前列腺素i的制作方法

专利名称：前列腺素i的制作方法
技术领域：
本发明涉及前列腺I2(PGI2)受体，更具体地说，涉及一种人类或大鼠PGI2受体多肽；其制备方法；编码该多肽的DNAs；一种包含所说DNAs的复制和表达载体；一种用该载体转染或转化的受体细胞；一种抗所说多肽的单克隆或多克隆抗体；一种药用组合物，包括所说的多肽或抗体或一种用所说的多肽或所说的受体细胞筛选一类具有PGI2促效或拮抗作用的化合物之方法。背景包括前列腺素(PG)，凝血噁烷(TX)、白三烯(LT)的类前列腺素，是一个家族的花生四烯酸的氧化代谢产物，并且具有维持机体内环境稳定所要求的各种生理活性。(参见“治疗学的药学基础”)(Thepharmacological Basis of Therapeutics)(Gilman，A.G.Good-man，L.S.，Rsil T.W.and Murad，F.eds)7th Ed.pp 660 Macmillan Publishing Co.New York(1985))。
这些生理活性是通过细胞膜上各个类前列腺素的特异性受体控制。(见Annu.Rev.Pharm.Tox.10，213(1989)and Prostanoids and theirReceptors.In Comprehensive Medicinal Chemistry，pp 643(1990)，Pergamon Press，Oxford)。
前列腺环素(PGI2)是类前列腺素中一种极不稳定的化合物，它大部分由血管的内皮细胞产生。PGI2通过激活腺苷环化酶并产生cAMP来阻止血小板的聚集和诱导血管舒张。这些活性能够拮抗另一类不稳定的类前列腺素TXA2的血小板强烈聚集和血管收缩活力。PGI2对维持血液循环系统的稳定有作用(见Br.J.Pharmacol 76，3(1982))。PGI2的这些活性可用于诸如脑血栓和心肌梗塞的疾病的预防和/或治疗。许多医药用途的PGI2的稳定衍生物已经合成。
通过使用PGI2及其稳定衍生物，PGI2的活性已在血小板、平滑肌以及其它组织和各种细胞作了广泛的研究(见Prostanoids and theirReceptors，InComprchensive Medicinal Chemistry.pp 643(1990)，Pergamon Press，Oxford)。这些研究表明不同种类的组织和细胞对PGI2及其衍生物的反应在某种程度上是不同的。
这种差别表明存在着受体亚型或存在着两种或更多种PGI2受体相配的G蛋白，而且，这还表明PGI2及其衍生物能与其它类前列腺素受体亚型发生交叉反应(见Br.J.Pharmacol 76 1494982)and 97 657(1989))为了阐明这些观点，对PGI2受体的结构、信号、分布进行分析被认为是必要的。发明的内容最近，本发明人等已成功地克隆了一种人类和一种小鼠TXA2受体和小鼠PGE受体的三种亚型，即EP1、EP2和EP3的cDNA.(见Nature.349617.(1991)，Biochem.Biophys.Res.Commun.184 1197，(1992)；J.BiolChem.268，20175(1993)；J.Biol.Chem.268，7759(1993)and J.BiolChem.267，6463(1992))。另外，一种小鼠PGI2受体的cDNA也已克隆(Presented at International Symposium On Molecular Biology of theArachidonate Cascade in December 6-7，1993)本发明人等用编码一种小鼠PGI2受体的cDNA或它的片段为探针，在人类和鼠cDNA文库中进行了同源性研究。分离的克隆序列的测定及表达的结果表明有与编码一种人类和一种大鼠PGI2受体相应的克隆存在。因此本发明也就得到了。
用计算机将这个多肽的氨基酸序列与Swiss Prot数据库(Swiss ProtRelease 20)中所有已知序列相比较，在这之前没有一个多肽具有与本发明的那个多肽一致的氨基酸序列，而且将编码本发明的多肽的核苷酸序列用计算机与Gen Bank数据库(Gen Bank Relase 70.0)中已知序列比较，也没有核酸序列与编码本发明中多肽的核酸序列相同，这样就证明本发明的多肽是一个全新的多肽。
也就是说，本发明涉及1)一种基本纯化的人类PGI2受体，2)上面1)中所述受体是一种多肽，它包括在Seq.ID.No.1中表示的氨基酸序列，或与其同源的序列，或所说序列的片段或上述片段的同源序列，3)上面2)描述的多肽由Seq.ID No.1表示的氨基酸序列组成，4)一类DNA编码上面1)，2)，3)中描述的多肽，5)上面4)描述的DNA具有Seq.ID No.2中表示的核苷酸序列或具有能与该序列选择性杂交的片段，
6)上面4)描述的DNA具有Seq.ID No.5中表示的核苷酸序列或具有能与该序列选择性杂交的片段，7)上面4)描述的DNA具有Seq.ID No.3中表示的核苷酸序列或具有能与该序列选择性杂交的片段，8)上面4)描述的DNA具有Seq.ID No.6中表示的核苷酸序列或具有能与该序列选择性杂交的片段，9)一种基本纯化的大鼠PGI2受体，10)上面9)中所述受体是一种多肽，它包括在Seq.ID No.8中表示的氨基酸序列或与其同源的序列，或该序列的片段或上述片段的同源序列，11)上面10)中描述的多肽，由Seq.ID No.8表示的氨基酸序列组成，12)一类DNA，编码上面9)，10)，11)中描述的多肽，13)上面12)描述的DNA，具有Seq.ID No.9中表示的核苷酸序列或具有能与该序列选择性杂交的片段，14)上面12)描述的DNA具有Seq.ID No.10中表示的核苷酸序列或具有能与该序列选择性杂交的片段，15)一种包括上面4)-8)或12)-14)中描述的DNA复制和表达的载体，16)一株用上面15)中描述的复制和表达的载体转化或转染的宿主细胞，17)一种制备上面1)-3)或9)-11)中描述的多肽的方法，这种方法包括在有效表达所说的多肽的条件下培养上面16)描述的宿主细胞，18)一类抗上面1)-3)或9)-11)中描述的多肽的单克隆或多克隆抗体，19)一类药用组合物，它的特性有包括在上面1)-3)或9)-11)中描述的多肽，或在上面18)中描述的一类抗体的一类药用赋形剂和/或载体，20)一种筛选具有PGI2促效或拮抗活性的化合物的方法，它的特点是使用上面1)-3)或9)-11)所描述的多肽，21)一种上面18)描述的筛选方法，其特征在于使用在上面16)中描述的宿主细胞。附图简述

图1表示各种配体将〔3H〕伊洛前列素(iloprost)结合到MK71转染的细胞膜上的抑制活性。发明详述本发明涉及基本纯化的一种人或一种大鼠的PGI2受体。具体地说，本发明的人类PGI2受体涉及一种多肽，这种多肽包含Seq.ID No.1中表示的氨基酸序列或其同源序列，或这个所说序列的片段或所说片段的同源片段。另外，本发明还涉及编码这些多肽的DNA。更具体地说，本发明涉及具有Seq.ID No.2，3，5或6表示的核苷酸序列的DNA，或含有能与在Seq.ID No.2，3，5或6中表示的核苷酸序列选择性杂交的片段的DNA。本发明的小鼠PGI2受体涉及一种多肽，这种多肽包含Seq.ID No.8中表示的氨基酸序列或其同源序列，或这个所说序列的片段或这个片段的同源序列，本发明还涉及编码这些多肽的DNA，更具体地说涉及在Seq.ID No.9或10中表示的核苷酸序列或包括在Seq.ID No.9或10中表示的片段的DNA或含有能与Seq.ID No.9或10中所示的核苷酸序列选择性杂交的片段的DNA。
更具体地说，本发明涉及(1)包含Seq.ID No.1或8表示的氨基酸序列的多肽。
(2)编码上面(1)所描述的多肽的DNA，(3)具有Seq.ID No.2，5或9所示的核苷酸序列的DNA。
(4)具有Seq.ID No.3，6或10表示的核苷酸序列的DNA。
这些多肽包含Seq.ID No.1或8表示的氨基酸序列，这不意味着只包含Seq.ID No.1或8中表示的氨基酸序列，而且还包括那些额外多肽，这些多肽的N-和/或C-末端的氨基酸序列包含20％或更少，更优选的是5％或更少数量的在Seq.ID No.1或8中表示多肽的总氨基酸。
这个包含着Seq.ID No.1或8表示的氨基酸序列的多肽是纯化了的，这意味着通常制剂中的多肽，90％或更多，如95％，98％或99％具有Seq.ID No.1或8中的多肽序列。
包含Seq.ID No.1或8表示的氨基酸序列的多肽的同源序列通常至少70％，优选至少80或90％，和更优选的是至少区域具有至少100，优选至少150，如200，250，或300个相邻氨基酸。这些同源多肽都将包括在本发明的多肽定义中。
另外，包含Seq.ID No.1或8表示的氨基酸序列的多肽的片段或所说多肽的同源序列的片段意味着至少10，优选至少15，如20，25，30，40，50或60个氨基酸长度。
能与有Seq.ID No.2或3，5，6，9或10表示的核苷酸序列的DNA选择性杂交的DNA通常至少70％，优选至少80或90％，更优选的是至少95％与所说的DNA区段有同源性，这个区段至少100个，优选至少150个，如200，250或300个相邻核苷酸。这些DNA都将包括在本发明的DNA定义中。
包含Seq.ID No.2，3，5，6，9或10中所示的核苷酸序列的片段有至少10个，优选至少15，如20，25，30或40核苷酸长度，并且这些片段也包含在本发明中。
本发明的DNA可以按基因工程法，化学合成法或本领域的技术人员已知的方法制备。
本发明的进一步实施方案提供了包括本发明的DNA的复制和表达的载体。载体可以是比如，质粒、病毒或噬菌体载体，前提是这些载体具有了所说的DNA的复制起点，任选的表达启动子，及任选的启动子的调节子。这个载体可能包括一个或多个可选择标记的启动子，还包括一个或多个可选择标记基因，比如氨苄青霉素抗性基因。
本发明的进一步实施方案还提供了用载体转化或转染了的受体细胞，而此载体是用于本发明的DNA复制与表达的，这些DNA包括Seq.ID No.2，3，5，6，9或10表示的核苷酸序列或其开放阅读框。这种细胞可以是例如细菌、酵母、昆虫细胞或哺乳动物细胞。本发明的进一步实施方案还提供了一种制备本发明的多肽的方法，此方法包括在有效表达本发明的多肽的条件下培养本发明的宿主细胞。
本发明中的多肽包括一类部分氨基酸序列缺失的多肽(如一种只包括成熟蛋白表现生物活性必须的序列的多肽)，一类部分氨基酸序列被其它氨基酸取代的多肽(如那些被相似特点的氨基酸取代的多肽)和一类其它氨基酸加到或插入到它们的部分氨基酸序列中的多肽，以及一类具有Seq.ID 1或8表示的氨基酸序列的多肽。
众所周知一个氨基酸可能有一到六种密码子编码(如已知甲硫氨酸(Met)由一种密码子编码，亮氨酸(Leu)有六种密码子编码)。因此，DNA的核苷酸序列可以改变使其编码的多肽仍具有相同的氨基酸序列。
本发明的DNA，特别是在(2)中的DNA，包括一组编码多肽的核苷酸序列，通过改变核苷酸序列生产多肽的产物所示的多肽的各个核苷酸序列。
在(3)中限定的DNA是(2)中表示的DNA的实施方案并且是这个序列的天然形式。
在(4)中表示的DNA代表的是具有非翻译区的(3)中限定的DNA的序列。
具有Seq.ID No.3，6或10表示的核苷酸序列的DNA可按以下方法制备，也就是I)将产生本发明的多肽的mRNA从细胞中分离出，ii)从得到的mRNA制备第一条链(单链cDNA)，接着制备第二条链(双链cDNA)(合成cDNA)，iii)将得到的cDNA插入到合适的质粒载体中，iv)将重组载体转染到宿主细胞中(构建cDNA文库)，v)通过斑点杂交从得到的cDNA文库中分离包含所要DNA的质粒，vi)测定所要的DNA的核苷酸序列。
详细地说，步骤(i)可以按OKayama，H等的方法(在Method inEnzymology，154，3(1987)中描述的)或Chirgwin，J.M.等的方法(在Biochem，18，5294(1979)中描述的)从组织中实现，这些组织是人或鼠的PGI2受体表达的组织，优选组织细胞或肺、血管、白细胞和血小板细胞等。
步骤(ii)、(iii)和(iv)是一系列制备cDNA文库的步骤，可以按Glubler& Hoffman(在Gene，25，263，(1983)中描述)方法并稍加改进来完成。
已知在步骤(iii)中使用的质粒载体的实例有可以在大肠杆菌菌株中作用的(如pB322)和在枯草芽孢杆菌中作用的(如pUB110)的许多载体，优选使用在大肠杆菌菌株λ-ZAPII。
作为步骤(iv)所用的宿主细胞，许多是已知的。可以用任何宿主细胞而优选使用DH5感受态细胞(按Gene，96，23(1990)描述的制备)。
步骤(v)本身是一个已知的方法，比如这个步骤可采用斑点杂交法或菌落杂交法(在Gene，10，63(1980)中描述)等来实现。对于要足够的探针，另一种类动物的PGI2受体的DNA及其片段，或与该DNA有同源性的DNA都可使用。
步骤(vi)本身也是已知的方法，比如这步可采用双脱氧终止法或Maxam-Gilbert法实现。
一旦测定了在Seq.ID No.2，3，5，6，9或10中表示的核苷酸序列，本发明的DNA可通过化学合成法，PCR法(聚合酶链式反应)得到或通过用本发明所说的DNA片段为探针杂交得到。另外，本发明的DNA能够得到想要的量，方法是将包含本发明的DNA的载体DNA转化进合适的宿主，接着培养转化子。
本发明的多肽(Seq.ID No.1或8)可按以下方法制备1)从有机体或培养细胞中分离和纯化，2)化学合成，或3)用基因工程技术等，优选用(3)中描述的方法。
采用基因工程制备多肽的表达系统(宿主细胞-载体系统)实例有比如细菌、酵母、昆虫细胞、哺乳动物细胞等表达系统。
例如，在大肠杆菌中的表达可按以下步骤进行，连接一种编码成熟蛋白的DNA(如在Seq.ID No.2，5或9中表示的DNA编码核苷酸序列)，得到以后再接到合适的启动子的下游(如trp启动子、Lac启动子、λPL启动子、T7启动子等)，再插入到载体中(如pBR322，pUC18，pUC19等)，这些载体在大肠杆菌菌株中作用成为表达载体。再将这包含有表达载体的转染物(如E.coli DH1，JM109，E.coli HB101)在合适培养基中培养，想要的多肽可从得到的细菌制备。如果应用了细菌信号肽(如Pel B的信号肽)，所需多肽可在周质产生，并且与另一种多肽的融合蛋白也容易产生。
此外，在哺乳动物细胞中也可表达，例如，将Seq.ID No.3，6或10中表示的DNA插入到一个合适启动子下游(如SV40启动子，LTR启动子，金属硫蛋白启动子等)，而这些启动子又在合适的载体上(如逆转录病毒载体，乳头瘤病毒载体，牛痘病毒载体，SV40载体)，这样得到表达载体，再将得到的表达载体转染到合适的哺乳细胞中(如猴COS-7细胞、中国仓鼠CHO细胞、小鼠L细胞)，然后将转化物在合适的培养基中培养，从培养物中可得到所要的多肽。得到的多肽可通过常规生化方法分离和纯化。
对于出血疾病等的治疗，本发明的多肽可以按正常全身或局部用药。通常经口服或肠胃外服用，优选口服，静脉注射或心内注射。
服用的剂量取决于年龄、体重、症状和预期的治疗效果，服用的方法，和治疗的时间。对于成人，每人的每次剂量通常在100μg-100mg，口服可以每天几次，10μg-100mg，肠胃外服用，每天几次。
正如上面提到的，使用剂量由各种条件决定，但是也有些例子可采用高于或低于上述范围的。
在服用本发明的化合物时，口服可用固体的，流体的或其它形式的组合物，注射剂、搽剂、栓剂可用于肠胃外服用。
口服的固体组合物包括压紧的片剂、丸剂、胶囊、可扩散粉、粒剂。胶囊包括软胶囊和硬胶囊。
在这些组合物中，一种或多种活性成分与至少一种惰性稀释剂混合(比如乳糖、甘露糖、葡萄糖、羟丙基纤维素、微晶纤维素、淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、硅酸镁氧化铝)，这些组合物还包括除惰性稀释剂外通常用途的附加物，如润滑剂(如硬脂酸镁等)，分散剂(如羟乙酸钙纤维素)，稳定剂(如，人血清白蛋白，乳糖等)，助溶剂(如精氨酸、天冬氨酸)。
药片或药丸，如果需要可包上一层胃的或肠的材料膜(如糖、白明胶、羟基丙基甲基纤维素或羟丙基纤维素、邻苯二甲酸盐)，或包上两层或多层膜。另外包围物也可作为可吸收材料包括在胶囊内容物中，如白明胶。
口服的流体组合物包括药用乳液、溶液、悬浊液、糖浆和酏剂等，也可能包括本领域常用的惰性稀释剂(如纯水、乙醇)。除惰性稀释剂，这些组合物也可能包含辅助剂，如润湿剂、悬浮剂、增甜剂、增味剂、香味剂和保存剂。
其它口服组合物包括喷雾组合物，它可按已知方法制备并包含一种或多种活性化合物。喷雾组合物包含除惰性稀释剂外的其它物质。如稳定剂，如硫酸氢钠等，稳定剂，使主要化合物等渗，等渗缓冲液如氯化钠、柠檬酸钠、柠檬酸。要制备这样的喷雾组合物可用例如美国专利No.2868691或3095355所描述的方法。
肠胃外服用的注射剂包括灭菌水或非水溶液，悬液和乳液。对于水溶液或非水溶液或悬液，一种或多种活性化合物与至少一种惰性稀释剂混合。水稀释液包括注射用蒸馏水和生理盐水溶液。非水稀释液包括丙烯乙二醇、聚乙烯乙二醇，植物油如橄榄油，酒精如乙醇POLYSOLBATE80(注册商标)等。
注射剂可包含惰性稀释剂以外的其它物质，如保存剂、润湿剂、乳化剂、分散剂、稳定剂(如人血清白蛋白乳糖)，和辅助剂如助溶液(精氨酸、天冬氨酸)。
它们将被灭菌，如通过细菌保留滤器过滤，通过用无菌试剂配制组合物或辐射。它们也可生产成无菌固体组合物的形式(如冷冻干燥)。这些固体组合物在注射使用前才溶解到无菌水或其它无菌稀释液中。
其它肠胃外使用的组合物包括外用流体，皮肤搽剂(如药膏)，用于直肠的栓剂和阴道栓剂，它们包含一种或一种以上活性化合物，并可按已知方法制备。本发明的最佳实施方式下面的实施例只是举例，并不是限制本发明。参考实施例1克隆一种小鼠PGI2受体的cDNA小鼠P-815的培养肥大细胞瘤细胞的总RNA可通过酸性硫氰酸胍-苯酚-氯仿法(Anal Biochem，162，156(1987))分离。一种单链cDNA采用随机引物(引物购制Toyobo.Co.Ltd)和莫洛尼(molony)小鼠白血病病毒逆转录酶(从Bethesda Research Laboratories购实)合成。对于PCR引物，使用人和小鼠TXA2受体的cDNA区域和对应于编码第二细胞外环结构域和第七穿膜结构域。小鼠PGE受体的三种亚型的cDNA，这就是说，对于引物，使用下面表示的分别编码氨基酸序列Leu-Ala-Val-Thr-Asp-Leu和Asp-Pro-Lie-Tyr-Ile的合成核苷酸(a)和(b)5’-CTG/CGCA/TGTG/CACNFGAT/CT/CT-3’(a)和5’-AT/GA/GTANACCCANGGA/GTC-3’(b)以上面得到的单链cDNA为模板，按下面扩增，在94℃变性1分钟，在40℃退火0.5分钟。在72℃延伸1分钟，进行两个循环，在94℃变性1分钟，在46℃退火0.5分钟，在72℃延伸1分钟，进行3个循环，接着在94℃变性1分钟，在5℃退火0.5分钟。在72℃延伸1分钟，进行27个循环。扩增的cDNA用DNA聚合酶I钝化，用琼脂糖凝胶电泳分离并亚克隆到pbluescript Sk(+)载体(购自Stratagene)的EcoRV位点。从随机挑选的克隆的测序结果看出，这个克隆有706个碱基(叫做CY)与已知类前列腺素受体的cDNA核苷序列有同源性，所以这个克隆可用作杂交的探针。
从P-815细胞中分离聚腺苷RNA。使用cDNA合成试剂盒(购自Pharmacia)并采用寡聚脱氧胸腺嘧啶引导法制备了一种cDNA。在大小选择后(大于1.5kb)，所说的cDNA插入到λ-ZAPIIDNA的EcoRI位点(λ-ZAPIIDNA购自Stratagene)，并采用了EcoRI接头(购自New England Biolabs)，这样制备了cDNA文库。得到的cDNA文库中有3.5×105个克隆转移到尼龙膜上(商标Hybond-N plus，购自Amersham)并用插入克隆CY的cDNA交叉杂交筛选，杂交在65℃的6×SSC(900mM NaCl，90mM柠檬酸钠)中进行，6×SSC还包括5×Denhardt’s溶液(0.1％Ficoll，0.1％聚乙烯吡咯烷酮和0.1％牛血清白白)，0.5％SDS(十二烷基磺酸钠)，200μg/ml热变性鲑精DNA和32P放射标记的克隆CY的插入cDNA，杂交15小时，然后尼龙膜在65℃用含1％SDS2×SSC洗两遍30分钟，挑选了9个阳性克隆并通过体内切除法转移到质粒上。用Bca Best DNA测序试剂盒测定了双链的核苷酸序列(试剂盒购自Takara-Shuzo Co.Ltd.)得到了一个代表性克隆CP302。实施例1克隆一种人PGI2受体cDNA(来自人血小板)采用寡聚(dT)引导法从人巨核细胞白血病细胞中制备了一种cDNA(CMK细胞，按Brit.J.Haematol.72，184(1989)描述方法制备)。在大小选择后(大于1.5kb)，所说的cDNA用EcoRI接头(购自NewEngland Biolabs)插入到λ-ZAPIIDNA(购自Stratagene)的EcoRI位点以制备cDNA文库。在得到的cDNA文库中转移3.5×105个克隆到尼龙膜上(商标Hybond-N plus，购自Amersham)并用参考实施例1中CY克隆的cDNA插入序列通过交叉-杂交筛选。杂交在6×SSC(900mM NaCl，90mM柠檬酸钠)中65℃下进行，6×SSC含有5×Denhardt’s溶液，0.5％SDS，200μg/ml热变性鲑精DNA和32P标记的克隆CY的cDNA插入序列，杂交15小时，在杂交后，膜在65℃用含1％SDS的2×SSC洗两次30分钟。几个阳性克隆挑选出来并用于序列分析。
用双脱氧链终止法测定了双链的核苷酸顺序，从分析结果可看出，有一个代表性克隆，MK71，具有一个开放阅读框(在Seq.ID No.2中表示)，1158bp的全长cDNA。全长核苷酸序列在Seq.ID No.3中表示。按开放阅读框推测的氨基酸顺序在Seq.ID No.1中表示。MK71的核苷酸序列在Seq.ID No.3中表示，而预测的氨基酸顺序一起在Seq.IDNo.4中表示。实施例2人PGI2受体cDNA的克隆(受体来自人肺)使用来源于人肺的cDNA文库(Clontech Code No.CHAL 1033a)和参考实施例1中制备的CP302用EcoRV消化后制备的片段(约1.5kb)，并在下面条件下按实施例1的方法进行交叉杂交。杂交在5×SSPE(0.75M NaCl，0.05M NaH2PO4-H2O，0.005M EDTA)在37℃下进行，5×SSPE还含有25％酰胺，1×Denhardt’s溶液，0.1％SDS，100μg/ml热变性鲑精DNA和32P标记的探针(用EcoRV消化在参考实施例1中制备在CP302得到片段)，杂交20小时。杂交后，滤膜依次在室温下用2×SSC洗两次10分钟，在2×SSC中37℃下洗两次10分钟，在2×SSC中42℃下洗一次10分钟。接着许多阳性克隆被选出，亚克隆到pBluescript KS(-)(购自Invitrogen Co.Ltd.)中并进行序列分析。
用双脱氧链终止法测定双链核苷酸序列。从分析结果看出，一个代表性克隆，phIPR1是一个1158bp有开放阅读框的全长cDNA(Seq.IDNo.5表示)的克隆。全长的核苷酸序列在Seq.ID No.6中表示。按开放阅读框预计的氨基酸序列在Seq.ID No.1中表示。phIPR1的核苷酸序列正如在Seq.ID No.6中表示，预计的氨基酸顺序一起在Seq.ID No.7中表示。
将Seq.ID No.2和5所示的核苷酸序列进行比较，在Seq.ID No.2的核苷酸序列中的第159个碱基位置是鸟嘌呤“G”。另一方面在Seq.IDNo.5的相对应处为胞嘧啶“C”。另外，在Seq.ID No.2的核苷酸序列的第984个碱基位置是腺嘌呤“A”，而在Seq.ID No.5相对应位置为胞嘧啶“C”。类似的差别还存在于Seq.ID No.3和6，Seq.ID No.4和7中。这种差别被认为是由于采用不同细胞制备cDNA文库造成的。实施例3克隆大鼠PGI受体的cDNA(来源于大鼠肺)采用来源于大鼠肺的cDNA文库(C1ontech Code No.CLRL 1008a)和用EcoRV消化参考实施例1中制备的CP302制备的片段(1.5kb)，按实施例2的方法进行交叉杂交。几个阳性克隆被选出，并亚克隆至pBluescript KS(-)(购自Invitrogen Co.Ltd)并进行序列分析。
用双脱氧链终止法测定双链核苷酸顺序。从分析的结果看出，一个代表性克隆，prIPR1，是1248bp的有开放阅读框(在Seq.ID No.9表示)的全长cDNA的克隆。全长的核苷酸序列在Seq.ID No.10中表示。按开放阅读框推测的氨基酸序列在Seq.ID No.8中表示。prIPR1的核苷酸序列在Seq.ID No.10中表示，而推测的氨基酸序列一起在Seq.ID No.11表示。实施例4在CHO细胞中的表达和配体结合试验MK71 cDNA的EcoRI插入片段被亚克隆到pdKCR-dhfr，pdKCR-dhfr是一个包含小鼠基因作为选择标记的真核细胞表达载体。得到的质粒DNA采用脂转染(lipofection)法(在Proc.Natl.Acad.Sci.USA，84，7413(1987))转染到二氢叶酸还原酶缺陷型的CHO细胞(CHO-dhfr)中。一组表达二氢叶酸还原酶的细胞在包含青霉素(100 units/ml)，链霉素(100mg/ml)和10％透析的胎牛血清的α-改进egle培养基(购自Cell Culture Laboratories)中培养并选择。从这组细胞中通过单细胞克隆分离出细胞系。通过RNA印迹分析测试cDNA的表达。用pdKCR-dhfr转染的CHO细胞制备的细胞系为对照，在PNA印迹分析中没有信号。
转染的CHO细胞克隆培养、收获后，用Potter-Eivehjem在包含25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.25M蔗糖，10mM MgCl2，1mM EDTA和0.1mM苯甲基磺酰氟溶液中匀浆。匀浆物在800×g离心10分钟。上清液保存，沉淀悬浮在包含25mM Tris-HCl(pH7.5)，0.25M蔗糖，10mM MgCl2，1mM EDTA和0.1mM苯基甲基磺酰基氟溶液中，再次匀浆并离心。上清液和保存的上清液混合，在100,000×g离心1小时，沉淀悬浮于20mM MES(2-CN-吗啉代乙烷磺酸水合物，pH6.0)，10mM MgCl2和1mM EDTA(悬浮缓冲液)和旧弱(asthe)粗膜组织中。
〔3H〕伊洛前列素(iloprost)结合测试按下面进行，也就是说粗糙膜组织，40μg蛋白和各种浓度的〔3H〕伊洛前列素(iloprost)(用于Scatchard分析)或20nM〔3H〕伊洛前列素(iloprost)(用于替换试验)悬浮于悬浮缓冲液中，总体积为100ml，在30℃保温1小时，加入2ml冰冷却悬浮缓冲液终止保温。混合物快速用-Whatman GF/C滤膜过滤，滤膜用2ml冰冷却的悬浮缓冲液洗4次。滤膜放射性用传统方法测定，结果见图1。
这个测试表明〔3H〕伊洛前列素(iloprost)，这种PGI2受体的专一性配体专一性结合到表达MK-71的CHO细胞的细胞膜上。这个结合的斯卡查得(Scatehard)分析显示出3.3nM的解离常数和3.2pmol/mg蛋白的最大结合。另外，各种类前列腺素对〔3H〕伊洛前列素(iloprost)专一性结合的抑制活力在图1表示。这表明各种类前列腺抑制活力按以下排列伊洛前列素(iloprost)＝卡前列素(cicaprost)＞＞carbacyclin(都为稳定PGI2促进剂)＞PGE1＞STA2(稳定TXA2促进剂)＞＞PGE2＝PGD2＝PGF2a。本发明的效果本发明的多肽本身能与PGI2专一性结合，所以它们可用作PGI2产生过多而造成的疾病如出血病的治疗和预防的药剂。它们也可用于筛选促进或拮抗PGI2的化合物。
本发明的DNA也可反义方向插入上述载体中以便产生反义RNA。反义RNA也可用合成方法产生。这些反义RNA可以用在控制一个细胞中本发明多肽的水平。
本发明还提供了药用组合物，这类组合物包括本发明的多肽，或其抗体，与一类药用上可接受的赋形剂和/或载体相连。
另外，抗体发明多肽的多克隆或单克隆抗体可用于抗体中所说多肽数量的测定，并且可用于调查所说多肽和疾病之间关系的目的中，或用于疾病诊断的目的中等等。多克隆和单克隆抗体可以用所说多肽或它的片段为抗原用传统方法制备。
本发明的DNA可用于作为一类重要和必要的模板来制备本发明的多肽，而此多肽可能在基因疾病的诊断和治疗中有各种用途。另外，使用本发明的DNA为探针可以分离基因组DNA。同样，可以在人或那些其它种类动物中分离与本发明DNA高度同源的基因。序列表(1)一般信息…………(2)SEQ ID No1的信息(i)序列特征(A)长度386个氨基酸(B)类型氨基酸(D)拓扑学线性(ii)分子类型蛋白质(xi)序列描述SEQ ID No1Met Ala Asp Ser Cys Arg Asn Leu Thr Tyr Val Arg Gly Ser Val Gly1 5 10 15Pro Ala Thr Ser Thr Leu Met Phe Val Ala Gly Val Val Gly Asn Gly20 25 30Leu Ala Leu Gly Ile Leu Ser Ala Arg Arg Pro Ala Arg Pro Ser Ala35 40 45Phe Ala Val Leu Val Thr Gly Leu Ala Ala Thr Asp Leu Leu Gly Thr50 55 60Ser Phe Leu Ser Pro Ala Val Phe Val Ala Tyr Ala Arg Asn Ser Ser65 70 75 80Leu Leu Gly Leu Ala Arg Gly Gly Pro Ala Leu Cys Asp Ala Phe Ala85 90 95Phe Ala Met Thr Phe Phe Gly Leu Ala Ser Met Leu Ile Leu Phe Ala100 105 110Met Ala Val Glu Arg Cys Leu Ala Leu Ser His Pro Tyr Leu Tyr Ala115 120 125Gln Leu Asp Gly Pro Arg Cys Ala Arg Leu Ala Leu Pro Ala Ile Tyr130 135 140Ala Phe Cys Val Leu Phe Cys Ala Leu Pro Leu Leu Gly Leu Gly Gln145 150 155 160His Gln Gln Tyr Cys Pro Gly Ser Trp Cys Phe Leu Arg Met Arg Trp165 170 175Ala Gln Pro Gly Gly Ala Ala Phe Ser Leu Ala Tyr Ala Gly Leu Val180 185 190Ala Leu Leu Val Ala Ala Ile Phe Leu Cys Asn Gly Ser Val Thr Leu195 200 205Ser Leu Cys Arg Met Tyr Arg Gln Gln Lys Arg His Gln Gly Ser Leu210 215 220Gly Pro Arg Pro Arg Thr Gly Glu Asp Glu Val Asp His Leu Ile Leu225 230 235 240Leu Ala Leu Met Thr Val Val Met Ala Val Cys Ser Leu Pro Leu Thr245 250 255Ile Arg Cys Phe Thr Gln Ala Val Ala Pro Asp Ser Ser Ser Glu Met260 265 270Gly Asp Leu Leu Ala Phe Arg Phe Tyr Ala Phe Asn Pro Ile Leu Asp275 280 285Pro Trp Val Phe Ile Leu Phe Arg Lys Ala Val Phe Gln Arg Leu Lys290 295 300Leu Trp Val Cys Cys Leu Cys Leu Gly Pro Ala His Gly Asp Ser Gln305 310 315 320Thr Pro Leu Ser Gln Leu Ala Ser Gly Arg Arg Asp Pro Arg Ala Pro325 330 335Ser Ala Pro Val Gly Lys Glu Gly Ser Cys Val Pro Leu Ser Ala Trp340 345 350Gly Glu Gly Gln Val Glu Pro Leu Pro Pro Thr Gln Gln Ser Ser Gly355 360 365Ser Ala Val Gly Thr Ser Ser Lys Ala Glu Ala Ser Val Ala Cys Ser370 375 380Leu Cys385(2)SEQ ID No2的信息(i)序列特征(A)长度1158碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型mRNA的cDNA(xi)序列描述SEQ ID No2ATGGCGGATT CGTGCAGGAA CCTCACCTAC GTGCGGGGCT CGGTGGGGCC GGCCACCAGC 60ACCCTGATGT TCGTGGCCGG TGTGGTGGGC AACGGGCTGG CCCTGGGCAT CCTGAGCGCA 120CGGCGACCGG CGCGCCCCTC GGCCTTCGCG GTGCTGGTGA CCGGACTGGC GGCCACCGAC 180CTGCTGGGCA CCAGCTTCCT GAGCCCGGCC GTGTTCGTGG CCTATGCGCG CAACAGCTCC 240CTGCTGGGCC TGGCCCGAGG CGGCCCCGCC CTGTGCGATG CCTTCGCCTT CGCCATGACC 300TTCTTCGGCC TGGCGTCCAT GCTCATCCTC TTTGCCATGG CCGTGGAGCG CTGCCTGGCG 360CTGAGCCACC CCTACCTCTA CGCGCAGCTG GACGGGCCCC GCTGCGCCCG CCTGGCGCTG 420CCAGCCATCT ACGCCTTCTG CGTCCTCTTC TGCGCGCTGC CCCTGCTGGG CCTGGGCCAA 480CACCAGCAGT ACTGCCCCGG CAGCTGGTGC TTCCTCCGCA TGCGCTGGGC CCAGCCGGGC 540GGCGCCGCCT TCTCGCTGGC CTACGCCGGC CTGGTGGCCC TGCTGGTGGC TGCCATCTTC 600CTCTGCAACG GCTCGGTCAC CCTCAGCCTC TGCCGCATGT ACCGCCAGCA GAAGCGCCAC 660CAGGGCTCTC TGGGTCCACG GCCGCGCACC GGAGAGGACG AGGTGGACCA CCTGATCCTG 720CTGGCCCTCA TGACAGTGGT CATGGCCGTG TGCTCCCTGC CTCTCACGAT CCGCTGCTTC 780ACCCAGGCTG TCGCCCCTGA CAGCAGCAGT GAGATGGGGG ACCTCCTTGC CTTCCGCTTC 840TACGCCTTCA ACCCCATCCT GGACCCCTGG GTCTTCATCC TTTTCCGCAA GGCTGTCTTC 900CAGCGACTCA AGCTCTGGGT CTGCTGCCTG TGCCTCGGGC CTGCCCACGG AGACTCGCAG 960ACACCCCTTT CCCAGCTCGC CTCAGGGAGG AGGGACCCAA GGGCCCCCTC TGCTCCTGTG1020GGAAAGGAGG GGAGCTGCGT GCCTTTGTCG GCTTGGGGCG AGGGGCAGGT GGAGCCCTTG1080CCTCCCACAC AGCAGTCCAG CGGCAGCGCC GTGGGAACGT CGTCCAAAGC AGAAGCCAGC1140GTCGCCTGCT CCCTCTGC 1158(2)SEQ ID No3的信息(i)序列特征(A)长度1979碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型mRNA的cDNA(xi)序列描述SEQ ID No3AGGCAGCGAG AGACACGAGG AGCAAAGCAA GTGAAGGCAC AGACGCACGG GACAGGAGAG 60CCTGGGCAAG ACTGGAGAGC CCAGACCTGG GATGGCGGAT TCGTGCAGGA ACCTCACCTA 120CGTGCGGGGC TCGGTGGGGC CGGCCACCAG CACCCTGATG TTCGTGGCCG GTGTGGTGGG 180CAACGGGCTG GCCCTGGGCA TCCTGAGCGC ACGGCGACCG GCGCGCCCCT CGGCCTTCGC 240GGTGCTGGTG ACCGGACTGG CGGCCACCGA CCTGCTGGGC ACCAGCTTCC TGAGCCCGGC 300CGTGTTCGTG GCCTATGCGC GCAACAGCTC CCTGCTGGGC CTGGCCCGAG GCGGCCCCGC 360CCTGTGCGAT GCCTTCGCCT TCGCCATGAC CTTCTTCGGC CTGGCGTCCA TGCTCATCCT 420CTTTGCCATG GCCGTGGAGC GCTGCCTGGC GCTGAGCCAC CCCTACCTCT ACGCGCAGCT 480GGACGGGCCC CGCTGCGCCC GCCTGGCGCT GCCAGCCATC TACGCCTTCT GCGTCCTCTT 540CTGCGCGCTG CCCCTGCTGG GCCTGGGCCA ACACCAGCAG TACTGCCCCG GCAGCTGGTG 600CTTCCTCCGC ATGCGCTGGG CCCAGCCGGG CGGCGCCGCC TTCTCGCTGG CCTACGCCGG 660CCTGGTGGCC CTGCTGGTGG CTGCCATCTT CCTCTGCAAC GGCTCGGTCA CCCTCAGCCT 720CTGCCGCATG TACCGCCAGC AGAAGCGCCA CCAGGGCTCT CTGGGTCCAC GGCCGCGCAC 780CGGAGAGGAC GAGGTGGACC ACCTGATCCT GCTGGCCCTC ATGACAGTGG TCATGGCCGT 840GTGCTCCCTG CCTCTCACGA TCCGCTGCTT CACCCAGGCT GTCGCCCCTG ACAGCAGCAG 900TGAGATGGGG GACCTCCTTG CCTTCCGCTT CTACGCCTTC AACCCCATCC TGGACCCCTG 960GGTCTTCATC CTTTTCCGCA AGGCTGTCTT CCAGCGACTC AAGCTCTGGG TCTGCTGCCT1020GTGCCTCGGG CCTGCCCACG GAGACTCGCA GACACCCCTT TCCCAGCTCG CCTCAGGGAG1080GAGGGACCCA AGGGCCCCCT CTGCTCCTGT GGGAAAGGAG GGGAGCTGCG TGCCTTTGTC1140GGCTTGGGGC GAGGGGCAGG TGGAGCCCTT GCCTCCCACA CAGCAGTCCA GCGGCAGCGC1200CGTGGGAACG TCGTCCAAAG CAGAAGCCAG CGTCGCCTGC TCCCTCTGCT GACATTTCAA1260GCTGACCCTG TGATCTCTGC CCTGTCTTCG GGCGACAGGA GCCAGAAAAT CAGGGACATG 1320GCTGATGGCT GCGGATGCTG GAACCTTGGC CCCCAAACTC TGGGGCCGAT CAGCTGCTGT 1380TTCTCCTGCG GCAGGGCAGT CGCTGCTGGC TCTGGGAAGA GAGTGAGGGA CAGAGGAAAC 1440GTTTATCCTG GAGTGCAGAA AGAATGGTTC TCTCAAAATA ACCAGTGGCC TGGCCGACCT 1500GCTCTGGCCC TGGATTCCCC ATCCATCTCA TTGTCTAAAT ATTTAGAAGG CGGAGAAGTT 1560CCCAGAGGCT TCTGTACAGT CAGGTCTGCT CTGGTCTGGG TGCTGGCTCC AATCTGCGTC 1620CACTTAGGAG GCCCAACTGC CCACCCCAAG TCCCCAGGGG ATGGCCCTCC CCCTCTACCA 1680AGCCACTCCA AGAGCCAGCC CCTTTCTGCT CCACAAAAAC CACAGTTATT GGAAAAGCTC 1740CCTGCCTTCC CTTGCCGCTG GTCCCCCACC AGGCTTGGGA GCCCTGGCAT CCCAAAGGGG 1800CAACGGGAGG AAGGGGAGGC TGCTGCATTG TGGGTGATGA CGTAGGACAT GTGCTTGGTA 1860CAAAAAGGGC CTGAGACATT CCACCTAGCT TGACTGGCTG CAAGATGAGA ACTGGGGGGG 1920TGCAGGTGGT GGGGAGACAG ATGGAGAAGC TGGCAGATGA AGGGTGGGGG CTGCGGATC1979(2)SEQ ID No4的信息(i)序列特征(A)长度1979碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型mRNA的cDNA(vi)来源(A)生物人属(G)细胞类型巨核细胞白血病细胞(H)细胞系CMK(ix)特点(A)名称/关键字CDS(B)位置92-1249(C)鉴定方法P(xi)序列描述SEQ ID No4AGGCAGCGAG AGACACGAGG AGCAAAGCAA GTGAAGGCAC AGACGCACGG GACAGGAGAG 60CCTGGGCAAG ACTGGAGAGC CCAGACCTGG G ATG GCG GAT TCG TGC AGG AAC 112Met Ala Asp Ser Cys Arg Asn1 5CTC ACC TAC GTG CGG GGC TCG GTG GGG CCG GCC ACC AGC ACC CTG ATG160Leu Thr Tyr Val Arg Gly Ser Val Gly Pro Ala Thr Ser Thr Leu Met10 15 20TTC GTG GCC GGT GTG GTG GGC AAC GGG CTG GCC CTG GGC ATC CTG AGC208Phe Val Ala Gly Val Val Gly Asn Gly Leu Ala Leu Gly Ile Leu Ser25 30 35GCA CGG CGA CCG GCG CGC CCC TCG GCC TTC GCG GTG CTG GTG ACC GGA256Ala Arg Arg Pro Ala Arg Pro Ser Ala Phe Ala Val Leu Val Thr Gly40 45 50 55CTG GCG GCC ACC GAC CTG CTG GGC ACC AGC TTC CTG AGC CCG GCC GTG 304Leu Ala Ala Thr Asp Leu Leu Gly Thr Ser Phe Leu Ser Pro Ala Val60 65 70TTC GTG GCC TAT GCG CGC AAC AGC TCC CTG CTG GGC CTG GCC CGA GGC 352Phe Val Ala Tyr Ala Arg Asn Ser Ser Leu Leu Gly Leu Ala Arg Gly75 80 85GGC CCC GCC CTG TGC GAT GCC TTC GCC TTC GCC ATG ACC TTC TTC GGC 400Gly Pro Ala Leu Cys Asp Ala Phe Ala Phe Ala Met Thr Phe Phe Gly90 95 100CTG GCG TCC ATG CTC ATC CTC TTT GCC ATG GCC GTG GAG CGC TGC CTG 448Leu Ala Ser Met Leu Ile Leu Phe Ala Met Ala Val Glu Arg Cys Leu105 110 115GCG CTG AGC CAC CCC TAC CTC TAC GCG CAG CTG GAC GGG CCC CGC TGC 496Ala Leu Ser His Pro Tyr Leu Tyr Ala Gln Leu Asp Gly Pro Arg Cys120 125 130 135GCC CGC CTG GCG CTG CCA GCC ATC TAC GCC TTC TGC GTC CTC TTC TGC 544Ala Arg Leu Ala Leu Pro Ala Ile Tyr Ala Phe Cys Val Leu Phe Cys140 145 150GCG CTG CCC CTG CTG GGC CTG GGC CAA CAC CAG CAG TAC TGC CCC GGC 592Ala Leu Pro Leu Leu Gly Leu Gly Gln His Gln Gln Tyr Cys Pro Gly155 160 165AGC TGG TGC TTC CTC CGC ATG CGC TGG GCC CAG CCG GGC GGC GCC GCC 640Ser Trp Cys Phe Leu Arg Met Arg Trp Ala Gln Pro Gly Gly Ala Ala170 175 180TTC TCG CTG GCC TAC GCC GGC CTG GTG GCC CTG CTG GTG GCT GCC ATC 688Phe Ser Leu Ala Tyr Ala Gly Leu Val Ala Leu Leu Val Ala Ala Ile185 190 195TTC CTC TGC AAC GGC TCG GTC ACC CTC AGC CTC TGC CGC ATG TAC CGC 736Phe Leu Cys Asn Gly Ser Val Thr Leu Ser Leu Cys Arg Met Tyr Arg200 205 210 215CAG CAG AAG CGC CAC CAG GGC TCT CTG GGT CCA CGG CCG CGC ACC GGA 784Gln Gln Lys Arg His Gln Gly Ser Leu Gly Pro Arg Pro Arg Thr Gly220 225 230GAG GAC GAG GTG GAC CAC CTG ATC CTG CTG GCC CTC ATG ACA GTG GTC 832Glu Asp Glu Val Asp His Leu Ile Leu Leu Ala Leu Met Thr Val Val235 240 245ATG GCC GTG TGC TCC CTG CCT CTC ACG ATC CGC TGC TTC ACC CAG GCT 880Met Ala Val Cys Ser Leu Pro Leu Thr Ile Arg Cys Phe Thr Gln Ala250 255 260GTC GCC CCT GAC AGC AGC AGT GAG ATG GGG GAC CTC CTT GCC TTC CGC 928Val Ala Pro Asp Ser Ser Ser Glu Met Gly Asp Leu Leu Ala Phe Arg265 270 275TTC TAC GCC TTC AAC CCC ATC CTG GAC CCC TGG GTC TTC ATC CTT TTC 976Phe Tyr Ala Phe Asn Pro Ile Leu Asp Pro Trp Val Phe Ile Leu Phe280 285 290 295CGC AAG GCT GTC TTC CAG CGA CTC AAG CTC TGG GTC TGC TGC CTG TGC 1024Arg Lys Ala Val Phe Gln Arg Leu Lys Leu Trp Val Cys Cys Leu Cys300 305 310CTC GGG CCT GCC CAC GGA GAC TCG CAG ACA CCC CTT TCC CAG CTC GCC 1072Leu Gly Pro Ala His Gly Asp Ser Gln Thr Pro Leu Ser Gln Leu Ala315 320 325TCA GGG AGG AGG GAC CCA AGG GCC CCC TCT GCT CCT GTG GGA AAG GAG 1120Ser Gly Arg Arg Asp Pro Arg Ala Pro Ser Ala Pro Val Gly Lys Glu330 335 340GGG AGC TGC GTG CCT TTG TCG GCT TGG GGC GAG GGG CAG GTG GAG CCC 1168Gly Ser Cys Val Pro Leu Ser Ala Trp Gly Glu Gly Gln Val Glu Pro345 350 355TTG CCT CCC ACA CAG CAG TCC AGC GGC AGC GCC GTG GGA ACG TCG TCC 1216Leu Pro Pro Thr Gln Gln Ser Ser Gly Ser Ala Val Gly Thr Ser Ser360 365 370 375AAA GCA GAA GCC AGC GTC GCC TGC TCC CTC TGC TGACATTTCA AGCTGACCCT 1269Lys Ala Glu Ala Ser Val Ala Cys Ser Leu Cys380 385GTGATCTCTG CCCTGTCTTC GGGCGACAGG AGCCAGAAAA TCAGGGACAT GGCTGATGGC 1329TGCGGATGCT GGAACCTTGG CCCCCAAACT CTGGGGCCGA TCAGCTGCTG TTTCTCCTGC 1389GGCAGGGCAG TCGCTGCTGG CTCTGGGAAG AGAGTGAGGG ACAGAGGAAA CGTTTATCCT 1449GGAGTGCAGA AAGAATGGTT CTCTCAAAAT AACCAGTGGC CTGGCCGACC TGCTCTGGCC 1509CTGGATTCCC CATCCATCTC ATTGTCTAAA TATTTAGAAG GCGGAGAAGT TCCCAGAGGC 1569TTCTGTACAG TCAGGTCTGC TCTGGTCTGG GTGCTGGCTC CAATCTGCGT CCACTTAGGA 1629GGCCCAACTG CCCACCCCAA GTCCCCAGGG GATGGCCCTC CCCCTCTACC AAGCCACTCC 1689AAGAGCCAGC CCCTTTCTGC TCCACAAAAA CCACAGTTAT TGGAAAAGCT CCCTGCCTTC 1749CCTTGCCGCT GGTCCCCCAC CAGGCTTGGG AGCCCTGGCA TCCCAAAGGG GCAACGGGAG 1809GAAGGGGAGG CTGCTGCATT GTGGGTGATG ACGTAGGACA TGTGCTTGGT ACAAAAAGGG 1869CCTGAGACAT TCCACCTAGC TTGACTGGCT GCAAGATGAG AACTGGGGGG GTGCAGGTGG 1929TGGGGAGACA GATGGAGAAG CTGGCAGATG AAGGGTGGGG GCTGCGGATC1979(2)SEQ ID No5的信息(i)序列特征(A)长度1158碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型mRNA的cDNA(xi)序列描述SEQ ID No5ATGGCGGATT CGTGCAGGAA CCTCACCTAC GTGCGGGGCT CGGTGGGGCC GGCCACCAGC 60ACCCTGATGT TCGTGGCCGG TGTGGTGGGC AACGGGCTGG CCCTGGGCAT CCTGAGCGCA120CGGCGACCGG CGCGCCCCTC GGCCTTCGCG GTGCTGGTCA CCGGACTGGC GGCCACCGAC180CTGCTGGGCA CCAGCTTCCT GAGCCCGGCC GTGTTCGTGG CCTATGCGCG CAACAGCTCC240CTGCTGGGCC TGGCCCGAGG CGGCCCCGCC CTGTGCGATG CCTTCGCCTT CGCCATGACC300TTCTTCGGCC TGGCGTCCAT GCTCATCCTC TTTGCCATGG CCGTGGAGCG CTGCCTGGCG360CTGAGCCACC CCTACCTCTA CGCGCAGCTG GACGGGCCCC GCTGCGCCCG CCTGGCGCTG420CCAGCCATCT ACGCCTTCTG CGTCCTCTTC TGCGCGCTGC CCCTGCTGGG CCTGGGCCAA480CACCAGCAGT ACTGCCCCGG CAGCTGGTGC TTCCTCCGCA TGCGCTGGGC CCAGCCGGGC540GGCGCCGCCT TCTCGCTGGC CTACGCCGGC CTGGTGGCCC TGCTGGTGGC TGCCATCTTC600CTCTGCAACG GCTCGGTCAC CCTCAGCCTC TGCCGCATGT ACCGGCAGCA GAAGCGCCAC660CAGGGCTCTC TGGGTCCACG GCCGCGCACC GGAGAGGACG AGGTGGACCA CCTGATCCTG720CTGGCCCTCA TGACAGTGGT CATGGCCGTG TGCTCCCTGC CTCTCACGAT CCGCTGCTTC780ACCCAGGCTG TCGCCCCTGA CAGCAGCAGT GAGATGGGGG ACCTCCTTGC CTTCCGCTTC840TACGCCTTCA ACCCCATCCT GGACCCCTGG GTCTTCATCC TTTTCCGCAA GGCTGTCTTC900CAGCGACTCA AGCTCTGGGT CTGCTGCCTG TGCCTCGGGC CTGCCCACGG AGACTCGCAG960ACACCCCTTT CCCAGCTCGC CTCCGGGAGG AGGGACCCAA GGGCCCCCTC TGCTCCTGTG 1020GGAAAGGAGG GGAGCTGCGT GCCTTTGTCG GCTTGGGGCG AGGGGCAGGT GGAGCCCTTG 1080CCTCCCACAC AGCAGTCCAG CGGCAGCGCC GTGGGAACGT CGTCCAAAGC AGAAGCCAGC 1140GTCGCCTGCT CCCTCTGC 1158(2)SEQ ID No6的信息(i)序列特征(A)长度1320碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型mRNA的cDNA(xi)序列描述SEQ ID No6AGCAAGTGAA GGCACAGACG CACGGGACAG GAGAGCCTGG GCAAGACTGG AGAGCCCAGA 60CCTGGGATGG CGGATTCGTG CAGGAACCTC ACCTACGTGC GGGGCTCGGT GGGGCCGGCC 120ACCAGCACCC TGATGTTCGT GGCCGGTGTG GTGGGCAACG GGCTGGCCCT GGGCATCCTG 180AGCGCACGGC GACCGGCGCG CCCCTCGGCC TTCGCGGTGC TGGTCACCGG ACTGGCGGCC 240ACCGACCTGC TGGGCACCAG CTTCCTGAGC CCGGCCGTGT TCGTGGCCTA TGCGCGCAAC 300AGCTCCCTGC TGGGCCTGGC CCGAGGCGGC CCCGCCCTGT GCGATGCCTT CGCCTTCGCC 360ATGACCTTCT TCGGCCTGGC GTCCATGCTC ATCCTCTTTG CCATGGCCGT GGAGCGCTGC 420CTGGCGCTGA GCCACCCCTA CCTCTACGCG CAGCTGGACG GGCCCCGCTG CGCCCGCCTG 480GCGCTGCCAG CCATCTACGC CTTCTGCGTC CTCTTCTGCG CGCTGCCCCT GCTGGGCCTG 540GGCCAACACC AGCAGTACTG CCCCGGCAGC TGGTGCTTCC TCCGCATGCG CTGGGCCCAG 600CCGGGCGGCG CCGCCTTCTC GCTGGCCTAC GCCGGCCTGG TGGCCCTGCT GGTGGCTGCC 660ATCTTCCTCT GCAACGGCTC GGTCACCCTC AGCCTCTGCC GCATGTACCG CCAGCAGAAG 720CGCCACCAGG GCTCTCTGGG TCCACGGCCG CGCACCGGAG AGGACGAGGT GGACCACCTG 780ATCCTGCTGG CCCTCATGAC AGTGGTCATG GCCGTGTGCT CCCTGCCTCT CACGATCCGC 840TGCTTCACCC AGGCTGTCGC CCCTGACAGC AGCAGTGAGA TGGGGGACCT CCTTGCCTTC 900CGCTTCTACG CCTTCAACCC CATCCTGGAC CCCTGGGTCT TCATCCTTTT CCGCAAGGCT 960GTCTTCCAGC GACTCAAGCT CTGGGTCTGC TGCCTGTGCC TCGGGCCTGC CCACGGAGAC1020TCGCAGACAC CCCTTTCCCA GCTCGCCTCC GGGAGGAGGG ACCCAAGGGC CCCCTCTGCT1080CCTGTGGGAA AGGAGGGGAG CTGCGTGCCT TTGTCGGCTT GGGGCGAGGG GCAGGTGGAG1140CCCTTGCCTC CCACACAGCA GTCCAGCGGC AGCGCCGTGG GAACGTCGTC CAAAGCAGAA1200GCCAGCGTCG CCTGCTCCCT CTGCTGACAT TTCAAGCTGA CCCTGTGATC TCTGCCCTGT1260CTTCGGGCGA CAGGAGCCAG AAAATCAGGG ACATGGCTGA TGGCTGCGGA TGCTGGAACC1220(2)SEQ ID No7的信息(i)序列特征(A)长度1320碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型mRNA的cDNA(vi)来源(A)生物小鼠(F)组织类型肺(ix)特点(A)名字/关键字CDS(B)位置67-1224(C)鉴定方法P(xi)序列描述SEQ ID No7AGCAAGTGAA GGCACAGACG CACGGGACAG GAGAGCCTGG GCAAGACTGG AGAGCCCAGA 60CCTGGG ATG GCG GAT TCG TGC AGG AAC CTC ACC TAC GTG CGG GGC TCG 108Met Ala Asp Ser Cys Arg Asn Leu Thr Tyr Val Arg Gly Ser1 5 10GTG GGG CCG GCC ACC AGC ACC CTG ATG TTC GTG GCC GGT GTG GTG GGC156Val Gly Pro Ala Thr Ser Thr Leu Met Phe Val Ala Gly Val Val Gly15 20 25 30AAC GGG CTG GCC CTG GGC ATC CTG AGC GCA CGG CGA CCG GCG CGC CCC204Asn Gly Leu Ala Leu Gly Ile Leu Ser Ala Arg Arg Pro Ala Arg Pro
35 40 45TGG GCC TTC GCG GTG CTG GTC ACC GGA CTG GCG GCC ACC GAC CTG CTG252Ser Ala Phe Ala Val Leu Val Thr Gly Leu Ala Ala Thr Asp Leu Leu50 55 60GGC ACC AGC TTC CTG AGC CCG GCC GTG TTC GTG GCC TAT GCG CGC AAC300Gly Thr Ser Phe Leu Ser Pro Ala Val Phe Val Ala Tyr Ala Arg Asn65 70 75AGC TCC CTG CTG GGC CTG GCC CGA GGC GGC CCC GCC CTG TGC GAT GCC348Ser Ser Leu Leu Gly Leu Ala Arg Gly Gly Pro Ala Leu Cys Asp Ala80 85 90TTC GCC TTC GCC ATG ACC TTC TTC GGC CTG GCG TCC ATG CTC ATC CTC396Phe Ala Phe Ala Met Thr Phe Phe Gly Leu Ala Ser Met Leu Ile Leu95 100 105 110TTT GCC ATG GCC GTG GAG CGC TGC CTG GCG CTG AGC CAC CCC TAC CTC444Phe Ala Met Ala Val Glu Arg Cys Leu Ala Leu Ser His Pro Tyr Leu115 120 125TAC GCG CAG CTG GAC GGG CCC CGC TGC GCC CGC CTG GCG CTG CCA GCC492Tyr Ala Gln Leu Asp Gly Pro Arg Cys Ala Arg Leu Ala Leu Pro Ala130 135 140ATC TAC GCC TTC TGC GTC CTC TTC TGC GCG CTG CCC CTG CTG GGC CTG540Ile Tyr Ala Phe Cys Val Leu Phe Cys Ala Leu Pro Leu Leu Gly Leu145 150 155GGC CAA CAC CAG CAG TAC TGC CCC GGC AGC TGG TGC TTC CTC CGC ATG588Gly Gln His Gln Gln Tyr Cys Pro Gly Ser Trp Cys Phe Leu Arg Met160 165 170CGC TGG GCC CAG CCG GGC GGC GCC GCC TTC TGG CTG GCC TAC GCC GGC636Arg Trp Ala Gln Pro Gly Gly Ala Ala Phe Ser Leu Ala Tyr Ala Gly175 180 185 190CTG GTG GCC CTG CTG GTG GCT GCC ATC TTC CTC TGC AAC GGC TCG GTC684Leu Val Ala Leu Leu Val Ala Ala Ile Phe Leu Cys Asn Gly Ser Val195 200 205ACC CTC AGC CTC TGC CGC ATG TAC CGC CAG CAG AAG CGC CAC CAG GGC732Thr Leu Ser Leu Cys Arg Met Tyr Arg Gln Gln Lys Arg His Gln Gly210 215 220TCT CTG GGT CCA CGG CCG CGC ACC GGA GAG GAC GAG GTG GAC CAC CTG780Ser Leu Gly Pro Arg Pro Arg Thr Gly Glu Asp Glu Val Asp His Leu225 230 235ATC CTG CTG GCC CTC ATG ACA GTG GTC ATG GCC GTG TGC TCC CTG CCT828lle Leu Leu Ala Leu Met Thr Val Val Met Ala Val Cys Ser Leu Pro240 245 250CTC ACG ATC CGC TGC TTC ACC CAG GCT GTC GCC CCT GAC AGC AGC AGT876Leu Thr Ile Arg Cys Phe Thr Gln Ala Val Ala Pro Asp Ser Ser Ser255 260 265 270GAG ATG GGG GAC CTC CTT GCC TTC CGC TTC TAC GCC TTC AAC CCC ATC924Glu Met Gly Asp Leu Leu Ala Phe Arg Phe Tyr Ala Phe Asn Pro Ile
275 280 285CTG GAC CCC TGG GTC TTC ATC CTT TTC CGC AAG GCT GTC TTC CAG CGA972Leu Asp Pro Trp Val Phe Ile Leu Phe Arg Lys Ala Val Phe Gln Arg290 295 300CTC AAG CTC TGG GTC TGC TGC CTG TGC CTC GGG CCT GCC CAC GGA GAC 1020Leu Lys Leu Trp Val Cys Cys Leu Cys Leu Gly Pro Ala His Gly Asp305 310 315TCG CAG ACA CCC CTT TCC CAG CTC GCC TCC GGG AGG AGG GAC CCA AGG 1068Ser Gln Thr Pro Leu Ser Gln Leu Ala Ser Gly Arg Arg Asp Pro Arg320 325 330GCC CCC TCT GCT CCT GTG GGA AAG GAG GGG AGC TGC GTG CCT TTG TCG 1116Ala Pro Ser Ala Pro Val Gly Lys Glu Gly Ser Cys Val Pro Leu Ser335 340 345 350GCT TGG GGC GAG GGG CAG GTG GAG CCC TTG CCT CCC ACA CAG CAG TCC 1164Ala Trp Gly Glu Gly Gln Val Glu Pro Leu Pro Pro Thr Gln Gln Ser355 360 365AGC GGC AGC GCC GTG GGA ACG TCG TCC AAA GCA GAA GCC AGC GTC GCC 1212Ser Gly Ser Ala Val Gly Thr Ser Ser Lys Ala Glu Ala Ser Val Ala370 375 380TGC TCC CTC TGC TGACATTTCA AGCTGACCCT GTGATCTCTG CCCTGTCTTC 1264Cys Ser Leu Cys385GGGCGACAGG AGCCAGAAAA TCAGGGACAT GGCTGATGGC TGCGGATGCT GGAACC 1320(2)SEQ ID No8的信息(i)序列特征(A)长度416个氨基酸(B)类型氨基酸(D)拓扑学线性(ii)分子类型蛋白质(xi)序列描述SEQ ID No8Met Val Ala Ser Gly Gly Arg Pro Asp Gly Pro Pro Ser Ile Thr Pro1 5 10 15Glu Ser Pro Leu Ile Val Gly Gly Arg Glu Trp Gln Gly Met Ala Gly20 25 30Ser Cys Trp Asn Ile Thr Tyr Val Gln Asp Ser Val Gly Pro Ala Thr35 40 45Ser Thr Leu Met Phe Val Ala Gly Val Val Gly Asn Gly Leu Ala Leu
50 55 60Gly Ile Leu Gly Ala Arg Arg Arg Ser His Pro Ser Ala Phe Ala Val65 70 75 80Leu Val Thr Gly Leu Ala Val Thr Asp Leu Leu Gly Thr Cys Phe Leu85 90 95Ser Pro Ala Val Phe Val Ala Tyr Ala Arg Asn Ser Ser Leu Leu Gly100 105 110Leu Ala His Gly Gly Thr Met Leu Cys Asp Thr Phe Ala Phe Ala Met115 120 125Thr Phe Phe Gly Leu Ala Ser Thr Leu Ile Leu Phe Ala Met Ala Val130 135 140Glu Arg Cys Leu Ala Leu Ser His Pro Tyr Leu Tyr Ala Gln Leu Asp145 150 155 160Gly Pro Arg Cys Ala Arg Leu Ala Leu Pro Ala Ile Tyr Ala Phe Cys165 170 175Cys Leu Phe Cys Ser Leu Pro Leu Leu Gly Leu Gly Glu His Gln Gln180 185 190Tyr Cys Pro Gly Ser Trp Cys Phe Ile Arg Met Arg Ser Pro Gln Pro195 200 205Gly Gly Cys Ala Phe Ser Leu Ala Tyr Ala Ser Leu Met Ala Leu Leu210 215 220Val Thr Ser Ile Phe Phe Cys Asn Gly Ser Val Thr Leu Ser Leu Cys225 230 235 240His Met Tyr Arg Gln Gln Arg Arg His His Gly Ser Phe Val Pro Thr245 250 255Ser Arg Ala Arg Glu Asp Glu Val Tyr His Leu Ile Leu Leu Ala Leu260 265 270Met Thr Gly Ile Met Ala Val Cys Ser Leu Pro Leu Thr Ile Arg Gly275 280 285Phe Thr Gln Ala Ile Ala Pro Asp Ser Arg Glu Met Gly Asp Leu His290 295 300Ala Phe Arg Phe Asn Ala Phe Asn Pro Ile Leu Asp Pro Trp Val Phe305 310 315 320Ile Leu Phe Arg Lys Ala Val Phe Gln Arg Leu Lys Phe Trp Leu Cys325 330 335Cys Leu Cys Ala Arg Ser Val His Gly Asp Leu Gln Thr Pro Leu Ser340 345 350Arg Pro Val Ser Gly Arg Arg Asp Thr Leu Ala Pro Asp Ser Leu Gln355 360 365Ala Lys Glu Gly Asn Trp Val Pro Leu Ser Thr Trp Gly Thr Gly Gln370 375 380Val Ala Pro Leu Thr Ala Val Pro Leu Ser Gly Gly Asp Gly Cys Ser385 390 395 400Val Gly Met Pro Ser Lys Thr Glu Ala Val Val Ala Cys Ser Leu Cys405 410 415(2)SEQ ID No9的信息(i)序列特征(A)长度1281碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型mRNA的cDNA(xi)序列描述SEQ ID No9ATGGTGGCCA GCGGTGGACG TCCTGATGGT CCCCCTTCTA TCACCCCCGA GAGCCCTCTC 60ATTGTAGGTG GCAGAGAGTG GCAGGGTATG GCAGGTTCTT GCTGGAACAT CACCTACGTT120CAAGACTCGG TAGGACCTGC CACCAGCACC CTGATGTTTG TGGCTGGTGT GGTGGGCAAC180GGGCTAGCAC TGGGCATCCT GGGTGCCCGA CGGAGGTCAC ACCCATCGGC 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CCAGGCTAAG GAAGGGAACT GGGTGCCCCT GTCAACCTGG 1140GGTACGGGGC AGGTGGCACC ATTGACTGCT GTGCCTCTGT CTGGTGGTGA TGGCTGTTCT 1200GTGGGAATGC CATCCAAAAC AGAGGCTGTG GTTGCCTGCT CCCTCTGCTG ATACCTAAGC 1260TGGTCCTGCT TGCCATCCCG G 1281(2)SEQ ID No10的信息(i)序列特征(A)长度1387碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型mRNA的cDNA(xi)序列描述SEQ ID No10CGGTGAAACA GGAGAGGGAC AGACCTGGAG AAGACGGAAA CAAAAGACAG AAACACACGC 60ACACGGGGAA CTGGGAGTTG ACTGGCAGAT CCCAGCTGCC CTGAGGATGG TGGCCAGCGG 120TGGACGTCCT GATGGTCCCC CTTCTATCAC CCCCGAGAGC CCTCTCATTG TAGGTGGCAG 180AGAGTGGCAG GGTATGGCAG GTTCTTGCTG GAACATCACC TACGTTCAAG ACTCGGTAGG 240ACCTGCCACC AGCACCCTGA TGTTTGTGGC TGGTGTGGTG GGCAACGGGC TAGCACTGGG 300CATCCTGGGT GCCCGACGGA GGTCACACCC ATCGGCGTTT GCAGTGTTGG TCACTGGGCT 360GGCAGTGACG GATCTGCTGG GCACGTGCTT CTTGAGCCCC GCGGTGTTTG TGGCCTATGC 420TCGAAACAGC TCTTTGCTGG GCCTGGCCCA CGGTGGGACG ATGCTGTGTG ACACTTTCGC 480CTTCGCTATG ACTTTCTTCG GCCTGGCCTC CACGCTCATC CTCTTCGCCA TGGCTGTGGA 540GCGGTGCCTG GCTCTCAGTC ATCCCTACCT GTACGCCCAG CTGGACGGGC CCCGCTGTGC 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No11的信息(i)序列特征(A)长度1320碱基对(B)类型核酸(C)链型单链(D)拓扑学线性(ii)分子类型mRNA的cDNA(vi)来源(A)生物小鼠(F)组织类型肺(ix)特点(A)名字/关键字CDS(B)位置107-1354(C)鉴定方法P(xi)序列描述SEQ ID No11CGGTGAAACA GGAGAGGGAC AGACCTGGAG AAGACGGAAA CAAAAGACAG AAACACACGC 60ACACGGGGAA CTGGGAGTTG ACTGGCAGAT CCCAGCTGCC CTGAGG ATG GTG GCC115Met Val Ala1AGC GGT GGA CGT CCT GAT GGT CCC CCT TCT ATC ACC CCC GAG AGC CCT 163Ser Gly Gly Arg Pro Asp Gly Pro Pro Ser Ile Thr Pro Glu Ser Pro5 10 15CTC ATT GTA GGT GGC AGA GAG TGG CAG GGT ATG GCA GGT TCT TGC TGG 211Leu Ile Val Gly Gly Arg Glu Trp Gln Gly Met Ala Gly Ser Cys Trp20 25 30 35AAC ATC ACC TAC GTT CAA GAC TCG GTA GGA CCT GCC ACC AGC ACC CTG 259Asn Ile Thr Tyr Val Gln Asp Ser Val Gly Pro Ala Thr Ser Thr Leu40 45 50ATG TTT GTG GCT GGT GTG GTG GGC AAC GGG CTA GCA CTG GGC ATC CTG 307Met Phe Val Ala Gly Val Val Gly Asn Gly Leu Ala Leu Gly Ile Leu55 60 65GGT GCC CGA CGG AGG TCA CAC CCA TCG GCG TTT GCA GTG TTG GTC ACT 355Gly Ala Arg Arg Arg Ser His Pro Ser Ala Phe Ala Val Leu Val Thr70 75 80GGG CTG GCA GTG ACG GAT CTG CTG GGC ACG TGC TTC TTG AGC CCC GCG 403Gly Leu Ala Val Thr Asp Leu Leu Gly Thr Cys Phe Leu Ser Pro Ala85 90 95GTG TTT GTG GCC TAT GCT CGA AAC AGC TCT TTG CTG GGC CTG GCC CAC 451Val Phe Val Ala Tyr Ala Arg Asn Ser Ser Leu Leu Gly Leu Ala His100 105 110 115GGT GGG ACG ATG CTG TGT GAC ACT TTC GCC TTC GCT ATG ACT TTC TTC 499Gly Gly Thr Met Leu Cys Asp Thr Phe Ala Phe Ala Met Thr Phe Phe120 125 130GGC CTG GCC TCC ACG CTC ATC CTC TTC GCC ATG GCT GTG GAG CGG TGC 547Gly Leu Ala Ser Thr Leu Ile Leu Phe Ala Met Ala Val Glu Arg Cys135 140 145CTG GCT CTC AGT CAT CCC TAC CTG TAC GCC CAG CTG GAC GGG CCC CGC 595Leu Ala Leu Ser His Pro Tyr Leu Tyr Ala Gln Leu Asp Gly Pro Arg150 155 160TGT GCC CGC TTG GCT TTG CCT GCC ATC TAC GCT TTC TGT TGT CTC TTC 643Cys Ala Arg Leu Ala Leu Pro Ala Ile Tyr Ala Phe Cys Cys Leu Phe165 170 175TGC TCA CTG CCC CTG CTG GGC CTG GGC GAG CAC CAG CAG TAT TGT CCC 691Cys Ser Leu Pro Leu Leu Gly Leu Gly Glu His Gln Gln Tyr Cys Pro180 185 190 195GGG AGC TGG TGC TTC ATC CGC ATG CGT TCC CCC CAG CCT GGT GGC TGT 739Gly Ser Trp Cys Phe Ile Arg Met Arg Ser Pro Gln Pro Gly Gly Cys200 205 210GCC TTC TCC CTG GCC TAT GCC AGT CTC ATG GCC CTG CTG GTG ACC TCC 787Ala Phe Ser Leu Ala Tyr Ala Ser Leu Met Ala Leu Leu Val Thr Ser215 220 225ATC TTC TTC TGC AAC GGC TCC GTC ACT CTC AGC CTC TGT CAC ATG TAC 835Ile Phe Phe Cys Asn Gly Ser Val Thr Leu Ser Leu Cys His Met Tyr230 235 240CGC CAA CAG AGA CGG CAC CAT GGC TCG TTT GTG CCG ACC TCT CGG GCA 883Arg Gln Gln Arg Arg His His Gly Ser Phe Val Pro Thr Ser Arg Ala245 250 255CGA GAG GAT GAA GTT TAC CAC CTG ATT CTG CTG GCC CTC ATG ACA GGC 931Arg Glu Asp Glu Val Tyr His Leu Ile Leu Leu Ala Leu Met Thr Gly260 265 270 275ATC ATG GCC GTA TGC TCC CTG CCT CTC ACG ATC AGA GGA TTC ACG CAG 979Ile Met Ala Val Cys Ser Leu Pro Leu Thr Ile Arg Gly Phe Thr Gln280 285 290GCC ATC GCC CCA GAC AGC AGA GAG ATG GGG GAC CTC CAC GCC TTC CGT 1027Ala Ile Ala Pro Asp Ser Arg Glu Met Gly Asp Leu His Ala Phe Arg295 300 305TTT AAT GCC TTC AAC CCC ATC CTG GAC 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1.一种基本纯化的人PGI2受体。
2.根据权利要求1的受体，它是一种包括Seq.ID No.1表示的氨基酸序列或其同源序列，或所说序列的片段或同源片段的多肽。
3.根据权利要求2的多肽，它由Seq.ID No.1表示的氨基酸序列组成。
4.编码根据权利要求1，2或3的多肽的DNA。
5.根据权利要求4的DNA，它具有Seq.ID No.2中表示的核苷酸序列或能与所说序列选择性杂交的片段。
6.根据权利要求4的DNA，它具有Seq.ID No.5表示的核苷酸序列或能与所说序列选择性杂交的片段。
7.根据权利要求4的DNA，它具有Seq.ID No.3中表示的核苷酸序列或能与所说序列选择性杂交的片段。
8.根据权利要求4的DNA，它具有Seq.ID No.6中表示的核苷酸序列或能与该序列选择性杂交的片段。
9.一种基本上纯化的大鼠PGI2受体。
10.根据权利要求9的受体，它是一种包括Seq.ID No.8表示的氨基酸序列或其同源序列，或该序列的片段或同源片段的多肽。
11.根据权利要求10的多肽，它由Seq.ID No.8表示的氨基酸序列组成。
12.编码权利要求9，10或11所述的多肽的DNA。
13.根据权利要求12的DNA，它具有Seq.ID No.9表示的核苷酸序列或能与该序列选择性杂交的片段。
14.根据权利要求12的DNA，具有Seq.ID No.10表示的核苷酸序列或能与该序列选择性杂交的片段。
15.包含权利要求4-8或12-14描述的DNA的复制或表达载体。
16.用权利要求15描述的复制或表达载体转化或转染的宿主细胞。
17.一种制备权利要求1-3或9-11描述的多肽的方法，它由在有效表达所说多肽的条件下培养权利要求16描述的宿主细胞组成。
18.一种抗权利要求1-3或9-11描述的多肽的单克隆或多克隆抗体。
19.一种药用组合物，其特征在于它包含权利要求1-3或9-11描述的多肽，或权利要求18中描述的抗体和药用赋形剂和/或载体。
20.一种筛选具有PGI2促进或拮抗活性的化合物的方法，其特征在于使用权利要求1-3或9-11描述的多肽。
21.根据权利要求18的筛选方法，其特征在于使用权利要求16描述的宿主细胞。
全文摘要
人和大鼠PGL
文档编号A61K38/00GK1145076SQ9519236
公开日1997年3月12日 申请日期1995年2月8日 优先权日1994年2月10日
发明者A·市川, K·中尾, S·成宫 申请人:小野药品工业株式会社