专利名称：用于测定蓝细菌毒素的存在或不存在的方法和试剂盒的制作方法
用于测定蓝细菌毒素的存在或不存在的方法和试剂盒与相关申请的交叉参考
本申请要求于2008年10月31日提交的美国临时申请号61/110，021的利益且是其的继续申请。该申请的内容特别地整体引入本文作为参考。关于联邦赞助的研究或开发的声明本申请的发明不由联邦或州基金或拨款进行。联合研究协议的参与者名称本申请的发明不在联合研究协议下进行。序列表的提及
本申请不具有任何核酸、肽或蛋白质序列。
背景技术：
本发明的实施方案涉及用于检测由蓝细菌产生的毒素的试剂盒和方法。蓝细菌通常在地面淡水中发现。毒性蓝细菌水华是难对付的，在那方面此种水华可能引起毒素在供水中释放。主要蓝细菌毒素包括环肽、生物碱和脂多糖。例如但并非限制，构成蓝细菌毒素的主要环肽是结瘤蛋白、微囊藻素-LR、微囊藻素RR和微囊藻素YR。关于结瘤蛋白的式在下文阐述
式1
关于微囊藻素LR的式在下文阐述式权利要求
1.一种测定样品中蓝细菌毒素的存在或不存在的方法，其包括步骤在固相提取设备上制备潜在包括蓝细菌毒素的水样品，以形成保留或浓缩的毒素样PPR，使所述保留或浓缩的毒素样品在流动相中洗脱或重构，以形成样品提取物； 将所述样品提取物置于在6，000-15，000磅/英寸2的压力下用具有1-3微米平均粒度的颗粒装填的层析柱头上，以形成潜在包括蓝细菌毒素的保留样品，如果所述样品提取物包含此种蓝细菌毒素的话；在有机溶剂的梯度下从所述层析柱中洗脱来自潜在包括蓝细菌毒素的所述保留样品的化合物，以形成包括蓝细菌毒素的至少一种洗脱的化合物，如果所述样品提取物包含此种蓝细菌毒素的话；和将潜在包括蓝细菌毒素的所述洗脱的化合物置于质谱仪中以形成质谱，并且由所述质谱测定所述蓝细菌毒素的存在或不存在。
2.权利要求1的方法，其中所述质谱仪形成蓝细菌毒素的一种或多种片段，并且所述片段的所述光谱用于鉴定且测定所述蓝细菌毒素的存在或不存在。
3.权利要求3的方法，其中将所述样品提取物置于层析柱头上，洗脱且将所述蓝细菌毒素置于质谱仪中的所述步骤在小于15分钟的时间段内执行。
4.权利要求1的方法，其中所述粒子选自桥接乙基杂化物和高强度硅石。
5.权利要求1的方法，其中所述粒子具有小于2微米的平均直径。
6.权利要求1的方法，其中所述样品提取物通过在弱阴离子交换树脂上提取生物碱蓝细菌毒素形成。
7.权利要求1的方法，其中所述样品提取物通过在弱阳离子交换树脂上提取环肽蓝细菌毒素形成。
8.权利要求1的方法，其中所述提取药液筒具有包括聚合物二乙烯基苯-N-乙烯吡咯烷酮共聚物的粒子。
9.一种用于就蓝细菌毒素的存在或不存在执行样品分析的试剂盒，其包括 用于校准且促进通过质谱法鉴定一种或多种蓝细菌毒素的标准，用于形成样品提取物的样品制备设备，柱，其用于使所述样品提取物的化合物分离和在应用梯度后释放所述蓝细菌毒素，如果存在的话，从而使得所述蓝细菌毒素释放至质谱仪用于鉴定。
10.权利要求9的试剂盒，其中所述柱具有1-3微米的粒度。
11.权利要求10的试剂盒，其中所述粒子具有选自桥接乙基杂化物和高强度硅石的层析表面。
12.权利要求11的试剂盒，其中所述柱具有6，000-15，000磅/英寸2的操作压力。
全文摘要
本发明的实施方案涉及用于检测由蓝细菌产生的毒素的试剂盒和方法。方法和试剂盒的特征在于用弱阳离子和阴离子交换树脂的样品制备步骤和在4,000-15,000磅/英寸2下操作的小粒子分析柱。
文档编号C08H1/00GK102264803SQ200980152962
公开日2011年11月30日 申请日期2009年10月28日 优先权日2008年10月31日
发明者A. 奧尔勒 S. 申请人:沃特世科技公司