未给出有关诊断或治疗用途的任何建议。Williamsetal"Biochem.&Biophys.Acta875:183-194(1986)教导引入血浆的磷脂脂质体，其携带脱辅基蛋白质和胆固醇。已公开了体内收集脱辅基蛋白质和胆固醇的脂质体，并提示在与脱辅基蛋白质相互作用并将其收集的磷脂脂质体中胆固醇的摄取得到增强。Williamsetal"Persp.Biol.&Med.27(3):417-431(1984)讨论了裤脂酰M脂质体除去胆固醇。该文献总结了先前的工作，表明含有脱辅基蛋白质的脂质体较之不含有脱辅基蛋白质的脂质体在体外更有效地从细胞中去除胆固醇。他们未讨论体内使用含有脱辅基蛋白质的脂质体或微团，并劝告在任何情况下在体内使用脂质体时要小心。美国专利No.5,506,218;5,344,822;5,614,507;5,587,366;5,674,855(它们均通过参考并入本文)描述了含有磷脂(如磷脂跣胆喊)、天然脂类(如甘油三酯)以及胆汁酸或胆汁酸盐(如胆烷酸或胆烷酸盐如胆酸钠)的制剂如何通过灭活脂质A锚定分子"LPS"而行^^功能以防止或减轻革兰氏阴性细菌感染(如通过鼠伤寒沙门氏菌(51.Jt^/"'附wnVi附)的感染)。在美国专利No.5,128,318(其公开内容通过参考并入本文)中，其教导包含HDL相关的载脂蛋白以及能结合内毒素以使其失活的脂质的重建颗粒可用作减轻内毒素毒性的有效物质。已相当惊人地发现，磷脂可以单独使用或与另外的材料(如中性脂质、胆汁酸盐等)组^^吏用，作为减轻和/或防止革兰氏阳性感染的有效药剂。尤其优选在基本不含肽和蛋白质(如载脂蛋白(apolip叩rotein)或由其来源的肽)的组合物中单独或与其它磷脂(如鞘脂类)组合使用磷脂酰胆碱(此后称"PC")。中性脂质(如甘油单酯、甘油二酯和甘油三酯)可以与所述磷脂组合，只要当该组合物以静脉内推注的形式使用时中性脂质的总量低于一定的重量百分比。当以其它施用形式如静脉内(例如通过连续输注)使用时，则所述重量百分比没有这么关键，但^A所期望的。胆汁酸或胆汁酸盐(如胆酸盐(例如胆酸钠))可以与所述其它两种组分组合以得到特别有效的配方。本发明特別优选的实施方案是那些其中中性脂质是甘油三酯、胆固醇酯或胆固醇酯和甘油三酯的混合物的组合物。本文表明了胆汁酸和胆汁酸盐(如胆酸盐)和/或中性脂质(如磷脂酰胆碱和/或甘油三酯)在治疗、预防和/或防止革兰氏阳性感染中中性脂质的功效。这些胆汁酸可以单独使用，或者与一种或多种磷脂和/或中性脂质(如磷脂酰胆喊和/或甘油三酯)组^^吏用。这些组合物可用于治疗或预防包括但不仅限于以上所述的那些病症，优选使用如以上所述的那些组合物，更优选乳剂的形式。以下对本发明进行更加详细的描述优选实施方案详述实施例在以下的实验中，确定了含有磷脂酰胆喊、甘油三酯和胆酸钠的乳剂可用于从血液中清除革兰氏阳性毒素。制备乳剂，其在甘油水溶液(2.6%)中含有99.7mg/ml磷脂酰胆碱(此后称"PC")、18mM胆酸钠和占该乳剂脂质总重量7.5%的甘油三酯(TG)的溶液。使用2.6%甘油溶液作为对照。将所述乳剂和对照均进行1:10稀释,将其添加至经EDTA处理过的全血的测试溶液(以50%稀释)，并向其添加各种稀释度的从枯草芽孢杆菌(B.subtilis)获得的5mg/ml脂罅壁酸(lipoteicholicacid)("LTA，，)溶液。混合所述样品并在37。C温育4小时，之后将其在水上猝灭。将样品离心(1000RPM,2000xg)，并使用市售的标准ELISA测定血浆肿瘤坏死因子("TNF")。表1(乳剂)和表2(对照)中的结果显示了所述乳剂从血液中除去毒素的功效。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>表2:甘油对照<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>前面的实例对本发明在一方面进行了详述，其包括治疗或预防由革兰氏阳性细菌引起的脓毒症、脓毒性休克、全身炎症反应综合征(SIRS)、具有器官功能异常/衰竭的SIRS、器官衰竭和器官功能异常的方法。所述实例还显示，胆汁酸或胆汁酸盐家族的成员(如胆烷酸或胆烷酸盐)还可以与磷脂和中性脂质组合施用，或单独与磷脂组合施用，用于例如预防、减轻、防止或治疗革兰氏阳性细菌感染。因此，含有胆汁^/胆汁酸盐和磷脂之一或二者的不含肽和蛋白质的组合物可用于治疗这些感染。通过例如Hofmann,Hepatology4(5):4S-14S(1984)(通过参考并入本文)对胆烷酸进行描述。特别注意第5S页，图1和2(通过参考并入本文)，其显示胆烷酸的结构特征。接受治疗的对象优itA，但本发明的实施同样也适用于兽医的情形。本文使用的"减轻"是指治疗从而緩解由革兰氏阳性细菌(例如枯草芽孢杆菌)产生的各种毒素中任何毒素所引起的感染的负担。可以通过以下方式实现预防在对象处于或将要处于可导致暴露于革兰氏阳性细菌的情况下施用所述药剂。通常，itiL生在手术期间。因此，可以在手术前向将要进行手术的对象施用该活性成分。治疗所述对象所必需的磷脂和胆汁酸组合的有效量可以变化。通常，优选总剂量可多达每千克所^f象体重约200mg到约800mg磷脂，尽管该量可根据感染的严重程度或在预防情形下风险的程度而降低或增加。对于胆汁酸及盐(如胆烷酸及其盐)来说，使用每千克体重约10mg到约300mg的剂量，更优选每千克体重15mg到约275mg的剂量。在还含有中性脂质的组合物中施用胆汁^/胆汁酸盐和磷脂是理想的，但不是必需的，因为不含中性脂质的磷脂乳剂也是预期的。联合施用中性脂质磷脂和中性脂质比较理想是由以下事实中性脂质和磷脂结合成类似于脂蛋白的颗粒，二者的不同在于所述颗粒不包含蛋白质或肽组分(其当然总是存在于脂蛋白中)。特别理想的治疗形式是其中所述磷脂为磷脂酰胆碱(如卵黄磷脂酰胆碱、基于大豆的磷脂酰胆碱、或鞘脂)的治疗形式。对于胆汁^/胆汁酸盐来说，优选胆烷酸和/或其盐(如胆酸钠、脱氧胆酸钠和鵝脱氧胆酸钠)。对于中性脂质来说，优选使用胆固醇酯或甘油三酯，但也可以使用其它中性脂质，如角鲨烯或其它烃油、甘油二酯和甘油单酯和抗氧化剂(如维生素E)。所述组合物可施用的形式可以变化，尤其优选推注或其它的静脉内形式。当使用推注形式且所述组合物包含例如甘油三酯时，在给药时一定要小心。众所周知，如果施用量太大，则甘油三酯是有毒的。然而，普通技术人员可以容易地配制该组合物，从而降低或消除甘油三酯中毒的风险。通常，当使用推注形式时，所述组合物应包含不超过约80wt。/。的甘油三酯或其它中性脂质，优选不超过70wt。/。。最优选地，当施用推注时，该组合物应包含不超过约50Wt。/n的中性脂质。然而，当使用非推注形式如其它静脉内形式时，则中毒的风险降低。但是，上述范围优选用于静脉内或其它施用形式，当然应当理解它们不是必需的。优选地，施用至多约200mg每千克体重的胆汁^/胆汁酸盐或磷脂的剂量。施用至多约800mg/kg也是可行的。然而，剂量是常规的，并将取决于对象和施用形式而有所变化。如上所述，不含蛋白质和肽的制剂需要存在至少一种磷脂或胆汁酸/胆汁酸盐。对于磷脂来说，优选存在至少一种中性脂质，如甘油三酯、甘油二酯或甘油单酯。该组合物可以包含另外的物质如甾醇(例如胆固醇、P-谷齒醇)、酯化或未酯化的脂类(例如胆固醇酯或未酯化的胆固醇)、烃油如角鲨烯、抗氧化剂如维生素E,但是这些不是必需的。当然，在任何这样的制剂中都可以使用多于一种磷脂和/或多于一种中性脂质。当使用中性脂质和磷脂的组合时，中性脂质应以相对于所述组合物中脂类总量的约3%至多达约50%的重量存在。对于胆汁^/胆汁酸盐来说，它们可以单独使用或与磷脂、中性脂质或与二者一起组合使用。关于这些另外的物质(例如磷脂和中性脂质)，优选的种类是以上所讨论和提及的。任选的另外成分包括以上列出的那些。组合物在治疗与细菌感染有关的特定病症(如上述那些病症)中的用途也是本发明的一部分。这些组合物优选包含约5wt。/。到约30wt。/。的胆汁l胆汁酸盐、约3wt。/o到约50wt。/o的中性脂质、以及约10wt^。到约95wt。/。重量的磷脂，并且不含蛋白质和肽。优选地，这些组合物处于乳剂的形式。特别优选含有约10-15wt。/。的胆汁^/胆汁酸盐、约5wt。/。到约10wt。/。的中性脂质，余量为磷脂的组合物。本文使用的短语"不含蛋白质和肽"是指不含足以治疗或防止如本文阐明的病症的蛋白质或肽或其二者的组合物，但可以存在残余的、不足量的蛋白质或肽。应该注意到，这些重量百分数^1相对于由三种组分组成的组合物而言的。当该三组分体系与例如载体、佐剂或任选的成分(如以上讨论的)组合时，相对于整个组合物的重量百分数将降低；然而，每个组分相对于彼此之间的比例将保持不变。必须记住，这些治疗性组合物总U本上不含蛋白质和肽。对于不含胆汁酸或胆汁酸盐的组合物来说，优选地，这些不含蛋白质、不含肽的组合物包含至少约3wt。/。到至多约50wt。/o的中性脂质，余量为一种磷脂。优选地，所述中性脂质是甘油三酯，但可以是以上讨论的其它中性脂质中的任何类型。同样，所述磷脂优选为磷脂酰胆碱。本发明的组合物在治疗或预防由革兰氏阳性细菌引起的病症中是有效的，所述病症包括但不仅限于如由革兰氏阳性细菌引起的脓毒症、脓毒性休克综合征、全身炎症反应综合征或"SIRS"、具有器官功能异常或衰竭的SIRS、器官衰竭、和/或器官功能异常等。本发明的其它方面对于技术人员而言是清楚的，并且不需要在这里重中。应当理解，本发明的说明书和实施例是示例性的而非限制性的，并且本领域技术人员清楚在本发明的主旨和范围内的其它实施方案。权利要求1.一种用于治疗或预防由革兰氏阳性细菌引起的病症的方法，所述病症选自脓毒症、脓毒性休克、全身炎症反应综合征(SIRS)、具有器官功能异常或衰竭的SIRS、器官衰竭和器官功能异常，该方法包括向有此需要的对象静脉内施用有效量的不含蛋白质、不含肽的组合物，所述组合物含有其量足以治疗或防止所述对象中所述病症的胆汁酸或胆汁酸盐以及磷脂。2.权利要求l的方法，其中所述胆汁酸或胆汁酸盐是胆烷酸或胆烷酸盐。3.权利要求l的方法，其中所述磷脂是磷脂醜胆碱。4.权利要求l的方法，其中所述组合物还包含中性脂质。5.权利要求4的方法，其中所述中性脂质是甘油三酯。6.权利要求2的方法，其中所述胆汁酸是胆烷酸。7.权利要求l的方法，其中所述胆汁酸盐是胆酸盐。8.权利要求7的方法，其中所述胆烷酸盐是胆酸钠。9.权利要求2的方法，其中所述组合物还包含中性脂质。10.权利要求9的方法，其中所述磷脂是磷脂酰胆碱并且所述中性脂质是甘油三酯。11.权利要求l的方法，其包括静脉内施用所述组合物。12.权利要求l的方法，其中所述革兰氏阳性细菌包括枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)。13.权利要求l的方法，其中所述革兰氏阳性细菌产生脂磷壁酸(LTA)。14.权利要求l的方法，其中所述组合物处于乳剂的形式。15.权利要求4的方法，其中所述组合物包含约5wt。/。到约30wt%的胆汁酸或胆汁酸盐、约3wt。/o到约50wt。/。的中性脂质、以及约10wt%到约95wt。/o的磷脂。16.—种用于治疗或预防由革兰氏阳性细菌引起的感染的方法，该方法包括向有此需要的对象静脉内施用有效量的不含蛋白质、不含肽的组合物，所述组合物含有其量足以治疗或防止所述对象中所述感染的胆汁酸或胆汁酸盐以及磷脂。全文摘要本发明描述了治疗、防止和预防如脓毒症、脓毒性休克、全身炎症反应综合征或“SIRS”、具有器官功能异常或衰竭的SIRS、器官衰竭和器官功能异常等的病症。这些病症与被革兰氏阳性细菌感染有关。所述治疗包括施用包含磷脂、中性脂质以及胆汁酸或胆汁酸盐的组合物。文档编号A61K35/50GK101252942SQ200680031406公开日2008年8月27日申请日期2006年8月25日优先权日2005年8月29日发明者丹尼尔·莱文,托马斯·S·帕克申请人:赛普斯治疗有限责任公司