专利名称：3－(2－(4－(4－(氨基－亚氨基－甲基)苯基)－4－甲基－2,5－二氧代咪唑烷－1－基 ...的制作方法
技术领域：
本发明涉及结构式I的3-(2-(4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯的盐，
其中的HB是马来酸、及其生理可接受的盐，它们的制备方法及其在药物中的用途。
在PCT申请PCT/EP94/03491(WO-A-95/14008)中记载了3-(2-(4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯盐酸盐及其药理学性质。然而，(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯盐酸盐、(R)-3-(2-((R)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯盐酸盐、(S)-3-(2-((R)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯盐酸盐以及(R)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯的盐酸盐的缺点在于它们是无定形的，无法以结晶状态得到。因此，上述盐酸盐无法通过结晶来纯化，从而不能用作药物的活性成分(药物的组成应满足法律规定的明确纯度)，并且不能作为药物活性物质工业合成中的目的产物，因为在分离和纯化过程中同样必须遵循法律准则所规定的条件。此外，由于其物理及操作特性，无定性的盐酸盐不完全适合于药物制剂如片剂的盖仑生产。
因此，本发明的目的是制备适当不吸湿形式的3-(2-(4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯，使其易于达到所需纯度并满足工业合成及盖仑制剂的要求。
通过制备3-(2-(4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯的马来酸盐、特别是含有摩尔比为大约1∶1的乙酯和马来酸的盐形式(即酸加成盐的形式)，意外地实现了该目的。
因此本发明涉及结构式I的3-(2-(4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯的盐，
其中HB是马来酸，包括所有的立体异构体形式及其任意比例的混合物，以及其生理可接受的盐。
结构式I的化合物是结晶并且是不吸湿的，从而具有无法预测的优点。它们可以在确定的条件下结晶并通过重结晶进行纯化，并且适于药物应用以及药物剂型的盖仑生产。
本发明包括式I化合物的所有立体异构体形式，即在咪唑烷环上的手性中心具有(S)构型并在丙酸单元上的手性中心具有(S)构型的异构体、在咪唑烷环上的手性中心具有(R)构型并在丙酸单元上的手性中心具有(S)构型的异构体、在咪唑烷环上的手性中心具有(S)构型并在丙酸单元上的手性中心具有(R)构型的异构体以及在咪唑烷环上的手性中心具有(R)构型并在丙酸单元上的手性中心具有(R)构型的异构体。优选的形式为在咪唑烷环上的手性中心具有(S)构型并在丙酸单元上的手性中心具有(S)构型的异构体，即结构式Ia的(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯盐，
其中HB是马来酸，及其生理可接受的盐。
本发明还包括由两种或多种结构式I的立体异构体以任意质量比形成的混合物。
在含有摩尔比为大约1∶1的3-(2-(4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯和马来酸的结构式I的新化合物中，马来酸的两个COOH基团中的一个被碱性的脒基基团中和，并以盐、即带有负电荷的羧酸盐基团的形式存在(被马来酸质子化后，乙酯中的脒基以带正电荷的脒基正离子存在)。新化合物中马来酸的第二个COOH可以以酸、即COOH的形式存在，或以盐、即羧酸盐的形式存在。本发明涉及马来酸氢盐(其中仍存在一个COOH基团，并且该形式为优选)以及由它们制得的生理可接受的盐(由它们与无机或有机碱形成)。
具体地讲，本文中生理可接受的盐是可药用或无毒的盐。可存在于这些盐中的阳离子来自，例如，碱金属和碱土金属(例如钠、钾、镁或钙)、氨或生理可接受的有机胺〔例如三乙胺、乙醇胺或三(2-羟乙基)胺〕。式I化合物的盐可以通过下述制备过程直接得到，例如，通过在该过程中采用适当的马来酸盐或通过加入适当的碱。所述的盐还可以通过将开始制得的结构式I的马来酸氢盐(其中的COOH基团仍然存在)用适当的碱(例如碱金属或碱土金属的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐，碱土金属氧化物或胺)处理制得。
在本发明中，可以将COOH基团彻底地、或仅仅是部分地转变为盐的形式。成盐的程度取决于，例如，使用所需的pH值。将游离的COOH基团转变成盐(彻底地或是部分地)的形式还可以在将结构式I的马来酸氢盐与碱性物质一起用于生产药物制剂时来完成。
结构式I的化合物可以根据本领域技术人员已知的常规方法，用结构式II的化合物与马来酸和/或马来酸盐进行阴离子交换来制备，
其中的HV是任何不同于马来酸的无机或有机酸。式HV的酸的例子是盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、乙酸、丙酸或甲磺酸。式II化合物的例子是结构式IIa和IIb的化合物，
其中，结构式II中的HV分别是盐酸和乙酸。结构式II的起始化合物可以按照，例如，PCT申请PCT/EP94/03491和PCT/EP96/01572(WO-A-96/33976)中所述的制备盐酸盐(与盐酸形成的盐)和乙酸盐的方法进行制备。关于这点，PCT申请PCT/EP94/03491和PCT/EP96/01572的全部内容是本公开的一个组成部分。例如，可以使用马来酸的钠盐、锂盐、钾盐和铵盐，或马来酸与有机胺阳离子形成的盐作为离子交换中的马来酸盐。优选使用马来酸。
为了进行阴离子交换，将式II化合物的溶液用载有马来酸的离子交换材料进行色谱分离。适用于该目的的适当溶剂的例子是水、醇(例如甲醇、乙醇、丁醇或异丙醇)、以及这些溶剂的混合物，例如水/醇混合物。可以使用可购得的阴离子交换材料，并首先用常规方法将这些材料转变成马来酸的形式，或在重复使用时再生成该形式。阴离子交换通常在-10至40℃、尤其是从-5至30℃、优选从0至25℃的温度下进行。如需要，浓缩后可以将所需产物在离子交换色谱的洗脱剂中结晶(例如通过冷却和/或沉淀的方法)，并通过过滤或离心进行分离。
为了进行阴离子交换，还可以将结构式II的化合物与马来酸和/或马来酸盐在溶剂中接触。本文中的溶剂也应理解为两种或多种溶剂的混合物。合适的溶剂是水、醇，例如含有1至8个碳原子的醇，尤其是含有1至6个碳原子的醇，优选含有1至4个碳原子的醇、醚(例如二氧六环、四氢呋喃、乙二醇独甲醚、乙二醇二甲醚、二甘醇独甲醚和二甘醇二甲醚)、酮(例如丙酮或丁酮)、腈(例如乙腈)、二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、以及这些溶剂的混合物，例如水和醇的混合物。可以使用的醇的例子是甲醇，乙醇，异和正丙醇，正、异、仲和叔丁醇，正、异、仲和叔戊醇，正己醇，2-乙基丁醇，2-乙基己醇，异辛醇、环戊醇、甲基环己醇(混合物)或苄醇。
在该过程中，式II化合物马来酸或马来酸盐的摩尔比通常从1∶1至1∶10，优选从1∶1至1∶2，特别优选大约1∶1。可以首先加入结构式II的化合物，然后加入马来酸或马来酸盐，或马来酸和马来酸盐的混合物，或采用相反的过程，并且还可以将两种成分同时加入到反应器内。尽管可以将各种成分以溶液的形式接触，但根据阴离子交换进行的方式，还可以首先引入悬浮液和/或加入悬浮液或固体。阴离子交换通常在-10至40℃、尤其是从-5至30℃、优选从0至25℃的温度下进行。为了分离，可随需要将生成的马来酸盐在浓缩后析出结晶(例如通过冷却和/或沉淀的方法)，并通过过滤或离心的方法分离。随需要，可对其进行进一步的洗涤，并随需要将其进行进一步的纯化，例如通过重结晶或浸提的方法。
在制备结构式I的新的马来酸盐的优选方法中，使用结构式IIb的乙酸盐作为起始化合物。关于此点，特别优选将盐与马来酸在溶剂中进行接触。
用于阴离子交换的结构式II的化合物优选通过如下路线制得。
在脱水剂，例如二环己基碳二亚胺(DCC)、O-((氰基(乙氧羰基)亚甲基)氨基)-N，N，N，N-四甲基脲四氟硼酸盐(TOTU)或丙基膦酸酐(PPA)的存在下，将结构式III的化合物，
所述化合物可以根据PCT申请PCT/EP94/03491和PCT/EP96/01572中给出的方法制备，在偶联反应的常规条件下与结构式IV的化合物偶联，
所述化合物可以根据文献中记载的方法制备(参见，例如E.Juaristi，D.Quintana，J.Escalante，Aldrichmica Acta，27卷(1)，1994，3-11；D.C.Cole，50卷，1994，9517-9582)，生成结构式V的化合物。
本文中，在咪唑烷环的手性中心以及结构式III、IV和V化合物的丙酸单元的手性中心可以存在(R)构型或(S)构型。结构式III和IV的化合物可以以单一立体异构体(对映体)的形式或立体混合物的形式应用，即以外消旋的形式或光学活性的形式应用。
结构式V的化合物可以根据将腈转变为酰胺肟的常规方法，在适当的溶剂(例如醇，如甲醇或乙醇)中用羟胺或羟胺盐和碱(例如叔胺或碱金属的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)将其转变为结构式VI的化合物，
该化合物可通过常规条件下的还原反应转变为结构式II的化合物，例如在金属催化剂的存在下用氢气进行氢化反应并加入分子式HV的酸，特别是在分子式HV的酸存在下的氢化反应。可以使用贵金属催化剂(例如钯碳)作为氢化反应的金属催化剂，所述氢化反应可以在常压下进行，并优选在升高的压力下进行。对于结构式IIb化合物的优选制备方法，氢化反应可以在含有乙酸的适当溶剂中进行，或在以乙酸作为溶剂的条件下进行。
式I化合物的药理学性质不会由于它们是马来酸盐而受到影响。与相应的盐酸盐相似，结构式I的新化合物可以抑制由含有Arg-Gly-Asp的蛋白质(例如纤维连接素、纤维蛋白质或Willebrand因子)与所谓的整合素相互作用所引起的细胞/细胞粘附作用。整合素是一种跨膜糖蛋白，是含有Arg-Gly-Asp的细胞骨架蛋白的受体(E.Ruoslahti和M.D.Pierschbacher，科学，238(1987)491-497；D.R.Phillips，I.F.Charo，L.V.Parise和L.A.Fitzgerald，血液，71(1988)831-843)。另外，它们还可以抑制其它粘附蛋白(例如Vitronectin、胶原和昆布胺酸)与相应的各种细胞类型的表面受体结合。具体地讲，结构式I的新化合物可以抑制血小板的聚集并适于预防血栓形成。此外，结构式I的化合物还可以抑制肿瘤细胞的转移。本发明还涉及结构式I的化合物和/或其生理可接受的盐用于以上目的的用途，另外还涉及它们在制备用于抑制血小板聚集、预防血栓形成或抑制肿瘤细胞转移的药物中的用途。
结构式I的化合物及其生理可接受的盐可以作为药物对动物、优选哺乳动物，特别是人进行给药，给药可以就化合物本身以各种化合物的混合物的形式进行或以药物制剂的形式进行，所述药物制剂可用于肠内给药或胃肠外给药，并含有有效量的至少一种结构式I的化合物或其生理可接受的盐作为活性成分，另外还含有常规的可药用载体和辅料。本发明还涉及结构式I的化合物及其生理可接受的盐用作药物以及用于药物制剂的用途，所述药物制剂含有作为活性成分的一种或多种结构式I的化合物和/或一种或多种其生理可接受的盐，以及可药用的载体和辅料，并选择性地含有一种或多种其它具有药理学活性的化合物。所述药物制剂通常含有约0.5至90％重量比的结构式I的化合物或其生理可接受的盐。
本发明的药物可以进行口服给药，例如以丸剂、片剂、薄膜片、包衣片、颗粒剂、硬胶囊和软胶囊、溶液剂、糖浆、乳剂或悬浮剂的形式给药。然而，还可以进行直肠给药(例如以栓剂的形式)、胃肠外给药(例如以注射液或输注液、微囊或棒的形式)、经皮给药(例如以软膏或酊剂的形式)，或以其它的方式(例如以鼻内喷雾或烟雾剂混合物的形式)进行给药。
本发明的药物制剂可以通过已知的方式，用药物惰性的无机和/或有机载体和辅料与活性化合物一起制备成适于给药的所需剂型。为了制备丸剂、片剂、包衣片和硬胶囊，可以使用，例如乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐等。用于制备软胶囊和栓剂的载体物质的例子是脂肪、蜡、半固体及液体多元醇、天然油或硬化油等。用于制备溶液剂和糖浆的合适载体的例子是水、蔗糖、转化糖、葡萄糖、多元醇等。用于制备注射液的合适载体的例子是水、醇、甘油、多元醇、植物油等。用于制备微囊、植入物或棒的合适载体是乙醇酸和乳酸的混合聚合物。
除活性化合物和载体物质外，本发明的药物制剂还含有辅料，例如填料、崩解剂、粘合剂、助流剂、湿润剂、稳定剂、乳化剂、防腐剂、甜味剂、染料、矫味剂或芳香剂、增稠剂、稀释剂或缓冲物质，并且还可含有溶剂或增溶剂或用于达到缓释效果的物质，以及用于调节渗透压的盐，包衣剂或抗氧剂。它们还可含有两种或多种结构式I的化合物和/或其生理可接受的盐，以及一种或多种其它的有治疗活性的化合物。
这些具有治疗活性的物质是血流促进剂，例如二氢麦角汀碱、麦角溴烟酯、烟酸及其酯、苄环庚烷、萘呋胺酯、前列环素衍生物及PGE1衍生物；抗心绞痛药，例如消心痛、异山梨醇一硝酸酯、硝酸甘油、吗斯酮胺、心痛定和异博定；β-受体阻制剂，例如普萘洛尔、氧烯洛尔、阿替洛尔、美托洛尔和喷布洛尔。此外，本发明的化合物还可以和ACE抑制剂(例如卡托普利、雷米普利、依那普利、赖诺普利和群多普利)、血小板聚集抑制剂(例如乙酰水杨酸、氯苄噻啶和氯吡雷格)、以及抗凝血药(例如肝素和低分子量的肝素)联合使用。
药物的剂量可以在宽的范围内改变并应与每一个体的具体条件相适应。通常，在口服给药的情况下，能够产生有效结果的合适的每日剂量从大约0.1至5mg/kg，优选从0.3至3mg/kg，特别是从0.5至2mg/kg体重。在静脉内给药的情况下，每日剂量通常从大约0.01至0.6mg/kg，优选从0.05至0.3mg/kg，特别是从0.05至0.1mg/kg体重。特别是当给予相对较大的量时，可以将每日剂量再次分成多个，例如2、3或4个分剂量进行给药。随需要，每日剂量可依据个体反应而超出给定的每日剂量范围(增加或减少)。每剂本发明的药物制剂通常含有0.2至500mg、优选1至200mg、特别是10至100mg结构式I的活性化合物或其盐。
本发明的新化合物可以用于控制或预防心血管系统疾病、冠脉系统或脑血管系统疾病、或外周动脉疾病。它们可用于有血栓形成危险时的急性治疗，并可用于预防动脉粥样硬化和血栓形成的慢性治疗，例如治疗和预防动脉血管疾病如急性心肌梗塞、心肌梗塞的二级预防、溶栓和扩张术(PTCA)后再狭窄的预防、不稳定型心绞痛、短暂性缺血性发作、中风、冠脉旁路手术(包括与旁路有关的再闭塞的预防)、肺栓塞、外周动脉闭塞疾病和壁间动脉瘤；此外，还可用于治疗静脉或微循环血管的疾病，例如深静脉血栓形成、弥散性血管内凝血、手术后和产后创伤、创伤或感染性休克以及败血症，或与高反应性血小板有关的疾病、血栓性血小板减少性紫癜、先兆子痫和经前综合征，或与透析或体外循环有关的疾病；另外还可用于癌症手术过程中以及预防癌症。结构式I的新化合物和/或其生理可接受的盐在治疗或预防这些疾病中的用途是本发明的目的之一，本发明还另外涉及它们在制备用于治疗或预防所述疾病的药物中的用途。具体地讲，本发明涉及它们在制备用于治疗或预防冠脉系统或脑血管系统疾病、外周动脉疾病、静脉或微循环血管疾病的药物，以及与透析或体外循环一起使用的药物中的用途。
测试了结构式I的化合物对血小板聚集以及纤维蛋白原向血小板(使用来自人血的凝胶过滤血小板，用ADP或凝血酶激活)粘附的抑制效果，及其抑制血小板聚集和血栓形成的体内效果。
实施例所有产物均通过质谱和NMR波谱的方法进行了鉴定。实施例1(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯马来酸氢盐
将100g AmberliteIRA93(游离碱，Fluka)和1000ml 2M的马来酸溶液一起在室温下搅拌10分钟。将马来酸溶液抽滤并将离子交换材料用2M的马来酸溶液以相同的方式再处理两次。然后将离子交换树脂用水洗至中性。将1.51g(3mmol)(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯盐酸盐溶于15ml水。将该溶液通过填有80ml AmberliteIRA93的离子交换柱(所述树脂已按上述方法吸附了马来酸)。然后将柱子用水洗脱。以每份25ml收集洗脱的馏分。在室温下从馏分2和3中结晶出纯净的(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯马来酸氢盐。结晶通过过滤进行分离。收率771mg白色结晶状固体(44％)M.p.228℃[α]D＝-54.4°(c＝1；甲醇；22℃)FBA-MS466(M+H)+X射线结晶结构分析证实该化合物为(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯马来酸氢盐(乙酯∶马来酸的比例为1∶1)，它还可以用如下的离子型结构式来表示，该结构式与上述的结构式是等同的。
通过冷冻干燥水溶液的方法，还可以从馏分2和3的母液、以及馏分4和12中另外分离出740mg(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯马来酸氢盐。
总收率1.511g(87％)。实施例2(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯马来酸氢盐2a.(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氰基苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯首先将7.7kg(33.5mol)(S)-3-氨基-3-苯丙酸乙酯盐酸盐加入到反应器中，然后加入9.14kg(33.5mol)2-(S)-4-(4-氰基苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酸的50l乙酸乙酯溶液。在内温20至23℃的条件下泵入7.72kg(8.54l；67mol)N-乙基吗啉。将该混合物搅拌15分钟，然后在2 0至2 3℃下，通过进料阀向其中一次性加入11kg(3 3.5mo l)O-((氰基(乙氧羰基)亚甲基)氨基)-N，N，N，N-四甲基脲四氟硼酸盐(TOTU)。然后将混合物在20至23℃的温度下搅拌2小时，然后加入50l水并将混合物在20至23℃的温度下搅拌30分钟。加入50l甲基叔丁基醚并随后将混合物在8至12℃的温度下搅拌2小时。将白色悬浮液转移到离心机中离心。将滤饼依次用28l水和28l乙醇洗涤，最后再用56l水洗涤。将产物在40℃的真空干燥箱中于氮气流下干燥。收率9.84kg(85％)FBA-MS449(M+H)+2b.(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-肟基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯首先将120l乙醇加入反应器中。室温下，将12kg(26.786mol)(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氰基苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯在搅拌下加入反应器中。加入3.74kg(53.813mol)盐酸羟胺和5.44kg(7.54l；53.86mol)三乙胺。将反应混合物加热至回流并在80℃下搅拌2小时。在温度为50℃的水浴中真空蒸除90l乙醇。将剩余的混合物溶于220l乙酸乙酯并将得到的混合物用水提取三次，每次50l。将乙酸乙酯相在温度为50℃的水浴中真空蒸发至30l。将其用甲苯处理四次(每次10l)并蒸发至干。收率11.1kg(85％)FBA-MS482(M+H)+2c.(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯乙酸盐将11kg(22.869mol)(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-肟基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯溶于70l冰醋酸并将该溶液加入到125l的高压釜中。向该溶液中加入1.0kg钯/碳(10％；50％水)和5 l冰醋酸的悬浮液。将混合物在50℃和10巴的氢气压力下氢化15小时。用压力漏斗在氮气下抽滤除去催化剂并用5 l冰醋酸洗涤。将滤液用旋转蒸发仪在温度为60℃的水浴中于真空下蒸发至干。将残余物溶于30l丙酮，并将该溶液在20℃下于30分钟内加入到200 l甲基叔丁基醚中。随后将混合物在室温下搅拌1小时并将沉淀出的产物进行离心。用10 l甲基叔丁基醚洗涤滤饼，将其从离心机中取出并真空干燥。得10.1kg(85％)产物。FBA-MS466(M+H)+。
为了纯化，首先将90 l丙酮加入反应器中并加入10.1kg上述产物。将混合物加热至50℃并搅拌1小时。然后在温度为20℃的夹套中继续搅拌过夜，然后用离心机分离出固体。将其用10l丙酮洗涤。将该含丙酮的产物与50l丙酮一起搅拌，加热至回流温度(57℃)并搅拌1小时。将该混合物在搅拌的条件下于24小时内冷却；然后将其在15℃下搅拌1小时并用离心机分离出产物。用10l甲基叔丁基醚洗涤滤饼，将其从离心机中取出并在0.1巴和40℃下真空干燥。将产物压碎。收率7.2kg(60％)FBA-MS466(M+H)+2d.(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯马来酸氢盐将75.68g(144mmol)(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯乙酸盐溶于340ml水。将溶液过滤，搅拌下加入16.87g(144mol)马来酸(99％)在48ml水中的溶液。将混合物在室温下搅拌1小时，随后将其在冰浴中放置过夜。产物以结晶状的固体从溶液中沉淀出来。抽滤出产物并在五氧化二磷下高真空干燥。收率80.7g白色结晶状固体(96％)M.p.228℃[α]D＝-54.4°(c＝1；甲醇；22℃)FBA-MS466(M+H)+步骤2a所用的起始化合物的制备I.(S)-3-氨基-3-苯丙酸乙酯盐酸盐Ia.(R)-2-氨基-2-苯乙醇将20g(920mmol)硼氢化锂溶于420ml无水四氢呋喃中。搅拌下滴加233.5ml(1.84mol)三甲基氯硅烷，随后在4小时内分多次加入69.5g(0.46mol)(R)-苯基甘氨酸。将反应混合物在室温下搅拌过夜。然后加入690ml甲醇，将混合物在室温下搅拌2小时并真空浓缩。将残余物在搅拌下溶于690ml 20％的氢氧化钾水溶液。将水相用乙酸乙酯提取三次。将合并的有机层用水洗涤、硫酸镁干燥并真空浓缩。收率41.2g(65.3％)FBA-MS138(M+H)+Ib.(R)-2-苄氧羰酰氨基-2-苯乙醇将40.5g(295mol)(R)-2-氨基-2-苯基乙醇溶于385ml无水二甲基甲酰胺。在0℃及搅拌的条件下加入73.5g N-(苄氧羰酰基)-琥珀酰亚胺(295mmol)，并将混合物在0℃下搅拌1小时。撤去冰浴并将该混合物在室温下放置48小时。将反应液真空浓缩并随后将残余物溶于500ml乙酸乙酯。将有机相用10％枸橼酸水溶液洗涤两次并用水洗涤一次。将其用无水硫酸钠干燥并浓缩。将得到的结晶状产物粗品(82.3g)再次溶于乙酸乙酯。将有机相用10％枸橼酸水溶液洗涤两次并用水洗涤一次。随后用乙酸乙酯/石油醚重结晶。收率74.6g(93.3％)FBA-MS272(M+H)+Ic. ((R)-2-苄氧羰酰氨基-2-苯乙醇)4-甲基苯磺酸酯将53.9g(R)-2-苄氧羰酰氨基-2-苯乙醇(198.7mmol)溶于500ml二氯甲烷和80.3ml(993.5mmol)吡啶的混合物中。在0℃及搅拌的条件下加入45.5g(238.4mmol)甲苯磺酰氯的240ml二氯甲烷溶液，并将该混合物在室温下搅拌7小时。另外加入11.36g甲苯磺酰氯(59.61mmol)。将该混合物在0℃搅拌5小时。然后将其在室温下放置过夜并随后进行真空浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯。有机相用10％的枸橼酸水溶液洗涤两次并用水洗涤一次，硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物与二乙醚一起研制，抽滤、用二乙醚洗涤并用五氧化二磷干燥。收率60.9g(72％)。将母液浓缩，残余物用正己烷/乙酸乙酯(6∶4)溶解并用硅胶进行色谱分离。收率3.5g(4.2％)总收率64.4g(76.2％)FBA-MS426(M+H)+Id.(S)-3-苄氧羰酰氨基-3-苯基丙腈将60.5g((R)-2-苄氧羰酰按基-2-苯乙醇)4-甲基苯磺酸酯(142.2mmol)溶于675ml二甲基甲酰胺。加入13.9g 氰化钾(213.3mmol)、5.64g 18-冠醚-6(21.33mmol)和520mg碘化钾(3.13mmol)并将该混合物在50℃搅拌20小时。将反应液倒入500ml冰水中并将该混合物在0℃搅拌5小时。然后将其进行抽滤并将沉淀溶于乙酸乙酯。将有机相用水洗涤三次，硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物与二乙醚一起研制，抽滤、用二乙醚洗涤并用五氧化二磷干燥。收率25.3g(63.5％)FBA-MS281(M+H)+Ie.(S)-3-苄氧羰酰氨基-3-苯丙酸乙酯将15g(S)-3-苄氧羰酰氨基-3-苯基丙腈(53.51mmol)悬浮于110ml无水乙醇和30ml二氧六环的混合物中。在冷却及搅拌的条件下于10-15℃通入HCl气体。在一段短的时间后，形成澄清的溶液。继续在冷却的条件下通入HCl气体，直至在薄层色谱上不再能检测到起始原料。向反应液中通入15分钟氮气，并随后将混合物真空浓缩。向残余物中加水，直至形成持久的浊度。将混合物在室温下搅拌30分钟，然后将水相用乙酸乙酯提取三次。将合并的有机相用水洗涤，用硫酸镁干燥并真空浓缩。将残余物溶于乙酸乙酯/石油醚(1∶1)并用硅胶进行色谱分离。收率10.55g(60％)FBA-MS328(M+H)+If.(S)-3-氨基-3-苯丙酸乙酯盐酸盐将10.29g(S)-3-苄氧羰酰氨基-3-苯丙酸乙酯(31.44mmol)溶于125ml乙醇并用Pd/活性炭在pH＝4的条件下催化氢化，同时用自动滴管滴加2N HCl乙醇溶液。用硅藻土抽滤除去催化剂并将滤液浓缩。将残余物与二乙醚一起研制，抽滤、用二乙醚洗涤并用五氧化二磷干燥。收率5.05g(70％)FBA-MS194(M+H)+II.2-((S)-4-(4-氰基苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酸IIa.(R，S)-4-(4-溴苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷将49.8g(0.25mol)4-溴苯乙酮、21.2g(0.325mol)氰化钾和211.4g(2.2mol)碳酸铵悬浮于1.0l乙醇水溶液中(0.5l蒸馏水和0.5l乙醇)。将该悬浮液在60℃下搅拌至用薄层色谱不再能检测到起始原料(8小时)。将混合物冷却至室温。用稀释一倍的浓盐酸将溶液的pH值调至6.3。析出白色沉淀状的产物。将该混合物在4℃下放置过夜。抽滤出白色沉淀，用水洗涤并用五氧化二磷真空干燥。收率65.3g白色固体(97％)FBA-MS269(M+H)+IIb.(R，S)-2-氨基-2-(4-溴苯基)丙酸将5.3g(20mmol)(R，S)-4-(4-溴苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷悬浮于50ml 3N的氢氧化钠溶液中。将该悬浮液在高压釜中、在10巴的氮气压力下于145℃加热1小时。将冷却的反应液用150ml水稀释并在冰浴冷却及剧烈搅拌的条件下用乙酸将pH调至4。将其在0℃下搅拌2小时。抽滤出沉淀，用水洗涤并用五氧化二磷真空干燥。收率3.65g白色固体(75％)FBA-MS244(M+H)+IIc.(R，S)-2-氨基-2-(4-溴苯基)丙酸乙酯将27.3g(112.3mmol)(R，S)-2-氨基-2-(4-溴苯基)丙酸悬浮于150ml9.8N的盐酸乙醇溶液中。将该混合物加热回流18小时，然后再次加入50ml9.8N的盐酸乙醇溶液并将混合物加热回流5小时。将溶液浓缩并将残余物在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间进行分配。将有机相用水洗涤并用硫酸钠干燥。为了纯化，将产物粗品(23.22g)进行高真空蒸馏(2mmHg下沸点＝129-130℃)收率20.7g(68％)FBA-MS272(M+H)+IId.(S)-2-氨基-2-(4-溴苯基)丙酸乙酯室温下，将44.3g(163mmol)(R，S)-2-氨基-2-(4-溴苯基)丙酸乙酯和24.8gD-(-)-扁桃酸(163mmol)溶于138ml异丙醇。加入414ml二异丙基醚并将混合物在0℃下冷却过夜。将析出的沉淀抽滤。将得到的盐以相同的方式进一步重结晶两次。得到20g对映体纯的盐([α]D＝-14°(c＝1；2.15N盐酸乙醇溶液；22℃)。将盐在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠溶液之间进行分配。将有机相用水洗涤，硫酸镁干燥并真空浓缩。在用R-(-)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯乙酰氯(Mosher试剂)形成衍生物后，经HPLC测得对映体纯度大于99％ee。收率12.5g(28％)[α]D＝+52.7°(c＝1；2.15N盐酸乙醇溶液；22℃)FBA-MS272(M+H)+IIe. N-((S)-1-(4-溴苯基)-1-(乙氧羰基)乙基)-N-(乙氧羰基甲基)脲将12.4g(45.6mmol)(S)-2-氨基-2-(4-溴苯基)丙酸乙酯溶于70ml二氯甲烷。在0℃下于15分钟内滴加5.11ml(45.6mmol)异氰酰乙酸乙酯的35ml二氯甲烷中溶液。将混合物在0℃下搅拌2小时后浓缩。收率18.1g(99％)[α]D＝+10.7°(c＝1；2.15N盐酸乙醇溶液；22℃)FBA-MS401(M+H)+IIf.2-((S)-4-(4-溴苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酸向18g(44.9mmol)N-((S)-1-(4-溴苯基)-1-(乙氧羰基)乙基)-N-(乙氧羰基甲基)脲中加入180ml 6N的盐酸溶液。将反应混合物加热回流10小时。将其冷却至0℃并将析出的反应产物沉淀抽滤，然后用水洗涤并用五氧化二磷真空干燥。收率11.4g(78％)[α]D＝+32.8°(c＝1；2.15N盐酸乙醇溶液；22℃)FBA-MS327(M+H)+IIg.2-((S)-4-(4-氰基苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酸将11.75g(35.9mmol)2-((S)-4-(4-溴苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酸溶于90ml二甲基甲酰胺。加入14.15g(158mmol)氰化铜(I)并将混合物在搅拌下加热回流20小时。冷却反应混合物并将其倒入300ml水中。用浓盐酸将水相调至酸性(pH＝1-1.5)，搅拌30分钟并用Seitz膜抽滤。水相用乙酸乙酯提取三次。将合并的有机相用水洗涤，硫酸镁干燥并真空浓缩。收率9.3g(95％)[α]D＝+33.4°(c＝1；2.15N盐酸乙醇溶液；22℃)FBA-MS274(M+H)+实施例3吸湿性的测定物质吸湿性的测定用自动双盘微量天平在真空下或具有确定组成或确定压力的空气中进行。将干燥的样品置于天平的一侧并将配衡重量置于另一侧。在称量室内产生压力逐渐增加的水蒸气氛围。记录下样品重量增加值关于水蒸气压的函数。称量测量在25℃的恒温下进行。
首先将称量室抽真空至恒重并测定样品的起始重量，然后通过进气阀向抽空的称量室内通入确定量的水蒸气。在随后进行的重复试验中，在第一步中设置的水蒸气压在25℃的测量温度下相当于4.7％的相对空气湿度。当通入水蒸气后再次达到恒重时，即当样品与空气中的水蒸气达到平衡时，记录下样品重量的增加值。然后，继续通入水蒸气使水蒸气的压力逐步增加(每个水蒸气压对应一个25℃测量温度下的确定的相对空气湿度)。在每一步中，在达到恒重后记录下样品重量的增加值。当对(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯马来酸氢盐进行测定时，观察到如下重量增加(以样品的起始重量计)。相对湿度 4.7％18.5％ 32.8％ 49.6％ 64.7％ 75.5％ 82.1％样品重量 0.06％ 0.11％ 0.16％ 0.23％ 0.33％ 0.43％ 0.54％的增加结果表明，即使在相对空气湿度为大约80％的条件下，(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯马来酸氢盐重量的增加仅为很小(约0.5％)；因此，该物质是不吸湿的。实施例4在狗冠脉循环流量改变模型(不稳定型心绞痛模型)中的药理学研究不分性别地将狗(20-35kg)麻醉(氯胺酮加戊巴比妥钠输注液)，换气并装备用于测量血液动力学参数(外周和左心室血压、心肌收缩力、心率)和ECG的工具。通过输注电解质使血气和红细胞压积保持恒定。进行左胸切开术后，暴露心脏，将左旋支冠状动脉(LCX)与一个电磁流量探针连接，以测量平均冠脉血流量。在流量探针的远端，用钳子短时间地挤压LCX以损伤内皮，并在损伤处放置一个小型的中心压缩的塑料圆柱体(依据LCX的大小，内径为1.0-1.7mm，长4mm)。收缩器消除由于LCX闭塞10秒钟所引起的反应性充血，并引发由于狭窄部位血小板富集的血栓再形成而造成的流量周期的出现(每小时约10次)。在出现规律性的流量改变60分钟后，将试验化合物以团块(bolus)的形式进行静脉内或十二指肠内给药。继续对循环流量的改变监测至少2至5个小时。对5至8只动物给予化合物，通过比较给药前后每小时内循环流量改变的平均次数计算出对冠脉血栓形成性循环流量改变的抑制百分率。在对照组的动物中，每小时内循环流量改变的次数在数小时内保持恒定。(参考文献Folts，J.D.等(1976)，循环，54365-370；Just，M.等(1989)，心血管药理学杂志，14(11补编)S129-136)当用(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯马来酸氢盐进行试验时，得到如下结果。所给出的数据为与给药前相比，在给予试验化合物后的第一、第二和第三小时中，每小时内由于狭窄所引起的冠脉循环流量改变(CFVs)次数的减少量。剂量以毫克/公斤体重计。剂量 给药方式 CFV s的减少(％)(mg/kg) 第一小时第二小时第三小时0.1 静脉内52 81 890.2 静脉内 75 96 990.1 十二指肠内 39 62 740.3 十二指肠内 23 66 78在该体内模型中得到的数据证实，试验物质具有很强的抗血栓形成活性，尤其是冠脉抗血栓形成作用。在试验过程中记录的所有血液动力学参数均无显著改变。实施例5在狗抑制血小板聚集的体外模型中的药理学研究不分性别地将狗(Labrador/Harrier混合饲养，体重21-28kg)禁食过夜。将试验化合物以硬胶囊的形式口服给药或进行静脉内给药。在试验化合物给药前及给药后的24小时内，从头静脉数次抽取20ml血并将其加入枸橼酸右旋糖(9+1体积)中。通过离心得到血小板富集的血浆(PRP)。加入ADP(3-30μmol/l)或胶原(0.3-10μg/ml)以及肾上腺素(10μM)后，用血小板聚集测量仪(BioData)在37℃测定PRP中的血小板聚集。比较给药前后的最大聚集百分数。给出了在最低的拮抗剂(可导致不可逆的聚集最大值)浓度下聚集抑制的百分数。另外，在收集血液时还用Simplate1装置在去毛的前腿内侧测量了皮肤出血时间。比较给药前后的出血时间计算出出血时间延长的百分数。
当用(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯马来酸氢盐进行试验时，得到如下结果。所给出的数据为给予试验物质1h、4h、8h和24h后血小板聚集的抑制百分数。剂量以毫克/公斤体重计。n为试验的狗的数量。a)ADP-介导的体外血小板聚集的抑制剂量 给药方式 聚集的抑制(％)(mg/kg)(n) 1h后 4h后8h24h后0.5静脉内(6)93 88 59160.5口服(6) 46 83 33181 口服(6) 76 97 86702 口服(8) 64 86 7849b)胶原介导的体外血小板聚集的抑制剂量给药方式 聚集的抑制(％)(mg/kg) (n)1h后 4h后 8h 24h后0.5静脉内(6) 272618 00.5口服(6) 8 19501 口服(6) 366750 112 口服(8) 286560 20静脉内给药0.5mg/kg 4小时后，出血时间改变的最大值为延长68％(p＜0.05)，口服给药2mg/kg 2小时后，该最大值为122％(p＜0.05)。在最低的口服剂量下，出血时间没有明显的改变。这些试验结果证明了试验化合物作为血小板聚集的体内抑制剂的显著效果。
权利要求
1.结构式I的3-(2-(4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯的盐，
其中HB是马来酸，包括所有的立体异构体形式及其任意比例的混合物，以及其生理可接受的盐。
2.权利要求1所要求的结构式I的化合物及其生理可接受的盐，其中，在咪唑烷环上的手性中心具有(S)构型并在丙酸单元上的手性中心具有(S)构型。
3.(S)-3-(2-((S)-4-(4-(氨基-亚氨基-甲基)苯基)-4-甲基-2，5-二氧代咪唑烷-1-基)乙酰氨基)-3-苯丙酸乙酯马来酸氢盐。
4.权利要求1至3中任意一个所要求的式I化合物的制备方法，所述方法包括用结构式II的化合物与马来酸和/或马来酸盐进行阴离子交换
其中HV是不同于马来酸的任何无机或有机酸。
5.权利要求4的方法，其中，为了进行阴离子交换，将结构式II的化合物用载有马来酸的离子交换材料进行色谱分离。
6.权利要求4的方法，其中，为了进行阴离子交换，将结构式II的化合物与马来酸或马来酸盐在溶剂中进行接触。
7.权利要求4至6中的任意一个所要求的方法，其中，用结构式IIb的乙酸盐进行阴离子交换
8.权利要求4至7中的任意一个所要求的方法，其中，为了制备结构式II的化合物，将结构式III的化合物
与结构式IV的化合物
偶联，生成结构式V的化合物，
将其用羟胺转变成结构式VI的化合物，
并通过氢化及加入分子式HV的酸将其转变成结构式II的化合物，优选通过乙酸存在下的氢化反应将其转变成结构式IIb的化合物。
9.权利要求1至3中的任意一个所要求的结构式I的化合物和/或其生理可接受的盐用作药物。
10.权利要求1至3中的任意一个所要求的结构式I的化合物和/或其生理可接受的盐，用作血小板聚集抑制剂、用于预防血栓形成或用作肿瘤细胞转移抑制剂。
11.权利要求1至3中的任意一个所要求的结构式I的化合物和/或其生理可接受的盐在制备抑制血小板聚集、预防血栓形成或抑制肿瘤细胞转移的药物中的用途。
12.权利要求1至3中的任意一个所要求的结构式I的化合物和/或其生理可接受的盐，用于治疗或预防冠脉系统或脑血管系统疾病、外周动脉疾病、静脉或微循环血管疾病，或用于透析或体外循环。
13.权利要求1至3中的任意一个所要求的结构式I的化合物和/或其生理可接受的盐在制备用于治疗或预防冠脉系统或脑血管系统疾病、外周动脉疾病、静脉或微循环血管疾病的药物，以及与透析或体外循环一起使用的药物中的用途。
14.一种药物制剂，含有作为活性成分的一种或多种权利要求1至3中的任意一个所要求的结构式I的化合物和/或一种或多种其生理可接受的盐以及可药用的载体和辅料，此外还选择性地含有一种或多种其它具有药理学活性的化合物。
15.制备含有一种或多种权利要求1至3中的任意一个所要求的结构式I的化合物和/或一种或多种其生理可接受的盐作为活性成分的药物制剂的方法，所述方法包括将活性成分与药用的载体和辅料、以及随需要加入的一种或多种其它具有药理学活性的化合物一起制备成适于给药的剂型。
全文摘要
本发明涉及结构式Ⅰ的3－(2－(4－(4－(氨基－亚氨基－甲基)苯基)－4－甲基－2,5－二氧代咪唑烷－1－基)乙酰氨基)－3－苯丙酸乙酯的盐,其中的HB是马来酸、及其生理可接受的盐,它们的制备方法及其在药物中的用途。
文档编号A61K31/415GK1174835SQ9710546
公开日1998年3月4日 申请日期1997年6月3日 优先权日1996年6月5日
发明者H·U·斯蒂尔兹, G·贝克, M·拉道 申请人:赫彻斯特股份公司