绿卟啉在制备无须有意光照卟啉衍生物而治疗动脉硬化药物上的应用的制作方法

专利名称：绿卟啉在制备无须有意光照卟啉衍生物而治疗动脉硬化药物上的应用的制作方法
发明的领域本发明涉及动脉粥样硬化血管中脂肪沉积的治疗。本发明特别涉及服用绿卟啉化合物(Gp)预防或抑制动脉斑块。但不象标准的光动力学治疗方案，无须有意地光照即可达到所需的抑制作用。
相关技术的描述动脉粥样硬化是脂肪物质(脂类)积聚在内膜或较靠内的血管中层(包围动脉腔的最内层膜)的一种动脉疾病。所造成的损害被称作动脉粥样硬化斑块。因动脉粥样硬化斑块逐渐减少通过所累及动脉的血流，从而损害远处组织或器官功能，最终出现临床症状。动脉粥样硬化及其并发症(如心肌梗塞形成、发作和周围血管疾病)在西方世界始终是发病率和死亡率的主要成因。据报告，美国每年仅冠心病总计死亡超过50万。
动脉粥样硬化的基本损害是动脉粥样化或纤维脂肪斑块，这种斑块引起动脉狭窄、血栓形成、钙化，导致肌肉无力，引起动脉瘤扩张。动脉粥样硬化斑块大致是圆形、凸出的损害，表面颜色通常是灰白色至白色，直径大约1cm。大斑块的中心可渗出黄色、粘性液体。典型的蜂窝状斑块如图3所示，其组成为1．纤维帽，主要由平滑肌细胞和一些白细胞和相对致密的结缔组织组成，后者包括弹性硬蛋白、胶原纤维、蛋白多糖和基底膜；2．在帽下挨着帽的细胞区，由巨噬细胞、平滑肌细胞和淋巴细胞T混合细胞组成；3．较深部的“坏死芯”，包括细胞碎屑、细胞外脂质小滴和胆固醇结晶。
Munro et al.,″Biology of Disease；The Pathogenesis of AtherosclerosisAtherogenesis and Inflammation″,Laboratory Investigation58:3,249-50(1988)。
如果不加阻止的话，斑块的形成可导致动脉的完全阻塞和严重的临床后果。例如，并发这种情况时，损害变成包括各种程度坏死、血栓形成和溃疡的钙化纤维斑块。随着坏死的增加和细胞碎屑的积聚，动脉壁进行性弱化，可出现内膜破裂，引起动脉瘤和出血。当斑块碎片掉入腔内时可形成动脉栓。当斑块增厚及血栓形成时逐渐阻塞动脉，引起狭窄和器官功能受损。
动脉粥样硬化的治疗一般集中于保护患者不发生动脉硬化并发症，典型地按照以下四个基本方法之一(1)可用修复术的或天然的移植物替代患病的血管段直至全心移植；(2)可给药(如抗心律失常药、抗凝药和降血脂药)使患者带病生活；(3)在血管成形术中可用气囊导管物理性降低斑块的大小；或(4)可使用光动力学治疗，将给予光敏剂结合相继的光照来产生感光剂，从而产生细胞毒效应(Spears的美国专利No.4,512,762(1985年4月23日授权)和美国专利No.4,566,636(1986年3月25日授权)。
在光动力学治疗中，所用的感光剂能定位于恶性细胞，无论是由于天然倾向或被有意地靶向特殊类型的组织，或二者兼具。照射时，它们可以是荧光性的，从而在涉及检测靶组织的诊断方法中是有用的。然而，甚至更重要的是，在以感光剂化合物吸收的波长照射时，感光剂具有对该感光剂所定位的任何细胞或其它组织引起细胞毒效应的能力。尽管尚未确定，但有人认为这种细胞毒效应是由于照射时形成了原子氧。
在大部分光动力学治疗方案中，必须找到一种方法使辐照光到达感光剂定位的靶组织。当激活化合物所需辐照光的波长在约630nm的范围(该波长容易被血液中和其它周围组织的天然发色团吸收)时，这是特别困难的。在一种技术中，患者必须插入发光导管，该导管插进患病的动脉或其它组织，以使导管的发光部分接近动脉粥样硬化斑块。例如，可用发光气球导管通过气球的充气移动气球表面外和动脉粥样硬化斑块之间不透光的血液。或者，可将一种“液体光”注入血管树，使这种与血液或血液替代品自由昆合的“液体光”输入患病的动脉(Spears，美国专利No.4,512,762)。
在另一个方法中，为了保持低剂量和降低患者对光的敏感性，较好的一组“绿卟啉”使光动力学治疗所采用的光其波长超出被血液或其它组织正常强度吸收的波长范围，具体地约为670-780nm。除了提供低浓度有效体内治疗和降低非靶组织的高敏性外，辐照光通常还达到更深的穿透。因为这些感光剂的颜色呈绿色而非红色．因此俗称“绿卟啉”。众所周知，绿卟啉在光动力学治疗方案中可用于检测和治疗动脉粥样硬化斑块。例如见1995年3月21日授予Levy等的美国专利No.5,399,583(第2栏第14-15行)、1990年4月24日授予Levy等的美国专利No.4,920,143(第10栏第58-59行)、1992年3月10日授予Levy等的美国专利No.5,095,030(第2栏第8-9行和第15栏第29-30行)和1992年12月15日授予Levy等的美国专利No.5,171,749(第2栏第12-13行和第18栏第1-4和35-47行)。
人们还发现，绿卟啉可达到一定的“暗效应”，这发生在用光激活光而根本无任何有意的辐照时。例如，发现在血管介入法(如血管成形术)后给予绿卟啉，可显著地降低平滑肌细胞的增生，后者典型地构建内膜，引起“再狭窄(restenosis)”或“内膜增生”。见1995年6月6日授予Vincent等的美国专利No.5,422,362。此外，如申请日为1995年1月13日的待批申请No.08/374,158所述，现已发现，在无光的情况下可用绿卟啉调节对特殊抗原的免疫反应和干扰血流中导致血栓形成或血凝块形成的细胞间信息传递。
然而，迄今为止，使用绿卟啉治疗脂肪动脉粥样硬化斑块仅限于这样一种光动力学治疗方案，它要求在给予感光剂后用能刺激绿卟啉产生细胞毒效应的波长的光照射血管内膜。因此，提供一种完全无须专门发射光的装置来抑制或预防动脉斑块的治疗方法是有益的。现已发现，绿卟啉可用来预防或抑制动脉斑块而无须任何一种有意的光照。
发明的概述按照本发明，开发了一种预防或抑制动脉斑块发展的方法，包括以下步骤a．给予受治疗者预防或抑制所述发展有效量的绿卟啉化合物；和b．在未用被所述绿卟啉吸收的光照射的情况下使所述的抑制出现。
本发明还涉及用于预防或抑制动脉斑块发展的药物组合物。该组合物包括a．一种绿卟啉化合物，其量给需要这种治疗的受治疗者投药后甚至在未用被所述Gp吸收的光照射的情况下也能有效地预防或抑制所述的发展；b．药学上可接受的赋形剂。
本发明的结果是惊人的，绿卟啉给药后不必接着用被所给绿卟啉吸收的光进行照射。更确切地说，无须有意地用任何类型的光照射即可典型地进行治疗。
附图的简要说明参照下面的附图，可更清楚地理解本发明，其中

图1显示本发明的方法和组合物中有用的典型的绿卟啉的结构式。
图2显示本发明的绿卟啉的四种特别好的实例BPD-DA、BPD-DB、BPD-MA和BPD-MB的结构式。
图3表示动脉粥样硬化斑块的剖面图。
发明的详细描述动脉粥样硬化易累及大的和中等大小肌肉的(muscular)动脉。最常受累的是主动脉、髂动脉、股动脉、冠状动脉、颈动脉、基底动脉、椎动脉和脑动脉。
本文所用的“动脉粥样硬化动脉斑块”定义为一种伴有内膜或较靠内的中层(围绕动脉腔的最内层)脂肪增生或脂质沉积的病理生理现象。
如图3的剖面图所示，动脉粥样硬化斑块出现于内膜1或中层2(中层平滑肌细胞未显示)之中。它们均可延伸到外膜3(动脉的外部包膜)。一层内皮层覆盖着斑块。斑块的纤维肌性的“帽”部分包含平滑肌细胞4、巨噬细胞5和胶原带8。在其下面是具有丰富的细胞外脂质滴9、胞浆中充满脂肪滴的“泡沫”细胞、胆固醇结晶10和坏死细胞碎屑的“芯”。巨噬细胞5广泛地分布，淋巴细胞6可见于帽和直至该芯的边缘。外膜毛细血管7趋向于内层受损处(Munro et al.,″Biology of Disease；The Pathogenesis of Atherosclerosis Atherogenesis andInflammation″,Laboratory Investigation58:3,249-50(1988))。
绿卟啉用于本发明方法的绿卟啉在1992年12月15日授予Levy等的美国专利No.5,171,749中有详细描述，该专利在本文中引为参考。“绿卟啉”是指将卟啉核与炔在Diel-Alder型反应中得到一氢苯并卟啉这样的卟啉衍生物。绿卟啉典型地选自乙炔衍生物与原卟啉在促进反应仅发生于原卟啉-IX环系统(A环和B环)上存在的两个可利用的非芳香族共轭二烯结构之一的条件下进行Diels-Alder反应所得的卟啉衍生物组。
典型的绿卟啉的一些结构见图1。如式1和2所示，Diels-Alder反应最初导致稠合于A或B吡咯环的环己二烯(本文中称作“氢化苯并”)的形成。己二烯环中的π系统的重排导致式3和式4化合物的形成，还原则提供式5和式6化合物。这些化合物如式1-6所示，有氢原子占据环内氮原子。然而，要理解的是，这些氢原子中的一个或两个均有阳离子取代的金属化形式也可使用。本发明中有用的绿卟啉化合物的制备在美国专利No.5,095,030中有详细描述，该专利在本文中引为参考。
为方便起见，术语“氢化一苯并卟啉衍生物”的缩写“BPD”一般用来指图1的式3和式4化合物。式3和式4化合物及其混合物是特别可取的。
如图1所示，R1、R2、R3和R4是非干扰性取代基，即不明显影响本发明的方法和组合物中化合物的活性。更具体地说，术语“发干扰性取代基”用来表示不破坏绿卟啉预防或抑制动脉斑块的能力的取代基。对于图1和图2的化合物来说，R1和R2一般是各自独立的中等程度的吸电子取代基或任何其他活性取代基，其吸电子能力不足以导致同时与A环和B环、而仅与其中之一进行Diels-Alder反应。合适的R1和R2基团包括例如C2-6烷氧羰基、C1-6烷基、磺酰基或C6-10芳基磺酰基、C6-10芳基、氰基和CONR5CO-，其中R5为C6-10芳基或C1-6烷基。R1和R2之一也可为氢原子，只要另一个是强度足以促进Diels-Alder反应的吸电子取代基。最常见的是，R1和R2是烷氧羰基，较好的是羧基甲酯或乙酯，较佳的化合物是其中R1和R2相同且为烷氧羰基(特别是乙氧甲酰基)的化合物。
本文所用的术语“羧基”，按常规定义为-COOH，而“烷氧羰基”代表-COOR，其中R为烷基。“羧基烷基”指取代基-R＇-COOH，其中R＇为亚烷基。“烷氧羰基烷基”指-R′-COOR，其中R′和R分别为亚烷基和烷基。“烷基”一般代表1-6个碳原子的饱和直链或支链烃基，如甲基、正己基、2-甲基戊基、叔丁基、正丙基等。“亚烷基”除了是二价而非一价外，是与烷基同样的基团．“芳基”表示可任意地被可分别独立地选自卤素(如氟、氯、溴或碘)、C1-4低级烷基和C1-4低级烷氧基的1-3个取代基取代的苯基。“芳基”或“芳基磺酰基”具有式-SO2R，其中R为上面所定义的烷基或芳基。
R3独立地为C2-6ω-羧基烷基或其盐、酰胺、酯或酰腙，或为C1-6烷基。较好地，R3为2-羧基乙基或其烷酯。R4为乙烯基。然而，因其可用天然的、而非出于生物效应的考虑而人工制成的卟啉，故这些实例较佳。如图1所示，R1-C≡C-R2与原卟啉-IX环系统(其中R3为2-羧基乙基的保护形式，如2-甲氧甲酰基乙基或2-乙氧甲酰基乙基，R4为-CH=CH)反应形成的加合物是式1和式2化合物。式1化合物从A环的加成而来，式2化合物从B环的加成而来。
本发明的绿卟啉化合物的方便的起始材料包括天然存在的卟啉，其中R3是-CH2CH2COOH或-CH2CHRCOOR，其中为C1-6烷基。但是，除了含有共轭于环π键的π键外，R3真正的本质常常与Diels-Alder反应的进程或与所得产物的有效性无关。因此，R3可以是各种各样基团之一，例如C1-4低级烷基和C2-6ω-羧基烷基及其酯和酰胺。R3取代基也可被卤素(如氟、氯、溴或碘)或被非反应性取代基取代。
当R3为CH2CHRCOOR时，对酯化羧基的水解或部分水解有利。典型地，R3位的水解容易进行，其速度大大快于R1或R2酯基的水解。而且，所得化合物的溶解度和生物分布特性比未水解形式理想得多。水解导致二元酸或一元酸产物(或其盐)。
在式1和式2化合物中，R4通常是-CH=CH2，但至少开始时分别通过式1或式2中B环或A环的乙烯基环取代基的加成或氧化，此乙烯基被容易地衍生为R4的其它实例。因此，R4可以是用容易做到的加成反应所形成的相应的各种取代基中的任何一种。例如，一种加成试剂的例子可以是HX，其中H加成到与环相邻的碳原子上产生的R4位如下式所示
因此，在一个实施例中，所加成的取代基之一为氢，另一个选自氢原子、卤素(如氟、氯、溴或碘)、羟基、低级烷氧基、氨基、酰氨基、巯基或有机硫化物。例如，水的Markovnikov加成反应在相应的环上产生类似于血卟啉环系统的取代基结构。乙烯基也可氧化得到R4位上的取代基-CH2OH、-CHO或COOH或其盐或酯。如果所加成的取代基是功能性可离去基，则加成或氧化产物本身也可被取代。例如，在Br为取代基时，它可被-OH、-OR(其中R为如上所述的C1-6烷基)、卤素、-NH2、-NHR、NR2等基团取代．因此，总的说来，R4代表乙烯基-CH=CH2通过裂解或加成可容易地转变成的基团，及离去性好的基团与另外的基团反应形成的进一步的取代基。但是，较好的R4为乙烯基(-CH=CH2)；-CHOR4＇，其中R4＇为H或可任意选择地被亲水性基团如-CH2OH取代的C1-6烷基；-CHO；-COOR4＇，如COOH或-COOCH3；-CH(OR4)CH3，如-CH(OH)CH3或-CH(OCH3)CH3；-CH(OR4＇)CH2OR4＇；-CH(OH)CH2OH；-CH(SR4＇)CH3，如-CH(SCH3)CH3及其二硫化物；-CH(NR4＇)CH3；-CH(CN)CH3；-CH(溴化吡啶鎓)CH3；-CH(COOR4)CH3；-CH(COOCR4＇)CH3；-CH2(卤素)CH3，如-CHBrCH3；或-CH(卤素)CH2(卤素)。或者，R4可以是直接或间接地从乙烯基衍生而来的少于12个碳原子的有机基团。或R4可产生另外的卟啉或与卟啉有关的环系统，如含有1-3个下面所定义的式-L-P所示四吡咯型核的基团。如下化合物较佳，其中R4为-CH=CH2、-CH(OH)CH3、-CH(卤素)CH3或含有1-3个下面所定义的式-L-P所示四吡咯型核的基团。
本文所用的术语“四吡咯型核”代表高度共轭的四环系统骨架
或其盐、酯、酰胺或酰腙。它包括实际上是完全共轭系统的卟啉系统；实际上是卟啉的二氢形式的二氢卟酚系统；及实际上是共轭卟啉系统的四氢形式的还原二氢卟酚系统。当将“卟啉”具体化时，指完全共轭的系统。绿卟啉实际上是卟啉系统的二氢形式。
在一个实施例中，取代基R4包括至少一个外加的四吡咯型核。本发明所得的化合物是二聚物或低聚物，其中至少一个四吡咯型环系统是绿卟啉。R4位上的绿卟啉基团与另外的四吡咯型环系统之间的键合可以是通过醚、胺或乙烯基键合。如下所述，还可衍生得到具有两个相应于R4的可利用的取代基位置(在A环和B环上)的卟啉环系统。
当R4为“-L-P”时，-L-选自(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
P为卟啉结构或如图l所示式1-6的第二个绿卟啉，除非第二个R4基团被上述L取代。
还可理解为当-L-为如上所述式(e)或(f)时，双键所连接的环系统具有相应于
的双键所连接的环中的共振系统。
上述直接来自Diels-Alder反应的氢化一苯并卟啉还可异构化为图1中式3和式4所示的BPD化合物。图1中化合物3和4的描绘未显示环外甲基(式3的A环和式4的B环)与R2取代基的相对位置。任何一个异构体均可得到。式3和式4化合物在本发明的方法和组合物中是特别好的。
另外，在催化剂如钯炭的存在下用氢处理可将Diels-Alder产物选择性地还原，得到相应于A环和B环各自Diels-Alser产物的如图1中式5和式6所示的饱和的环类似物。上面关于涉及留下的乙烯基取代基(R4)转化衍生的式1和式2化合物及关于R3可变性的描述也适用于式3、4、5和6化合物。
本发明的绿卟啉的较佳实例是Diels-Alder产物重排和部分水解的化合物。更佳的是R3位烷氧羰基还被水解或部分水解的式3和式4化合物(BPD)。含有-COOH的本发明化合物可制成游离酸或与有机或无机碱形成的盐。
图2显示式3和式4覆盖的本发明的特别好的化合物，它们共同称作苯并卟啉衍生物，即BPD-DA、BPD-DB、BPD-MA和BPD-MB。它们是式3和式4重排产物的水解或部分水解形式，其中R3的一个或两个被保护的羧基已被水解。R1和R2上的酯基水解相对较慢，以致于容易地转变成图2所示的形式。这些绿卟啉化合物中最佳的为BPD-MA。
图2中，R3为-CH2CH2COOR3′，其中R3＇因化合物而异。具体地说，在BPD-DA中，R1和R2为烷氧羰基，R3＇为氢，衍生在A环上。BPD-DB是衍生在B环上的相应化合物。BPD-MA表示BPD-DA的部分水解形式，而BPD-MB表示BPD-DB的部分水解形式。因此，在后面这些化合物中，R1和R2是烷氧羰基，一个R3＇是氢，另一个R3＇是C1-6烷基。
式BPD-MA和式BPD-MB化合物可以是同源性的，其中仅C环烷氧羰基乙基或仅D环烷氧羰基乙基被水解，或可以是C环和D环取代基水解产物的混合物。此外，本发明的方法和组合物中可使用BPD-MA、-MB、-DA和-DB中任何两种或两种以上的混合物。
应当提及的是，图1化合物中很多都含有至少一个手性中心，因此可以旋光异构体的形式存在。无论化合物是以单一立体异构体的分离物或对映体和/或非对映体的混合物的形式使用，具有手性碳两种构型的化合物均可使用于本发明的方法。非对映体化合物的分离可使用任何常规方法。对映体混合物可用任何有用的技术(如使其与旋光性制品反应然后分离所得的非对映体)加以分离。
还应提及的是，反应产物可以是A环和B环加成物不分离的混合物，如式1和式2、式3和式4或式5和式6的混合物。无论是分离的形式，如式3单独或式4单独，或任何比例的混合物均可用于本发明的方法和组合物。
而且，绿卟啉的二聚物形式和绿卟啉/卟啉的二聚物或多聚物形式均可使用，本发明的二聚和低聚化合物可用类似于卟啉本身的二聚作用和低聚作用的反应加以制备。绿卟啉或绿卟啉/卟啉键合可直接进行，或可将卟啉偶联，然后在卟啉的任何一端或两端进行Diels-Alder反应，使其转变成相应的绿卟啉。
绿卟啉化合物的给药在本发明的方法中，以一次剂量或几次剂量给受治疗者服用一定量的绿卟啉化合物或绿卟啉化合物的混合物。剂量取决于绿卟啉的纯度和化学形式及预期的吸收程度。每剂合适的量典型地大于约0.5mg/kg体重，较佳在每剂约0.5-5.0mg/kg的范围内，最佳约为每剂0.5-2.0mg/kg。这些剂量范围是建议性的，不必认为是限制性的，因为受治疗者的个体反应会不同。按照个体的变化调节剂量范围是实施者的常规。
同样，看来现时并无对所有病例都理想的一种治疗方案。然而，经典的治疗方案可包括单次剂量或一个起始剂量后接着以每周、双周或每月的间隔给再1-4次附加剂量。一个特别好的治疗方案要求间隔约2周的3次剂量。另外，鉴于方案设计上允许的变动大，这些治疗方案并不是限制性的。
本发明的绿卟啉化合物可以单一化合物(较佳为BPD-MA)或各种绿卟啉的混合物给药。合适的制剂包括适用于全身给药的制剂，包括注射、经粘膜或经皮给药或口服给药的制剂。用于此用途的本发明的绿卟啉的特别好的制剂方式是适合于注射到外周静脉中的溶液的形式或脂质体的形式。绿卟啉可包含在脂质体中或附着在其表面，或两者兼有。绿卟啉化合物包含在这种制剂中的描述见例如1993年5月25日授予Allison等的美国专利No.5,14,036和Desai等于1995年6月13日提交的待批申请No.08/489,850，这两篇文献均在此引为参考。
静脉注射后，溶液或脂质体制剂分散到整个血管系统，从而与其所针对的动脉斑块直接接触，绿卟啉在这里被选择性地吸收，峰浓度典型地出现在约24小时内。注射后几个小时内可检出斑块内绿卟啉的存在，并可持续数日到两周之久。
在一个实施例中，在绿卟啉上结合对斑块的成分特异性的某种抗体可促进动脉斑块对绿卟啉的吸收。单克隆抗体因其极高的特异性而特别有用。可起抗原靶作用的斑块成分包括弹性成分、胶原和脂质成分。
在本发明的方法中，将制成药物组合物的绿卟啉化合物进行给药，无须用被绿卟啉吸收的光在潜在的或成长中的动脉斑块作侵袭性的照射。“在不用被绿卟啉吸收的光照射的情况下”是指不进行这样有意识的照射，当然不排除受累组织非故意地、偶然地或正常地暴露于周围的光。
下面的实施例是为了阐述而非限制本发明。
实施例1剂量改变进行本研究是为了评估脂质体BPD-MAverteporfin对饲以高脂肪饮食家兔的动脉脂肪斑块发展的效应。选择20只实验动物，分成4组。在整个研究中，所有动物均保持食用含7％玉米油和1.5％胆固醇的制成丸状的家兔食物。在高脂肪饮食开始后2周和6周，对3组动物给以0.5、1.0或2.0mg/kg BPD-MA。第4组动物不接受BPD-MA，作为对照组。第7周时，所有4组动物均作尸检，摘出主动脉，经固定后，由一个持证兽医病理学家作肉眼检查和显微镜检查。用标准苏木素和伊红染色技术对福尔马林固定的切片作组织病理学检查。将每试验组5个动物的数据进行平均，得到该组的数值。
在肉眼检查中，对长度约15cm的整个家兔主动脉检测斑块的严重性和长度。结果概括于下面的表1。
表1组 药物剂量(mg/kg) 严重性1受累组织的长度2(cm) 受累组织％1 0 2.27.0 46.72 0.51.82.5 16.73 1.01.34.8 32.04 2.01.20.9 6.11严重性0=无斑块1=线性小斑块(3mm或更小)2=涉及动脉周线1/2以下的斑块融合区3=涉及动脉周线1/2以上的斑块融合区2长度受斑块影响的主动脉线性长度cm。在涉及几个分开的区域时，受累长度相加得到总长值。
取距离主动脉分叉1cm处的家兔主动脉切片用于显微镜检。选择主动脉的这一特殊部分是因为一般认为它最好地代表全部斑块的发展。结果概括于表2。
表2组 药物剂量(mg/kg) 斑块严重性1包含主动脉斑块的切片数1 0 1.04/52 0.50.83/53 1.00.21/54 2.00 0/51严重性0=正常主动脉；1=少于30％主动脉切片有一个或几个内皮下脂肪斑块；2=30-60％切片有内皮下脂肪斑块；3=60％以上切片有内皮下脂肪斑块。
随着BPD-MA剂量的增加，斑块的严重性和斑块受累组织的长度均出现降低。这些效应在肉眼观察和显微镜检时均观察到。在这两种情况下，最大效应均见于接受2.0mg/kg绿卟啉的动物。
实施例2剂量数的改变在本研究中，在上述实施例1的高脂肪饮食开始后2周或该饮食开始后2、4和6周后，对两组实验动物(每组n=6)投药2mg/kg BPD-MA。第3组作为对照组，不接受BPD-MA。所有动物在第8周时作尸检，摘出家兔主动脉，如实施例1所述进行固定。
对长度约为13.0-17.5cm的主动脉进行肉眼检查。结果列于下表3表3从高脂饮食开始的 受累组织的长度2受累组织组药 物剂量给药时间(周) 严重性2(cm) ％10 0 2.25.0 30.622.0 2 1.72.5 17.832.0 2、4、6 1.20.9 5.91和2见表1。
从距离主动脉分叉约1、2和3cm处同样取家兔主动脉切片用于显微镜检。1cm处切片被考虑与实施例1所取的切片可作比较。结果概括于下面的表4。
表4药物剂量 从高脂饮食开始的斑块严重性1包含主动脉斑块的切片数组 (mg/kg) 给药时间(周)(1、2、3cm切片) (1、2、3cm切片)10 01.3、1.7、2.24/6、5/6、5/622.020.8、1.0、2.04/6、4/6、5/532.0 2、4、6 0.7、1.3、2.02/6、5/6、5/61见表2。
肉眼检查和显微镜检的结果均表明，在研究结束前6周给单剂BPD-MA后主动脉斑块的严重性和长度均减小。但是，在间隔2周的3次重复剂量后，降低更明显。
权利要求
1．预防或抑制动脉斑块发展的方法，所述方法包括以下步骤a．给予受治疗者1剂或多剂预防或抑制所述发展有效量的绿卟啉；和b．在未用被所述绿卟啉吸收的光有意照射的情况下使所述的抑制出现。
2．如权利要求1所述的方法，其中所述给药是给予1-5次剂量。
3．如权利要求2所述的方法，其中所述给药是给予1次剂量。
4．如权利要求2所述的方法，其中所述给药是给予3次剂量。
5．如权利要求1所述的方法，其中所述有效量为每次剂量大于0.5mg/kg。
6．如权利要求5所述的方法，其中所述有效量为每次剂量0.5-5.0mg/kg。
7．如权利要求5所述的方法，其中所述有效量为每次剂量0.5-2.0mg/kg。
8．如权利要求1所述的方法，其中所述绿卟啉以脂质体制剂的形式给药。
9．如权利要求1所述的方法，其中所述绿卟啉选自式1 式2
式3式4
式5 式6
组成的组，其中，R1、R2、R3和R4是非干扰性取代基。
10．如权利要求9所述的方法，其中R1和R2独立地为甲氧甲酰基或乙氧甲酰基。
11．如权利要求9所述的方法，其中R3为-CH2CH2COOH或其盐、酰胺、酯或酰腙。
12．如权利要求9所述的方法，其中所述绿卟啉为式3或式4。
13．如权利要求12所述的方法，其中所述绿卟啉选自BPD-DA、BPD-DB、BPD-MA和BPD-MB组成的组。
14．如权利要求13所述的方法，其中所述绿卟啉为BPD-MA。
15．用于预防或抑制动脉斑块发展的药物组合物。所述组合物包括a．单位剂量的绿卟啉化合物，该量给需要这种治疗的受治疗者投药后甚至在未用被所述绿卟啉吸收的光照射的情况下也能有效地预防或抑制所述的斑块发展；b．药学上可接受的赋形剂。
16．如权利要求29所述的方法，其中所述组合物以1-5次剂量给药。
17．如权利要求16所述的方法，其中所述组合物以1次剂量给药。
18．如权利要求16所述的方法，其中所述组合物以3次剂量给药。
19．如权利要求15所述的组合物，其中所述单位剂量大于所述受治疗者每kg体重0.5mg。
20．如权利要求19所述的组合物，其中所述单位剂量为所述受治疗者每kg体重0.5-5.0mg。
21．如权利要求19所述的组合物，其中所述单位剂量为所述受治疗者每kg体重0.5-2.0mg。
22．如权利要求15所述的组合物，其中所述组合物是脂质体制剂。
23．如权利要求15所述的组合物，其中所述绿卟啉选自式1 式2
式3 式4
式5 式6
组成的组，其中，R1、R2、R3和R4是非干扰性取代基。
24．如权利要求23所述的组合物，其中R1和R2独立地为甲氧甲酰基或乙氧甲酰基。
25．如权利要求23所述的组合物，其中R3为-CH2CH2COOH或其盐、酰胺、酯或酰腙。
26．如权利要求23所述的组合物，其中所述绿卟啉为式3或式4化合物。
27．如权利要求26所述的组合物，其中所述绿卟啉选自BPD-DA、BPD-DB、BPD-MA和BPD-MB组成的组。
28．如权利要求27所述的组合物，其中所述绿卟啉为BPD-MA。
29．预防或抑制动脉斑块发展的方法，所述方法包括以1剂或多剂给予权利要求15的组合物。
全文摘要
本发明涉及一种预防或抑制动脉斑块发展的方法,包括以下步骤:a.给予受治疗者预防或抑制所述发展有效量的绿卟啉化合物;和b.在未用被所述绿卟啉吸收的光照射的情况下使所述的抑制出现。本发明还涉及用于预防或抑制动脉斑块发展的药物组合物。该组合物包括:a.一种绿卟啉化合物,其量给需要这种治疗的受治疗者投药后甚至在未用被所述绿卟啉吸收的光照射的情况下也能有效地预防或抑制所述的发展;和b.药学上可接受的赋形剂。绿卟啉给药后不必用光进行有意的照射。
文档编号A61K31/00GK1222076SQ97195509
公开日1999年7月7日 申请日期1997年6月5日 优先权日1996年6月14日
发明者B·凯利, J·利维, P·M·马加隆 申请人:Qlt光治疗股份有限公司