专利名称：6－芳基吡唑并[3,4－d]嘧啶－4－酮和它们的组合物和使用方法
背景技术：
(a)发明领域本发明涉及6-芳基吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮类化合物、含有它们的药物组合物和抑制c-GMP磷酸二酯酶以及治疗心力衰竭和/或高血压的方法。
(b)资料内容陈述1865年1月12日颁布的Schmidt等人的US3165520公开了用作冠状扩张药的如下通式的吡唑并[3，4-d]嘧啶类化合物
其中R1表示氢原子或烷基、羟基烷基、卤代烷基或氧杂烷基或环烷基、环烷基烷基、芳烷基或杂环基烷基或至多双核芳基或杂环基；R3表示氢原子或低级烷基；R5表示脂族、环脂族、环脂族-脂族、芳脂族或杂环-脂族基团；和R6表示脂族基团或芳烷基或杂环-烷基，这些基团可以被取代。
该专利较具体地公开了如下尤其有价值的化合物，其中R1表示氢原子或低级烷基或环烷基、羟基低级烷基或卤代低级烷基，或氧杂低级烷基或芳基，它是未取代的或被卤素、烷氧基、烷基、亚甲二氧基、三氟甲基、硝基、氨基或吡啶基单、二或三取代；R3表示氢原子或低级烷基；R5表示低级烷基或低级烷基氨基；和R6表示低级烷基或芳烷基。
其它公开的化合物是一组1-R1-3-R3-4-羟基-6-R6-吡唑并[3，4-d]嘧啶，这些化合物被认为是在合成最终产物中有用的中间体。在这些中间体中，具体公开的是1-环戊基-4-羟基-6-苄基-吡唑并[3，4-d]嘧啶和1-异丙基-4-羟基-6-间-甲氧基苄基吡唑并[3，4-d]嘧啶类。
1965年10月12日颁布的Sdhmidt等人的US3211731公开了用作冠状扩张药的如下通式的吡唑并[3，4-d]嘧啶类化合物
其中R1表示氢原子、烷基、羟基烷基、卤代烷基或氧杂烷基、环烷基、环烷基烷基、芳烷基、杂环基-烷基或至多双核的芳基或杂环基；R3表示氢原子或其次是低级烷基；R6表示可能取代的芳烷基或杂环基烷基。
该专利较具体地公开了如下尤其有价值的化合物，其中R1表示氢原子或低级烷基、环烷基、羟基低级烷基、卤代低级烷基，氧杂低级烷基或芳基；R3表示氢原子或低级烷基；和R6表示取代或未取代的芳烷基。在这些化合物中，具体公开的是1-异丙基-4-羟基-6-3′-甲氧基苯基甲基)吡唑并[3，4-d]嘧啶、1-环戊基-4-羟基-6-苄基-吡唑并[3，4-d]嘧啶、1-异丙基-4-羟基-6-(β-苯基乙基)吡唑并[3，4-d]嘧啶和1-异丙基-4-羟基-6-(4-氨基苄基)吡唑并[3，4-d]嘧啶。
1965年10月12日颁布的Sdhmidt等人的US3211732公开了用作中间体的1-R1-3-R3-6-R6-4-羟基-吡唑并[3，4-d]嘧啶类化合物，其中R1表示氢原子、未取代的或被羟基或低级烷氧基取代的低级烷基，或环戊基或环己基或苯基或苯基低级烷基；R3表示氢原子或低级烷基；R6表示取代或未取代的苯基低级烷基。
具体公开的是1-异丙基-4-羟基-6-苄基吡唑并[3，4-d]嘧啶。
还公开了用作中间体的1-R1-3-R3-6-R6-4-羟基-吡唑并[3，4-d]嘧啶类化合物，其中R1表示氢原子、低级烷氧基-低级烷基或羟基-低级烷基、环戊基或环己基或苯基或被取代的苯基低级烷基；R3具有如上所述的定义；和R6表示被取代的苯基。具体公开的是1-异丙基-4-羟基-6-苯基吡唑并[3，4-d]嘧啶。
1973年5月8日颁布的Breuer等人的US3732225公开了用作降血糖药和消炎药的下式吡唑并[3，4-d]嘧啶类化合物
其中R是氢或低级烷基；R1是低级烷基、环烷基、苯基或取代的苯基；R2是苯基、取代的苯基或环烷基；和R3是氢、低级烷基、环烷基、苯基或取代的苯基。具体公开的是1-甲基-6-苯基和1-甲基-6-(4-氯苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
1963年9月25日公开的CIBA LIMITED的GB937722公开了用作冠状扩张药的1-异丙基-4-羟基-6-苄基-吡唑并[3，4-d]嘧啶。
1987年5月19日颁布的Hamilton的US4666908公开了下式的吡唑并[4，3-d]嘧啶-7-酮类化合物
其中R1是1-6个碳原子的低级烷基，1-6个碳原子的低级亚烷基、1-6个碳原子的低级羟基烷基、1-6个碳原子的低级羟基亚烷基、1-6个碳原子的低级氨基烷基、1-6个碳原子的低级氨基亚烷基；n是0-4；和Ar是R2
或2，3或4-吡啶基，其中X、Y和Z独立地是(1)氢；(2)1-6个碳原子的低级烷基；(3)卤素；(4)羟基；(5)1-6个碳原子的低级烷氧基；(6)硝基；(7)氨基；(8)NR′R″，其中R′和R″每个独立地是(a)氢或(b)1-6个碳原子的低级烷基，包括任选地被(i)氨基、(ii)吗啉代或(iii)5-7个碳原子的环烷基取代的低级烷基，(9)磺酰基或(10)-SO2NR′R″，其中R′和R″是如上定义的。
该专利较具体地描述了其中Ar是R2的优选化合物。据说该化合物在治疗心血管疾病中是有效的。
Miyashita等人在期刊“杂环化合物”1990，31，1309-1314描述了制备一系列如下通式的吡唑并[3，4-d]嘧啶类化合物的方法
其中R是苯基或甲基；和R1是氢、甲基、乙基、丙基、异丙基、苄基、乙基羧酸酯或苯基。未公开其用途。
1988年1月14日出版的Hamilton的PCT申请WO88 00192公开了一系列5-取代的吡唑并[3，4-d]嘧啶-7-酮类化合物，据说可用作强心剂、CNS刺激剂、抗变态反应药、镇喘药或识别活化剂。
1992年1月2日出版的Bell等人的EP专利申请0463756公开了一系列5-(2，5-二取代的苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-7-酮类化合物，据说可用于治疗心血管疾病。
1973年11月13日颁布的Podesva等人的US3772294公开了制备式I化合物的方法
其中X表示卤素原子、游离或取代羟基、氨基或巯基和R表示氢原子或低级烷基或取代或未取代的芳基。这些化合物被披露潜在地用于与痛风和其它症状有关的高尿酸血，并且，通式中X表示卤素原子的化合物被认为是合成其它式I化合物的中间体。具体公开的是4-羟基-6-苯基-1-吡唑并[3，4-d]嘧啶。
1991年12月24日颁布的Coates和Rawlings的US5075310(1989年6月23日申请，申请系列号为370494)公开和要求保护了下式的化合物和其可药用的盐
其中
是如下式(a)、(b)或(c)的环
X是氧或硫；和R1是C1-C6烷基、C2-6链烯基、C3-5环烷基-C1-4烷基或被1-6个氟取代的C1-4烷基。具体公开的是6-(2-丙氧基苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4(5H)-酮。这些化合物被认为可用作支气管扩张药和心血管扩张药。
1994年3月15日颁布的Bacton等人的US5294612(1992年3月30日申请，申请系列号为859770)公开了一系列6-杂环基-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮类化合物，例如1-环戊基-3-乙基-6-(3-吡啶基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。这些化合物被披露用于治疗心力衰竭和高血压。
发明简述本发明涉及式I化合物或其可药用的酸加成盐和/或水合物
其中R1是叔丁基或环戊基；R3是低级烷基或苯基-低级烷基；和R6是苯基或被1-3个相同或不同的取代基取代的苯基，这些取代基选自低级烷氧基、低级烷基、羟基、1-咪唑基、低级链烯氧基、二低级烷基氨基-低级烷氧基、4-吗啉基-低级烷氧基、低级烷氧基羰基-低级烷氧基、羧基低级烷氧基、三氟甲基、1-哌啶基低级烷氧基、1-吡咯烷基低级烷氧基、硝基、卤素、氨基、-(CH2)2O-、低级烷基磺酰基氨基、低级烷氧基低级烷氧基、低级链烯基、二低级烷基氨基、-OCH(CH3)CH2-、4-吗啉基羰基低级烷氧基、4-硫代吗啉基低级烷氧基、吡啶基低级烷氧基、1-低级烷基-3-六氢吖庚因基氧基和1-低级烷基-4-哌啶基氧基。
式I化合物被发现具有c-GmP-PDE V抑制活性，因而用于治疗心力衰竭和/或高血压。
上述尤其优选的式I化合物是如下化合物，其中R1是环戊基；
R3是甲基或乙基；和R6是苯基或被1-2个相同或不同的取代基取代的苯基，这些取代基选自甲氧基、乙氧基、丙氧基、甲基、羟基、1-咪唑基、CH2＝CHCH2O-、2-(二甲基氨基)乙氧基、3-(二甲基氨基)丙氧基、2-(4-吗啉基)乙氧基、3-(4-吗啉基)丙氧基、乙氧基羰基甲氧基、羧基甲氧基、三氟甲基、2-(1-哌啶基)乙氧基、2-(1-吡咯烷基)乙氧基、硝基、氯、氨基、-(CH2)2O-、甲基磺酰基氨基、2-(甲氧基)乙氧基、CH2＝CH2CH2-、二乙基氨基、-OCH(CH3)CH2-、4-吗啉基羰基甲氧基、2-(4-硫代吗啉基)乙氧基、4-吡啶基甲氧基、1-甲基-3-六氢吖庚因基氧基和1-甲基-4-哌啶基氧基。
本发明尤其优选的化合物是1-环戊基-3-乙基-6-(2-丙氧基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，1-环戊基-3-乙基-6-[4-(1-咪唑基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，1-环戊基-3-乙基-6-[3-(2-(4-吗啉基)乙氧基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，1-环戊基-3-乙基-6-[2-乙氧基-4-(1-咪唑基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，和1-环戊基-3-乙基-6-[2-(CH2＝CHCH2O)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
本发明还涉及药物组合物，它含有式I化合物与可药用的载体、助剂、稀释剂或赋形剂。
本发明还涉及抑制哺乳动物cGMP磷酸二酯酶的方法，它包括向上述生物体赋给有效量的式I化合物。
优选实施方案的详细描述式I化合物可与相应的烯醇形式呈互变平衡存在
尽管该化合物被认为主要呈酮的形式，并在整个说明书中如此表示，但应当理解本发明包括了两种形式和它们的混合物。
本文中使用的术语低级烷基指的是具有1至约4个碳原子的直链或支链烃链，因此包括甲基、乙基、丙基、异丙基、正丁基、仲丁基等。
本文中使用的术语低级烷氧基指的是具有1至约4个碳原子的直链或支链烷氧基取代基，因此包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、正丁氧基、仲丁氧基等。
本文中使用的术语卤素、卤化物或卤代指的是溴、氯、碘或氟。
本文中使用的术语低级链烯基指的是具有2至约4个碳原子的直链或支链不饱和烃基，因此包括1-乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、异丙烯基、2-丁烯基、异丁烯基等。
本发明的化合物的合成方法可由如下方案A说明方案A
适当取代的5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(II)与过量的式III的适当取代的醛反应，反应任选地在合适的有机溶剂，优选是二甲苯或苯存在下，使用或不用酸性催化剂，优选为对甲苯磺酸、乙酸或甲磺酸，任选地在以碳为载体的铂存在下，在室温至反应混合物的沸点的温度下，优选在反应混合物的沸点下进行以得到式I化合物。
另外，用过量的式IV的酯R6C(O)OR(其中R是低级烷基，优选为乙基)处理适当取代的5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(II)，反应在碱，优选乙醇钠存在下，在醇溶剂，例如乙醇中，在室温至所用的溶剂的沸点的温度下，优选在所用的溶剂的沸点下进行以得到式I化合物。
式I化合物也可以如方案B中所述合成方案B
用过量的式V的腈处理式II的适当取代的5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺，反应在合适的有机溶剂，优选二甲基甲酰胺(DMF)或二氧杂环己烷中，在过量的合适的碱，优选氢化钠存在下，在室温至所用的溶剂的沸点的温度下进行以直接得到式I的化合物，或式I的化合物与式VI的吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的混合物。随后可用过量亚硝酸钠在1/1水/酸混合物中，优选1/1水/硫酸混合物中，在约-10℃至室温的温度下处理该混合物以得到式I化合物。
对本领域技术人员是常规和熟知的简单化学转变过程可用于改变式I化合物的官能基团。例如芳基醚的脱烷基得到相应的酚衍生物、酯的水解得到相应的酸、硝基衍生物的催化还原得到相应的胺和胺的磺酰化得到相应的磺酰胺衍生物。
式I化合物在游离碱形式和酸加成盐形式时都是有用的，两种形式都包含在本发明的范围内。酸加成盐是使用的更方便的形式；在实践中，使用盐的形式本来就相应于使用碱形式。可用于制备酸加成盐的酸优选包括与游离碱结合时产生可药用的盐的酸，即盐的阴离子在盐的药用剂量时对动物生物是相当无害的，因而在游离碱中固有的有益性质不被起因于阴离子的副作用损害。在本发明的实践中，方便的是使用游离碱形式或盐酸盐、富马酸盐、甲苯磺酸盐、甲磺酸盐或马来酸盐。然而，在本发明范围内的其它合适的可药用盐是由其它无机酸和有机酸得到的盐。碱性化合物的酸加成盐通过现有技术中已知的标准方法制备，其中包括，但不限制于，将游离碱溶解在含有合适酸的含水醇溶液中，通过蒸发溶液分离出盐，或使游离碱与酸在有机溶剂中反应，在这种情况下直接分离出盐，或用第二种有机溶剂沉淀出，或可通过浓缩溶液得到。虽然碱性化合物的可药用的盐是优选的，但所有酸加成盐包含在本发明的范围内。所有酸加成盐可作为游离碱形式的来源，即使特殊的盐本身仅作为中间体产物，例如，当盐是为了纯化或鉴定而形成时或当盐用作例如通过离子交换方法制备可药用盐的中间体时。
式II的适当取代的5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺是已知的，因此通过已知方法制备(例如参见，1994年3月15日颁布的US5294612，其全文列为本文参考文献)，或它们可通过在如下实施例中描述的方法制备。式III的醛、式IV的酯和式V的腈或是商业上可得到的，或它们可通过在现有技术中已知的方法制备，或通过如下实施例中描述的方法制备。
本发明的化合物的结构通过合成方式、通过一种或多种元素分析、红外、核磁共振和质谱确定。反应进程和产物的鉴定和均匀性通过一种或多种薄层色谱法(TLC)、高压液相色谱法(HPLC)或气液色谱法(GLC)测试。
如下实施例将进一步说明本发明，但不是将本发明限制于这些实施例。所有熔点(m.p.)用℃表示，是未校正的。
实施例1在冰/水浴中在氩气气氛中冷却水杨醛(12.21g，0.1mol)在DMF(65ml)中的溶液，分几批加入在矿物油(4.0g，0.1mol)中的60％氢化钠。将混合物搅拌1小时，然后在室温下加入碘丙烷(16.99g，0.1mol)。反应混合物在室温下搅拌过夜，倾入水(800ml)中并搅拌。用氯仿提取三次混合物，真空浓缩氯仿层，真空蒸馏(92-94℃，1.15mmHg)所得到的黑色油状物，得到12.68g(77％)2-丙氧基苯甲醛(b)在冰浴中冷却KOH(12.16g，184.2mmol)溶在水(150ml)中的溶液，然后加入1-环戊基-3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-腈(5.0g，26.3mmol)和过氧化氢(13.5ml，131.6mmol)。将反应混合物温热至室温，搅拌过夜。通过过滤收集沉淀物并用乙醚洗涤，得到1-环戊基-3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺，为白色固体。通过浓缩滤液得到附加的产物，经过滤收集产物，共得到4.46g产物。
另外，甲酰胺可如下制备将浓硫酸溶液(50ml)冷却至-5℃，加入1-环戊基-3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.0g，10.5mmol)。将混合物搅拌2小时，然后在室温下过夜。将反应混合物倾入400ml冰和NH4OH(100ml)中并搅拌1小时。产物沉淀，通过过滤收集。通过用乙酸酸化滤液至pH5，然后用氯仿提取得到附加的产物。真空浓缩氯仿层，用乙醚处理，过滤和在100℃干燥过夜后，得到1.67g(76％)1-环戊基-3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺，m.p.191-192℃。
(c)将1-环戊基-3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(3.98g，0.019mol)、2-丙氧基苯甲醛(6.35g，0.038mol)、二甲苯(150ml)和甲磺酸(0.5ml)的混合物加热回流39小时，同时共沸除去水。真空浓缩反应混合物，残余物用10％碳酸钾和乙醚处理。分层，水层用乙醚提取，真空浓缩合并的乙醚层。用TLC分析反应混合物表明反应还未完全。因而，将混合物在180℃的油浴上加热，将残余物溶解在氯仿中，用硅胶柱色谱法纯化，依次用己烷(100％)和乙醚(100％)洗脱得到2.67gl-环戊基-3-甲基-6-(2-丙氧基苯基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.130-132℃。
另外，最终产物制备如下将1-环戊基-3-甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.0g，4.8mmol)和2-丙氧基苯甲醛(10.6g，10mmol)的混合物在160℃油浴上加热4小时，随后在170℃加热48小时。冷却反应混合物，加入氯仿(5ml)，在硅胶柱中用乙醚(100％)洗脱溶液，在从环己烷中重结晶后得到0.16gl-环戊基-3-甲基-6-(2-丙氧基苯基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
实施例2将1-环戊基-3-乙基-5-(4-喹啉基-CH＝N)-1H吡唑-4-甲酰胺(6.34g，0.018mol)、苯甲醛(0.96g，0.009mol)、二甲苯(150ml)和甲磺酸(0.5ml)的混合物加热回流过夜。真空浓缩反应混合物，残余物用乙醇(200ml)处理，并共沸蒸馏。残余物随后用10％碳酸钾(100ml)处理，用乙醚研制，过滤和用水洗涤。产物从乙酸乙酯中重结晶，在100℃干燥得到2.68g粗产物，用硅胶柱色谱法纯化，得到0.603gl-环戊基-3-乙基-6-苯基-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.221-222℃。
另外，最终产物优选可按照类似于实施例1(c)的方法由1-环戊基-3-乙基-5-(4-喹啉基-CH＝N)-1H吡唑-4-甲酰胺和苯甲醛制备。
实施例3将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H吡唑-4-甲酰胺(2.0g，9mmol)、邻甲苯甲醛(2.16g，18mmol)、甲磺酸(0.5ml)和二甲苯(50ml)的混合物回流加热32小时。除去溶剂，残余物用乙醇(100ml)处理，然后蒸发至干。黑色残余物用10％碳酸钾和氯仿处理，分离出有机层，水层用氯仿(2×100ml)提取。合并有机层，浓缩至约20ml，然后加入硅胶(30g)。将预载硅胶放入硅胶柱中，用乙醚/己烷(2/8)至(5/5)洗脱得到1.10g(40％)1-环戊基-3-乙基-6-(2-甲基苯基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.133-134℃。
实施例4将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H吡唑-4-甲酰胺(2.0g，9mmol)、邻乙氧基苯甲醛(2.7g，18mmol)、甲磺酸(5滴)和二甲苯(50ml)的混合物回流加热48小时。汽提反应混合物至干，用10％碳酸钾和氯仿(100ml)处理。分层，水层用氯仿(2×100ml)提取。合并有机层，真空浓缩。将得到的黑色油状物溶解在二氯甲烷(30ml)中，与硅胶(30g)混合。将预载硅胶放入硅胶柱中，用乙醚/己烷(20/80)至乙醚(100％)洗脱得到1.41g(45％)1-环戊基-3-乙基-6-(2-乙氧基苯基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.146-147℃。
实施例5将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H吡唑-4-甲酰胺(2.0g，9mmol)、对甲氧基苯甲醛(2.45g，18mmol)、二甲苯(50ml)和对甲苯磺酸(0.5g)的混合物回流加热32小时。汽提反应混合物至干，用乙醇(100ml)处理，然后再次浓缩至干。残余物用氯仿(100ml)和10％碳酸钾(100ml)处理，分层，水层用氯仿(3×100ml)提取。浓缩合并的有机层至约25ml，然后与硅胶(30g)混合。将预载硅胶放入硅胶柱中，用乙醚/己烷(8/10)至乙醚(100％)洗脱，在从环己烷重结晶后得到1.25g(41％)1-环戊基-3-乙基-6-(2-甲氧基苯基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.135-136℃。
实施例6将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H吡唑-4-甲酰胺(1.0g，4.5mmol)、2-丙氧基苯甲醛(1.5g，9mmol)、对甲苯磺酸(0.5g)和二甲苯(50ml)的混合物回流加热20小时。汽提反应混合物至干，用乙醇处理，然后再次浓缩至干。残余物用氯仿(100ml)处理，用饱和的碳酸氢钠洗涤。浓缩有机层得到黑色油状物，将其溶解在二氯甲烷(30ml)中，与硅胶(50g)混合。将预载硅胶放入硅胶柱中，用10％乙醚/己烷至乙醚(100％)洗脱，在从环己烷重结晶后得到0.492g(30％)1-环戊基-3-乙基-6-(2-丙氧基苯基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.93-94℃。
实施例7在1-环戊基-3-乙基-6-(2-甲氧基苯基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(0.5g，1.5mmol)在DMF(10ml)中的溶液中加入氢化钠(0.15g，3.75mmol，在矿物油中的60％氢化钠)。将反应混合物搅拌20分钟，然后加入丙硫醇(0.228g，3.0mmol)，混合物在室温下搅拌4小时，然后在110℃下搅拌9小时。将反应混合物汽提至干，加入水(15ml)和乙酸(1ml)。形成沉淀，通过过滤收集沉淀，用水洗涤，从用乙酸乙酯处理的DARCO中重结晶，得到0.28g(58％)1-环戊基-3-乙基-6-(2-羟基苯基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.272-273℃，为白色针状物。
实施例8(a)将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.18g，5.32mmol)、 4-(1-咪唑基)苯甲醛(1.37g)和二甲苯(8ml)温热至130℃30分钟，然后在160℃保持3天。冷却反应混合物，经过滤收集产物，用乙醚洗涤得到1.88gl-环戊基-3-乙基-6-[4-(1-咪唑基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，为6，7-饱和衍生物。将该衍生物与乙醇(300ml)和30％过氧化氢(3.0ml)混合，回流过夜。加入附加的30％过氧化氢(3ml)，混合物回流8小时。加入附加的10ml30％过氧化氢，混合物回流过夜。仍存在起始物料，因此加入附加的10ml30％过氧化氢，混合物回流4小时，然后加入附加的30％过氧化氢(10ml)，混合物搅拌1小时，随后在室温下静置过夜。汽提反应混合物得到黄色液体，用硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯(100％)，然后用5％甲醇/乙酸乙酯洗脱得到0.4gl-环戊基-3-乙基-6-[4-(1-咪唑基)苯基]-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮的1/2水合物，m.p.＞300℃。
(b)另外，产物可如下制备在咪唑(5.13g，75.35mmol)、碳酸钾(11.45g)和DMSO(50ml)的混合物中在室温下一次加入4-氟苄腈(10.04g)。反应混合物在室温下搅拌1小时，然后用蒸汽温热2小时。将反应混合物冷却至室温，倾入冷水中。沉淀形成，经过滤收集，用水洗涤和从氯仿/己烷中重结晶得到4.07g4-(1-咪唑基)苄腈，m.p.146-148℃。
在4-(1-咪唑基)苄腈(0.9g，5.27mmol)、1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.17g)在DMF(20ml)中的混合物中在室温下加入氢化钠(0.63g，在矿物油中的60％分散液)。反应混合物在室温下搅拌过夜，加入附加的氢化钠(0.5g)，混合物在室温下搅拌约2天。将反应混合物倾入冰/水(500ml)中，用乙酸中和，所形成的沉淀经过滤收集，用己烷洗涤，溶解在氯仿中，用硫酸镁干燥，过滤和真空浓缩。残余物从乙酸乙酯中重结晶，与两次类似实验得到的产物合并，从乙腈/氯仿中重结晶，得到1-环戊基-3-乙基-6-[4-(1-咪唑基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.＞300℃实施例9(a)向水杨酸乙酯(100g，0.602mol)在DMF(400ml)中的溶液中加入碳酸钾(150g)，然后滴加烯丙基溴(87.5g，0.723mol)。将反应混合物在蒸汽浴上加热2小时，过滤除去碳酸钾，将反应混合物倾入水中用乙酸乙酯(3×300ml)提取。有机层盐水洗涤，用硫酸镁干燥，蒸发溶剂，得到122g(98％)2-(2-丙烯氧基)苯甲酸乙酯。
(b)将钠球(207mg)溶解于乙醇(15ml)中，加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1g，45mmol)，然后加入2-(2-丙烯氧基)苯甲酸乙酯(1.85g，9mmol)。反应混合物回流加热过夜，冷却，汽提乙醇，加入水。调节pH至约7，经过滤分离出固体。将固体溶解于乙醚中，用稀盐酸洗涤，用硫酸镁干燥，过滤和除去溶剂，固体残余物从乙醚中重结晶得到0.56gl-环戊基-3-乙基-6-[2-(CH2＝CH-CH2O)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.119-120℃。
实施例10将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.03g，9.14mmol)，4-[3-(二甲基氨基)丙氧基]苯甲醛(2.76ml)和二甲苯的混合物在120℃加热1小时，随后在160℃加热6小时。加入对甲苯磺酸(300ml)，混合物在160℃下加热直至反应完全。将反应混合物冷却至室温，形成乳白色固体，通过过滤收集固体，用甲醇洗涤，从乙酸乙酯中重结晶得到1-环戊基-3-乙基-6-[4-[3-(二甲基氨基)丙氧基]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.175-178℃。
实施例11(a)在水杨醛(2ml)在乙腈(20ml)中的溶液中加入碳酸钾(5.71g)，然后加入N-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐(3.5g)，混合物在室温下搅拌2小时，回流过夜。将反应混合物冷却至室温，过滤，真空浓缩滤液得到2-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯甲醛，黄色油状物。
(b)+(c)将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(0.95g，4.28mmol)，2-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯甲醛(1.51g)和二甲苯(15ml)的混合物在120℃加热1小时，然后在160℃加热直至反应完成。然后将反应混合物冷却至室温，真空除去溶剂，残余物用硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯(100％)，然后用乙醇/乙酸乙酯(1/1)洗脱，得到1-环戊基-3-乙基-6-[2-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(实施例11(b))，油状物。然后将游离碱转化为盐酸盐，并从乙醇中重结晶，在110℃高真空下干燥得到0.5g1-环戊基-3-乙基-6-[2-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮单盐酸盐，为灰白色粉末，m.p.235-237℃，实施例11(c)。
实施例12(a)将2-甲酰基苯氧基乙酸(9.01g，0.05mol)、乙醇(4.6g)、浓硫酸(0.4ml)和甲苯(40ml)的混合物回流加热1小时，同时共沸蒸馏除去水。将反应混合物倾入10％碳酸氢钾(100ml)中，分层，水层用乙醚(2×75ml)提取。合并有机层，真空浓缩，得到9.1g(95％)2-(乙氧基羰基甲氧基)苯甲醛。
(b)将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(5.26g，23.7mmol)、2-(乙氧基羰基甲氧基)苯甲醛(9.10g，47.3mmol)、对甲苯磺酸(0.2g)和二甲苯(100ml)的混合物回流加热18小时，同时共沸蒸馏除去水。真空除去溶剂，残余物用乙醇处理并蒸发至干。将残余物在氯仿和10％碳酸钾水溶液之间分配，分层，水层用氯仿(100ml)提取。合并有机层，浓缩至干。残余物用硅胶预载，然后用硅胶柱色谱法纯化，用己烷(100％)至20％乙醚/己烷洗脱，得到3.74g(38％)1-环戊基-3-乙基-6-[2-(乙氧基羰基甲氧基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.116-117℃。
实施例13(a)向3-羟基苯甲醛(3.05g，24.97mmol)在乙腈(15ml)中的溶液中加入碳酸钾(7.6g)，然后加入N-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐(4.65g)。反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后回流加热过夜。加入附加的N-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐(0.93g)和碳酸钾(0.7g)，混合物再回流加热6小时。将反应混合物冷却至室温，过滤，真空浓缩滤液。残余物在水和氯仿之间分配，分层，水层用氯仿(2×75ml)提取。合并有机层，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤和汽提，得到7.3g3-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯甲醛，为琥珀色液体。
(b)将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.05g，4.73mmol)、3-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯甲醛(1.67g)和二甲苯(7ml)的混合物在160℃加热过夜。再加入醛(0.4g)将混合物在160℃加热直至反应完全。将反应混合物冷却至室温，用过滤收集形成的固体，用乙醚洗涤。浓缩滤液至干，残余物与固体合并，经硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯/乙醇(60/40)洗脱。由此得到的固体产物用乙醚洗涤，从乙酸乙酯中重结晶，然后再次用乙醚洗涤得到1-环戊基-3-乙基-6-[3-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.173-176℃。
实施例14将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.19g，5.38mmol)、2-甲氧基-4-羧基甲氧基苯甲醛(1.13g)和冰醋酸(25ml)的混合物温热至回流4天。将反应混合物冷却至室温，汽提溶剂后得到浆状物，将其用甲醇洗涤，过滤收集，和用乙醚洗涤。产物从乙醇中重结晶，用乙醚洗涤得到1-环戊基-3-乙基-6-[(2-甲氧基-4-羧基甲氧基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
实施例15将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(0.59g，2.65mmol)、2-三氟甲基苯甲醛(0.5ml)和冰醋酸(25ml)的混合物回流过夜，再加入0.5当量的附加的醛，将混合物回流加热约3天。将反应混合物冷却至室温，汽提乙酸，将残余物冷却，用乙醚漂洗得到白色固体，经过滤收集固体，，从叔丁基二甲基醚/己烷中重结晶得到1-环戊基-3-乙基-6-(2-三氟甲基苯基)-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.201-202℃。
实施例16将1-环戊基-3-乙基-6-[2-(乙氧基羰基甲氧基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(3.0g，7.3mmol)、碳酸钾(3.04g)、水(20ml)和乙醇(50ml)的混合物回流加热1.5小时。冷却反应混合物，真空除去溶剂，残余物与水形成浆液，并酸化。经过滤收集形成的沉淀，从异丙醇中重结晶，在90℃下干燥。将固体溶解在10％碳酸钾(100ml)中，用DARCO处理，过滤，用乙酸酸化滤液，形成沉淀，经过滤收集沉淀，在110℃干燥。与由类似实验得到的固体产物合并，与6N盐酸(100ml)一起搅拌，过滤和用五氧化二磷在100℃真空干燥，得到2.09g1-环戊基-3-乙基-6-[2-(羧基甲氢基)苯基]-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮半水合物，m.p.208-209℃。
实施例17(a)在0℃下，在水(500ml)和85％KOH(37.91g)的混合物中加入30％过氧化氢(49.4ml，483mmol)，随后加入1-叔丁基-5-氨基-1H-吡唑-4-腈(15.83g，96.5mmol)。反应混合物在0℃下搅拌4小时，然后在室温下搅拌1小时。形成黄色沉淀，通过过滤收集，空气干燥得到13.2g1-叔丁基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺，m.p.193-195℃。
(b)将2-丙氧基苯甲醛(3.0g，18.27mmol)、1-叔丁基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.5g，13.7mmol)、甲磺酸(0.2ml)和二甲苯(50ml)的混合物回流加热过夜。汽提反应混合物至干，用乙醇处理，再次汽提至干。残余物在氯仿和10％碳酸氢钾之间分配，分层，水层用氯仿(2×100ml)提取。合并有机层，真空浓缩，残余物溶解在二氯甲烷(30ml)中，与硅胶(20g)混合。将预载的硅胶放在硅胶柱中，用70％乙醚/己烷洗脱，然后用乙醚(100％)洗脱，得到0.98g(22％)1-叔丁基-6-(2-丙氧基苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮的1/100水合物，m.p.130-131℃。
(c)将1-叔丁基-6-(2-丙氧基苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮的1/100水合物(0.68g，2.1mmol)和三氟乙酸(50ml)的混合物在蒸汽浴中加热3.5小时，将反应混合物汽提至干，残余物用硅胶柱色谱法纯化，用乙醚洗脱，得到0.45g(79％)6-(2-丙氧基苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮的1/4水合物，m.p.170-171℃。
实施例18(a)在4-羟基苯甲醛(4.04g，33.08mmol)溶于乙腈(50ml)中的溶液中加入碳酸钾(10.1g)，然后加入N-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐(6.16g)。将反应混合物回流加热过夜，再加入N-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐(0.6g)和碳酸钾(0.5g)，混合物再回流加热3小时。将反应混合物冷却至室温，过滤，滤液用DARCO处理，过滤并汽提溶剂。残余物在饱和碳酸氢钠(150ml)和乙酸乙酯(300ml)之间分配。分层，有机层用1N氢氧化钠洗涤，用硫酸镁干燥，过滤和汽提，得到6.41g4-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯甲醛，为琥珀色油状物。
(b)将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.19g，9.86mmol)、4-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯甲醛(3.5g)和二甲苯(10ml)的混合物在160℃加热过夜。加入对甲苯磺酸(0.2g)，混合物在160℃下加热过夜。将反应混合物冷却至室温，形成的沉淀与甲醇形成浆状物，过滤收集沉淀，用甲醇然后用醚洗。产物从乙腈中重结晶得到1-环戊基-3-乙基-6-[4-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
实施例19(a)在3-羟基苯甲醛(5.42g，44.38mmol)、碳酸钾(13.5g)和乙腈的混合物中加入N-(2-氯乙基)哌啶盐酸盐(9.8g)。将反应混合物回流过夜，冷却至室温，过滤。汽提滤液得到油状物，将其在氯仿(350ml)和1M氢氧化钠(200ml)之间分配。分离有机层，用1M氢氧化钠(2×200ml)洗涤，用DARCO处理，然后用硫酸镁处理，过滤和汽提，得到6.28g3-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯甲醛，为黑色油状物。
(b)将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.02g，9.09mmol)、3-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯甲醛(3.18g)和二甲苯(10ml)的混合物回流过夜。加入附加的醛(0.5g)，混合物在160℃加热6小时。反应仍未完成，因此，加入附加的醛(0.5g)，混合物回流约2天。将反应混合物冷却，过滤和汽提，得到油状残余物。残余物用乙腈处理，冷却，经过滤收集形成的沉淀，用乙醚洗涤。产物用硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯/己烷(1/1)洗脱，然后从乙腈中重结晶，得到1-环戊基-3-乙基-6-[3-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，白色固体，m.p.180℃。
实施例20(a)在3-羟基苯甲醛(5.17g，42.34mmol)、碳酸钾(5.85g)和丙酮(50ml)的混合物中加入溴代乙酸乙酯(5.2ml)。反应混合物在室温下搅拌过夜，加入附加的碳酸钾(1当量)，混合物搅拌1小时，然后加入附加的溴代乙酸乙酯(0.5当量)，混合物在室温下搅拌直至反应完全。过滤反应混合物，在滤液中加入水，除去溶剂。将残余物溶解在乙醚中，用1M氢氧化钠(2×100ml)提取，乙醚层用硫酸镁干燥，汽提，得到7.89g3-(乙氧基羰基甲氧基)苯甲醛，液体。
(b)将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(3.54g，15.95mmol)、3-(乙氧基羰基甲氧基)苯甲醛(4.3g)和二甲苯(20ml)的混合物在160℃加热过夜。将反应混合物冷却至室温，经过滤收集形成的固体，用甲醇洗涤，然后用乙醚洗涤。产物从乙腈中重结晶得到2.48gl-环戊基-3-乙基-6-[3-(乙氧基羰基甲氧基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。从重结晶的滤液中还得到附加的0.3g产物，总共2.78g。
实施例21在1-环戊基-3-乙基-6-[3-(乙氧基羰基甲氧基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(1.23g，3.0mmol)在乙醇(10ml)中的浆液中加入水(100ml)和85％KOH(0.4g)。反应混合物在蒸汽浴中加热3小时，冷却至室温并过滤。将滤液冷却，用乙酸酸化，得到白色沉淀物，通过过滤收集沉淀物，依次用水、乙醇和乙醚洗涤。产物与另外的实验的产物合并随后从DMF/乙腈中重结晶，得到0.98gl-环戊基-3-乙基-6-[3-(羧基甲氧基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.299-300℃。
实施例22(a)在3-羟基苯甲醛(4.15g，33.98mmol)、KOH(4.93g)和DMSO(50ml)的混合物中加入N-(2-氯乙基)吡咯烷盐酸盐(6.94g)。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后倾入水(750ml)中，加入乙酸乙酯(350ml)。分层，水层用乙酸乙酯提取，合并的有机层用水(2×1000ml)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤和汽提，得到7.12g3-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]苯甲醛。
(b)将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.32g，10.45mmol)、3-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]苯甲醛(2.98g)和二甲苯(10ml)的混合物在160℃加热过夜。加入附加的醛(0.5g)和对甲苯磺酸(0.5g)，在160℃持续加热过夜。将反应混合物冷却，汽提溶剂，残余物用硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯，然后用乙醇/乙酸乙酯(1/1)洗脱，然后产物从乙腈中重结晶。从重结晶步骤的母液中经制备性薄层色谱法得到附加的产物，用乙酸乙酯洗脱，总共得到0.6g(14％)1-环戊基-3-乙基-6-[3-[2-(1-吡咯烷基)乙氧基]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
实施例23在3-羟基苯甲醛(5.44g，44.55mmol)、碳酸钾(13.6g)和DMF(50ml)的混合物中分批加入2-二甲基氨基乙基氯盐酸盐(7.1g)。反应混合物在室温下搅拌过夜，过滤并汽提滤液。残余物用1N盐酸(300ml)稀释，用乙醚提取，乙醚层用硫酸镁干燥并汽提。将酸性水层冷却，用8N氢氧化钠处理直至碱性，随后用乙醚(3×150ml)提取。合并乙醚层，用硫酸镁干燥，过滤并汽提，得到1.43g3-[2-(二甲基氨基)乙氧基]苯甲醛，油状液体。
(b)+(c)将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(3.50g，15.74mmol)、3-[2-(二甲基氨基)乙氧基]苯甲醛(3.95g)和二甲苯(10ml)的混合物在160℃加热过夜。将反应混合物冷却到室温，汽提溶剂，残余物在氯仿和水之间分配。分层，水层用氯仿提取。合并有机层，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并汽提，得到1-环戊基-3-乙基-6-[3-[2-(二甲基氨基)乙氧基]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮油状物，如在[实施例23(b)]所标记的。游离碱用盐酸乙醇溶液处理得到产物盐酸盐[如在实施例23(c)所标记的]。
实施例24(a)将3-氟苄腈(18ml，168.38mmol)、咪唑(11.46g)、碳酸钾(25.59g)、铜(1.75g)、碘化钾(1.75g)和DMF(125ml)的混合物回流过夜。将反应混合物冷却至室温，倾入冰/水(600ml)中。形成沉淀，经过滤收集沉淀，用水洗涤，溶解于乙醇(25ml)/氯仿(500ml)中，过滤。滤液在水中分配，分出有机层，用硫酸镁干燥和汽提。将残余物与其它实验的产物合并，从氯仿/己烷中重结晶，得到134g3-(1-咪唑基)苄腈。
(b)在3-(1-咪唑基)苄腈(3.16g)、1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(3.77g，16.98mmol)和DMF(75ml)的混合物中加入氢化钠(0.78g，在矿物油中的60％分散液)。反应混合物在室温下搅拌过2天，加入附加的腈(0.1当量)和氢化钠(0.2当量)，混合物在室温下搅拌过夜。汽提溶剂，残余物在氯仿(150ml)和水(350ml)之间分配。分层，水层用氯仿(2×100ml)提取，合并有机层，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤和汽提。将产物溶解于热叔丁基二甲基醚中，过滤和汽提。残余物用乙腈处理，经过滤收集形成的固体，得到2.10gl-环戊基-3-乙基-6-[3-(1-咪唑基)]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺。
(c)在乙醇/冰浴中向在45ml水/硫酸(1∶1)中的1-环戊基-3-乙基-6-[3-(1-咪唑基)]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺(6.24g，16.7mmol)的溶液中在1.5小时内以小批量加入溶在水(5ml)中的亚硝酸钠(5.77g)。将反应混合物温热至室温，搅拌过夜。将反应混合物倾入冰/水(500ml)中，用NH4OH中和得到黄色沉淀，通过过滤收集沉淀，用水洗涤，然后用醚洗涤。产物从乙酸乙酯/甲醇中，然后从甲醇中重结晶，得到1-环戊基-3-乙基-6-[3-(1-咪唑基)]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.264-265℃。
实施例25(a)向3，4-二羟基苯甲醛(3.46g，15.05mmol)、碳酸钾(11.08g)和DMF(50ml)的在室温下搅拌1小时的混合物中加入N-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐(9.79g)。反应混合物在室温下搅拌过夜，然后在蒸汽浴中搅拌6小时。仍存在起始物料，因此加入附加的碳酸钾(1.73g)和N-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐(4.66g)，混合物在蒸汽浴中加热过夜。将反应混合物过滤，汽提滤液，将残余物溶解在2N盐酸(200ml)中，用氯仿(100ml)提取。水层用氯仿(2×150ml)提取，合并有机层。冷却水层，然后用浓氨水处理直至中性。水层用氯仿提取(3×150ml)，合并有机层，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤和汽提，得到3，4-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯甲醛。
(b)将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.09g，9.4mmol)、3，4-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯甲醛(5.14g)和二甲苯(25ml)的混合物在160℃加热2天。仍存在起始物料，因此加入对甲苯磺酸(6.0g)，混合物在160℃下加热过夜。将反应混合物冷却至室温，加入水和甲醇，汽提混合物得到油状残余物。残余物在1N氢氧化钠(300ml)和乙酸乙酯(100ml)之间分配，分层，水层用乙酸乙酯(1×150ml)提取。合并有机层，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤和汽提。固体产物从乙酸乙酯中重结晶，得到1.51g1-环戊基-3-乙基-6-[3，4-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
实施例26(a)在2-羟基苯甲酸乙酯(2.4ml，16.38mmol)、碳酸钾(4.98g)和DMF(30ml)的混合物中加入N-(3-氯丙基)吗啉盐酸盐(3.93g)。混合物在室温下搅拌30分钟，在蒸汽浴中温热过夜。冷却反应混合物，过滤并汽提，得到液体，将其在乙酸乙酯(350ml)和水之间分配。分离有机层，用水(2×200ml)洗涤，用硫酸镁干燥和汽提，得到2-[3-(4-吗啉基)丙氧基]苯甲酸乙酯。
(b)+(c)将钠球(0.42g)溶解于乙醇(20ml)中，加入1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.02g，9.10mmol)，然后加入2-[3-(4-吗啉基)丙氧基]苯甲酸乙酯(5.33g)。反应混合物回流加热3天，然后在室温下搅拌，然后汽提溶剂。将残余物溶解在水(250ml)中，用乙酸酸化至约pH7，用氯仿提取。有机层用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，汽提，得到油状物，将油状物溶解在乙醚中，过滤并汽提滤液，用硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯(100％)，然后用乙酸乙酯/甲醇(80/20)洗脱，得到2.71gl-环戊基-3-乙基-6-[2-[3-(4-吗啉基)丙氧基]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮液体，[如实施例26(b)中所标记的]。游离碱用乙醇·盐酸处理，得到1.14g盐酸盐[如实施例26(c)所标记的]，m.p.220-221℃。
实施例27(a)向KOH(5.81g)在DMSO(15ml)中的搅拌溶液中加入咪唑(5.0g，73.4mmol)。将混合物搅拌1小时，然后在20分钟内滴加溶于DMSO(10ml)中的2-氟苄腈(8.76ml)。反应混合物在室温下搅拌过夜，经过滤收集产物，用水洗涤，得到10.91g2-(1-咪唑基)苄腈，白色固体。
(b)在2-(1-咪唑基)苄腈(3.14g)、1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(3.75g，16.59mmol)和DMF(75ml)的混合物中加入60％氢化钠(0.78g在矿物油中的60％分散液)。将反应混合物在室温下搅拌过夜，倾入冰/水(600ml)中，用乙酸处理直至pH7。经过滤收集产物，从乙酸乙酯/己烷中重结晶，得到2.82gl-环戊基-3-乙基-6-[2-(1-咪唑基)]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的1/4水合物。
(c)在乙醇/冰浴中，向1-环戊基-3-乙基-6-[2-(1-咪唑基)]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-胺的1/4水合物(2.55g，6.837mmol)在35ml水/硫酸(1/1)中的溶液中在2小时内滴加溶于水(10ml)中的亚硝酸钠(2.36g)。将反应混合物搅拌过夜，倾入冰水(750ml)中并用氨水中和。通过过滤收集形成的沉淀，用水洗涤，然后用乙醚洗涤，得到0.75g产物。由滤液中提取附加的1.74g产物，合并的产物从乙酸乙酯中重结晶，随后溶解于氯仿中，汽提，得到1.42g1-环戊基-3-乙基-6-[2-(1-咪唑基)]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.192-194℃。
实施例28将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.0g，9mmol)、4-硝基苯甲醛(2.04g，13.5mmol)、甲磺酸(0.25ml)和二甲苯(50ml)的混合物回流加热过夜，再另加6小时。在反应混合物中加入乙醇(200ml)，然后回流，随后用DARCO处理。过滤反应混合物，浓缩至100ml，随后冷却。形成黄色针状物，通过过滤收集，用乙醚洗涤，得到0.53g(17％)1-环戊基-3-乙基-6-(4-硝基苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.321-323℃(分解)。
实施例29(a)向在冰浴中冷却的1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(5.0g，22.5mmol)、4-氯-2-乙氧基苯甲酸乙酯(5.4g，23.6mmol)和DMF(50ml)的混合物中加入NaH(3.9g，97.5mmol，在矿物油中60％的分散液)。反应混合物在冰浴中搅拌2小时，然后在室温下搅拌过夜。真空浓缩反应混合物，残余物用水(100ml)处理，用乙酸酸化。反应混合物用氯仿(2×150ml)提取，真空浓缩有机层，油状残余物用乙醚结晶。经过滤收集产物并干燥。产物从异丙醇/乙醚中重结晶，得到6.2g1-环戊基-3-乙基-5-(4-氯-2-乙氧基苯基甲酰氨基(carboxamido))-1H-吡唑-4-甲酰胺，m.p.175-177℃。
(b)将1-环戊基-3-乙基-5-(4-氯-2-乙氧基苯基甲酰胺基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.0g，2.11mmol)和N-甲基-2-吡咯烷酮(3ml)的混合物在185-190℃加热6小时。将反应混合物冷却至室温，用水(25ml)处理，经过滤收集沉淀，从异丙醇中重结晶，得到1-环戊基-3-乙基-6-(4-氯-2-乙氧基苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.185-187℃。
实施例30将1-环戊基-3-乙基-5-(4-氯-2-乙氧基苯基甲酰胺基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(4g，9.8mmol)、咪唑(5.0g，73.5mmol)、KF(4.5g，77.5mmol)和N-甲基-2-吡咯烷酮(10ml)的混合物在185-190℃下加热2.5小时，然后在室温下加热过夜。在反应混合物中加入水(30ml)，混合物用乙酸酸化，经过滤收集所形成的沉淀，用水洗涤，得到2.8gl-环戊基-3-乙基-6-(4-氯-2-羟基苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，白色针状物，m.p.＞300℃。实施例31在1-环戊基-3-乙基-6-(4-硝基苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(1.38g，3.9mol)、SnCl.2H2O(2.64g，11.72mmol)、乙醇(24ml)和水(10ml)的混合物中加入浓盐酸(14.5ml)。反应混合物回流2小时，冷却，经过滤收集产物，真空干燥得到0.85g(67％)1-环戊基-3-乙基-6-(4-氨基苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮盐酸盐的1/3水合物，m.p.279℃(分解)。实施例32将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.0g，9.0mmol)、2，3-二羟基苯并[b]呋喃-5-甲醛(1.73g，11.7mmol)、甲磺酸(0.25ml)和二甲苯(50ml)的混合物回流20小时，然后静置约2天。用乙醚稀释反应混合物，通过过滤收集产物，干燥得到1.65g(52％)1-环戊基-3-乙基-6-(2，3-二羟基苯并[b]呋喃-5-基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮的1/10水合物，m.p.253-254℃。
实施例33在冰浴中，向1-环戊基-3-乙基-6-(4-氨基苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮盐酸盐的1/3水合物(0.61g，1.7mmol)溶于无水吡啶(20ml)中的混合物中加入甲磺酰氯(0.49g，4.25mmol)。将反应混合物在室温下搅拌约2天，汽提溶剂至干，残余物用水处理。经过滤收集产物，从乙醇中重结晶，经DARCO处理后，得到0.49g1-环戊基-3-乙基-6-[4-(甲磺酰氨基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.325℃(分解)。
实施例34(a)在氩气气氛和冰浴中，向2-羟基苯甲醛(6.11g，0.05mol)溶于DMF(50ml)中的溶液中加入NaH(2.0g，0.05mol，在矿物油中的60％分散液)，1小时后加入2-氯乙基甲基醚(4.73g，0.05mol)。将反应混合物静置约2天，然后在70℃加热7小时。将反应混合物汽提至干，残余物在水和氯仿之间分配，分层，水层用氯仿(2×75ml)提取，产物存在于两层中，将它们真空浓缩，残余物用硅胶柱色谱法纯化，用乙醚洗脱，得到1.5g2-[2-(甲氧基)乙氧基]苯甲醛。
(b)将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.07g，4.8mmol)、2-[2-(甲氧基)乙氧基]苯甲醛(1.31g，7.2mmol)、二甲苯(40ml)和甲磺酸(0.25ml)回流过夜。将反应混合物汽提至干，残余物在二氯甲烷和水之间分配，分层，水层用二氯甲烷(2×100ml)提取。合并有机层，真空浓缩，与硅胶(30g)混合。将预载的硅胶放入硅胶柱中，用己烷/乙醚(1/1)洗脱，在从己烷/叔丁基甲基醚(25/1)中结晶后，得到0.305g(17％)1-环戊基-3-乙基-6-[2-[2-(甲氧基)乙氧基]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.71-72℃。
实施例35(a)向3-羟基-4-甲氧基苯甲醛(8.56g，56.26mmol)在乙腈(50ml)中的溶液中加入碳酸钾(17.1g)和乙腈(20ml)，20分钟后，加入N-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐(11.52g)。将反应混合物回流过夜，然后冷却至室温，过滤和汽提溶剂，得到琥珀色液体的4-甲氧基-3-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯甲醛。
(b)将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.25g，5.63mmol)、4-甲氧基-3-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯甲醛(1.64g)和二甲苯(12ml)的混合物在160℃加热过夜。加入附加的醛(0.5g)，将混合物回流加热直至反应完全，随后冷却至室温。汽提溶剂，残余物与乙酸乙酯形成浆液，通过过滤收集产物，与类似实验的产物合并。合并的产物从乙腈中重结晶得到1-环戊基-3-乙基-6-[4-甲氧基-3-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.205-206℃。
实施例36将1-环戊基-3-乙基-6-[2-(CH2＝CH-CH2O)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(5.84g)在210℃加热2小时，加入乙醚，将混合物过滤，产物先后从乙醇和DMF中重结晶，得到3.42g1-环戊基-3-乙基-6-[2-羟基-3-(2-丙烯基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.＞280℃。
实施例37(a)在2-羟基-4-(二乙基氨基)苯甲醛(10.0g，51.57mmol)、碳酸钾(14.3g)和DMF(150ml)的混合物中在室温下加入乙基碘(4.1ml)。反应混合物搅拌约2天，过滤并真空浓缩滤液。残余物在乙醚和饱和碳酸钠之间分配，分出有机层，用硫酸镁干燥，用活性炭处理，过滤和真空浓缩。固体产物从己烷中重结晶得到9.8g桃红结晶固体的2-乙氧基-4-(二乙基氨基)苯甲醛，m.p.58-59℃。
(b)将2-乙氧基-4-(二乙基氨基)苯甲醛(7.87g，35.56mmol)、1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(3.95g，17.78mmol)、对甲苯磺酸单水合物(0.05g)、10％披钯炭(0.11g)和苯(150ml)的混合物回流过夜，同时共沸蒸馏除去水。经过滤除去催化剂，真空浓缩滤液。残余物与类似实验得到的残余物混合，溶解于二氯甲烷中，装入硅胶柱中。用乙醚/己烷(60/40)洗脱，得到绿色泡沫，将其用回流的己烷处理，冷却，通过过滤收集产物，得到1.19g(8％)淡黄色针状物1-环戊基-3-乙基-6-[2-乙氧基-4-(二乙基氨基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.138-139℃。
实施例38(a)向碳酸钾(82.88g，0.6mol)在乙腈(300ml)中的悬浮液中加入3，5-二羟基苯甲酸(4.62g，0.03mol)，10分钟后加入N-(2-氯乙基)吗啉盐酸盐(18.42g，0.099mol)。将反应混合物回流过夜，冷却，过滤并真空浓缩滤液。油状残余物用硅胶柱色谱法纯化，用丙酮洗脱，随后在＞195℃和0.2mmHg下进行Kugelrohr蒸馏得到9.45g 3，5-二-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯甲酸4-吗啉基乙基酯。
(b)4-吗啉基乙基3，5-二-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯甲酸酯(2.0g，4mmol)、1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(0.46g，2mmol)、甲醇钠(0.23g，4mmol)和乙醇(50ml)的混合物回流96小时。反应未完成，因此，加入附加当量的苯甲酸和甲醇钠，将反应混合物回流48小时。汽提反应混合物至干，残余物用水处理，用乙酸酸化。将混合物冷却，经过滤分离产物，在90℃干燥得到0.61g(54％)1-环戊基-3-乙基-6-[3，5-二-[2-(4-吗啉基)乙氧基]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.182-183℃。
实施例39在冰浴中冷却条件下，向1-环戊基-3-乙基-6-[2-羟基-3-(2-丙烯基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(1.0g)在乙酸(15ml)的悬浮液中加入硫酸(15ml)。将反应混合物温热至室温，搅拌过夜。将反应混合物倾入冰/水中，经过滤收集形成的沉淀，用水洗涤。产物通过从乙醚中重结晶纯化，然后用硅胶柱色谱法纯化，用25％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到0.5gl-环戊基-3-乙基-6-[2-甲基-2，3-二氢苯并[b]呋喃-5-基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.164-165℃。
实施例40(a)将3-(乙氧基羰基甲氧基)苯甲醛(9.55g，45.91mmol)溶解于乙醇(75ml)和水(25ml)中，加入KOH(3.02g)。反应混合物在室温下搅拌直至反应完全，然后经过滤收集产物，干燥得到3.78g白色粉末3-(羧基甲氧基)苯甲醛钾盐。
(b)将3-(乙氧基羧基甲氧基)苯甲醛钾盐溶解于水中，用9N硝酸处理。通过过滤收集得到的沉淀，用水洗涤，在高真空下和75℃下干燥，得到1.66g3-(羧基甲氧基)苯甲醛。
(c)将3-(羧基甲氧基)苯甲醛(1.63g，9.05mmol)溶解于对二氧杂环己烷(20ml)中并在冰浴中冷却，然后一次加入N，N’-羰基二咪唑(1.9g)。反应混合物搅拌30分钟，加入吗啉(0.8ml)，将混合物温热至室温，搅拌直至反应完全。真空除去溶剂，残余物在氯仿(100ml)和2N盐酸(75ml)之间分配，分层，水层用氯仿(2×75ml)提取。合并有机层，用硫酸镁干燥，汽提得到油状物，将其与类似实验的产物混合，用硅胶柱色谱法纯化，用氯仿洗脱，得到2.1g3-[4-吗啉基羰基甲氧基]苯甲醛。
(d)将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.87g)、3-[4-吗啉基羰基甲氧基]苯甲醛(2.1g，8.43mmol)和二甲苯(20ml)的混合物在160℃加热约2天。除去溶剂，在残余物中加入甲醇，经过滤收集产物。由滤液得到附加的产物，将产物合并，从乙腈/氯仿中重结晶得到1-环戊基-3-乙基-6-[3-(4-吗啉基羰基甲氧基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.212-213℃。
实施例41(a)将3-羟基苯甲醛(5.17g，42.33mmol)、碳酸钾(58.5g)和乙腈(100ml)的混合物在室温下搅拌15分钟，随后加入二溴乙烷(18.3ml)。反应混合物在室温下搅拌30分钟，然后回流3-4小时。加入附加的二溴乙烷，反应混合物回流过夜。冷却反应混合物，过滤和汽提滤液得到油状物。将油状物溶解于乙醚(300ml)中，用5N氢氧化钠洗涤(2×75ml)，乙醚层用硫酸镁干燥，汽提。残余物用硅胶柱色谱法纯化，用10％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到5.23g3-(2-溴乙氧基)苯甲醛。
(b)将3-(2-溴乙氧基)苯甲醛(3.91g，17.07mmol)、碳酸钾(3.1g)、硫代吗啉(1.9ml)和DMF(30ml)的混合物在蒸汽浴中温热过夜。加入附加的碳酸钾(0.7g)和硫代吗啉(1.0ml)，反应混合物在蒸汽浴中温热过夜。将反应混合物冷却至室温，过滤和汽提滤液，得到琥珀色油状物。将油状物与类似实验得到的产物合并，经硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯(100％)洗脱，得到油状物3-[2-(4-硫代吗啉基)乙氧基]苯甲醛。
(c)将3-[2-(4-硫代吗啉基)乙氧基]苯甲醛(3.2g，12.75mmol)、将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.55g)和二甲苯(20ml)的混合物在160℃加热过夜。将反应混合物在冰浴中冷却，除去溶剂得到油状物，油状物在静置时结晶。产物用热甲醇/乙醚处理，将混合物冷却，经过滤收集产物，用乙醚洗涤，得到0.51g所需产物。真空浓缩滤液得到5.0g6，7-二氢衍生物，将其溶解于二甲苯(25ml)中，用披钯炭处理，在110℃加热3小时。加入附加的披钯炭(1.5g)，持续加热2小时。用CELITE过滤混合物，汽提滤液。残余物用甲醇处理，经过滤收集产物，与如上得到的产物(0.51g)和类似实验得到的产物混合。合并的产物从乙酸乙酯中重结晶，用乙醚洗涤，在100℃高真空下加热干燥得到1-环戊基-3-乙基-6-[3-[2-(4-硫代吗啉基)乙氧基]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
实施例42(a)在氩气下，向3-羟基苄腈(4.76，0.04mmol)、碳酸钾(16.6g，0.12mmol)和DMF(100ml)的混合物中加入4-氯甲基吡啶盐酸盐(6.56g，0.04mmol)。反应混合物在室温下搅拌约2天，蒸发溶剂，残余物在水和二氯甲烷之间分配。有机层用2N氢氧化钠水溶液(1×100ml)、盐水洗涤，然后用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，得到9.0g琥珀色固体3-(4-吡啶基甲氧基)苄腈。
(b)用雷内镍(2.0g)处理3-(4-吡啶基甲氧基)苄腈(2.5g，0.012mol)在75％甲酸(35ml)中的混合物，将混合物回流加热4小时。通过SUPERCELL过滤反应混合物，用5N氢氧化钠使滤液达到pH8-9，用乙酸乙酯(3×150ml)提取，用硫酸镁干燥合并的有机层，过滤并汽提。残余物用硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯(100％)洗脱，得到0.94g(37％)3-(4-吡啶基甲氧基)苯甲醛。
(c)将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2.7g，0.124mol)、3-(4-吡啶基甲氧基)苯甲醛(3.95g，0.0185mol)和二甲苯(100ml)的混合物回流加热过夜。加入附加的甲酰胺(1g)，混合物再回流2天。加入10％披钯炭(1g)，混合物再回流3天。经过滤除去催化剂，真空浓缩滤液，经过滤收集固体残余物。通过浓缩母液得到附加的产物，合并的产物从乙酸乙酯中重结晶，得到1.66g1-环戊基-3-乙基-6-[3-[4-吡啶基甲氧基]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.230-232℃。
实施例43(a)将3-羟基苯甲醛(3.66g，0.03mol)、碳酸钾(12.43g，0.09mol)和乙腈(100ml)的混合物在室温下搅拌30分钟，然后加入N-甲基-2-氯甲基哌啶盐酸盐(5.49g，0.03mol)。搅拌反应混合物直到反应完全，然后真空除去溶剂，残余物在氯仿和水之间分配。用氯仿(3×100ml)提取水层，真空浓缩合并的有机层，得到3-(1-甲基-3-六氢吖庚因氧基)苯甲醛。
(b)将3-(1-甲基-3-六氢吖庚因氧基)苯甲醛(0.79g，3.4mol)、1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(0.5g，2.2mmol)、甲磺酸(0.25ml)和二甲苯(25ml)的混合物回流过夜。汽提溶剂，残余物溶解在二氯甲烷中，通过硅胶柱色谱法纯化，用乙醚洗脱，然后用丙酮洗脱，再用0.5％三乙胺/丙酮洗脱，得到0.43g1-环戊基-3-乙基-6-[3-(1-甲基-3-六氢吖庚因氧基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.195-196℃。
实施例44向1-环戊基-3-乙基-6-[3-[4-吡啶基甲氧基]苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮(1.1g)在乙酸(100ml)/水(50ml)中的混合物中加入Pt2O(200mg)。混合物在50磅/英寸2下加热氢化(自耦变压器设为40)4小时。经过滤除去催化剂，浓缩滤液，残余物在NH4OH和乙酸乙酯之间分配。分离有机层，用盐水洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩。残余物用硅胶柱色谱法纯化，用乙酸乙酯洗脱，然后用制备性薄层色谱法纯化，用乙酸乙酯洗脱，从乙酸乙酯中重结晶得到64mg1-环戊基-3-乙基-6-(3-羟基苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.275-278℃(分解)。
实施例45(a)在35分钟内向3-羟基苯甲醛(8g，65mmol)、1-甲基-4-哌啶醇(7.5g，65mmol)、三苯膦(13.1g，65mmol)和THF(100ml)的搅拌溶液中加入偶氮二羧酸二乙酯(11.4g，65mmol)在THF(20ml)中的溶液。反应混合物在冰浴中搅拌3小时，随后在室温下搅拌5天。真空浓缩反应混合物，在氯仿(300ml)和3N盐酸(300ml)之间分配。真空浓缩水层，残余物用10％碳酸钾处理，用氯仿(2×100ml)提取，真空除去溶剂，得到7.4g3-(1-甲基-4-哌啶氧基)苯甲醛。
(b)将3-(1-甲基-4-哌啶氧基)苯甲醛(7.4g)、1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(2g)和二甲苯(200ml)回流31小时，然后在室温下搅拌几天。真空除去溶剂，残余物经硅胶柱色谱法纯化，用乙醚(100％)至10％甲醇/乙醚洗脱，从异丙醇中重结晶后，得到2.3g1-环戊基-3-乙基-6-[3-(1-甲基-4-哌啶氧基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮的1/4水合物。
实施例46(a)在冰浴中，向2，4-二氟苄腈(25g，0.18mol)在对二氧杂环己烷(250ml)中的搅拌溶液中在45分钟内加入乙醇钠(15g，0.22mol)。反应混合物如此搅拌2小时，随后在室温下搅拌18小时。真空浓缩溶剂，残余物在水(200ml)和二氯甲烷(400ml)之间分配，用乙酸酸化。分离出有机层，用硫酸镁干燥，真空浓缩，得到26.7g黄色油状物2-乙氧基-4-氟苄腈和4-乙氧基-2-氟苄腈的混合物。
(b)向实施例46(a)的苄腈(26.5g，0.16mol)、咪唑(11.5g，0.17mol)和对二氧杂环己烷(150ml)的在冰浴中冷却的混合物中在30分钟内加入NaH(6.8g，在矿物油中的60％分散液)。反应混合物如此搅拌1小时，然后在室温下搅拌24小时，然后在室温下静置24小时。真空除去溶剂，残余物在二氯甲烷(2×300ml)和水(100ml)之间分配。合并二氯甲烷提取物，真空浓缩，残余物经硅胶柱色谱法纯化，用乙醚(100％)至10％甲醇/乙醚洗脱，得到10.1g4-(1-咪唑基)-2-乙氧基苄腈，m.p.134-136℃。
(c)将1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺(1.5g，6.3mmol)、4-(1-咪唑基)-2-乙氧基苄腈(1.5g，7mmol)、NaH(0.84g，21mmol，在矿物油中的60％分散液)和对二氧杂环己烷(75ml)的混合物在蒸汽浴中加热12小时，然后在室温下搅拌过夜。反应混合物用乙酸酸化，真空浓缩，在残余物中加入水。收集形成的胶状固体，用水洗涤，干燥和通过硅胶柱色谱法纯化，用乙醚(100％)至15％甲醇/乙醚洗脱，在从乙腈中重结晶后，得到0.78g(36％)1-环戊基-3-乙基-6-[4-(1-咪唑基)-2-乙氧基苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，m.p.204-206℃。
实施例47按照类似于实施例1(c)中描述的方法，但用1-叔丁基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺代替1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺，用2，4，6-三甲基苯甲醛代替2-丙氧基苯甲醛，可以预料可制备1-叔丁基-3-乙基-6-[2，4，6-三甲基苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
实施例48按照类似于实施例1(b)和1(c)中描述的方法，但用1-环戊基-3-苯基甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-腈代替在1(b)部分中的1-环戊基-3-乙基-5-氨基-1H-吡唑-4-腈，可以预料可制备(a)1-环戊基-3-苯基甲基-5-氨基-1H-吡唑-4-甲酰胺。
(b)1-环戊基-3-苯基甲基-6-(2-丙氧基苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
生物学试验结果在标准生物试验方法中，式I化合物被发现具有c-GMP-PDE V(先前称为c-GMP-PDE I)抑制活性，因此，用于治疗心力衰竭和高血压。与硝酸结合的式I化合物己被发现用于逆转或降低硝酸酯引起的耐受性，因此，将用于治疗心绞痛、充血性心脏病和心肌梗塞形成。
环状核苷酸磷酸二酯酶(PDE)的多种同功酶形式在哺乳动物细胞内被识别。这些同功酶可将环式腺苷磷酸(cAMP)和/或环式鸟苷磷酸(cGMP)水解成可能生物失活的5′-核苷酸磷酸。在血管平滑肌内细胞内cGMP的升高触发了一系列反应，从而导致肌肉紧张性下降，而肾小管细胞cGMP的升高刺激了尿钠排泄和多尿。血管平滑肌和肾细胞含有磷酸二酯酶同功酶，它具有低的水解cGMP的Km(1μM)。这种同功酶被称为cGMP-PDE或cGMP-PDE V(由于它是在乙酸钠浓度为150-200mM下在PDE活性的第一峰值中由离子交换琼脂糖树脂洗脱得到，先前被称为cGMP-PDEI)。cGMP-PDE同功酶的抑制是可行的亚细胞机制，由此，通过增加cGMP可导致降低总外周耐受性和刺激尿钠排泄和多尿。cGMP-PDE抑制剂的开发代表了一种方法，以发现用于治疗心力衰竭和高血压的药物。例如，具有高的cGMP-PDE抑制潜力的化合物可预期用于降低血压和引起尿钠排泄和多尿。
本发明的代表性的化合物的cGMP-PDE V抑制活性由如下方法说明。
由各种动物和人的心血管组织(心脏和主动脉)通过阴离子交换和亲合色谱法分离cGMP-PDE和其它PDE同功酶，如Silver等人在“Sec.Messeng.Phos.”1313-25，1991中所述；在存在或不存在试验化合物下的PDE活性基本上按Thompson等人在“环状核苷酯研究进展”期刊1069-92中所述方法测定。为测定化合物作为PDE抑制剂的效价和选择性，通过在10μM下筛选化合物对环状核苷酸水解的影响。如果观察到≥50％的PDE活性抑制，则得到IC50值(导致PDE活性降低50％的化合物的浓度)和相应的95％置信区间。由Tallarida和Murray在“采用计算机程序的药理学计算手册，方法8，分级剂量响应”，第14-19页，Springer-Verlag，纽约，1981中所述的方法由浓度响应曲线计算IC50值。
下表概括了本发明代表性的化合物的试验结果。
在给定μM下的抑制百分数或IC50(nM)实施例编号 cGMP-PDE V1(c) 7/3*2 2503 2004 5.85 876 1.67 51％(10μM)或20％(1μM)8(a) 410/430*8(b) 70％(1μM)或32％(0.1μM)9(b) 4.910 85％(10μM)或15％(1μM)11(c) 2700/4500*12(b) 74％(1μM)或30％(0.1μM)13(b) 10714 81015 50016 68％(10μM)或19％(1μM)或780nM17(c) 14％(0.1μM)或19％(1μM)或39％(10μM)18(b) 37019(b) 7320(b) 94
在给定μM下的抑制百分数或IC50(μM)实施例编号 cGMP-PDE V21 9322(b) 14023(c) 54024(c) 13025(b) 14/51*26(c) 28％(1μM)27(c) 73％(1μM)或21％(0.1μM)28 40％(1μM)29(b) 7.4/8.4*30 53％(1μM)或9％(0.1μM)31 61％(1μM)或31％(0.1μM)32 47％(1μM)或23％(0.1μM)33 56％(1μM)或21％(0.1μM)34(b) 56％(0.1μM)或28％(0.01μM)35(b) 58％(0.1μM)或13％(0.01μM)36 0％(0.1μM)或4％(1μM)37(b) 73％(1μM)或31％(0.1μM)38(b) 63％(0.1μM)或11％(0.01μM)39 65％(0.1μM)或24％(0.01μM)40(d) 74％(1μM)或47％(0.1μM)41(c) 56％(1μM)或46％(0.1μM)42(c) 56％(0.1μM)或25％(0.01μM)43(b) 75％(1μM)或41％(0.1μM)44 56％(1μM)或29％(0.1μM)46(c) 26％(0.1μM)或76％(0.1μM)或90％(10μM)或18nM*该数值表示对分别实验的IC50(nM)值。
本发明的代表性的化合物的抗高血压活性由如下方法说明。
用戊巴比妥钠(50mg/kg，ip)麻醉自发的高血压大鼠(SHR)，在下方静脉腔和腹主动脉中插入导管，给药和分别记录动脉压力和心率。在手术2天后，在有意识的SHR中以5分钟间隔测量基准血压。试验化合物或赋形剂以与剂量相关的方式(0.3-10mg/kg)静脉内给药，同时，在多谱仪中连续记录动脉压力。在试验化合物的每个剂量给药后5分钟测量平均动脉压力响应，而下一次剂量以累积剂量方式给出。对试验化合物的每个剂量的响应由与三个基准测量结果的平均值的差值计算。
下表概括了本发明代表性化合物的试验结果。
SHR iv在给定mg/kg下的平均动脉实施例编号 压力百分变化或ED25(mg/kg)1(c) -5％(1mg/kg)3 -7％(1mg/kg)4 -13％(10mg/kg)5 -8％(1mg/kg)6 -1％(10mg/kg)8(a) 5.7或-35％(10mg/kg)或-20％(3mg/kg)或-81％(30mg/kg，po)9(b) -19％(10mg/kg)13(b) 9.5或-58％(30mg/kg，po)或-19％(3mg/kg)或-14％(1mg/kg)或-11％(0.3mg/kg)19(b) 12.5或-19％(10mg/kg)21 -1％(10mg/kg)22(b) 17.9％或-18％(10mg/kg)24(c) 12.7或-21％(10mg/kg)或-13％(3mg/kg)25(b) 4.5或-38％(10mg/kg)或-27％(3mg/kg)或-18％(1mg/kg)或-18％(10mg/kg，po)本发明代表性的化合物在逆转或降低硝酸酯引起的耐受性方面的活性由如下方法说明自发性高血压大鼠(17-25周龄)通过重复给药高剂量硝酸甘油(100mg/kg，s.c.，3次/天，连续3天)使之具有硝酸甘油耐受性。为证实耐受性，以1-300μg/kg的剂量静脉内给以刺激剂量的硝酸甘油，记录每个剂量的平均动脉压力(MAP)中的最大变化。在给药刺激剂量之前5-10分钟，耐受性大鼠组用本发明的化合物(耐受性预处理组)或载体(0.05N氢氧化钠)(耐受性载体预处理组)进行静脉内预处理。向非耐受性大鼠(非耐受性组)给药刺激剂量的硝酸甘油导致MAP在10-40mmHg之间依赖于剂量的下降。向耐受性载体预处理组给药刺激剂量的硝酸甘油导致低血压响应的显著下降。向用本发明化合物预处理的耐受性大鼠(耐受性预处理组)给药刺激剂量的硝酸甘油导致低血压响应的不同程度的恢复。计算非耐受性组、耐受性载体预处理组和耐受性预处理组的剂量-MAP曲线下的面积。硝酸酯引起的耐受性的逆转百分数计算如下逆转百分数＝(AUC耐受性预处理-AUC耐受性载体)/(AUC非耐受性-AUC耐受性载体)×100其中AUC非耐受性＝非耐受性组的剂量-MAP曲线下的面积。
AUC耐受性载体＝耐受性载体预处理组的剂量-MAP曲线下的面积。
AUC耐受性预处理＝耐受性预处理组的剂量-MAP曲线下的面积。
100％或更大的逆转百分数反映了硝酸酯引起的耐受性完全逆转，而0％的逆转百分数表示没有发生任何硝酸酯引起的耐受性的逆转。下表概括了本发明代表性化合物的试验结果。
硝酸甘油引起的实施例剂量(mg/kg) 耐受性的逆转百公数(％)6 1.0 498(a)0.3 513(b) 0.3 58本发明的化合物可通过现有技术中已知的常规药物制备方法，即通过配制药物组合物以用于药物用途；所述药物组合物含有本发明的化合物或其可药用的盐和一种或多种以固体或液体形式用于口服给药、肠胃外给药、局部给药或气溶胶吸入给药等等的可药用的载体、助剂、稀释剂或赋形剂。
用于口服给药的固体组合物包括压制的片剂、丸剂、粉剂和粒剂。在该固体组合物中，活性化合物与至少一种惰性稀释剂，例如淀粉、碳酸钙、蔗糖或乳糖混合。这些组合物也可含有除惰性稀释剂之外的其它物质，例如润滑剂，如硬脂酸镁、滑石等等。
用于口服给药的液体组合物包括可药用的乳剂、溶液、分散液、糖浆和酏剂，它含有现有技术中常用的惰性稀释剂，例如水和液体石蜡。除了惰性稀释剂之外，这些组合物也可含有助剂，如增湿剂和悬浮剂、和增甜剂、色素、香料和防腐剂。本发明的用于口服给药的化合物还包括可吸收材料的胶囊，如明胶，它含有所述活性组分，加入或不加稀释剂或赋形剂。
用于肠胃外给药的本发明的制剂包括无菌水溶液、水溶液有机和有机溶液、分散液和乳剂。有机溶剂或分散介质的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油，例如橄栏油和可注射有机酯，例如油酸乙酯。这些组合物还可含有助剂，例如稳定剂、防腐剂、增湿剂、乳化剂和分散剂。
本发明用于局部给药或气溶胶吸入给药的制剂包括在可药用的赋形剂，例如水、含水醇、二醇、油溶液或油-水分散液等中溶解或分散本发明的化合物。
如果需要，本发明的化合物可进一步加入缓释或有目标地提供体系，例如聚合物基质、脂质体和微球。
在这些组合物中的活性组分百分数可变化，使得得到合适的剂量。向特定患者给药的剂量使用如下标准根据临床判断改变给药途径、治疗持续时间、患者的年龄和症状、活性组分的效价和患者对其的反应。因此，在考虑所有标准和使用其对患者利益的最佳判断后，在临床上很容易确定活性化合物的有效剂量。
权利要求
1.式I化合物或其可药用的酸加成盐和/或水合物
其中R1是叔丁基或环戊基；R3是低级烷基或苯基低级烷基；和R6是苯基或被1-3个相同或不同的取代基取代的苯基，取代基选自低级烷氧基、低级烷基、羟基、1-咪唑基、低级链烯氧基、二低级烷基氨基低级烷氧基、4-吗啉基低级烷氧基、低级烷氧基羰基低级烷氧基、羧基低级烷氧基、三氟甲基、1-哌啶基低级烷氧基、1-吡咯烷基低级烷氧基、硝基、卤素、氨基、-(CH2)2O-、低级烷基磺酰基氨基、低级烷氧基低级烷氧基、低级链烯基、二低级烷基氨基、-OCH(CH3)CH2-、4-吗啉基羰基低级烷氧基、4-硫代吗啉基低级烷氧基、吡啶基低级烷氧基、1-低级烷基-3-六氢吖庚因基氧基和1-低级烷基-4-哌啶基氧基。
2.权利要求1的化合物，其中R1是环戊基；R3是低级烷基。
3.权利要求2的化合物，其中R3是甲基或乙基。
4.权利要求3的化合物，其中R6是苯基或被1-2个相同或不同的取代基取代的苯基，取代基选自低级烷氧基、低级烷基、羟基、1-咪唑基、低级链烯氧基、二低级烷基氨基低级烷氧基、4-吗啉基低级烷氧基、低级烷氧基羰基低级烷氧基、羧基低级烷氧基、三氟甲基、1-哌啶基低级烷氧基、1-吡咯烷基低级烷氧基、硝基、卤素、氨基、-(CH2)2O-、低级烷基磺酰基氨基、低级烷氧基低级烷氧基、低级链烯基、二低级烷基氨基、-OCH(CH3)CH2-、4-吗啉基羰基低级烷氧基、4-硫代吗啉基低级烷氧基、吡啶基低级烷氧基、1-低级烷基-3-六氢吖庚因基氧基和1-低级烷基4-哌啶基氧基。
5.权利要求4的化合物，其中R6是苯基或被1-2个相同或不同的取代基取代的苯基，其中取代基选自甲氧基、乙氧基、丙氧基、甲基、羟基、1-咪唑基、CH2＝CHCH2O-、2-(二甲基氨基)乙氧基、3-(二甲基氨基)丙氧基、2-(4-吗啉基)乙氧基、3-(4-吗啉基)丙氧基、乙氧基羰基甲氧基、羧基甲氧基、三氟甲基、2-(1-哌啶基)乙氧基、2-(1-吡咯烷基)乙氧基、硝基、氯、氨基、-(CH2)2O-、甲基磺酰基氨基、2-(甲氧基)乙氧基、CH2＝CH2CH2-、二乙基氨基、-OCH(CH3)CH2-、4-吗啉基羰基甲氧基、2-(4-硫代吗啉基)乙氧基、4-吡啶基甲氧基、1-甲基-3-六氢吖庚因基氧基和1-甲基-4-哌啶基氧基。
6.权利要求5的化合物，其选自1-环戊基-3-乙基-6-(2-丙氧基苯基)吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，1-环戊基-3-乙基-6-[4-(1-咪唑基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，1-环戊基-3-乙基-6-[3-(2-(4-吗啉基)乙氧基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，1-环戊基-3-乙基-6-[2-乙氧基-4-(1-咪唑基)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮，和1-环戊基-3-乙基-6-[2-(CH2＝CHCH2O)苯基]吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-酮。
7.药物组合物，其含有权利要求1的化合物和可药用的载体，助剂，稀释剂或赋形剂。
8.药物组合物，其含有权利要求2的化合物和可药用的载体，助剂，稀释剂或赋形剂。
9.药物组合物，其含有权利要求3的化合物和可药用的载体，助剂，稀释剂或赋形剂。
10.药物组合物，其含有权利要求4的化合物和可药用的载体，助剂，稀释剂或赋形剂。
11.药物组合物，其含有权利要求5的化合物和可药用的载体，助剂，稀释剂或赋形剂。
12.药物组合物，其含有权利要求6的化合物和可药用的载体，助剂，稀释剂或赋形剂。
13.抑制哺乳动物中cGMP-磷酸二酯酶的方法，该方法包括给所说动物施用有效量的权利要求1的化合物。
14.抑制哺乳动物中cGMP-磷酸二酯酶的方法，该方法包括给所说动物施用有效量的权利要求2的化合物。
15.抑制哺乳动物中cGMP-磷酸二酯酶的方法，该方法包括给所说动物施用有效量的权利要求3的化合物。
16.抑制哺乳动物中cGMP-磷酸二酯酶的方法，该方法包括给所说动物施用有效量的权利要求4的化合物。
17.抑制哺乳动物中cGMP-磷酸二酯酶的方法，该方法包括给所说动物施用有效量的权利要求5的化合物。
18.抑制哺乳动物中cGMP-磷酸二酯酶的方法，该方法包括给所说动物施用有效量的权利要求6的化合物。
19.治疗哺乳动物中心力衰竭和/或高血压的方法，该方法包括给所说动物施用有效量的权利要求1的化合物。
20.治疗哺乳动物中心力衰竭和/或高血压的方法，该方法包括给所说动物施用有效量的权利要求2的化合物。
21.治疗哺乳动物中心力衰竭和/或高血压的方法，该方法包括给所说动物施用有效量的权利要求3的化合物。
22.治疗哺乳动物中心力衰竭和/或高血压的方法，该方法包括给所说动物施用有效量的权利要求4的化合物。
23.治疗哺乳动物中心力衰竭和/或高血压的方法，该方法包括给所说动物施用有效量的权利要求5的化合物。
24.治疗哺乳动物中心力衰竭和/或高血压的方法，该方法包括给所说动物施用有效量的权利要求6的化合物。
全文摘要
本发明公开了6－芳基吡唑并[3,4－d]嘧啶－4－酮衍生物,含有它们的药物组合物,和抑制c－GMP－磷酸二酯酶的方法和治疗心力衰竭和/或高血压的方法。
文档编号A61K31/55GK1177963SQ96192463
公开日1998年4月1日 申请日期1996年3月5日 优先权日1996年3月5日
发明者E·R·巴肯, B·辛格 申请人:圣诺菲药品有限公司