二苯并噁和二苯并二噁衍生物及其作为抗肿瘤药剂的用途的制作方法

专利名称：二苯并噁和二苯并二噁衍生物及其作为抗肿瘤药剂的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及式(Ⅰ)的化合物及其差向异构体和对映体，或其生理上可使用的盐，
其中R1和R2独立地为氢、未取代的低级烷基、被低级烷氧基或低级烷硫基取代的低级烷基、或者未取代或被一个或多个低级烷基、低级烷氧基、卤素取代的低级烷基或卤素取代的酰基；X为CO或CHOH；Y为CO或CH2；而Z为O或NH。
除非特别指明，这里所用的术语“低级烷基”是指未取代或可以被低级烷氧基或低级烷硫基取代的、最多含有6个(包括6个)、优选1-2个碳原子的烃基，例如“低级烷基”的例子为甲基、乙基、叔丁基、正戊基、取代的甲基如甲氧基甲基、甲硫基甲基。
“酰基”可以是脂肪族酰基、芳脂族酰基或芳族酰基。优选的脂肪族酰基有1-6个碳原子，例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、正丁酰基、异丁酰基和戊酰基。芳脂族酰基例如可以被一个或多个取代基(例如低级烷氧基和卤代的低级烷基)取代的苯乙酰基，如α-甲氧基-α-(三氟甲基)-苯乙酰基。优选的芳族酰基为未取代或可以被低级烷基(例如甲基、乙基、叔丁基和正戊基)或卤素(例如氟、氯、溴或碘)取代的苯甲酰基。优选地，X为CO,Y为CO，而Z为O。
本发明还涉及含有一种或多种上式(Ⅰ)所定义的化合物或其生理上可使用的盐的组合物；这些化合物或其生理上可使用的盐作为抗肿瘤药剂的用途；生产这些化合物或其生理上可使用的盐的方法；和能生产某种这些化合物的微生物。
更具体地，本发明涉及下面定义的式(Ⅰ)的被称为化合物A,A-1,A-2,A-3,A-4,A-5,A-6,A-7,A-8,A-9和A-10的化合物及其相应的差向异构体化合物B,B-1,B-2,B-3,B-4,B-5和B-6。化合物A:I,R1=H,R2=H,X=CO,Y=CO,Z=O(3,7-二羟基-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氢-5aH-二苯并[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外观白色晶体2)熔点187-188℃3)比旋光度[α]23D=+272°(c=0.56，在甲醇中)4)分子量(FAB-MS法)负离子方式m/z 347(M-H)-5)分子式C18H20O76)高分辨率质谱(M-H)测定值347.1146C18H19O7的计算值347.11317)UVλmaxnm(ε)在MeOH中213(20,100),282(14,500)在MeOH+N/10HCl中 215(18,400),278(14,500)在MeOH+N/10NaOH中248(16,100),297(13,900),328(17,000)8)IR光谱在KBr压片中，主吸收波数如下3410,2932,1729,1678,1639,1604,1232,11269)1H-NMR光谱400MHz，在DMSO-d6中，用TMS作内标，δ:101(3H,s),1.77(3H,d,J=2Hz),2.09(3H,s),2.38(3H,s),3.28(3H,s),4.32(1H,d,J=5Hz),5.35(1H,q,J=2Hz)5.52(1H,d,J=5Hz,D2O可互换的)，6.62(1H,s),10.60(1H,s,D2O可互换的)10)13C-NMR光谱100MHz，在DMSO-d6中，用TMS作内标δ:8.3,8.4,13.3,21.8,50.1,74.6,80.2,82.8,110.8,113.7,114.6,117.1,142.1,159.2,160.2,160.8,161.1,197.5
11)溶解性可溶于二甲基亚砜，乙酸乙酯，甲醇不溶于正己烷，水化合物A-1:I,R1=乙酰基，R2=乙酰基，X=CO,Y=CO,Z=O(3,7-二(甲基羰基氧基)-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氢-5aH-二苯并[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外观白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正离子方式m/z 433(M+H)+3)分子式C22H24O94)1H-NMR光谱400MHz，在DMSO-d6中，用TMS作内标δ:1.09(3H,s),1.80(3H,d,J=2Hz),2.10(3H,s),2.17(3H,s),2.34(3H,s),2.45(3H,s),3.23(3H,s),5.69(1H,s),5.78(1H,q,J=2Hz),7.04(1H,s)化合物A-2:R1=H,R2=对溴苯甲酰基，X=CO,Y=CO,Z=O(3-(4-溴苯甲酰基)-7-羟基-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氢-5aH-二苯并[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外观白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正离子方式m/z 531(M+H)+3)分子式C25H23BrO84)1H-NMR光谱400MHz，在DMSO-d6中，用TMS作内标δ:1.00(3H,s),1.80(3H,d,J=2Hz),2.14(3H,s),2.45(3H,s),3.31(3H,s),4.29(1H,s),5.56(1H,d,J=2Hz),5.71(1H,broad s),7.17(1H,s),7.85(2H,d,J=8.5Hz),8.08(2H,d,J=8.5Hz)化合物A-3:I,R1=对溴苯甲酰基，R2=对溴苯甲酰基，X=CO,Y=CO,Z=O(3,7-二(4-溴苯甲酰基)-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氢-5aH-二苯并[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外观白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正离子方式m/z 713(M+H)+
3)分子式C32H26Br2O94)1H-NMR光谱400MHz，在DMSO-d6中，用TMS作内标δ:1.44(3H,s),1.97(3H,d,J=2Hz),2.19(3H,s),2.57(3H,s),3.38(3H,s),5.21(1H,d,J=2Hz),5.73(1H,s),6.97(1H,s),7.62(2H,d,J=8.5Hz),7.69(2H,d,J=8.5Hz),7.95(2H,d,J=9Hz),8.05(2H,d,J=9Hz)化合物A-4:I,R1=H,R2=甲基，X=CO,Y=CO,Z=O((5aS,6S,7S)-7-羟基-3,6-二甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氢-5aH-二苯并[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外观白色粉末2)分子量(EI-MS法)正离子方式m/z 362(M)+3)分子式C19H22O74)1H-NMR光谱270MHz，在CDCl3中，用TMS作内标δ:1.20(3H,s),1.97(3H,d,J=2Hz),2.20(3H,s),2.56(3H,s),3.50(3H,s),3.81(1H,d,J=2.5Hz),3.89(3H,s),4.22(1H,d,J=2.5Hz),4.91(1H,q,J=2Hz),6.60(1H,s)化合物A-5:I,R1=(-)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)-苯乙酰基，R2=甲基，X=CO,Y=CO,Z=O((S)-3,3,3-三氟-2-甲氧基-2-苯基-丙烯酸(5aS,6S,7S)-2,6-二甲氧基-1,4,6,9-四甲基-8,11-二氧-5a,6,7,8-四氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二噁-7-基酯))；1)外观白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正离子方式m/z 579 (M+H)+3)分子式C29H29F3O94)1H-NMR光谱400MHz，在CDCl3中，用TMS作内标δ:1.29(3H,s),1.97(3H,d,J=2Hz),2.13(3H,s),2.57(3H,s),3.09(3H,s),3.72(3H,d,J=1Hz),3.89(3H,s),4.98(1H,d,J=2Hz),5.60(1H,s),6.61(1H,s),7.42(3H,m),7.74(2H,m)化合物A-6:I,R1=(+)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯乙酰基，R2=甲基，X=CO,Y=CO,Z=O((R)-3,3,3-三氟-2-甲氧基-2-苯基-丙烯酸(5aS,6R,7S)-2,6-二甲氧基-1,4,6,9-四甲基-8,11-二氧-5a,6,7,8-四氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二噁-7-基酯))；1)外观白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正离子方式m/z 579 (M+H)+3)分子式C29H29F3O94)1H-NMR光谱400MHz，在CDCl3中，用TMS作内标δ:1.38(3H,s),1.96(3H,d,J=2Hz),2.20(3H,s),2.58(3H,s),3.33(3H,s),3.63(3H,d,J=1Hz),3.91(3H,s),5.07(1H,d,J=2Hz),5.66(1H,s),6.62(1H,s),7.44(3H,m),7.70(2H,m)化合物A-7:I,R1=CH2SCH3,R2=甲基，X=CO,Y=CO,Z=O((5aS,6R,7S)-3,6-二甲氧基-1,4,6,9-四甲基-7-甲基磺酰基甲氧基-6,7-二氢-5aH-二苯并[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外观白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正离子方式m/z 423(M+H)+3)分子式C21H26O7S4)1H-NMR光谱500MHz，在CDCl3中，用TMS作内标δ:1.40(3H,s),1.88(3H,d,J=1.5Hz),2.16(3H,s),2.18(3H,s),2.53(3H,s),3.43(3H,s),3.88(3H,s),4.29(1H,s),4.86(2H,d,J=12.5Hz),4.93(1H,q,J=1.5Hz),6.55(1H,s)化合物A-8:I,R1=H,R2=H,X=CHOH,Y=CO,Z=O(3,7,8-三羟基-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氢-5aH-二苯并[b,e][1,4]二噁-11-酮)；1)外观白色粉末2)分子量(EI-MS法)正离子方式m/z 350(M)+3)分子式C18H22O74)1H-NMR光谱500MHz，在DMSO-d6中，用TMS作内标δ:1.43(3H,s),1.63(3H,s),2.01(3H,s),2.21(3H,s),3.28(3H,s),3.56(1H,d,J=5,4.5Hz),4.07(1H,ddd,J=8,4.5,1Hz),4.59(1H,d,J=5Hz,D2O可互换的)，4.67(1H,d,J=1Hz),4.77(1H,d,J=8Hz D2O可互换的)，6.40(1H,s),9.82(1H,broad s,D2O可互换的)化合物A-9:I,R1=H,R2=H,X=CO,Y=CH2,Z=O((5aS,6R,7S)-3,7-二羟基-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氢-5aH,11H-二苯并[b,e][1,4]二噁-8-二酮)；1)外观白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正离子方式m/z 335 (M+H)+3)分子式C18H22O64)1H-NMR光谱500MHz，在DMSO-d6中，用TMS作内标δ:1.15(3H),s),1.66(3H,s),2.01(3H,s),2.12(3H,s),3.27(3H,s),4.26(1H,d,J=5Hz),5.18(1H,d,J=14Hz),5.22(1H,d,J=5Hz D2O可互换的)，5.23(1H,s),5.29(1H,d,J=14Hz),6.39(1H,s),9.33(1H,s,D2O可互换的)化合物A-10:I,R1=H,R2=H,X=CO,Y=CO,Z=NH；1)外观白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正离子方式m/z 348(M+H)+3)分子式C18H21NO64)1H-NMR光谱400MHz，在MeOH-d4中，用TMS作内标δ:1.25(3H,s),1.90(3H,d,J=1.2Hz),2.20(3H,s),2.44(3H,s),3.36(3H,s),4.35(1H,s),4.95(1H,broad s),6.56(1H,s)化合物B化合物A的对映体(3,7-二羟基-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氢-5aH-二苯并[b,e][1,4]噁-8,11-二酮)；1)外观白色晶体2)熔点198-199℃3)比旋光度[α]23D=-8°(c=0.52，在甲醇中)4)分子量(FAB-MS法)负离子方式m/z 347(M-H)-5)分子式C18H20O7
6)高分辨率质谱(M-H)测定值347.1140C18H19O7的计算值347.11317)UVλmaxnm(ε)在MeOH中 220(21,300),290(8,400)在MeOH+N/10HCl中 220(20,100),289(8,000)在MeOH+N/10NaOH中 249(17,100),335(12,800)8)IR 光谱在KBr压片中，主吸收波数如下3424,2932,1744,1657,1600,1247,11289)1H-NMR光谱400MHz，在DMSO-d6中，用TMS作内标δ:1.53(3H,s),1.66(3H,s),2.00(3H,s),2.32(3H,s),3.24(3H,s),4.27(1H,d,J=6Hz),5.13(1H,s),5.42(1H,d,J=6Hz,D2O可互换的),6.54(1H,s),10.38(1H,broad s,D2O可互换的)10)13C-NMR光谱125MHz，在DMSO-d6中，用TMS作内标δ:7.7,8.6,15.7,22.3,51.3,75.4,77.0,79.9,107.9,111.0,113.0,117.3,139.7,155.2,155.8,159.8,162.2,196.511)溶解性可溶于二甲基亚砜，乙酸乙酯，甲醇不溶于正己烷，水化合物B-1化合物A-1的差向异构体(3,7-二(甲基羰基氧基)-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氢-5aH-二苯并[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外观白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正离子方式m/z 433 (M+H)+3)分子式C22H24O94)1H-NMR光谱400MHz，在DMSO-d6中，用TMS作内标δ:1.51(3H,s),1.69(3H,s),1.98(3H,s),2.21(3H,s),2.33(3H,s),2.39(3H,s),3.28(3H,s),5.55(1H,s),5.56(1H,s),6.92(1H,s)化合物B-2化合物A-2的差向异构体(3-(4-溴苯甲酰基)-7-羟基-6-甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氢-5aH-二苯并[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外观白色粉末
2)分子量(FAB-MS法)正离子方式m/z 531(M+H)+3)分子式C25H23BrO84)1H-NMR光谱400MHz，在DMSO-d6中，用TMS作内标δ:1.55(3H,s),1.71(3H,s),2.04(3H,s),2.41(3H,s),3.26(3H,s),4.23(1H,d,J=6Hz),5.37(1H,s),5.46(1H,d,J=6Hz),7.07(1H,s),7.86(2H,d,J=8Hz),8.06(2H,d,J=8Hz)化合物B-3化合物A-3的差向异构体1)外观白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正离子方式m/z 713 (M+H)+3)分子式C32H26Br2O94)1H-NMR光谱500MHz，在CDl3中，用TMS作内标δ:1.63(3H,s),1.87(3H,s),2.13(3H,s),2.50(3H,s),3.47(3H,s),4.92(1H,s),5.95(1H,s),6.86(1H,s),7.63(2H,d,J=9Hz),7.69(2H,d,J=9Hz),7.98(2H,d,J=8Hz),8.06(2H,d,J=8Hz)化合物B-4化合物A-4的差向异构体((5aS,6S,7R)-7-羟基-3,6-二甲氧基-1,4,6,9-四甲基-6,7-二氢-5aH-二苯并[b,e][1,4]二噁-8,11-二酮)；1)外观白色粉末2)分子量(EI-MS法)正离子方式m/z 362 (M)+3)分子式C19H22O74)1H-NMR光谱400MHz，在CDCl3中，用TMS作内标δ:1.71(3H,s),1.84(3H,s),2.08(3H,s),2.51(3H,s),3.35(3H,s),3.53(1H,d,J=3.5Hz,D2O可互换的)，3.87(3H,s),4.43(1H,d,J=3.5Hz),4.76(1H,s),6.54(1H,s)化合物B-5化合物A-5的差向异构体((S)-3,3,3-三氟-2-甲氧基-2-苯基-丙烯酸(5aS,6R,7S)-2,6-二甲氧基-1,4,6,9-四甲基-8,11-二氧-5a,6,7,8-四氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二噁-7-基酯))；1)外观白色粉末
2)分子量(FAB-MS法)正离子方式m/z 579(M+)+3)分子式C29H29F3O94)1H-NMR光谱500MHz，在CDCl3中，用TMS作内标δ:1.61(3H,s),1.82(3H,s),2.11(3H,s),2.51(3H,s),3.30(3H,s),3.59(3H,s),3.88(3H,s),4.78(1H,s),5.81(1H,s),6.55(1H,s),7.45(3H,m),7.69(2H,m)化合物B-6化合物A-6的差向异构体((R)-3,3,3-三氟-2-甲氧基-2-苯基-丙烯酸(5aS,6R,7R)-2,6-二甲氧基-1,4,6,9-四甲基-8,11-二氧-5a,6,7,8-四氢-11H-二苯并[b,e][1,4]二噁-7-基酯))；1)外观白色粉末2)分子量(FAB-MS法)正离子方式m/z 579 (M+H)+3)分子式C29H29F3O94)1H-NMR光谱500MHz，在CDCl3中，用TMS作内标δ:1.37(3H,s),1.83(3H,s),2.10(3H,s),2.50(3H,s),3.18(3H,s),3.72(3H,s),3.88(3H,s),4.72(1H,s),5.80(1H,s),6.55(1H,s),7.45(3H,m),7.80(2H,m)按照本发明所提供的方法，化合物A(R1=H,R2=H,X=CO,Z=O)及其差向异构体化合物B(R1=H,R2=H,X=CO,Z=O)可以通过在有氧的条件下，在培养基中培养一种能生产化合物A和/或B的曲霉菌属微生物并从培养基中分离出化合物A和B而制得。
前述的方法中所使用的微生物可以是能生产这些化合物的、属于曲霉菌属的任何菌株(包括突变株和变种)。特别优选的菌株是日本曲霉菌NR7328、烟曲霉菌NR7329、NR7330、NR7331、NR7332和NR7334及其突变株和变种。日本曲霉菌NR7328、烟曲霉菌NR7329、NR7330、NR7331、NR7332和NR7334从玉米或土壤样品中分离出来，并经过鉴定分别属于日本曲霉菌和烟曲霉菌的菌株。
被命名为日本曲霉菌NR7328、烟曲霉菌NR7329、NR7330、NR7331、NR7332和NR7334的菌株已经遵照布达佩斯条约于1996年5月9日保藏在DMS Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und ZellkulturenGmbH,Germany，保藏号如下日本曲霉菌NR7328(DSM10677)，烟曲霉菌NR7329(DSM10678)，烟曲霉菌NR7330(DSM10679)，烟曲霉菌NR7331(DSM10680)，烟曲霉菌NR7332(DSM10681)和烟曲霉菌NR7334(DSM10682)。
日本曲霉菌NR7328和烟曲霉菌NR7329、NR7330、NR7331、NR7332和NR7334的培养基和形态特性如下菌株NR7328的培养基特性在蔡氏培养基-酵母抽提掖琼脂(CYA)上，菌落生长迅速并在25℃7天后布满佩特里细菌培养皿，在浓絮状菌丝质的中心显示了茂盛的分生孢子的生长。菌落的颜色为深棕色至棕黑色(Munsell,7.5YR2/2-7.5YR2/2)。菌丝体为白色的，背面为淡黄色(Munsell,2.5YR8/6)。不产生渗出液和可溶性染料。
25℃下，菌落在麦芽糖提取液琼脂(MEA)上比在CYA上生长慢，在25℃下7天后达到48-50mm的直径，形成一个平整的、浓密的、沉重的孢子菌落。菌落的颜色为暗黄棕色(Munsell,10YR3/2)。菌丝体是白色的但是不明显，背面为淡黄色(Munsell,5YR8/4)。没有观察到渗出液和可溶性染料。
在25℃下含有20％蔗糖的蔡氏培养基-酵母抽提液琼脂(CY20S)上，菌落生长得与在25℃的CYA上一样迅速，菌落的颜色也是棕黑色，菌丝体是白色絮状的，背面为黄白色。
菌落在37℃的CYA上生长适中，7天后达到17-18mm的直径，显示了凸凹不平的菌落，分生孢子的生长差。菌落的颜色为暗灰黄色(Munsell,5Y5/2)。背景为深黄棕色(Munsell,5Y5/2)。
在5℃的CYA上没有观察到发芽。菌株NR7328的形态特征分生孢子头先是呈辐射状，然后分裂成几个纵向的柱，柱槽(strigmata)是单列的、紧密排列的瓶梗，几乎布满小泡的整个表面。小泡为球形或几乎是球形的，直径为35-55(-75)μm，壁很厚，稍带棕色。条纹为宽的、光滑的壁7.5-20x250-700(-1000)μm。分生孢子为球形至近似球形，偶尔为椭球形，着色为黑色，直径3.5-5.0μm。分生孢子的表面带有相互间隔很宽的刺。
菌株NR7328以某种黑色色调着色为黑色的、浓密的、分生孢子生长茂盛的菌落。小泡为球形或几乎是球形的。柱槽是单列的。分生孢子为球形至椭园形，带刺，黑色。在这些明显的特征的基础上，本发明的菌株NR7328被鉴定为一种日本曲霉菌菌株，命名为日本曲霉菌NR7328(DSM10677)。菌株NR7329,NR7330,NR7331,NR7332和NR7334的培养基特征在CYA上，这些菌株的菌落生长迅速，在25℃下7天后达到53-61mm的直径，除NR7334慢于其它菌株、达到44-45mm外。所有的菌落表现为平整的轮式质地，其中分生孢子生长茂盛。菌落的颜色为暗兰绿色(Munsell,7.5BG4/4)或深兰绿色至柔和兰绿色(Munsell,5BG4/2-7/4)。菌丝体只有在边缘才是白色的，有时还不明显。NR7329的对比色为菌落黄(Munsell,5Y7/6)，而其它菌株的对比色为拿蒲黄(Munsell,2.5Y8/6)至柔和黄绿色(Munsell,2.5GY7/2)。不产生渗出液和可溶性染料。
在MEA上，菌落生长迅速，在25℃下7天后达到523-63mm的直径，为平整浓密的偶尔为毡状的菌落，与在25℃下的CYA上的菌落相比，质地疏松。菌落的颜色为暗绿色至灰绿色(Munsell,5G5/4-7/2)。菌丝体不明显。对比色为无色或暗黄绿色(Munsell,7.5GY6/4)。没有观察到渗出液和可溶性染料。
在25℃下的CY20S上，这些菌落生长迅速，在7天后达到50-56mm的直径，表现为浓密的轮式或毡状的菌落。菌落的颜色和质地与在25℃下的CYA上的相同。菌丝体只有在边缘才是白色的或淡黄绿色(Munsell,10Y9/4)的。菌落的对比色为奶黄色至中等黄绿色(Munsell,10Y7/6)。只有菌株FE6425才微弱地产生红棕色的可溶性染料。
在37℃下的CYA上，菌落生长迅速并布满佩特里细菌培养皿，表现为平整的粉状的菌落。菌落的颜色为灰黄色至串红绿(Munsell,7.5GY6/2-5GY6/2)。分生孢子生长过多，菌丝体不明显或只有在边缘才可看到。菌落的背景为沟状的，为米色至淡红黄色(Munsell,2.5Y6/6-7/6)。某些菌落产生澄清的渗出液。
在5℃下的CYA上，所有的菌落都没有观察到发芽。菌株NR7329,NR7330,NR7331,NR7332和NR7334的形态特征分生孢子头为柱状的，柱槽是单列的、紧密排列的瓶梗，相互平行并与条纹轴平行。瓶梗覆盖了小泡的一半至2/3部分。小泡为抹刀形或漏斗形，厚壁，宽度为13-30μm。条纹为无色的、边缘光滑的、渐渐扩大进入小泡，最高达到400μm长，偶尔达到500μm长。分生孢子为球形或近似球形至椭球形，直径为2.5-4.0μm。表面为从光滑的到粗糙的各种形状，有时是带刺的。
菌落在25℃和37℃下都生长迅速，颜色为某种暗绿色，分生孢子生长浓密茂盛。分生孢子头为柱状的。小泡为抹刀形，在其一半至2/3部分上覆盖着茂盛的、紧密排列的而且相互平行并与条纹轴平行的瓶梗。柱槽是单列的。分生孢子很小，为球形至椭球形。在这些明显的特征的基础上，本发明的菌株NR7329,NR7330,NR7331,NR7332和NR7334被鉴定为一种烟曲霉菌菌株，命名为烟曲霉菌NR7329(DSM10678),NR7330(DSM10679),NR7331(DSM10680),NR7332(DSM10681)和NR7334(DSM10682)。
本发明的化合物A和B可以通过在有氧的条件下，在培养基中培养能生产化合物A和/或B的曲霉菌属微生物并从培养基中分离出化合物A和B而制得。
本发明的培养可以在含有培养微生物时使用的常规营养物的培养基中进行。可以提出的碳源的例子是葡萄糖、蔗糖、淀粉、甘油、糖浆、糊精及其混合物。氮源例如大豆粉、棉籽粉、肉浆、胨、干酵母、酵母提取液、玉米浸取液、硫酸铵、硝酸钠及其混合物。此外，还可以向培养基中加入其它的有机或无机物质以促进微生物的生长和提高真菌静止素的生产率。这种物质的例子为无机盐，例如碳酸钙、氯化钠、磷酸盐等。
培养在有氧的条件下、在水溶性培养基中、优选通过浸没式发酵进行。培养适于在20-37℃的温度下进行，最佳温度为27℃。培养优选在3-9的pH值下进行。培养时间依培养条件而定。总之，20-200小时足以进行培养。
为了从培养基中分离出化合物A和B，可以使用常规用于从微生物的培养基中分离代谢物的任何分离方法。例如，菌丝体可以通过离心或过滤从发酵液中分离出来，目标化合物可以用一种不与水相混的有机溶剂(例如烷醇如正丁醇，及其酯如乙酸乙酯、乙酸丁酯等)从滤液中萃取出来。另一方面，分离出的菌丝体中所包含的目标化合物可以通过例如用一种溶剂(如丙酮水溶液或甲醇水溶液)萃取菌丝体，除去溶剂，再用一种不与水相混的有机溶剂萃取残留物而制得。这样得到的有机层通过一种干燥剂(例如硫酸钠等)干燥，然后减压浓缩。所得的化合物A和B粗产物可以用分配法、柱色谱法(使用硅胶、氧化铝、十八烷基-硅胶、Sephadex LH-20等作吸附剂)和高压液相色谱(使用硅胶、十八烷基-硅胶和苯基硅胶等作吸附剂)纯化。
可以以游离形式分离出化合物A和B，但是如果需要的话，用常规方法把它们可以转变为生理上可使用的盐(钠盐、铵盐等)。
按照下面描述的方法A-F，可以把化合物A和B转变为化合物A-1至A-10和B-1至B-6。方法A其中R1为低级烷基，R2为氢，X和Y为CO，而Z为O；或R1为氢，R2为低级烷基，X和Y为CO，而Z为O；或R1和R2都为低级烷基，X和Y为CO，而Z为O的式(Ⅰ)的化合物可以通过在一种碱(例如碳酸钾或氧化银)的存在下在一种惰性溶剂(例如丙酮或N,N-二甲基甲酰胺)中，用烷基卤化物或烷基硫酸盐使化合物A或B发生烷基化而制得。反应温度可以在大约-50℃-150℃的很宽的温度范围、优选在大约0℃-100℃的温度范围内变化。甲基化也可以通过在一种溶剂(例如氯仿或甲醇)中，用重氮甲烷处理化合物A或B来进行。反应温度可以在大约-0℃-80℃的很宽的温度范围、优选在大约10℃-30℃的温度范围内变化。方法B其中R1为酰基，R2为氢，X和Y为CO，而Z为O；或R1为氢，R2为酰基，X和Y为CO，而Z为O；或R1和R2都为酰基，X和Y为CO，而Z为O的式(Ⅰ)的化合物可以通过在一种偶联剂(例如碳酰二亚酰胺)的存在下在一种惰性溶剂(例如乙腈或二噁烷)中，用一种羧酸使化合物A或B发生酰化而制得。反应温度可以在大约-50℃-100℃的很宽的温度范围、优选在大约-20℃-50℃的温度范围内变化。也可以用所说的羧酸的一种活性衍生物(例如一种酸氯化物或与另一种羧酸(如苯磺酸)的混合酸酐)来完成酰基化反应。酰基化可选择性地在一种碱(例如碳酸氢钠、吡啶、三乙胺或N,N-二甲基氨基吡啶的存在下，在一种惰性溶剂(例如二氯甲烷、氯仿、乙腈或N，N-二甲基甲酰胺)中进行。方法C其中R1为低级烷基，R2为酰基，X和Y为CO，而Z为O；或R1为酰基，R2为低级烷基，X和Y为CO，而Z为O的式(Ⅰ)的化合物可以通过在一种偶联剂(例如碳酰二亚酰胺)的存在下在一种惰性溶剂(例如乙腈或二噁烷)中，用一种羧酸使其中R1为低级烷基，R2为氢，X和Y为CO，而Z为O；或R1为氢，R2为低级烷基，X和Y为CO，而Z为O的式(Ⅰ)的化合物发生酰化而制得。反应温度可以在大约-50℃-100℃的很宽的温度范围、优选在大约-20℃-50℃的温度范围内变化。也可以用所说的羧酸的一种活性衍生物(例如一种酸氯化物或与另一种羧酸(如苯磺酸)的混合酸酐)来完成酰基化反应。酰基化可选择性地在一种碱(例如碳酸氢钠、吡啶、三乙胺或N,N-二甲基氨基吡啶的存在下，在一种惰性溶剂(例如二氯甲烷、氯仿、乙腈或N,N-二甲基甲酰胺)中进行。或者可以通过在一种碱(例如碳酸钾或氧化银)的存在下在一种惰性溶剂(例如丙酮或N,N-二甲基甲酰胺)中，用烷基卤化物或烷基硫酸盐使其中R1为酰基，R2为氢，X和Y为CO，而Z为O；或R1为氢，R2为酰基，X和Y为CO，而Z为O的式(Ⅰ)的化合物(按照上述的方法B制得的)发生烷基化而制得。反应温度可以在大约-50℃-100℃的很宽的温度范围、优选在大约-20℃-50℃的温度范围内变化。甲基化也可以通过在一种溶剂(例如氯仿或甲醇)中，用重氮甲烷处理化合物A或B来进行。反应温度可以在大约-0℃-80℃的很宽的温度范围、优选在大约10℃-30℃的温度范围内变化。方法D其中X为CHOH,R1和R2各为氢、低级烷基或酰基，Y为CO，而Z为O的式(Ⅰ)的化合物可以通过在一种合适的有机溶剂(例如乙醇或乙酸)中，加压或不加压下，用一种催化剂(如钯/炭或铂)氢化还原；或者通过在一种合适的有机溶剂(例如乙醇)中，用硼氢化钠处理化合物A或B或按照上述的方法A,B或C中所说的方法制备的化合物来生产。反应温度可以在大约-80℃-50℃的很宽的温度范围、优选在大约0℃-30℃的温度范围内变化。方法E其中Y为CH2,R1和R2各为氢、低级烷基或酰基，X为CO或CHOH，而Z为O的式(Ⅰ)的化合物可以通过在一种合适的有机溶剂(例如乙醇)中，用硼氢化钠还原处理化合物A或B或按照上述的方法A,B,C或D中所说的方法制备的化合物来生产。反应温度可以在大约-80℃-50℃的很宽的温度范围、优选在大约0℃-30℃的温度范围内变化。方法F其中Z为NH,R1和R2各为氢、低级烷基或酰基，X为CO或CHOH,Y为CO或CH2的式(Ⅰ)的化合物可以通过在一种合适的有机溶剂(例如N,N-二甲基聚酰胺)中，在大约-40℃-80℃、优选在大约0℃-30℃的温度下用氨处理化合物A或B或按照上述的方法A,B,C,D或E中所说的方法制备的化合物，然后在一种合适的溶剂(例如甲苯和苯)中，在弱酸(例如对甲苯磺酸吡啶鎓盐)的存在下，在大约40-200℃、优选大约80-150℃的温度下加热来生产。式Ⅰ的化合物对几种变形的细胞线的抗增生活性结肠-直肠瘤细胞线(HT-29和SW480)、肺癌细胞线(H460a)、骨瘤细胞线(Saos-2)和胰腺细胞线(ASPC-1)从ATCC(Americantype Cell Culture Collection)购得并在ATCC推荐的培养基中培养生长。也试验了化合物抗乳腺癌细胞线(T-47D和MCF-7)、结肠-直肠瘤细胞线(COLO-320DM和HCT116)和肺癌细胞线(H1299)的增生的活性。为了分析各种化合物对这些细胞的生长的影响，以能在试验的最后得到最少四对结果的浓度，把细胞放置在测定板上。把待分析的化合物溶解于100％的DMSO中，得到10mM的原种溶液。用水把每种化合物稀释到1mM，并加到含有培养基的96-孔标准板的第一排的三个孔中，达到40μM的最终浓度。化合物依次用“标准板”中的培养基稀释，然后把稀释的化合物转移到含有细胞的试验板上，每个孔中DMSO的最终浓度为0.1％DMSO。在加入化合物后的不同时间分析MTT。把MTT(溴化-3-(4-5甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑鎓，噻唑基兰)加入每个孔中，达到1mg/ml的最终浓度。然后在37℃下温育该板2.5-3小时。然后除去含培养基的MTT，向每个孔中加入50μl100％的乙醇以溶解偕苯肼基代甲基。然后用自动读数计(生物技术微板测量计)读取吸收值。对于Saos-2细胞，把细胞置于板的6个孔中，排板24小时后，以不同浓度加入化合物，然后在加药后的不同天数时数细胞的个数，结果列于表1中。
表1IC50(μM)化合物A 化合物B细胞线乳腺T-47D 5.8MCF-7 1.5结肠-直肠HT29 5.8 4.8COLO-320DM 2.6SW480 3～10HCT116 1.3肺H1299 3～4H460A 2.3 2.2骨癌SAOS-2 0.3～1胰腺ASPC-1 6.2如上表1中所示，化合物A和B对变形的细胞线的增生具有抑制活性。因此，本发明所提供的式Ⅰ的化合物可用作乳腺癌、结肠-直肠癌、肺癌、骨癌等的抗癌药物，以适当方式向哺乳动物(包括人类和非人类)给药。
没有观察到本发明所提供的式Ⅰ的化合物的急性毒性。
本发明的产品可用作药物，例如以药物制剂的形式用于肠道(口服)给药。本发明的产品例如可以经口服给药(如以片剂、包衣的片剂、糖锭剂、硬胶囊或软胶囊、溶液、乳液或悬浮液形式给药)或经直肠给药(例如以栓剂给药)。
用于治疗时，式Ⅰ的化合物及其生理上可使用的盐可以制成各种药物组合物。可以用本领域中熟悉的常规方法来制备含有这些化合物的药物组合物，例如将这些组分与合适的、无毒的、惰性的适用于治疗的固体或液体载体材料以及(如果需要的话)常用的药用佐剂混合来制成一种药剂。
考虑到这些化合物最终要具体化为适于口服或非肠道给药的制剂形式，本发明的这些化合物可以含有在药物制剂的生产中经常使用的、作为选择性成分的各种佐剂。因此，例如在把本发明的组合物配制成所要的口服制剂时，可以使用选择性的成分、填料，例如共沉淀的氢氧化铝-碳酸钙、磷酸二钙或乳糖；崩解剂如玉米淀粉；和润滑剂如滑石、硬脂酸钙等。然而，应当充分理解，这里所说的选择性成分仅仅给出例子，本发明并不限于使用这些，在完成本发明时可以使用本领域所熟知的其它这样的佐剂。
合适的这种载体材料不仅是无机的，而且还可以是有机的载体材料。因此，对于片剂、包衣的片剂、糖锭剂和硬胶囊，可以使用例如乳糖、玉米淀粉或其衍生物、滑石、硬脂酸或其盐。用于软胶囊的合适的载体例如为植物油、蜡、脂肪和半固体多元醇和液体多元醇(依活性物质的性质而定，然而对于软胶囊不需要载体)。用于配制溶液和糖浆的合适的载体材料例如为水、多元醇、糖、转化糖和葡萄糖。用于栓剂的合适的载体材料例如为天然的或硬化的油、蜡、脂肪和半固体多元醇或液体多元醇。
作为药物佐剂可考虑常用的防腐剂、增溶剂、稳定剂、加湿剂、乳化剂、甜味剂、着色剂、香味剂、用于改变渗透压的盐、缓冲液、包衣剂和抗氧化剂。
式Ⅰ的化合物及其盐可优选用于非肠道给药，用于这种目的时优选制成如冷冻干燥物或干燥的粉末的制剂以便于用常规的试剂(例如水或常用的等渗的盐水)稀释。
例如，化合物A可以方便地用生理盐水通过静脉、皮下或肌肉内注射给药，通常剂量为1-50mg/kg/天、优选1-20mg/kg/天；或者以胶囊或糖包衣的片剂给药，通常剂量为1-100mg/kg/天、优选5-50mg/kg/天。
下面的实施例更详细地描述了本发明，但其目的不在于限定本发明。除非特别指明，％是指重量/体积％。
实施例1烧瓶培养把一部分烟曲霉菌NR7329(DSM10678)的原种培养物(0.1ml)接种到一个含有100ml由0.05％Mg3(PO4)2·8H2O、0.8％KCl、5.0％蔗糖、1.0％玉米浸取液、2.0％烤大豆(Nisshin Seiyu Co.Ltd.,Japan)和0.03％Nissan消泡剂CA-123(Nippon Yushi Co.Ltd.,Japan)组成的培养基的500ml锥形瓶中。把培养基的pH调节到6.5。菌种培养物于27℃下在2270rpm的旋转摇床上温育3天，然后以每份2ml的量把菌种培养物转移到100只各含有100ml上述同样的培养基的500ml烧瓶中。在与菌种培养物同样的条件下，在旋转摇床上进行发酵。大约96小时后，化合物的产量达到最大值。然后把所有的培养液按照下述的方法分离。罐发酵把一部分烟曲霉菌NR7329(DSM10678)的商品培养物(0.1ml)接种到一个含有100ml上述同样的培养基的500ml锥形瓶中。第一个菌种培养物于27℃下在220rpm的旋转摇床上温育。然后以每份2ml的量把菌种培养物转移到24只各含有100ml上述同样的培养基的500ml烧瓶中，在同样的条件下发酵3天。把所得的培养物各600ml接种到四个每个含有30L同样的培养基及500ml Nissan消泡剂CA-123的50L发酵罐中。罐发酵在27℃下以400rpm的转速搅拌和30L/分钟的空气流速进行。大约经过91小时的发酵后，化合物的产量达到最大值。然后把所有的培养液按照下述的方法分离。分离方法-Ⅰ通过离心把上述烧瓶发酵中得到的培养液(10L)分成上清液和菌丝体饼。上清液(6.4L)用乙酸乙酯(6.4L)萃取，在减压下把有机层浓缩至干。把浓缩物(6.9g)溶解于甲醇(1L)中，与正己烷(2L)进行分配，然后除去正己烷层，再在减压下把甲醇层浓缩至干(粗提取物Ⅰ:5.2g)。在另一边，用甲醇(4.5L)萃取菌丝体饼，过滤混合物，得到一个甲醇提取液，在减压下浓缩这样得到的甲醇提取液，浓缩液(1.5L)用正己烷(1.5L)洗涤。在减压下把下层浓缩至干。残留物溶于水(1.5L)中，得到的悬浮液用乙酸乙酯(1.5L)萃取，然后在减压下把乙酸乙酯层浓缩至干(粗提取物Ⅱ:4.0g)。合并粗提取物Ⅰ和Ⅱ，在YMC-GEL ODS-A60-60/30(50g,YMC Co.LTD.,Japan)色谱柱上纯化，色谱柱用水和甲醇的混合物洗脱。合并含有活性化合物的洗脱物，并在减压下把浓缩至干。残留物(7.1g)然后在SephadexLH-20(4L,Pharmacia,Sweden)色谱柱上纯化，用甲醇作洗脱剂。合并含有活性化合物的洗脱物，得到两个馏分(馏分1:1.98g，馏分2:63mg)。馏分1通过制备性的HPLC(CAPCELLPAK C18 UG-120A；Shiseido,Japan)纯化，用30％乙腈水溶液作洗脱剂。在减压下分别把含有化合物A和B的馏分浓缩至干。含有化合物A的残留物(275mg)再通过制备性的HPLC(YMC-Pack PhA-414；YMC Co.LTD.,Japan)纯化，用30％乙腈水溶液作洗脱剂。在减压下把含有化合物A的馏分浓缩至干，然后用甲醇结晶，得到化合物A的白色结晶(132mg)。用同样的方式处理含有化合物B的残留物(115mg)，得到化合物B的白色结晶(74mg)。分离方法-Ⅱ通过离心把上述罐发酵中得到的培养液(120L)分成上清液和菌丝体饼。上清液(100L)用乙酸乙酯(72L)萃取，在减压下把有机层浓缩至干。把浓缩物(160g)溶解于甲醇(3L)中，与正己烷(5L)进行分配，然后除去正己烷层，再在减压下把甲醇层浓缩至干(粗提取物Ⅰ:70g)。在另一边，用甲醇(36L)萃取菌丝体饼，过滤混合物，得到一个甲醇提取液，在减压下浓缩这样得到的甲醇提取液，浓缩液(3L)用正己烷(3L)洗涤。在减压下把下层浓缩至干。残留物溶于水(2L)中，得到的悬浮液用乙酸乙酯(2L)萃取，然后在减压下把乙酸乙酯层浓缩至干(粗提取物Ⅱ:230g)。合并粗提取物Ⅰ和Ⅱ，在硅胶(300g,Wakogel；Wako Pure ChemicalIndustries,Ltd.,Japan)色谱柱上纯化，色谱柱用二氯甲烷和甲醇的混合物洗脱。在减压下把含有活性化合物的洗脱物，浓缩至干。残留物(77g)然后在Sephadex LH-20(44L)色谱柱上纯化，用甲醇作洗脱剂。合并含有活性化合物的洗脱物，得到3个馏(馏分1,2,3)。含有化合物A和B的馏分1通过珞巴(树脂)柱(LiChroprep Si60 size C；Merck,Germany)纯化，用二氯甲烷和甲醇作洗脱剂。在减压下把含有化合物A的馏分浓缩至干，然后用甲醇结晶，得到化合物A的白色结晶(2.39g)。用同样的方式处理含有化合物B的馏分，得到化合物B的白色结晶(0.72g)。
实施例2用与实施例1中同样的方式培养烟曲霉菌NR7334(DSM10682)和日本曲霉菌NR7328(DSM10677)。
化合物A和B各自的产率如表2所示。
表2菌株序号化合物A化合物BNR7328 1mg/L -NR7334 45mg/L 20mg/L
实施例3烧瓶培养把一部分烟曲霉菌NR7330(DSM10679)的原种培养物(0.1ml)接种到一个含有100ml由2％葡萄糖、1％土豆淀粉、1.5％甘油、1％烤大豆、0.25％多肽胨、0.35％酵母提取液、0.3％NaCl、0.5％CaCO3、0.005％ZnSO4·7H2O、0.0005％CuSO4·5H2O、0.0005％MnSO4·4H2O和0.03％Nissan消泡剂CA-123组成的培养基的500ml烧瓶中。培养基的pH不进行调节。菌种和培养物的生产方法和条件与实施例的烧瓶培养相同。经过大约96小时的发酵后，分离所有的培养液。按照与上述同样的方式培养烟曲霉菌NR7331(DSM 10680)和烟曲霉菌NR7332(DSM10681)。化合物A和B各自的产率如表2所示。
表3菌株序号化合物A化合物BNR7330 14mg/L 11mg/LNR7331 2mg/L 4mg/LNR7332 4mg/L 7mg/L实施例4化合物A-1和B-1的制备在室温下搅拌21mg化合物A在1.4ml吡啶/乙酸酐(1∶1,v/v)中的溶液1小时，混合物在减压下干燥，得到26mg化合物A-1的白色粉末。
在室温下搅拌21mg化合物B在1.4ml吡啶/乙酸酐(1∶1,v/v)中的溶液1小时，混合物在减压下干燥，得到26mg化合物B-1的白色粉末。
实施例5化合物A-1和B-1的制备在室温下，向4mg化合物A在3ml甲醇中的溶液中加入过量的重氮甲烷的乙醚溶液，放置8小时，在真空下蒸馏溶液，残留物通过制备性的TCL(Kieselgel 60 F254,Art.5715；Merck,Germany)纯化，得到4mg化合物A-4的白色粉末。
按照同样的方式处理6mg化合物B在3ml甲醇中的溶液，得到5mg化合物B-4的白色粉末。
实施例6化合物A-7的制备在室温下，向5mg化合物A-4在0.2ml二甲基亚砜中的溶液中加入0.2ml的乙酸酐，混合物搅拌17小时，减压蒸馏，残留物通过制备性的HPLC纯化，得到0.5mg化合物A-7的白色粉末。
实施例7化合物A-8的制备向50mg化合物A在10ml乙醇中的溶液中加入15mg钯/活性炭，混合物在室温下在氢气气氛下搅拌15小时，除去催化剂后，减压蒸馏溶液。残留物通过HPLC(CAPCELL Pak C18 SG120A)纯化，用磷酸缓冲液和乙腈的混合物作洗脱剂，得到5mg化合物A-8的白色粉末。
实施例8化合物A-9的制备在0℃和氩气气氛下，向20mg化合物A在4ml甲醇中的溶液中加入2.6mg硼氢化钠。搅拌4小时后，减压蒸馏溶液，把4ml乙酸乙酯和4ml蒸馏水加入残留物中。摇动溶液，减压蒸馏有机层，残留物通过HPLC(CAPCELL PakC18 SG120A)纯化，用磷酸缓冲液和乙腈的混合物作洗脱剂，得到15mg化合物A-8和2mg化合物A-9的白色粉末。
实施例9化合物A-5,A-6,B-5和B-6的制备向3mg化合物A-4在0.2ml吡啶中的溶液中加入4.5mg的(-)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酰氯，混合物搅拌5小时。减压下除去吡啶后，残留物通过制备性的TCL(Kieselgel 60F254,Art.5715)纯化，得到3mg化合物A-5的白色粉末。
向3mg化合物A-4在0.2ml吡啶中的溶液中加入4.5mg的(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酰氯，混合物搅拌5小时。减压下除去吡啶后，残留物通过制备性的TCL(Kieselgel 60 F254,Art.5715)纯化，得到3mg化合物A-6的白色粉末。
向2mg化合物B-4在0.2ml吡啶中的溶液中加入4.5mg的(-)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酰氯，混合物搅拌5小时。减压下除去吡啶后，残留物通过制备性的TCL(Kieselgel 60 F254,Art.5715)纯化，得到2mg化合物B-5的白色粉末。
向2mg化合物B-4在0.2ml吡啶中的溶液中加入4.5mg的(+)-α-甲氧基-α-三氟甲基苯乙酰氯，混合物搅拌5小时。减压下除去吡啶后，残留物通过制备性的TCL(Kieselgel 60 F254,Art.5715)纯化，得到2mg化合物B-6的白色粉末。
实施例10化合物A-3和B-3的制备向5mg化合物A在0.8ml吡啶中的溶液中加入4mg的对溴苯甲酰氯，混合物搅拌1小时。减压下除去吡啶后，残留物通过制备性的TCL(Kieselgel 60F254,Art.5715)纯化，得到2mg化合物A-2和0.5mg化合物A-3的白色粉末。
按照同样的方式处理5mg化合物B在0.8ml吡啶中的溶液，得到1mg化合物B-2和2mg化合物B-3的白色粉末。
实施例11化合物A-2和B-2的制备向200mg化合物A在20ml乙腈中的溶液中加入164mg的对溴苯甲酰氯和120mg的碳酸钾，混合物在室温下搅拌30分钟。反应混合物用乙酸乙酯稀释，用蒸馏水洗涤。有机层通过无水硫酸镁干燥，在减压下蒸馏。残留物通过硅胶色谱(Wakogel C-200)纯化，用乙酸乙酯和正己烷的混合物作洗脱剂，得到100mg化合物A-2的白色粉末。
按照同样的方式处理200mg化合物B在20ml乙腈中的溶液，得到200mg化合物B-2的白色粉末。
实施例12化合物A10的制备在氩气气氛下，向72.9mg化合物A在0.25ml无水DMF中的溶液中加入0.5ml新鲜制备的NH3的DMF溶液。30分钟后，减压下除去挥发物。向固体残留物中加入22ml甲苯和10mg对甲苯磺酸吡啶鎓盐。混合物总计回流125分钟，然后冷却，减压下除去挥发物。产物通过硅胶色谱纯化，用己烷-乙酸乙酯(1∶1)作洗脱剂，得到45.9mg化合物A-10的白色粉末。
下列实施例说明包含本发明所提供的化合物A的抗肿瘤药物实施例包含下列成分的片剂是按照常规方法生产的化合物A 100mg淀粉 26mg羧甲基纤维素钙 15mg结晶纤维素 20mg硬脂酸钙 4mg165mg
权利要求
1．一种式(Ⅰ)的化合物及其差向异构体和对映体或其生理上可使用的盐，
其中R1和R2独立地为氢、未取代的低级烷基、被低级烷氧基或低级烷硫基取代的低级烷基、或者未取代或被一个或多个低级烷基、卤素取代的低级烷基或低级烷氧基取代的酰基；X为CO或CHOH；Y为CO或CH2；而z为O或NH。
2．权利要求1的化合物，其中X为CO。
3．权利要求2的化合物，其中Y为CO。
4．权利要求3的化合物，其中R1和R2都为氢。
5．权利要求4的化合物，其中Z为O，该化合物的比旋光度为[α]23D=+272°(C=0.56，在甲醇中)。
6．权利要求4的化合物，其中z为O，该化合物的比旋光度为[α]23D=8°(c=0.52，在甲醇中)。
7．权利要求2的化合物，其中R1为酰基。
8．权利要求7的化合物，其中R1为乙酰基。
9．权利要求8的化合物，其中R2为酰基。
10．权利要求9的化合物，其中R1为乙酰基。
11．权利要求10的化合物及其差向异构体，其中z为O。
12.权利要求7的化合物，其中R1为对溴苯甲酰基。
13．权利要求12的化合物，其中R2为氢。
14．权利要求13的化合物及其差向异构体，其中z为O。
15．权利要求7的化合物，其中R1为(-)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯乙酰基。
16．权利要求15的化合物，其中R2为低级烷基。
17．权利要求16的化合物，其中R2为甲基。
18．权利要求17的化合物及其差向异构体，其中Z为O。
19．权利要求7的化合物，其中R1为(+)-α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯乙酰基。
20．权利要求19的化合物，其中R2为低级烷基。
21．权利要求20的化合物，其中R2为甲基。
22．权利要求21的化合物及其差向异构体，其中Z为O。
23．权利要求2的化合物，其中R1为取代的低级烷基。
24．权利要求23的化合物，其中R1为甲硫基甲基。
25．权利要求24的化合物，其中R2为低级烷基。
26．权利要求25的化合物，其中R2为甲基。
27．权利要求2的化合物，其中R1为氢。
28．权利要求27的化合物，其中R2为酰基。
29．权利要求28的化合物，其中R1为对溴苯甲酰基。
30．权利要求29的化合物及其差向异构体，其中Z为O。
31．权利要求27的化合物，其中R2为低级烷基。
32．权利要求31的化合物，其中R2为甲基。
33．权利要求32的化合物及其差向异构体，其中Z为O。
34．权利要求4的化合物，其中Z为NH。
35．一种药物组合物，含有治疗有效量的下式Ⅰ的一种化合物，
其中R1和R2独立地为氢、未取代的低级烷基、或被低级烷氧基或低级烷硫基取代的低级烷基、或者未取代或被一个或多个低级烷基、卤素取代的低级烷基或低级烷氧基取代的酰基；X为CO或CHOH；Y为CO或CH2；而Z为O或NH，及其差向异构体和对映体，或其生理上可使用的盐，和一种药学上可接受的载体。
36．一种治疗在需要治疗的宿主中的肿瘤的方法，包括给该宿主施用治疗有效量的下式Ⅰ的化合物，
其中R1和R2独立地为氢、未取代的低级烷基、或被低级烷氧基或低级烷硫基取代的低级烷基、或者未取代或被一个或多个低级烷基、卤素取代的低级烷基或低级烷氧基取代的酰基；X为CO或CHOH；Y为CO或CH2；而Z为O或NH，及其差向异构体和对映体，或其生理上可使用的盐，和一种药学上可接受的载体。
37．一种生物学纯的日本曲霉菌NR7328(DSM 10677)培养物。
38．一种生物学纯的烟曲霉菌NR7329(DSM 10678)培养物。
39．一种生物学纯的烟曲霉菌NR7330(DSM 10679)培养物。
40．一种生物学纯的烟曲霉菌NR7331(DSM 10680)培养物。
41．一种生物学纯的烟曲霉菌NR7332(DSM 10681)培养物。
42．一种生物学纯的烟曲霉菌NR7334(DSM 10682)培养物。
全文摘要
可用作抗肿瘤药剂的式(Ⅰ)的化合物及其差向异构体和对映体或其生理上可使用的盐,其中R
文档编号A61K31/335GK1221409SQ97195242
公开日1999年6月30日 申请日期1997年5月30日 优先权日1996年6月7日
发明者厄瓦什·H·德欣格拉, 白井治义, 竹花幸, 彼得·M·伍库里赫, 矢吹波 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司