专利名称：用作naalad酶抑制剂的氧膦基衍生物的制作方法
相关申请本申请是1996年6月17日申请、发明名称为“膦酰基甲基戊二酸衍生物”、序号为08/665,776的美国专利申请的部分连续(CIP)申请，也是1996年12月31日申请、发明名称为“NAALAD酶活性抑制剂”、序号为08/775,586的美国专利申请的部分连续申请及1996年12月31日申请、发明名称为“氨基磷酸盐衍生物”、序号为08/778,733的美国专利申请的部分连续申请。本发明背景1．发明领域本发明涉及抑制N-乙酰化α-链接的酸性二肽酶(NAALAD酶)的酶活性的新的膦酸盐衍生物、羟基氧膦基衍生物和氨基磷酸盐衍生物，含有这类衍生物的药物组合物，以及利用这类衍生物抑制NAALAD酶的酶活性和治疗动物前列腺疾病的方法。2．现有技术的描述前列腺癌在美国，前列腺癌是主要类型的癌症，它是男人死于癌症的第二主要原因。据美国癌症研究协会估计，仅在1996年就诊断出了317,100例新的前列腺癌患者且有41,400人死于前列腺癌。1980年与1990年之间，前列腺癌的发病率增加了65％，而且随着诊断试验的改进和更长时间的预测，这个数字还将继续上升。尽管在前列腺癌发作之前，多数男人死于其它疾病，但随着男人寿命的增加，这种疾病会有更多的传播时间，前列腺癌的死亡率预计会更加提高。
在1993年，有报道认为前列腺特异性膜抗原(PSMA)的分子克隆是有力的前列腺癌标记物并被假设为前列腺癌的造影和细胞毒素治疗方法的目的物。PSMA抗体，特别是标记铟-111和标记氚的PSMA抗体已被公开过并为前列腺癌的诊断和治疗进行过临床试验。PSMA表达在前列腺管上皮中，它存在于精液血浆、前列腺流体和小便中。在1996年，人们发现PSMA cDNA表达可赋予NAALAD酶活性。NAALAD酶抑制剂在某些与谷氨酸盐异常和神经中毒性相关的人和动物病态中涉及到了NAAG和NAALAD酶，例如人们已经揭示出在海马内注射NAAG可引起癫痫发作活性加长。最近报道，具有遗传性癫痫发作倾向的大鼠的NAALAD酶活性的基本水平持续增加。这些观察结果支持了突触谷氨酸盐的有效性增加激励了癫痫发作的感受性的假说，同时可提出NAALAD酶抑制剂可提供抗癫痫活性。
在ALS发病机理和被称为遗传性犬脊柱肌肉萎缩(HCSMA)的病理学类似动物疾病中也涉及到了NAAG和NAALAD酶。结果表明NAAG浓度及其代谢物-NAA、谷氨酸盐和天冬氨酸盐--在ALS患者和HCSMA狗的脑脊髓液中被提高了2-至3-倍。另外，NAALAD酶活性在ALS患者和HCSMA狗的死后脊髓组织中显著增加(2至3倍)。同样地，如果NAAG代谢增加可改变这些酸性氨基酸和肽的CSF水平，则NAALAD酶抑制剂在临床上也可用于抑制ALS的传播。
NAAG水平和NAALAD酶活性异常也可在神经分裂症死后的大脑，特别是在额叶前部和大脑边缘区域中得到证明。
上述结果表明NAALAD酶抑制剂可用于治疗谷氨酸盐异常。但是，本发明的目的在于惊奇且出人意料地发现本发明新化合物不仅是有效的NAALAD酶抑制剂，而且可有效地用于治疗前列腺疾病，特别是前列腺癌。尽管癌症数据与前列腺癌细胞有关，但预期NAALAD酶抑制剂同样有效地用于治疗属于NAALAD酶的其它组织的癌症，所述组织如脑、肾和睾丸。
尽管已认识到了几种NAALAD酶抑制剂，但它们仅被用于非临床研究。这类抑制剂的实例包括一般的金属肽酶抑制剂，如o-菲咯啉金属螯合剂如EGTA和EDTA，以及肽类似物，如使君子酸和β-NAAG。因此有必要确认更多的NAALAD酶抑制剂，特别是确认能够治疗前列腺疾病(如前列腺癌)的NAALAD酶抑制剂。发明概要本发明涉及抑制N-乙酰化α-链接的酸性二肽酶(NAALAD酶)的酶活性的新的膦酸盐衍生物、羟基氧膦基衍生物和氨基磷酸盐衍生物，含有这类衍生物的药物组合物，以及利用这类衍生物抑制NAALAD酶的酶活性和治疗动物如癌症类疾病以及治疗与前列腺疾病相关的疾病的方法。
本发明优选的组合物包含式Ⅰ化合物
其中R1为氢、C1-C9直链或支链烷基、C2-C8直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1；X为CH2、O或N；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基被羧酸取代。
本发明也涉及一种药物组合物，该组合物包含
(ⅰ)治疗有效量的式Ⅰ化合物；和(ⅱ)可药用载体。
优选地，式Ⅰ化合物以抑制NAALAD酶的酶活性或治疗动物前列腺疾病的有效量存在。
本发明进一步涉及抑制动物NAALAD酶的酶活性的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的式Ⅰ化合物。
最后，本发明涉及治疗动物前列腺疾病的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的式Ⅰ化合物。附图简述
图1是表示前列腺癌细胞系LNCAP生长与不同使君子酸浓度之间的条线图。图1表示了利用使君子酸盐进行7-天治疗对LNCAP细胞生长的作用。正如[3H]胸腺嘧啶核甙掺入量的显著降低所示，浓度为10nM至1μM的使君子酸盐显示出LNCAP细胞增生的降低明显与剂量有关。
图2是表示前列腺癌细胞系LNCAP生长与不同2-(膦酰基甲基)戊二酸浓度之间的条线图。图2表示了利用2-(膦酰基甲基)戊二酸进行7-天治疗对LNCAP细胞生长的作用。正如[3H]胸腺嘧啶核甙掺入量的显著降低所示，浓度为100pM至10nM的2-(膦酰基甲基)戊二酸显示出LNCAP细胞增生的降低明显与剂量有关。
图3是利用2-(膦酰基甲基)戊二酸进行日治疗时LnCap人前列腺肿瘤的响应的曲线图。在开始治疗之后将各个肿瘤体积的平均值绘制成时间的函数曲线，误差表示为SEM。利用2-(膦酰基甲基)戊二酸治疗6周后导致对照组与日注射给药的动物(p=0.04)之间和对照组与植入聚合物的动物(p=0.02)之间产生显著差异。
图4是利用2-(膦酰基甲基)戊二酸进行治疗的动物存活百分数与天数之间的曲线图。与载体对比，图4表明注射与聚合物混合的2-(膦酰基甲基)戊二酸及接受肿瘤内注射2-(膦酰基甲基)戊二酸的存活百分数平均值更高。该图表明72天后，利用聚合物治疗的动物存活率为88％，而利用肿瘤内注射进行治疗的动物存活率为55％，利用载体进行治疗的对照组的动物存活率为32％。
图5为肿瘤生长与进行大鼠Dunning细胞R3327-G注射后天数之间的曲线图。在0天时注入前列腺癌细胞，从第1天至第84天皮下日注射不同剂量的2-(膦酰基甲基)戊二酸和对照载体。图5表明肿瘤生长速度的降低是2-(膦酰基甲基)戊二酸剂量的函数。
图6是R3327-G大鼠前列腺肿瘤对利用2-[[(苯基甲基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸进行治疗的响应曲线图。将以相对于治疗开始时肿瘤体积表示的各个肿瘤体积平均值(V/V0)绘制成时间的函数。利用2-[[(苯基甲基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸治疗2.5周后得到了对照组与肿瘤内日注射1μg药物的动物之间的显著差异(p=0.02)。本发明定义的详细描述“化合物3”是指2-(膦酰基甲基)戊二酸，NAALAD酶抑制剂。
在酶的上下文中的“抑制”是指可逆酶抑制，如竞争性、无竞争性和非竞争性抑制。竞争性、无竞争性和非竞争性抑制可通过抑制剂对酶的反应动力学的影响而加以区分。当抑制剂与酶可逆结合时则发生竞争性抑制，所述结合以在活性位置与一般反应物竞争的方式进行。抑制剂和酶之间的亲合力可通过抑制剂常数Ki测定，所述常数Ki定义如下Ki=[E][I]/[EI]其中[E]为酶的浓度，[I]为抑制剂的浓度，[EI]为由酶与抑制剂反应所形成的酶-抑制剂配合物的浓度。除非另外指明，这里所使用的Ki是指本发明化合物与NAALAD酶之间的亲合力。“IC50”是指与用于定义抑制50％目标酶所需的化合物的浓度或量相关的术语。
在肿瘤生长或肿瘤细胞生长上下文中的“抑制”可由原发或次生肿瘤的表象延迟、原发或次生肿瘤的发展缓慢、原发或次生肿瘤的发作降低、疾病第二效应严重性的缓解或降低、肿瘤生长的停止和肿瘤消退等等来进行评价。在极端的情况下，完全抑制在这里是指防止。
“NAGG”是指N-乙酰基-天冬氨酰基-谷氨酸盐，它是一种重要的大脑肽组分，其含量与主要抑制剂神经介质γ-氨基丁酸(GABA)相当。NAAG是神经元的特异的，存在于突触载体中；它在几个假设为glutamatergic的体系中释放而对神经元产生刺激刺激。有些研究提出NAAG可用作中枢神经系统中的神经介质和/或神经调节剂，或者用作神经介质谷氨酸盐的前体。
“NAALAD酶”是指N-乙酰化α-链接的酸性二肽酶，它是一种结合膜金属肽酶，可将NAAG分解代谢成N-乙酰基天冬氨酸盐(NAA)和谷氨酸盐由NAALAD酶分解代谢NAAG
NAALAD酶对NAAG显示出高的亲合力，Km=540nM。如果NAAG为生物活性肽，则可将NAALAD酶用于使NAAG的对突触的作用失去活性。另外，如果NAAG功能是用作谷氨酸盐前体，则NAALAD酶的主要作用是调节突触中谷氨酸盐的生物利用度。
“可药用盐”是指具有所需药物活性且既没有生物又没有其它所不需要的本发明化合物的盐。该盐可以是与有机或无机酸形成的盐，如乙酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、苯磺酸盐、硫酸氢盐、丁酸盐、柠檬酸盐、樟脑酸盐、樟脑磺酸盐、环戊烷丙酸盐、二葡糖酸盐、十二烷基硫酸盐、乙磺酸盐、富马酸盐、葡糖庚酸盐、甘油磷酸盐、半硫酸盐、庚酸盐、己酸盐、氢氯酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、2-羟乙磺酸盐、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、2-萘磺酸盐、烟酸盐、草酸盐、硫氰酸盐、甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。碱盐的实例包括铵盐；碱金属盐，如钠和钾盐；碱土金属盐，如钙和镁盐；与有机碱所成的盐，如二环己基胺盐、N-甲基-D-葡糖胺盐；以及与氨基酸所成的盐，所述氨基酸如精氨酸和赖氨酸。碱性含氮基团可与试剂季胺化，所述试剂包括低级烷基卤代物，如甲基、乙基、丙基和丁基的氯化物、溴化物和碘化物；硫酸二烷基酯，如硫酸二甲酯、二乙基酯、二丁基酯和二戊基酯；长链卤化物，如癸基、月桂基、肉桂基和硬脂基氯化物、溴化物和碘化物；以及芳烷基卤化物，如苄基和苯乙基溴化物。
与肿瘤生长或肿瘤细胞生长有关的术语“防止”是指如果没有发生肿瘤或肿瘤细胞生长，则不再会发生肿瘤或肿瘤细胞生长，如果肿瘤或肿瘤细胞已经生长，则肿瘤或肿瘤细胞不会进一步生长。
术语“前列腺疾病”与前列腺癌相关，如腺癌或转移性癌症，是以前列腺上皮细胞异常生长为特征的疾病，如良性前列腺增生，以及需要利用本发明化合物治疗的疾病。
“PSA”是指前列腺特异性抗原，它是一种公知的前列腺癌标记物。PSA是一种由前列腺细胞生成的蛋白质，一般在前列腺癌男性患者的血液中含量水平很高。PSA与肿瘤麻烦有关，它可用作癌症转移的指示剂，可为前列腺癌症患者对手术、放射和雄激素置换治疗的响应提供参数。
“PSMA”是指前列腺特异性膜抗原，是有效的前列腺癌标记物，它被假设为前列腺癌的造影和细胞毒素治疗方法的目的物。PSMA表达在前列腺管上皮中，存在于精液血浆、前列腺流体和小便中。人们发现PSMA cDNA表达可赋予NAALAD酶活性。
术语“治疗”是指为了直接或间接地改进动物病情，在动物(包括人类)中进行的以医疗为目的的任何过程、行为、应用或治疗等。本发明化合物本发明涉及式Ⅰ化合物或其可药用盐、水合物或其混合物
其中R1为氢、C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1；X为CH2、O或NR1，其中R1如上文定义；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基被羧酸取代。
本发明也注视到所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基可任意地被下述基团取代C3-C8环烷基、C3或C5环烷基、C5-C7环烯基、C1-C4烷基、C1-C4链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基或Ar1；其中Ar1选自1-萘基、2-萘基、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、2-呋喃基、3-呋喃基、四氢呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、4-噻吩基、2-、3-、或4-吡啶基或苯基，它们可具有1至5个取代基，该取代基独立地选自氢、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基或C1-C4链烯氧基、苯氧基和苄氧基。
在优选的实施方案中，该化合物选自式Ⅱ化合物
其中R1为氢、C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基被羧酸取代。
在另一优选的实施方案中，R基团为选自式Ⅱ化合物中所示的脂族或碳环取代基
其中R1为氢、C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基被羧酸取代。
在本发明特别优选的化合物中，R1为脂族或碳环基团，R2为羧酸取代的乙基和X为CH2，它们选自2-[[甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[乙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[丙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[丁基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[环己基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(环己基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[苯基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[苄基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[苯基乙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[(3-苯基丙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；2-[[苯基丁基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-氟苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-氟苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(五氟苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-甲氧基苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[(二羟基氧膦基)甲基]戊二酸；2-[[(3-苯并三氟)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2,3,4-三甲氧基苯基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(1-萘基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-萘基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(1-萘基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-萘基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(1-萘基)乙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-萘基)乙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；
2-[[(1-萘基)丙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-萘基)丙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(1-萘基)丁基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-萘基)丁基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[(甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-氟苯基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[((羟基)苯基甲基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；和2-[[(苯基丙-2-烯基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸。
在本发明特别优选的化合物中，R1为脂族或碳环基团，R2为被羧酸取代的乙基和X为CH2，它们选自2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；2-[(苯基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；2-[[((羟基)苯基甲基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[(丁基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；2-[[(3-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[(3-苯基丙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；2-[[(4-氟苯基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；2-[(苯基乙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；2-[[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-氟苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-甲氧基苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[(二羟基氧膦基)甲基]戊二酸；2-[[(3-苯并三氟)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-氟苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；和2-[[(五氟苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸。
尽管不局限于任何一个具体的实例，但在本发明非常优选的实例中，R1为碳环，R2为被羧酸取代的乙基和X为CH2，该化合物为2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]戊二酸。
其它优选的本发明化合物包括其中X为CH2,R1为脂族或碳环和R2为被羧酸取代的C2-C8烷基或链烯基的羟基氧膦基衍生物。这类化合物的实例包括2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]己二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]己二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]庚二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]庚二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]辛二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]辛二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]壬二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]壬二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]癸二酸；和2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]癸二酸。
在特别优选的本发明化合物中，R1为被杂环基取代的所述烷基、链烯基、环烷基或芳基，R2为被羧酸取代的乙基和X为CH2，它们选自2-[[(2-吡啶基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-吡啶基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)乙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)丙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)乙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)丙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-吲哚基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；
2-[[(4-吲哚基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)乙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)丙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-噻吩基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-噻吩基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)乙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；和2-[[(3-噻吩基)丙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸。
在另一优选的实施方案中，R基团为式Ⅱ化合物所示的脂族、碳环或杂环取代基
其中R1为Ar1；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基和芳基被羧酸取代。
在特别优选的本发明化合物中，R1为杂环基，R2为被羧酸取代的乙基和X为CH2，它们选自2-[[(2-吡啶基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-吡啶基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-吲哚基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；
2-[[(4-吲哚基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-噻吩基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；和2-[[(4-噻吩基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸。
化合物也优选地选自式Ⅱ化合物
其中R1为氢、C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1；和R2为Ar1，其中所述芳基被羧酸取代。
其中R2为芳族或杂环的具体实例可根据这里所提供或本领域公知的技术，由本领域普通技术人员容易地制备和使用。
优选的化合物也可选自式Ⅲ化合物
其中R1为氢、C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基被羧酸取代。
在另一优选的实施方案中，R基团为式Ⅲ化合物所示的脂族、碳环或杂环取代基
其中R1为氢、C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基被羧酸取代。
在本发明特别优选的式Ⅲ化合物中，R1为脂族或碳环基团和R2被羧酸取代的乙基，它们选自2-[[甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[乙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[丙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[丁基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[环己基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(环己基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[苯基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[苄基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[苯基乙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[3-苯基丙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[苯基丁基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；
2-[[(4-氟苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-氟苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(五氟苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(甲氧基苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-氟苯基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[((羟基)苯基甲基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-甲基苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[(二羟基氧膦基)氧基]戊二酸；2-[[(3-苯并三氟)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2,3,4-三甲氧基苯基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(1-萘基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-萘基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(1-萘基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-萘基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(1-萘基)乙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-萘基)乙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(1-萘基)丙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-萘基)丙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(1-萘基)丁基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-萘基)丁基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；和2-[[(苯基丙-2-烯基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸。
在特别优选的本发明式Ⅲ化合物中，R1为脂族或碳环基团和R2为被羧酸取代的乙基，它们选自2-[(苄基羟基氧膦基)氧基]戊二酸；2-[(苯基羟基氧膦基)氧基]戊二酸；2-[[((羟基)苯基甲基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[(丁基羟基氧膦基)氧基]戊二酸；2-[[(3-甲基苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[(3-苯基丙基羟基氧膦基)氧基]戊二酸；
2-[[(4-氟苯基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氧基]戊二酸；2-[(苯基乙基羟基氧膦基)氧基]戊二酸；2-[[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-氟苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-甲氧基苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[(二羟基氧膦基)氧基]戊二酸；2-[[(3-苯并三氟)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-氟苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；和2-[[(五氟苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸。
尽管不局限于任何一个具体的实例，但在本发明非常优选的实例中，R1为碳环，R2为被羧酸取代的乙基和X为氧，该化合物为2-[(苄基羟基氧膦基)氧基]戊二酸。
其它特别优选的本发明化合物包括其中X为氧，R1为脂族或碳环和R2为被羧酸取代的C2-C9烷基或链烯基的膦酸盐衍生物。这类化合物的实例包括2-[(甲基羟基氧膦基)氧基]己二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)氧基]己二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氧基]庚二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)氧基]庚二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氧基]辛二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)氧基]辛二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氧基]壬二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)氧基]壬二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氧基]癸二酸；和2-[(苄基羟基氧膦基)氧基]癸二酸。
在特别优选的本发明化合物中，R1为被杂环基取代的所述烷基、链烯基、环烷基或芳基，R2为被羧酸取代的乙基和X为氧，它们选自2-[[(2-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)乙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)丙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸2-[[(四氢呋喃基)乙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)丙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)乙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)丙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)乙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；和2-[[(3-噻吩基)丙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸。
在另一优选的实施方案中，R1为式Ⅲ化合物所示的芳族或杂环取代基
其中R1为Ar1；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基被羧酸取代。
在特别优选的本发明化合物中，R1为杂环基，R2为被羧酸取代的乙基和X为氧，它们选自2-[[(2-吡啶基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-吡啶基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-吲哚基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-吲哚基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-噻吩基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；和2-[[(4-噻吩基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸。
该化合物也优选地选自式Ⅲ化合物
其中R1为氢、C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1；和R2为Ar1，其中所述芳基被羧酸取代。
其中R2为芳族或杂环的具体实例可根据这里所提供或本领域公知的技术，由本领域普通技术人员容易地制备和使用。
本发明优选的氨基膦酸盐化合物选自式Ⅳ化合物
其中R1为氢、C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基被羧酸取代。
在优选的实施方案中，R基团为式Ⅳ化合物所示的脂族或碳环取代基
其中R1为氢、C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基被羧酸取代。
在特别优选的式Ⅳ化合物中，R1为脂族或碳环基团，R2被羧酸取代的乙基和NR1为氨基，它们选自2-[[甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；
2-[[乙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[丙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[丁基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[环己基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(环己基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[苯基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[苄基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[苯基乙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[苯基丙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[苯基丁基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-氟苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-氟苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(五氟苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(甲氧基苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-氟苯基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[((羟基)苯基甲基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-甲基苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[(二羟基氧膦基)氨基]戊二酸；2-[[(3-苯并三氟)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2,3,4-三甲氧基苯基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(1-萘基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-萘基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(1-萘基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-萘基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(1-萘基)乙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-萘基)乙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(1-萘基)丙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-萘基)丙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(1-萘基)丁基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；
2-[[(2-萘基)丁基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；和2-[[(苯基丙-2-烯基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸。
在特别优选的式Ⅳ化合物中，R1为脂族或碳环基团，R2为被羧酸取代的乙基和NR1为氨基，它们选自2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；2-[(苯基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；2-[[((羟基)苯基甲基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[(丁基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；2-[[(3-甲基苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[(3-苯基丙基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；2-[[(4-氟苯基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；2-[(苯基乙基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；2-[[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-氟苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-甲氧基苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[(二羟基氧膦基)氨基]戊二酸；2-[[(3-苯并三氟)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-氟苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；和2-[[(五氟苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸。
尽管不局限于任何一个具体的实例，但在本发明非常优选的实例中，R1为碳环，R2为被羧酸取代的乙基和X为氨基，该化合物为2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]戊二酸。
其它特别优选的本发明化合物包括其中X为氨基，R1为脂族或碳环和R2为被羧酸取代的C2-C8烷基或链烯基的氨基膦酸盐衍生物。这类化合物的实例包括2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]己二酸；
2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]己二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]庚二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]庚二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]辛二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]辛二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]壬二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]壬二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]癸二酸；和2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]癸二酸。
在特别优选的本发明化合物中，R1为被杂环基取代的所述烷基、链烯基、环烷基或芳基，R2为被羧酸取代的乙基和X为氨基，它们选自2-[[(2-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)乙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)丙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)乙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)丙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)乙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)丙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)乙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；和
2-[[(3-噻吩基)丙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸。
在另一优选的实施方案中，R1为式Ⅳ化合物所示的芳族或杂环取代基
其中R1为Ar1；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基被羧酸取代。
在特别优选的本发明化合物中，R1为杂环基，R2为被羧酸取代的乙基和X为氨基，它们选自2-[[(2-吡啶基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-吡啶基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-吲哚基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-吲哚基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-噻吩基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；和2-[[(4-噻吩基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸。
该化合物也优选地选自式Ⅳ化合物
其中R1为氢、C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1；和R2为Ar1，其中所述芳基被羧酸取代。
其中R2为芳族或杂环的具体实例可根据这里所提供或本领域公知的技术，由本领域普通技术人员容易地制备和使用。化合物的合成利用下述的一般合成路径(参见流程Ⅰ-Ⅸ)，通过有机化学中的常规方法可容易地制备本发明化合物。前体化合物可通过本领域公知的方法制备，例如下述文献中描述的方法Jackson等人，医学化学杂志(J.Med.Chem.),39(2),619-622,Design.Synthesis and Biological Activity ofPotent Inhibitor of the Neuropeptidase N-Acetylated a-Linked AcidicDipeptidase和Froestl等人，医学化学杂志(J.Med.Chem.),1995,38,3313-3331,Phosphinic Acid Analogues of GABA。
利用已知的方法可容易地制备含R基团取代基的化合物。合成膦酸酯的进一步的方法也描述在医学化学杂志(J.Med.Chem.),1988,31,204-212中，该方法也可在下述流程Ⅱ中得到。
A． R′=(CH2)3Ph H．n-C7H15B． (CH2)4Ph I．n-C8H17C． (CH2)5Ph J．n-C9H19D． (CH2)4(P-F-Ph) K．n-C10H22E． (CH2)4-(3-pyridyl) L．CH2(CH)(CH3)C4H9F． n-C5H11M．CH2(CH3)CH(CH3)2G． n-C6H13
N． R′=n-C4H9O． CH(CH3)C5H11流程Ⅱ
以上述膦酸酯为起始原料，有许多路线可用于制备本发明化合物。例如医学化学杂志(J.Med.Chem.),39,619-622中最近描述了一般的路线，该路线如下述流程Ⅲ所示。
流程Ⅲ本发明化合物的另一制备路线描述在下述流程Ⅳ和流程Ⅴ中。流程Ⅳ和流程Ⅴ表示了以膦酸衍生物为起始原料制备本发明化合物的方法，而且R基团可包括任何合理的化学取代基并包括但不局限于说明书流程Ⅱ中所罗列的R基团。
流程Ⅳ
流程Ⅴ
制备本发明化合物的另一路线可允许R1为芳族取代基，该路线描述在下述流程Ⅵ中。
流程Ⅵ制备本发明化合物的另一路线可允许R2为芳族取代基，该路线描述在下述流程Ⅶ中。
流程Ⅶ
其中X为NR1的本发明化合物的制备方法描述在下述流程Ⅷ中。
流程Ⅷ
其中X为氧的本发明化合物的制备方法描述在下述流程Ⅸ中。
流程Ⅸ本发明的药物组合物本发明也涉及一种药物组合物，该药物组合物包含(ⅰ)治疗有效量的式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ化合物；和(ⅱ)可药用载体。
在另一优选的实施方案中，药物组合物进一步地含有治疗剂，所述治疗剂选自治疗激素、化疗剂、单克隆抗体、抗血管形成剂、放射性标记化合物、抗肿瘤剂及其混合物。治疗激素实例包括二乙基己烯雌酚(DES)、亮丙瑞林、氟化胺、乙酸环丙孕酮、酮康唑，优选氨基苯乙哌啶酮。抗肿瘤剂的实例包括5-氟尿嘧啶、硫酸长春碱、磷酸雌二醇氮芥、苏拉明和锶-89。化疗剂实例包括布舍瑞林、三对甲氧基苯氯乙烯、磷酸铬、顺铂、环磷酰胺、地塞米松、阿霉素、雌二醇、戊酸雌二醇、共轭和酯化雌激素、雌酮、乙炔基雌二醇、氟尿苷、戈舍瑞林、羟基脲、苯丙氨酸氮芥、甲氨嘌呤、丝裂霉素和强的松。
在进一步优选的实施方案中，所存在的式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ化合物的量为有效抑制动物NAALAD酶活性或治疗动物前列腺疾病的量。制备药物组合物的方法再一优选的实施方案涉及制备用于治疗疾病的含有本发明化合物的药物组合物或药物。本发明的使用方法ⅰ)抑制NAALAD酶活性的方法本发明还涉及抑制动物NAALAD酶活性的方法，包括给予所述动物有效量的式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ的化合物。ⅱ)治疗前列腺疾病的方法本发明也涉及治疗动物前列腺疾病的方法，包括给予所述动物有效量的式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ的化合物。
在优选的实施方案中，所述前列腺疾病为前列腺癌如前列腺腺癌、良性前列腺增生或与前列腺有关的需要给予本发明化合物的疾病如前列腺上皮内瘤形成(PIN)。ⅲ)治疗癌症的方法除了前列腺癌外，可用本发明化合物治疗的其它形式的癌不受限制地包括产生ACTH的肿瘤、急性淋巴细胞白血病、急性非淋巴细胞白血病、肾上腺皮质癌、膀胱癌、脑癌、乳腺癌、子宫颈癌、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓细胞白血病、结肠直肠癌、皮肤T细胞淋巴瘤、子宫内膜癌、食管癌、尤因瘤、胆囊癌、毛细胞白血病、头颈癌、何杰金淋巴瘤、卡波济肉瘤、肾癌、肝癌、肺癌(小和/或非小细胞)、恶性腹膜渗漏、恶性胸膜渗漏、黑素瘤、间皮瘤、多发性骨髓瘤、成神经细胞瘤、非何杰金淋巴瘤、骨肉瘤、卵巢癌、卵巢(胚细胞)癌、胰腺癌、阴茎癌、视网膜神经胶质瘤、皮肤癌、软组织肉瘤、鳞状细胞癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、绒膜上皮癌、子宫癌、阴道癌、外阴癌和维尔姆斯瘤。
本发明的化合物对于治疗存在有NAALAD酶的组织的癌是特别有用的。此组织包括前列腺以及脑、肾和睾丸。
对于初期存在而没有晚期或转移癌的病人来说，作为药物的NAALAD酶抑制剂在外科和放射治疗前用作立即的起始治疗剂，并用作有复发或转移危险病人的治疗后继续进行治疗的治疗剂(根据高PSA、高Gleason评分、局部扩散的疾病和/或外科切片从病理学上证明肿瘤侵袭来判断)。对这些病人治疗的目的是抑制外科或放射治疗期间原发肿瘤潜在性转移细胞的生长和抑制未能检测到的残余的原发肿瘤的肿瘤细胞的生长。
对于初期存在并为晚期或转移癌的病人来说，作为药物的NAALAD酶抑制剂可作为继续的补充治疗或可能作为去除激素的替代物。对这些病人进行治疗的目的是减缓未治疗的原发肿瘤和存在的转移损伤的肿瘤细胞的生长。
另外，本发明在手术后的恢复过程中是特别灵验的，本发明组合物和方法在减少脱落细胞引起的肿瘤复发的机率，所述细胞不能通过手术的方法来去除。ⅳ)诊断药盒本发明也包括进行本发明方法的诊断药盒，并且可含有包括本发明化合物的化合物和/或组合物。在该方法中可使用放射标记的化合物和单克隆抗体以便提供诊断信息。诊断信息和用途的实例包括确定疾病的类型、特定疾病的进展、靶向于NAALAD酶抑制剂的细胞部位、放射标记的化合物或单克隆抗体以及本领域技术人员已知的类似的诊断用途。给药途径在本发明的方法中，化合物以含有常规无毒性的可药用载体、辅料和赋形剂的剂量制剂的形式可通过口服、非胃肠道给药，通过喷雾吸入、局部、直肠、鼻腔、颊、阴道给药或通过植入药库来给药。本文所使用的术语非胃肠道给药包括皮下、静脉、肌内、腹膜内、鞘内、心室内、胸骨内或颅内注射和输入技术。优选侵入技术，特别是直接给予损伤的神经组织。
由于对中枢神经系统的治疗是有效的，本发明的化合物外周给药时应当渗透通过血脑屏障。不能渗透通过血脑屏障的化合物通过心室内途径有效地给药。
化合物也可以以灭菌可注射制剂如灭菌可注射水或油性悬浮液的形式给药。这些悬浮液可按照本领域已知的技术使用合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂来配制。灭菌可注射制剂也可以是在无毒的非胃肠道可接受的稀释剂或溶剂中的灭菌可注射的溶液或悬浮液如1,3-丁二醇中的溶液。其中，可使用的可接受赋形剂和溶剂是水、林格溶液和等渗的氯化钠溶液。另外，灭菌固定油常用作溶剂或悬浮介质。为此，任何混合的固定油如合成的单或二甘油酯可被使用。脂肪酸如油酸及其甘油酯衍生物，包括橄榄油和蓖麻油，特别是其聚氧乙烯化的形式在可注射制剂中是有用的。这些油溶液或悬浮液也可含有长链醇稀释剂或分散剂。
另外，化合物可以以胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液的形式口服给药。片剂可含有载体如乳糖和玉米淀粉，和/或润滑剂如硬脂酸镁。胶囊可含有稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。水性悬浮液可含有与活性组分混合的乳化剂和悬浮剂。口服剂量形式可进一步含有甜味剂和/或芳香剂和/或着色剂。
化合物还可以以栓剂的形式直肠给药。这些组合物可通过将药物与合适的无刺激的在室温下为固体但在直肠温度下为液体而使得它们在直肠中溶解而释放出药物的赋形剂混合来制备。此赋形剂包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。
而且，化合物可局部给药，特别是所治疗疾病的区域或器官便于通过局部使用来接近，包括眼、皮肤和肠道下端的神经性疾病。
为了局部用于眼睛，或眼睛使用，化合物可被配制成等渗、pH调节的灭菌盐水的微粒化悬浮液或者，优选地配制成等渗的、pH调节的灭菌盐水的有或无防腐剂如氯苄烷铵(benzylalkonium chloride)的溶液。另外，化合物可被配制成软膏，如凡士林软膏。
为了皮肤局部给药，化合物可被配制成含有该化合物的合适的软膏，所述的化合物被悬浮或溶解在如一种或多种下列物质的混合物中矿物油、液体石蜡、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化的石蜡和水。另外，化合物可被配制成含有该活性化合物的合适的洗剂或霜剂，所述活性化合物悬浮或溶解在例如一种或多种下列物质的混合物中矿物油、脱水山梨醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、鲸蜡醇酯石蜡、cetearyl alcohol、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
局部用于肠道下端可制成直肠栓剂制剂(见上文)或合适的灌肠剂。
本发明的化合物可通过单剂量、多次分剂量或连续输注来给药。由于化合物是小的、易于扩散的和相对稳定的，它们非常适于连续输注。抽吸方式，特别是皮下抽吸方式是优选的连续输注法。
本发明的组合物和方法也可使用控释技术。因此，例如，可将NAALAD酶抑制剂与控制在几天内释放的聚合物材料混合。这类控释膜在本领域中是公知的。本发明可使用的常用于该目的的聚合物的例子包括非降解的乙烯-乙酸乙烯酯共聚物和可降解的乳酸-乙醇酸共聚物。也可使用某些水凝胶如聚(羟乙基甲丙烯酸酯)或聚乙烯醇。剂量在治疗上述疾病时，可使用约0.1mg到约10,000mg数量级活性组分化合物的剂量水平，优选约0.1mg到约1,000mg的剂量水平。任何特定病人的具体剂量水平将随各种因素发生变化，包括所使用的具体化合物的活性，病人的年龄、体重、总体健康状况、性别和饮食，给药时间，排泄速率，联合使用的药，被治疗特定疾病的严重程度和给药方式。一般来说，体外量效结果可为病人给药的合适剂量提供有用的指导。动物模型中的研究也是有帮助的，特别是有助于确定治疗癌症的有效剂量。如何确定合适的剂量水平在本领域中是公知的。
在优选的实施方案中，本发明化合物以冻干形式给药。这样，1-100mg的本发明化合物可在各个小瓶中与载体和缓冲剂如甘露醇和磷酸钠一起冻干。给药前，可使用抑制细菌的水将小瓶中的化合物重新配制。
如上所述，本发明的化合物可与一种或多种治疗剂(包括化疗剂)联合给药。表Ⅰ提供了所选化疗剂的已知的中间剂量。这些化疗剂的具体剂量将取决于各种因素，如上文针对本发明化合物所述的那些因素。
表Ⅰ
表1(续表)
给药方案对于本发明的方法来说，任何使药物按时和按序释放的给药方案均可使用并按治疗作用的需要重复。这类方案可包括预治疗和/或与其它治疗剂联合给药。
对于忠有既不是晚期也不是转移的前列腺癌的病人，本发明的化合物可如下使用(ⅰ)手术或放射治疗前用于减少转移的危险；(ⅱ)手术期间或与放射治疗结合使用；和/或(ⅲ)手术或放射治疗之后用于减少复发的危险并抑制任何残余肿瘤细胞的生长。
对于患有晚期或转移的前列腺癌的病人来说，本发明化合物可用作继续补充性治疗剂或用作去除激素的替代剂，以便减慢未治疗原发肿瘤和存在的转移损伤的肿瘤细胞的生长。
本发明方法对于不能通过外科手术去除脱落细胞的病人是特别有用的。手术恢复后，本发明的方法会有效地减少由这类脱落细胞引起的肿瘤的复发率。与其它治疗方法联合使用(ⅰ)外科手术和放射治疗一般来说，外科手术和放射治疗对于年龄在70岁以下的局限于前列腺癌的病人来说是有可能治愈的治疗方法并且有希望至少存活10年。
大约70％新近诊断为前列腺癌的病人处于这种情况。这些病人中大约90％(病人总数的65％)进行手术治疗，同时这些病人中大约10％(病人总数的7％)进行放射治疗。
外科切片的组织病理学检查表明进行外科手术的病人中大约63％(病人总数的40％)有局部扩散的肿瘤或在先前诊断时未检测到的区域性(淋巴结)转移癌。这些病人复发危险性非常大。实际上，这些病人中大约40％将在手术后的5年内复发。放射治疗后甚至很少有作用。以放射治疗作为其主要治疗方法进行治疗的病人中大约80％仍存在疾病或在治疗后5年内复发或转移。
目前，进行外科手术和放射治疗的大多数前列腺癌病人不接受立即的继续治疗。相反地，它们经常被检测到前列腺特异的抗原(“PSA”)升高，该抗原是复发或转移癌的主要指标。
基于上述统计，值得考虑将本发明与外科手术和/或放射治疗结合使用。(ⅱ)激素治疗对于10％患有转移前列腺癌的病人来说，去除激素是最有效的缓解治疗。通过药物治疗和/或睾丸切除来去除激素的方法用于阻断促进前列腺癌进一步生长和转移的激素。同时，实际上所有这些患有原发和转移肿瘤的病人都变得与激素无关并对治疗耐受。大约50％忠有转移癌的病人在最初诊断后的3年内死亡，并且75％的这类病人在诊断后的5年内死亡。用本发明化合物继续进行补充治疗可用于防止或逆转这种潜在的可能转移的状态。(ⅲ)化疗尽管化疗成功地用于某些类型的癌症，但留在最后治疗手段的化疗在治疗前列腺癌时显示微小的治疗价值。因此，化疗与本发明方法联合治疗前列腺癌的机率很小。然而，进行联合治疗时，与单独进行化疗相比，这类治疗方法会更有效地控制前列腺癌。(ⅳ)免疫治疗本发明的化合物也可与单克隆抗体联合用于治疗前列腺癌。这种联合治疗对于忠有涉及骨盆淋巴结的病人(这些病人在5年后仅有34％存活)来说是特别有效的。这类单克隆抗体的例子是细胞膜特异的抗前列腺抗体。
本发明也可与基于多克隆或单克隆抗体衍生试剂的免疫治疗一起使用。优选单克隆抗体衍生的试剂。这些试剂在本领域中是已知的，并且包括放射标记的单克隆抗体如与锶89结合的单克隆抗体。(ⅴ)冷冻疗法本发明的方法也可与冷冻疗法一起用于治疗前列腺癌。实验性研究下列针对本发明化合物和结构上相关的化合物所进行的实验性研究强有力地证明本发明化合物是无毒的并且对抑制NAALAD酶活性、治疗谷氨酸异常和治疗前列腺疾病是有效的。NAALAD酶抑制剂的体内毒性为了检测NAALAD酶抑制剂在体内的毒性作用，给一组小鼠注射2-(膦酰基甲基)戊二酸(一种高活性的NAALAD酶抑制剂)，剂量为1、5、10、30、100、300和500mg/kg体重。随后连续观察小鼠5天，每天两次。下表Ⅱ显示各剂量水平下的存活率。所得结果表明NAALAD酶抑制剂对小鼠是无毒的，暗示以治疗有效量给药时，类似地，本发明化合物对人应当是无毒的。
表Ⅱ
NAALAD酶活性的体外测定试验下列化合物对NAALAD酶活性的体外抑制作用。结果示于下表Ⅲ(a)、Ⅲ(b)和Ⅲ(c)中。
表Ⅲ(a)NAALAD抑制剂的体外活性
2-(膦酰基甲基)戊二酸显示高水平的NAALAD酶抑制活性，Ki为0.27nM(表Ⅲ(a))。该化合物的活性比以前所述的抑制剂强1000倍以上。由于2-(膦酰基甲基)戊二酸在结构上类似于本发明的化合物，所得结果暗示本发明化合物也应当是强的NAALAD酶抑制剂。通过比较，2-(膦酰基甲基)琥珀酸显示低得多的NAALAD酶抑制活性，暗示结合在膦酸上的谷氨酸类似物有助于其NAALAD酶抑制活性。所得结果也显示2-[[(2-羧基乙基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸(具有另外的类似于NAAG中发现的天冬氨酸盐残基的羧酸侧链)显示比2-(膦酰基甲基)戊二酸低的NAALAD酶抑制活性。
表Ⅲ(b)下表Ⅲ(b)中描述了证明具有NAALAD酶活性抑制作用的其它化合物。表Ⅲ(b)中的9个化合物的结果显示本发明各种化合物的显著的Ki活性。这些化合物显示NAALAD酶抑制剂的能力，其中R1包括脂族基、取代的脂族基、芳基和取代的芳基。
表Ⅲ(b)NAALAD酶抑制剂的体外活性
由表Ⅲ(c)提供的进一步结果也显示本发明化合物的显著Ki活性。这些化合物显示NAALAD酶抑制剂的能力，其中R1包括被苄基取代的脂族基，所述苄基进一步被另外的取代基取代。
表Ⅲ(c) NAALAD酶抑制剂的体外活性
NAALAD酶活性体外测定的方法使用30-50μg的突出体蛋白，在37℃下测量15分钟从50nM三羟甲基氨基甲烷缓冲液中的[3H]NAAG解离的[3H]Glu的量。通过阴离子交换液体色谱层析，将底物和产物分离。重复进行测定以便NAAG的消化不超过20％，这代表着肽酶活性的线性范围。使君子酸盐(100μg)包括在平行测定管中以确证测量的特异性。
NAALAD酶抑制剂对癌作用的体外测定现参照附图1和2，检测了NAALAD抑制剂对癌细胞系的作用。用使君子酸(浓度范围为10nM到1μM)和2-(膦酰基甲基)戊二酸(浓度范围为100pM到10nM)处理LNCAP细胞(一种前列腺癌细胞系)。下表Ⅳ中也提供了在各个使君子酸和2-(膦酰基甲基)戊二酸浓度下测量的3H-胸苷。图1和2用图来表示这些数据并且具体说明了用NAALAD酶抑制剂处理的细胞在增殖和胸苷的摄入上都有所减少。
表Ⅳ 3H-胸苷结合作用(dpm/孔)剂量使君子酸2-(膦酰基甲基)戊二酸对照4813±572 4299±88710pM -- 3078±1006100pM -- 2062±5951nM 3668±866 1001±5210nM2137±764 664±366100nM 1543±312 --1μM1295±181 --所得结果表明LNCAP细胞增殖(通过3H-胸苷结合量来测量)随NAALAD酶抑制剂的增加而明显减少，暗示本发明化合物治疗癌，特别是前列腺癌会是有效的。体外测定癌的方法将含有10％胎牛血清(FCS)的RPMI 1640介质中的细胞涂布在24孔板中并允许粘合24小时，然后加入使君子酸(10-9到10-6)或2-(膦酰基甲基)戊二酸(10-11到10-8)7天。在第7天，用3H-胸苷脉冲细胞4小时、收获并测定放射活性。所得值代表各自处理的6个独立的细胞孔的平均值+/-SEM。所有实验都进行至少两次。
为了控制使君子酸和2-(膦酰基甲基)戊二酸的非特异抑制细胞效应，将这两种试剂同时在含有前列腺细胞系，DU145(Carter等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,(93)749-753,1996)的非NAALAD酶上进行评价。如果用使君子酸和2-(膦酰基甲基)戊二酸处理对细胞生长没有明显的影响，那么这两种试剂的NAALAD酶抑制活性对前列腺癌细胞系的抑制细胞效应有独特的作用。细胞系和组织培养从马里兰巴尔的摩Johns Hopkins School of Medicine的WilliamNelson博士处得到LNCAP细胞。DU145从美国典型培养物收藏中心(ATCC,Rockville，马里兰)获得。细胞在37℃、5％CO2/95％空气、湿润的保温培养箱、RPMI-1640培养介质中生长，所述培养介质补充有5％热灭活的胎牛血清、2mM谷氨酰胺、100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素(Paragon)。[3H]胸苷结合测定将细胞以1×103细胞/ml浓度悬浮在RPMI-1640培养介质中并以每孔500μl接种在24孔板中。保温培养24小时后，将各种浓度的使君子酸(Sigma)或有效的NAALAD酶抑制剂2-(膦酰基甲基)戊二酸(按照Jackson等描述的方法合成，J.Med.Chem 39(2)619-622)加到孔中并将板放回保温培养箱。在3、5和7天，复新培养介质和药物。在接种后第8天，用1μCi3H-胸苷(New England Nuclear)脉冲各孔4小时。然后除去培养介质并用磷酸盐缓冲的盐水(pH=7.4)洗涤两次。随后将孔中的成分溶解在250μl的0.2NNaOH中并转移到闪烁管中。加入5ml UltimaGold(Packard)闪烁液并使用Beckman LS6001闪烁计数器定量放射活性。化合物合成的一般方法所有合成化合物的纯度和/或鉴定都通过薄层色谱层析、高压液相色谱(HPLC)、质谱和元素分析来确定。使用Bruker光谱仪获得质子核磁共振(NMR)谱。化学位移值以相对于内标四甲基硅烷的百万分子份数来表示。在预先铺制的硅胶GHLF板(Analtech,Newark,DE)上进行分析性薄层色谱层析(TLC)。使用UV光、磷钼酸-乙醇和/或碳化的碘铂酸盐使板显色。在Kieselgel 60,230-400目(E Merck,Darmstadt,WestGermany)上进行闪式色谱层析。溶剂或者是普通试剂或者是HPLC级的。反应在室温下和氮气环境中进行，除非另有注释。在Buchi旋转蒸发仪上减压下蒸发溶液。体内LNCaP肿瘤异种移植测定和结果现参照附图3和4，将LNCaP人前列腺癌细胞皮下注入雄性裸鼠的右侧胁部。肿瘤体积大约到50-70mm3时开始每日肿瘤内注射给予2-(膦酰基甲基)戊二酸(一种NAALAD酶抑制剂，0.25μg/天)。包括使用含有2-(膦酰基甲基)戊二酸的硅聚合物的其它组，它将大约0.25μg/天的药物局部释放到肿瘤中。2-(膦酰基甲基)戊二酸聚合物被变成每周两次。开始治疗后，检测肿瘤体积42天。实验方法细胞系LNCaP是人前列腺癌细胞系，该细胞系建立于1973年，来自病人的腹膜积液，病人在创建细胞系前已用5-FU、阿霉素、甲氨喋呤和CTX治疗3个月。该细胞系是雄激素受体阳性的并用于筛选作为激素拮抗剂的抗癌药物。LNCaP在具有1.5g NaHCO3/L、10％胎牛血清(FBS)和2mM L-谷氨酰胺的RPMI中生长并在37℃、湿润的5％CO2/空气培养保温箱中保持。不将抗生素加到培养介质中。动物肿瘤模型NCr裸体(nu/nu)雄性小鼠，4-5周龄，购自Taconie(Germantown，纽约)。动物被饲养在通风笼架上的顶端无菌过滤的笼中，每笼4只。动物到来时，使用前将它们检疫4个工作日。温度保持在72+5°F并且相对湿度为35-70％，使用12小时亮/暗循环。小鼠以无菌的、可高压灭菌的、被证明了的Purina啮齿动物饲料随意喂养。饮用的水被酸化并高压灭菌，水源被再循环、去离子、UV处理和5-μm过滤。
动物检疫后，给小鼠的右胁部位皮下注射在MatrigelTM(0.1ml注射体积)中的1×107LNCaP细胞。每周两次测量肿瘤大小和体重。用游标尺测径器从3个平面测量肿瘤，并如下计算肿瘤的体积(V)V=π(x·y·z)/6，其中x、y、z为测量的肿瘤减去皮肤厚度。实验结束时，通过CO2吸入然后断颈处死小鼠。药物2-(膦酰基甲基)戊二酸以2.5mg/ml的浓度在水中配制。含有2-(膦酰基甲基)戊二酸的聚合物可通过将140mg NaCL研磨成细粉，然后与5mg 2-(膦酰基甲基)戊二酸和350mg硅氧烷胶混合来配制。将化合物涂布在薄膜上并允许干燥24小时。该材料切成1-1.5mg的片用于皮下植入。治疗方法肿瘤体积长到预定大小(平均肿瘤体积50-70mm3)时，将小鼠随机分入治疗组中，每组6-8只。所有治疗动物都每日给药，至少4周。2-(膦酰基甲基)戊二酸被每日注入肿瘤内，每次注射体积为0.05ml，其中含有0.025μg 2-(膦酰基甲基)戊二酸。
含有2-(膦酰基甲基)戊二酸的聚合物(10μg 药物/mg聚合物)植入皮下。用metafane麻醉小鼠并在肿瘤部位的附近切一小口(＜2mm)。植入后，用伤口钳封闭切口。聚合物每周替换两次。
第一次治疗后，每周测量两次肿瘤，至少测量8周。计算每个时间点上的每组小鼠肿瘤的平均体积。采用非成对的双尾t-测验，对特定时间的各组进行比较，所得数据使用方差分析法(ANOVA)进行分析。
通过治疗后体重的下降来评价系统性毒性。治疗结束时或如果其肿瘤体积达到1600mm3或肿瘤溃疡时早一些处死小鼠。统计分析使用JMP(SAS Institute Inc.,Cary,NC)进行上文所述的统计分析。体内大鼠Dunning R3327模型现参见附图5和6,Dunning R3327-G前列腺癌细胞皮下注入同源雄性大鼠的两侧胁部。在第一个研究中，每日皮下注射药物(1、3、10和30mg/kg)后试验2-(膦酰基甲基)戊二酸的抗肿瘤生长活性。2-(膦酰基甲基)戊二酸注射和肿瘤测量继续进行12周。在第二个研究中，肿瘤长到80-290mm3时每日肿瘤内注射药物(0.1、1、10、100μg)后试验2-[[(苯基甲基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸的抗肿瘤生长活性。开始药物治疗后，测量肿瘤体积42天。实验方法细胞系R3327-G是由雄激素敏感的乳头状腺瘤衍生的细胞系，所述腺瘤是由前列腺中自主形成的肿瘤衍生的。R3327-G细胞在含有10％胎牛血清(FBS)、2mML-谷氨酰胺和10-8M地塞米松的RPMI中生长。培养物被保持在37℃、湿润的5％CO2/空气保温箱中。不将抗生素加到培养介质中。
动物肿瘤模型
Copenhagen雄性大鼠，8-10周龄，购自Harlan Sprague Dawly(印第安纳波利斯，IN)。动物被每笼两只进行饲养。动物到来时，使用前将它们检疫4个工作日。温度保持在72+5°F并且相对湿度为35-70％，使用12小时亮/暗循环。大鼠以被证明了的Purina啮齿动物饲料和水随意喂养。
动物检疫后，给大鼠的双侧胁部位皮下注射1×107R3327-G细胞(0.1ml注射体积)。每周两次测量肿瘤大小和体重。用游标尺测径器从3个平面测量肿瘤，并如下计算肿瘤的体积(V)V=π(x×y×z)/6,其中x、y、z为测量的肿瘤减去皮肤厚度。肿瘤细胞注射4-5周后，肿瘤开始显现。实验结束时，通过CO2吸入处死大鼠。药物2-(膦酰基甲基)戊二酸分别在注射前一天在生理盐水中新鲜配制。2-[[(苯基甲基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸储备液以2.5mg/ml的浓度在水中配制；每周新鲜制备10倍系列稀释液用于注射。治疗方法在2-(膦酰基甲基)戊二酸研究中，肿瘤植入后14天开始每日给大鼠皮下注射药物并继续12周。在2-[[(苯基甲基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸研究中，直到肿瘤体积长到预定大小(平均肿瘤体积50-70mm3)时，给予药物。此时，将大鼠分为每组5只大鼠的治疗组。此后，所有治疗动物都每日肿瘤内给予2-[[(苯基甲基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸，给药4周。
每周测量两次肿瘤。计算每个时间点上的每组小鼠肿瘤的平均体积。采用非成对的双尾t-测验，对特定时间的各组进行比较，所得数据使用方差分析法(ANOVA)进行分析。对于2-[[(苯基甲基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸来说，各个肿瘤体积(V)被表示为0天(治疗的第一天)肿瘤体积(V0)的分数。对于各组来说，用V/V0比的平均值以治疗后时间为函数作图。统计分析使用JMP(SAS InstituteInc.,Cary,NC)进行上文所述的统计分析。实施例下列实施例用于说明本发明化合物的使用和制备方法的优选实施方案而不对本发明构成限制。除非另有说明，所有百分数都基于最终制剂100％来计算。实施例1制备2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]戊二酸流程Ⅳ R=CH3,R1=CH2Ph甲基-邻-苄基膦酸将在80ml无水乙醚中的二氯甲基亚磷酸酯(10.0g,77mmol)在氮气下冷却到-20℃。保持内部温度在0℃-10℃范围的同时，在1小时中滴加苯甲醇(23g,213mmol)和三乙胺(10.2g,100mmol)的40ml乙醚溶液。加完后，立即将混合物温热到室温并搅拌过夜。过滤混合物并用200ml乙醚洗涤固体滤饼。合并有机物并减压蒸发而获得25g透明且无色的液体。通过闪式色谱层析纯化液体并用1∶1己烷/乙酸乙酯到乙酸乙酯的梯度洗脱。收集所需馏分并蒸发而获得透明且无色油状的甲基邻苄基膦酸(1,R=CH3,R1=CH2Ph,6.5g,50％,R0％)。Rf0.1(1∶1，己烷/乙酸乙酯)。
1H NMR(d6-DMSO):7.4ppm(m,5H),7.1ppm(d,1H),5.0ppm(dd,2H),1.5ppm(d,3H)2,4-二(苄氧基羰基)丁基(甲基)-邻-苄基膦酸将在200ml二氯甲烷中的甲基邻苄基膦酸(3.53g,20.7mmol)在氮气下冷却到-5℃。通过注射器加入三乙胺(3.2g,32mmol)，然后加入三甲基硅烷氯化物(2.9g,27mmol)。搅拌混合物并在1小时内温热到室温。加入在10ml二氯甲烷中的二苄基2-亚甲基戊二酸酯(2,6.0g,18.5mmol)。然后在室温下将混合物搅拌过夜。反应混合物被冷却到0℃并加入三甲基铝(9ml,18mmol,2.0M在二氯甲烷中)。温热烧瓶并搅拌72小时。将透明淡黄色溶液冷却到5℃并通过缓慢加入5％盐酸骤冷。骤冷的反应混合物被温热到室温并分出有机层。用5％盐酸和水洗涤有机层。干燥(MgSO4)有机层并减压蒸发而获得8g透明淡黄色油状物。在硅胶上纯化油状物并用1∶1己烷/乙酸乙酯到100％7酸乙酯的梯度洗脱。收集所需馏分并蒸发而获得透明无色油状的2,4-二(苄氧基羰基)丁基(甲基)-邻-苄基膦酸(3,R=CH3,R1=CH2Ph,0.8g,8％)。Rf0.5(乙酸乙酯)。
1H NMR(CDCL3):7.4ppm(m,15H),5.1ppm(m,6H),3.0ppm(m,1H),2.4ppm(m,3H),1.5ppm(dd,3H)元素分析计算值C28H31O5P·0.5H2O:C 68.01,H 6.32实测值C66.85,H 6.352-[(里基羟基氧膦基)甲基]戊二酸将在20ml含有100mg10％披钯碳的水中的2,4-二(苄氧基羰基)丁基(甲基)-邻-苄基膦酸(0.8g,1.6mmol)于40psi下氢化4小时。经硅藻土垫板过滤混合物并在高真空下蒸发而获得透明无色粘稠油状的2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]戊二酸(4,R=CH3,0.28g,78％)。
1H NMR(D2O):2.5ppm(m,1H),2.2ppm(t,2H),2.0ppm(m,1H),1.7ppm(m,3H),1.3ppm(d,3H)元素分析计算值C7H13O5P·0.2H2O:C 36.92H 5.93实测值C37.06H 6.31实施例2制备2-[(丁基羟基氧膦基)甲基]戊二酸流程Ⅳ R=正丁基，R1=H将在60ml无水乙醚中的丁基膦酸二乙基氯亚磷酸酯(25g,0.16mol)在氮气下冷却到0℃。保持内部温度在0℃的同时，在2小时中滴加丁基镁氯化物(80ml,0.16mol,2.0M在乙醚中的溶液)。加完后，立即将稠的白色淤浆加热到30℃保持1小时。在氮气下过滤悬浮液并在减压下蒸发滤液。然后将透明淡黄色液体加到15ml水中并在室温下搅拌。此后再加入浓盐酸(0.5ml)并观察放热反应。再搅拌混合物15分钟并用乙酸乙酯提取两次，每次75ml。合并有机相，干燥(硫酸镁)并蒸发而获得透明无色液体。用氢氧化钠(40ml,20M)处理液体并搅拌1小时。然后用乙醚洗涤混合物并酸化到pH1.0。用乙酸乙酯从酸化提取物中提取所需材料两次，每次100ml。合并有机相，干燥(硫酸镁)并减压蒸发而获得透明无色液体丁基膦酸(1,R=正丁基，R1=H,10g,51％)。
1H NMR(d6-DMSO):6.9ppm(d,1H),1.6ppm(m,2H),1.4ppm(m,4H),0.9ppm(t,3H)丁基[2,4-二(苄氧基羰基)丁基]膦酸将在80ml无水二氯甲烷中的丁基膦酸(2.0g,16mmol)在氮气下冷却到0℃。加入三乙胺(6.7g,66mmol)然后加入三甲基硅烷氯化物(58ml,58mmol,1.0M在二氯甲烷中)。在0℃下搅拌混合物10分钟并加入在20ml二氯甲烷中的二苄基2-亚甲基戊二酸酯(2)(6.4g,20mmol)。移去冷浴、将反应物温热到室温并搅拌过夜。然后将混合物冷却到0℃并通过缓慢加入5％盐酸进行骤冷。然后分出二氯甲烷层并用5％盐酸和盐水洗涤。干燥有机层(硫酸镁)并蒸发而获得透明淡金黄色液体。经闪式色谱层析纯化液体并用含有5％乙酸的3∶1己烷/乙酸乙酯洗脱。合并所需馏分并蒸发而获得透明无色油状的丁基[2,4-二(苄氧基羰基)丁基]膦酸(3,R=正丁基，R1=H)(2.9g,40％)。Rf0.12(3∶1，己烷/乙酸乙酯5％乙酸)。
1H NMR(d6-DMSO):7.3ppm(m,10),5.0ppm(s,4H),2.7ppm(m,1H),2.3ppm(y,2H),1.8ppm(m,2H),1.3ppm(m,4H),0.8ppm(t,3H)2-[(丁基羟基氧膦基)甲基]戊二酸将在30ml含有0.32g 10％披钯碳的水中的丁基[2,4-二(苄氧基羰基)丁基]膦酸(2.9g,6.5mmol)于帕尔氢化器中40psi下氢化4.5小时。经硅藻土垫板过滤混合物并在高真空下蒸发而获得透明无色粘稠油状的2-[(丁基羟基氧膦基)甲基]戊二酸(4,R=正丁基，0.75g,43％)。
1H NMR(D2O):2.4ppm(m,1H),2.1ppm(t,2H),1.9ppm(m,1H),1.6ppm(m,3H),1.4ppm(m,2H),1.1ppm(m,4H),0.6ppm(t,3H)元素分析计算值C10H19O5P·0.5H2O:C 43.64H 7.32实测值C43.25H 7.12实施例3制备2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]戊二酸流程Ⅳ R=CH2Ph,R1=H苄基膦酸将在100ml无水乙醚中的二乙基氯亚磷酸酯(25g,0.16mol)在氮气下冷却到0℃。保持温度低于10℃的同时，在2小时中滴加苄基镁氯化物(80ml,0.16mol,2.0M在乙醚中的溶液)。形成稠的白色淤浆并在室温下搅拌1小时。在氮气下过滤混合物并在减压下蒸发滤液而获得透明无色液体。将液体搅拌并加到15ml水中，此后再加入0.5ml浓盐酸。观察放热反应并再搅拌30分钟，此后用乙酸乙酯提取。合并有机相，用盐水洗涤、干燥(硫酸镁)并蒸发。将所得透明淡金黄色液体加到氢氧化钠(50ml,2.0M氢氧化钠)中、搅拌1小时并用乙醚洗涤。用浓盐酸将水层酸化到pH1.0并用乙酸乙酯提取。合并有机相，干燥(硫酸镁)并减压蒸发而获得透明淡金黄色油状的苄基膦酸(1,R=CH2Ph,R1=H,8g,32％)。
1H NMR(d6-DMSO):7.3ppm(m,5H),6.9ppm(d,1H),3.1ppm(d,2H)苄基[2,4-二(苄氧基羰基)丁基]膦酸将在150ml无水二氯甲烷中的苄基膦酸(2.3g,15mmol)在氮气下冷却到0℃。加入三乙胺(6.5g,65mmol)然后加入三甲基硅烷氯化物(5.8g,54mmol)同时保持反应温度在0℃。30分钟后,在5分钟内加入在20ml二氯甲烷中的二苄基2-亚甲基戊二酸酯(2)(6.4g,20mmol)。放置反应物而使其温热到室温并搅拌过夜。将透明溶液冷却到0℃并用5％盐酸再用盐水进行骤冷、干燥(硫酸镁)并蒸发而获得透明黄色液体。经闪式色谱层析纯化并用含有10％乙酸的1∶1己烷/乙酸乙酯洗脱而获得透明淡黄色油状的苄基[2,4-二(苄氧基羰基)丁基]膦酸(3,R=CH2Ph,R1=H)(2.0g,28％)。Rf0.37(1∶1，己烷/乙酸乙酯，10％乙酸)。
1H NMR(d6-DMSO):7.2ppm(m,15H),5.0ppm(s,4H),3.0ppm(d,2H),2.8ppm(m,2H),2.3ppm(t,2H),1.9ppm(m,2H),1.7ppm(t,1H)2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]戊二酸将在20ml含有120mg 10％披钯碳的水中的苄基[2,4-二(苄氧基羰基)丁基]膦酸(0.5g,1.0mmol)于帕尔氢化器中40psi下氢化6小时。经硅藻土垫板过滤并在高真空下蒸发而获得0.17g(57％)白色固体的2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]戊二酸(4,R=CH2Ph)。
1H NMR(D2O):7.1ppm(m,5H),2.9ppm(d,2H),2.4ppm(m,1H),2.1ppm(t,2H),1.8ppm(m,1H),1.6ppm(m,3H)元素分析计算值C13H17O6P:C 52.00H 5.71实测值C 51.48H 5.70实施例4制备2-[(苯乙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸流程Ⅳ R=CH2CH2Ph,R1=H苯乙基膦酸将在100ml无水乙醚中的二乙基氯亚磷酸酯(15.6g,0.1mol)在氮气下冷却到5℃。保持温度在0-10℃的同时，在2小时中滴加苯乙基镁氯化物(100ml,0.1mol,1.0M在THF中)。形成稠的白色淤浆并在室温下搅拌过夜。在氮气下过滤混合物并在减压下蒸发滤液而获得透明无色液体。将液体搅拌并加到15ml水中，此后再加入0.5ml浓盐酸。观察放热反应并再搅拌15分钟，此后用乙酸乙酯提取。合并有机相，用盐水洗涤、干燥(硫酸镁)并蒸发。将所得透明液体加到氢氧化钠(40ml,2.0M氢氧化钠)中、搅拌1小时并用乙醚洗涤一次。用浓盐酸将水层酸化到pH1.0并用乙酸乙酯提取。合并有机相，干燥(硫酸镁)并蒸发而获得透明淡金黄色油状的苯乙基膦酸(1,R=CH2CH2Ph,R1=H,9.8g,58％)。
1H NMR(d6-DMSO):7.2ppm(m,5H),6.9ppm(d,1H),2.8ppm(m,2H),1.9ppm(m,2H)苯乙基[2,4-二(苄氧基羰基)丁基]膦酸将在50ml无水二氯甲烷中的苯乙基膦酸(1.0g,5.9mmol)在氮气下冷却到-5℃。加入三乙胺(2.3g,23mmol)，然后加入三甲基硅烷氯化物(2.2g,21mmol)，同时保持反应温度在0℃。10分钟后，在10分钟内加入在10ml二氯甲烷中的二苄基2-亚甲基戊二酸酯(2)(6.4g,20mmol)。放置反应物而使其温热到室温并搅拌过夜。将透明溶液冷却到0℃并用5％盐酸骤冷，此后分离有机层。用盐水洗涤有机层、干燥(硫酸镁)并蒸发而获得透明淡金黄色液体。经闪式色谱层析纯化并用含有5％乙酸的1∶1己烷/乙酸乙酯洗脱而获得1.2g(41％)透明无色油状的苯乙基[2,4-二(苄氧基羰基)丁基]膦酸(3,R=CH2CH2Ph,R1=H)。
1H NMR(d6-DMSO):7.2ppm(m,15H),5.0ppm(s,4H),3.3ppm(m,1H),2.8ppm(m,4H),2.3ppm(m,2H),1.8ppm(m,4H)2-[(苯乙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸将在20ml含有120mg 10％披钯碳的水中的苯乙基[2,4-二(苄氧基羰基)丁基]膦酸(1.1g,2.2mmol)于帕尔氢化器中40psi下氢化过夜。经硅藻土垫板过滤并在高真空下蒸发而获得0.8g(114％)白色固体的2-[(苯乙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸(4,R=CH2CH2Ph)。
1H NMR(D2O):7.2ppm(m,5H),2.7ppm(m,2H),2.5ppm(m,1H),2.3ppm(t,2H),1.9ppm(m,6H),1.5ppm(t,1H)元素分析计算值C14H19O6P·0.75H2O,0.5 AcOH:C 50.35H 6.34实测值C 50.26H 5.78实施例5制备2-[(3-苯丙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸流程Ⅳ R=CH2CH2CH2Ph,R1=H在氮气下，将20ml无水乙醚中的镁削(2.44g,0.10mol)加到一些碘晶体中。在80ml乙醚中的苯基丙基溴化物(20.0g,0.10mol)置于滴液漏斗中。大约10ml的溴化物溶液被加到镁削中并开始搅拌。几分钟后，碘被消耗并在保持35℃温度的同时再加入苯基丙基溴化物。完成加入之后(1.5小时)，立即密封混合物并在5℃纯粹。
在50ml无水乙醚中的二乙基氯亚磷酸酯(15.7g,0.1mol)在氮气下冷却到5℃。保持温度在0-10℃的同时，在2小时中滴加苯丙基镁氯化物(100ml,0.1mol,1.0M在乙醚中的溶液)。形成稠的白色淤浆并在室温下再搅拌30分钟。在氮气下过滤混合物并在减压下蒸发滤液而获得透明无色液体。将20ml水加到液体中，此后再加入0.5ml浓盐酸。观察放热反应并再搅拌20分钟，此后用乙酸乙酯提取。合并有机相，用盐水洗涤、干燥(硫酸镁)并蒸发。将所得透明液体加到氢氧化钠(40ml,2.0M氢氧化钠)中，搅拌所得溶液1小时并用乙醚洗涤。用浓盐酸将水层酸化到pH1.0并用乙酸乙酯提取两次。合并有机相，干燥(硫酸镁)并蒸发而获得透明无色油状的3-苯丙基膦酸(1,R=CH2CH2CH2Ph,R1=H,9.8g,53％)。
1H NMR(d6-DMSO):7.2ppm(m,5H),6.9ppm(d,1H),2.6ppm(t,2H),1.7ppm(m,2H),1.6ppm(m,2H)2,4-二(苄氧基羰基)丁基(3-苯丙基)膦酸将在50ml无水二氯甲烷中的3-苯丙基膦酸(1.0g,5.4mmol)在氮气下冷却到-5℃。加入三乙胺(2.2g,22mmol)，然后加入三甲基硅烷氯化物(2.1g,19mmol)，同时保持反应温度在0℃。10分钟后，在10分钟内加入在10ml二氯甲烷中的二苄基2-亚甲基戊二酸酯(2)。将反应物温热到室温并搅拌过夜。将透明溶液冷却到0℃并用5％盐酸骤冷，此后分离有机层。用盐水洗涤有机层、干燥(硫酸镁)并蒸发而获得透明淡黄色液体。经闪式色谱层析纯化并用含有5％乙酸的4∶1己烷/乙酸乙酯洗脱而获得1.5g(56％)透明淡黄色油状的2,4-二(苄氧基羰基)丁基(3-苯丙基)膦酸(3,R=CH2CH2CH2Ph,R1=H)。Rf 0.58(1∶1己烷/乙酸乙酯，5％乙酸)。
1H NMR(d6-DMSO):7.2ppm(m,15H),5.0ppm(s,4H),2.7ppm(m,1H),2.5ppm(m,5H),2.2ppm(m,2H),1.8ppm(m,3H),1.6ppm(m,2H)元素分析计算值C29H33O6P·1.3H2O:C 65.48H 6.75实测值C 65.24H 6.392-[(3-苯丙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸将在20ml含有150mg 10％披钯碳的水中的2,4-二(苄氧基羰基)丁基(3-苯丙基)膦酸(1.4g,2.8mmol)于帕尔氢化器中40psi下氢化过夜。经硅藻土垫板过滤并在高真空下蒸发而获得0.8g(89％)淡黄色粘稠油状的2-[(苯丙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸(4,R=CH2CH2CH2Ph)。
1H NMR(D2O):7.4ppm(m,5H),2.7ppm(m,3H),2.4ppm(t,3H),1.8ppm(m,7H)元素分析计算值C15H21O6P·0.75H2O,0.5 AcOH:C 51.23H 6.64实测值C 50.85H 6.02实施例6制备2-[[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸流程Ⅴ，化合物5将六甲基乙硅烷(21.1ml,100mmol)加到剧烈搅拌的膦酸铵(8.30g,100mmol)中，并将所得悬浮液在105℃搅拌2小时。然后将4-甲基苄基溴化物(5.00g,27.0mmol)溶液滴加到0℃的悬浮液中。混合物在室温下搅拌19小时。然后用二氯甲烷(50ml)稀释反应混合物并用1N HCL(50ml)洗涤。分出有机层、硫酸钠干燥并浓缩而获得4.72g白色固体。将其溶于二氯甲烷(50ml)中并将苯甲醇(3.24g,30mmol)加到该溶液中。然后在0℃下将1,3-二环己基碳二亚胺(DCC)(6.19g,30mmol)加到该溶液中并在室温下将该悬浮液搅拌14小时。减压除去溶剂并将残余物悬浮在乙酸乙酯中。过滤所得悬浮液并浓缩滤液。经硅胶色谱层析纯化残余物(己烷∶乙酸乙酯，4∶1到1∶1)而获得2.40g白色固体的4-甲基苄基-邻-苄基膦酸(2,R=4-甲基苄基，产率34％)Rf0.42(乙酸乙酯)；1HNMR(DMSO-d6)δ 2.30(s,3H),3.29(d,J=16.6Hz,2H),5.2(m,2H),7.0(d,J=543Hz,1H),7.1-7.2(m,4H),7.3-7.4(m,5H)。
在0℃温度下，将氢化钠(0.10g,60％油悬浮液)加到4-甲基苄基-邻-苄基膦酸(2,R=4-甲基苄基)(2.16g,8.3mmol)的THF(15ml)溶液中，然后加入二苯基2-亚甲基戊二酸酯，并将混合物在室温下搅拌4小时。然后用乙酸乙酯(50ml)稀释反应混合物并倾入1 N HCL(50ml)中。分出有机层、硫酸钠干燥并浓缩。经硅胶色谱层析纯化该材料(己烷∶乙酸乙酯，4∶1到1∶1)而获得3.41g无色油状的2,4-二(苄氧基羰基)丁基(4-甲基苄基)-邻-苄基膦酸(4,R=4-甲基苄基，70％产率)Rf 0.61(乙酸乙酯)；1H NMR(CDCL3)δ1.6-1.8(m,1H),1.9-2.0(m,2H),2.1-2.4(m,6H),2.7-2.9(m,1H),3.05(dd,J=9.0,16.8Hz,2H),4.8-5.1(m,6H),7.0-7.1(m,4H),7.2-7.4(m,15H)。
在2,4-二(苄氧基羰基)丁基(4-甲基苄基)-邻-苄基膦酸(0.70g,1.2mmol)的乙醇(30ml)溶液中加入钯-碳(5％,0.10g)并在氢气下(50psi)将悬浮液振摇18小时。然后将悬浮液滤过硅藻土垫板并减压浓缩。所得残余物溶于蒸馏水(5ml)、通过AG 50W-X8树脂柱(H+型)，并冷冻干燥而获得0.21g的白色固体2-[[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸(5,R=4-甲基苄基，55％产率)Rf 0.62(i-PrOH∶H2O,7∶3)；1HNMR(D2O)δ1.7-1.9(m,3H),2.0-2.2(m,1H),2.33(dt,J=1.7Hz,7.4Hz,2H),2.55-2.70(m,1H),3.12(d,J=16.5Hz,2H),7.0-7.1(m,2H),7.2-7.3(m,2H)。分析计算值C13H17O6P*0.30H2O:C,52.60；H,6.18。实测值C,52.60；H,6.28实施例7制备2-[[(4-氟苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸(R=4-氟苄基)流程Ⅴ，按以上其中R=甲基苄基的实施例所述的方法来制备Rf0.64(i-PrOH∶H2O,7∶3)；1H NMR(D2O)δ1.7-1.9(m,3H),2.0-2.2(m,1H),2.3-2.4(m,2H),2.55-2.70(m,1H),3.12(d,J=16.5Hz,2H),7.0-7.1(m,2H),7.2-7.3(m,2H)。分析计算值C13H16FO6P*0.25H2O:C,48.38；H,5.15。实测值C,48.38；H,5.15实施例8制备2-[[(4-甲氧基苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸(R=4-甲氧基苄基)流程Ⅴ，按以上其中R=甲基苄基的实施例所述的方法来制备Rf0.56(i-PrOH∶H2O,7∶3)；1H NMR(D2O)δ1.8-1.9(m,3H),2.0-2.2(m,1H),2.3-2.4(m,2H),2.55-2.70(m,1H),3.16(d,J=16.7Hz,2H),3.81(s,3H),6.98(d,J=8.7Hz,2H),7.25(d,J=8.7Hz,2H)。分析计算值C14H19O7P*0.30H2O:C,50.09；H,5.89。实测值C 49.98；H,5.80实施例9制备2-[[(2-氟苄基)羟基氧基]甲基]戊二酸(R=2-氟苄基)流程Ⅴ，按以上其中R=甲基苄基的实施例所述的方法来制备Rf0.67(i-PrOH∶H2O,7∶3)；1H NMR(D2O)δ1.8-1.9(m,3H),2.0-2.2(m,1H),2.3-2.4(m,2H),2.55-2.70(m,1H),3.28(d,J=16.6Hz,2H),7.1-7.5(m,4H)。分析计算值C13H16FO6P*0.10H2O:C,48.79；H,5.10。实测值C48.84；H,5.14实施例10制备2-[[(五氟苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸(R=五氟苄基)流程Ⅴ,按以上其中R=甲基苄基的实施例所述的方法来制备Rf0.69(i-PrOH∶H2O,7∶3)；1H NMR(D2O)δ1.8-2.0(m,3H),2.1-2.3(m,1H),2.3-2.5(m,2H),2.7-2.9(m,1H),3.29(d,J=15.4Hz,2H)。分析计算值C13H12F5O6P*0.45H2O:C,39.20；H,3.26。实测值C 39.17；H,3.28实施例11制备2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]戊二酸流程Ⅵ，化合物92,4-二(苄氧基羰基)丁基膦酸(6)将无水膦酸(100g,1.52mol)溶于100ml氯仿并用三乙胺(155g,1.52mol)处理。蒸发混合物并转移到3升的烧瓶中，其中装有75ml氯仿。通过机械搅拌器搅拌溶液并将烧瓶冷却到0℃。用三乙胺(277g,2.72mol)处理透明溶液再用三甲基甲硅烷基氯化物(281g,2.58mol)处理。加完三甲基甲硅烷基氯化物后，立即在20分钟内滴加在150ml氯仿中的二苄基2-亚甲基戊二酸酯(2)。移开低温浴并将混合物温热到室温。6小时后，过滤粘稠淤浆并将滤液冷却到0℃。然后用5％盐酸骤冷滤液并分出有机层。用氯仿提取水层，合并有机层、干燥(硫酸镁)并减压蒸发而获得55g淡黄色液体的2,4-二(苄氧基羰基)丁基膦酸(6)。通过闪式色谱层析纯化液体并用含有5％三氟乙酸的3∶1己烷/乙酸乙酯而获得40g(7％)所需产物。Rf 0.28(3∶1己烷/乙酸乙酯5％TFA)；1H NMR(CDCL3):7.3ppm(m,10H),7.2ppm(d,1H),5.12ppm(s,2H),2.9ppm(m,1H),2.4ppm(t,2H),2.2ppm(m,1H),2.0ppm(m,3H)2,4-二(苄氧基羰基)丁基苄基膦酸(7)
将苯甲醇(5.3g,49.3mmol)和二甲基氨基吡啶(0.5g)加到2,4-二(苄氧基羰基)丁基膦酸(6)(19.3g,49.4mmol)的四氢呋喃溶液中。加入二环己基碳二亚胺(DCC,12g,58mmol)而形成白色沉淀。30分钟后，过滤白色悬浮液并减压蒸发滤液。通过闪式色谱层析纯化透明无色油状物并用1∶1己烷/乙酸乙酯洗脱而获得透明无色油状的2,4-二(苄氧基羰基)丁基苄基膦酸(7)(11.5g,47％)。Rf.0.16(1∶1己烷/乙酸乙酯)；1H NMR(CDCL3):7.3ppm(m,15H),7.2ppm(d,1H),5.0ppm(m,6H),2.9ppm(m,1H),2.2ppm(m,3H),1.9ppm(m,3H)2,4-二(苄氧基羰基)丁基[羟基(苯基)甲基]苄基膦酸(8)在5ml无水THF中的2,4-二(苄氧基羰基)丁基苄基膦酸(7)滴加到搅拌冷却(0℃)的氢化钠(0.09g,2.3mmol)的15mlTHF混合物中。15分钟后，在保持0℃温度的同时，通过注射器加入苯甲醛(0.23g,2.2mmol)。30分钟后，用水使混合物骤冷并用二氯甲烷提取两次。合并有机层并蒸发而获得透明无色油状物。将油状物在硅胶上机械色谱层析并用1∶1己烷/乙酸乙酯溶剂系统洗脱。收集所需馏分并蒸发而获得0.4g(33％)透明无色油状的2,4-二(苄氧基羰基)丁基[羟基(苯基)甲基]苄基膦酸(8)。Rf.0.18(1∶1己烷/乙酸乙酯)；1H NMR(CDCL3):7.3ppm(m,20H),5.2ppm(m,1H),4.9ppm(m,6H),2.8ppm(dm,lH),2.2ppm(m,3H),1.9ppm(m,3H)2-([羟基(苯基)甲基]羟基氧膦基甲基)戊二酸(9)将在25ml含有0.10g 10％披钯碳的水中的2,4-二(苄氧基羰基)丁基[羟基(苯基)甲基]苄基膦酸(6)(0.37g,0.6mmol)于40psi下氢化6小时。混合物经硅藻土垫板过滤并冷冻干燥而获得白色固体的2-([羟基(苯基)甲基]羟基氧膦基甲基)戊二酸(9)(0.14g,70％)。1H NMR(D2O):7.4ppm(m,5H),5.0ppm(d,lH),2.7ppm(m,lH),2.4ppm(m,2H),2.2ppm(m,1H),1.9ppm(m,3H)元素分析计算值C13H17O7P·0.6H2O:C 47.74 H 5.61实测值C 47.73 H 5.68实施例12制备二苄基-2-亚甲基戊二酸酯流程Ⅲ在氮气环境下，将丙烯酸苄基酯(500g,3mol)加热到100℃。在保持内部温度为135-145℃的同时，停止加热并滴加HMPT(10g,61mmol)。加完之后，立即将混合物冷却到室温并加入具有5∶1己烷/乙酸乙酯的硅胶淤浆。然后，将淤浆转移到含有一管干燥硅胶的柱中。用1∶1己烷/乙酸乙酯洗涤该柱，收集溶剂并蒸发。在高真空(200μHg)下蒸馏透明黄色液体而获得在45℃时蒸馏的8g起始馏分和180-185℃时蒸馏的透明无色液体的所需产物(212g,42％)。
1H NMR(CDCL3):7.3ppm(s,10H)；6.2ppm(s,1H)；5.5ppm(s,1H)；5.2ppm(s,2H)；5.1ppm(s,2H)；2.6ppm(m,4H)实施例13制备-2-[[二(苄氧基)磷酰基]里基]-戊二酸二苄基酯流程Ⅲ将在350ml二氯甲烷中的二苄基亚磷酸酯(9.5g,36mmol)冷却到0℃。将三甲基铝(18.2ml,2.0M在己烷中的溶液，36.4mmol)加到搅拌的所得溶液中。30分钟后，在10分钟内滴加到90ml二氯甲烷中的1(6.0g,37mmol)中。然后，将透明无色的溶液温热到室温并放置搅拌过夜。通过缓慢加入5％盐酸骤冷混合物。再搅拌1.5小时后，分离有机层并用100ml二氯甲烷将水层提取。合并有机层、干燥(硫酸镁)并蒸发而获得透明淡金黄色液体。将液体在硅胶上进行色谱层析(4cm*30cm)并用梯度(4∶1-1∶1)溶剂系统(己烷/乙酸乙酯)洗脱。合并含有所需产物的馏分并蒸发而产生透明无色液体的2(7.1g,42％)。然后在Kughleror装置上于0.5mmHg和195-200℃下蒸馏液体。弃去蒸馏液并将剩余的淡金黄色油状物在硅胶上进行色谱层析(1∶1，己烷/乙酸乙酯)而获得2.9g透明无色油状的2。TCL Rf0.5(1∶1，己烷/乙酸乙酯)。
1H NMR(CDCL3):7.1-7.4(m,20H),；5.05(s,2H)；4.8-5.03(m,6H)；2.8(1H)；2.22-2.40(m,3H)；1.80-2.02(m,3H)实施例14制备2-(膦酰基甲基)戊二酸流程Ⅲ将苄基戊二酸酯(2.9g,4.9mmol)加到20ml含有0.29g(6mol)10％披钯碳的甲醇混合物中。将该混合物在帕尔氢化器于40psi下氢化24小时、过滤并蒸发而获得透明淡金黄色粘稠油状的3(1.0g,90％)。
1H NMR(D2O):2.6-2.78(m,1H)；2.25-2.40(m,2H)；1.75-2.15(m,4H)实施例15病人被诊断为前列腺腺瘤。然后，通过直接注射到肿瘤中，可给予该病人NAALAD酶抑制剂，如实施例1-3所述的。开始治疗后，使用硬膜下的泵间隙性地或连续性地给予也可不给予病人相同或不同的NAALAD酶抑制剂。预期腺瘤不会更进一步发展。实施例16病人被诊断为前列腺腺瘤。然后，通过直接注射到肿瘤中，可给予该病人NAALAD酶抑制剂，如实施例1-3所述的。开始治疗后，通过植入生物相容的聚合物基质释放系统间隙性地或连续性地给予也可不给予病人相同或不同的NAALAD酶抑制剂。预期腺瘤不会更进一步发展。实施例17病人被诊断为良性前列腺增生。然后，通过直接注射到肿瘤中，可给予该病人NAALAD酶抑制剂，如实施例1-3所述的。开始治疗后，通过注射、硬膜下的泵或聚合物基质植入剂间隙性地或连续性地给予也可不给予病人相同或不同的NAALAD酶抑制剂。预期良性前列腺增生细胞不会发展为腺瘤。实施例18病人被诊断为前列腺腺瘤。腺瘤似乎没有转移。通过外科手术去除腺瘤。手术结束恢复后，通过注射、硬膜下泵或通过聚合物基质植入剂间隙性地或连续性地局部给予病人NAALAD酶抑制剂。预期腺瘤不会更进一步发展。实施例19病人被诊断为前列腺转移腺瘤。腺瘤似乎是转移的，但外科手术仍表明是有效的治疗方式。通过外科手术去除肿瘤组织。从大约确诊时开始局部给予病人NAALAD酶抑制剂如本文所述的，并应在手术后继续。手术结束恢复后，通过周期性局部给药方案保持病人的NAALAD酶抑制剂水平。仔细检测病人对给予NAALAD酶抑制剂时不可耐受的副作用。预期肿瘤没有进一步发展。如果在手术后检测到一些原发的。小的肿瘤块，预期其大小不会增加。实施例20病人被诊断为ACTH产生的肿瘤。然后，通过直接注射到肿瘤中，可给予该病人NAALAD酶抑制剂，如实施例1-3所述的。开始治疗后，通过直接注射、硬膜下的泵或植入生物相容的聚合物基质释放系统给予也可不给予病人相同或不同的NAALAD酶抑制剂。预期会防止或抑制肿瘤生长或肿瘤细胞的生长，产生ACTH的肿瘤不会更进一步发展。实施例21按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为急性淋巴细胞白血病。实施例22
按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为急性非淋巴细胞白血病。实施例23按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的肾上腺皮质癌。实施例24按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的膀胱癌。实施例25按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被转移的或非转移的脑癌。实施例26按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的乳腺癌。实施例27按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的宫颈癌。实施例28按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的慢性淋巴细胞白血病。实施例29按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的慢性髓细胞白血病。实施例30按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的结肠直肠癌。实施例31按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的皮肤T细胞淋巴瘤。实施例32按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的子宫内膜癌。实施例33按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的食管癌。实施例34按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的尤因瘤。实施例35按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的胆囊癌。实施例36按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的毛细胞白血病。实施例37
按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的头颈癌。实施例38按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的何杰金淋巴瘤。实施例39按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的卡波济肉瘤。实施例40按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的肾癌。实施例41按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的肝癌。实施例42按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的肺癌(小和/或非小细胞)。实施例43按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的恶性腹膜渗漏。实施例44按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的恶性胸膜渗漏。实施例45按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的黑素瘤。实施例46按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的间皮瘤。实施例47按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的多发性骨髓瘤。实施例48按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的成神经细胞瘤。实施例49按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的非何杰金淋巴瘤。实施例50按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的骨肉瘤。实施例51按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的卵巢癌(和/或卵巢(胚细胞)癌)。实施例52
按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的胰腺癌。实施例53按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的阴茎癌。实施例54按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的视网膜神经胶质瘤。实施例55按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的皮肤癌。实施例56按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的软组织肉瘤病。实施例57按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的鳞状细胞癌。实施例58按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的胃癌。实施例59按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的睾丸癌。实施例60按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的甲状腺癌。实施例61按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的绒膜上皮癌。实施例62按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的子宫癌。实施例63按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的阴道癌。实施例64按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的外阴癌。实施例65按实施例19所述的方法进行治疗，其中病人被诊断为转移的或非转移的维尔姆斯瘤。
因此，所描述的本发明以多种方式进行相同的变化是显而易见的。不认为这些变化脱离了本发明的精神和范围并且所有这类修饰都打算包含在下列权利要求所要求保护的范围之内。
权利要求
1．式Ⅰ化合物或其可药用盐、水合物或其混合物
其中R1为氢、C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1；X为CH2、O或NR1，其中R1如上文定义；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基被羧酸取代，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基可任意地被下述基团取代C3-C8环烷基、C3或C5环烷基、C5-C7环烯基、C1-C4烷基、C1-C4链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基或Ar1；其中Ar1选自1-萘基、2-萘基、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、2-呋喃基、3-呋喃基、四氢呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、4-噻吩基、2-、3-、或4-吡啶基或苯基，它们可具有1至5个取代基，该取代基独立地选自氢、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基或C1-C4链烯氧基、苯氧基和苄氧基。
2．根据权利要求1的化合物，其中R1为取代或未取代脂族或碳环基团；及R2为被羧酸取代的脂族基团。
3．根据权利要求1的化合物，其中R1为取代或未取代脂族或碳环基团；及R2为被羧酸取代的C1-C9烷基或链烯基。
4．根据权利要求1的化合物，其中R1为取代或未取代脂族或碳环基团；及R2为被羧酸取代的C2烷基或链烯基。
5．根据权利要求1的化合物，其中R1和R2之一为芳族或杂环基团。
6．一种药物组合物，该药物组合物包含(ⅰ)治疗有效量的权利要求1的化合物；和(ⅱ)可药用载体。
7．一种抑制动物NAALAD酶活性的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的权利要求1的化合物。
8．一种治疗动物前列腺疾病的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的权利要求1的化合物。
9．根据权利要求8的方法，所述前列腺疾病为前列腺癌或良性前列腺增生。
10．式Ⅱ化合物或其可药用盐、水合物或其混合物
其中R1为氢、C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基被羧酸取代，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基可任意地被下述基团取代C3-C8环烷基、C3或C5环烷基、C5-C7环烯基、C1-C4烷基、C1-C4链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基或Ar1；其中Ar1选自1-萘基、2-萘基、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、2-呋喃基、3-呋喃基、四氢呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、4-噻吩基、2-、3-、或4-吡啶基或苯基，它们可具有1至5个取代基，该取代基独立地选自氢、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基或C1-C4链烯氧基、苯氧基和苄氧基。
11．根据权利要求10的化合物，其中R2为被羧酸取代的C2-C8烷基或链烯基。
12．根据权利要求10的化合物，其中R2为被羧酸取代的C2烷基或链烯基。
13．一种药物组合物，该药物组合物包含(ⅰ)治疗有效量的权利要求10的化合物；和(ⅱ)可药用载体。
14．一种抑制动物NAALAD酶的酶活性的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的权利要求10的化合物。
15．一种治疗动物前列腺疾病的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的权利要求10的化合物。
16．根据权利要求15的方法，所述前列腺疾病为前列腺癌或良性前列腺增生。
17．选自下列的化合物及其可药用盐、水合物或其混合物2-[[甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[乙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[丙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[丁基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[环己基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(环己基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[苯基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[苄基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[苯基乙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[苯基丙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[苯基丁基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-氟苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-氟苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(五氟苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-甲氧基苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-氟苯基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[((羟基)苯基甲基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[(二羟基氧膦基)甲基]戊二酸；2-[[(3-苯并三氟)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2,3,4-三甲氧基苯基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(1-萘基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-萘基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(1-萘基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-萘基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(1-萘基)乙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-萘基)乙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(1-萘基)丙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-萘基)丙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(1-萘基)丁基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-萘基)丁基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(苯基丙-2-烯基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]己二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]己二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]庚二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]庚二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]辛二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]辛二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]壬二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]壬二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]癸二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]癸二酸；2-[[(2-吡啶基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-吡啶基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)乙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)丙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)乙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)丙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-吲哚基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-吲哚基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)乙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)丙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-噻吩基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-噻吩基)甲基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)乙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸；和2-[[(3-噻吩基)丙基羟基氧膦基]甲基]戊二酸。
18．选自下列的化合物及其可药用盐、水合物或其混合物；2-[(苄基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；2-[(苯基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；2-[[((羟基)苯基甲基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[(丁基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；2-[[(3-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[(3-苯基丙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；2-[[(4-氟苯基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；2-[(苯基乙基羟基氧膦基)甲基]戊二酸；2-[[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-氟苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-甲氧基苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[(二羟基氧膦基)甲基]戊二酸；2-[[(3-苯并三氟)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-氟苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；和2-[[(五氟苄基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸。
19．式Ⅱ化合物或其可药用盐、水合物或其混合物
其中R1为Ar1；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基和芳基被羧酸取代，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基可任意地被下述基团取代C3-C8环烷基、C3或C5环烷基、C5-C7环烯基、C1-C4烷基、C1-C4链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基或Ar1；其中Ar1选自1-萘基、2-萘基、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、2-呋喃基、3-呋喃基、四氢呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、4-噻吩基、2-、3-、或4-吡啶基或苯基，它们可具有1至5个取代基，该取代基独立地选自氢、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基或C1-C4链烯氧基、苯氧基和苄氧基。
20．根据权利要求19的化合物，其中R2为被羧酸取代的C2-C8烷基或链烯基。
21．根据权利要求19的化合物，其中R2为被羧酸取代的C2烷基或链烯基。
22．一种药物组合物，该药物组合物包含(ⅰ)治疗有效量的权利要求19的化合物；和(ⅱ)可药用载体。
23．一种抑制动物NAALAD酶活性的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的权利要求19的化合物。
24．一种治疗动物前列腺疾病的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的权利要求19的化合物。
25．根据权利要求24的方法，所述前列腺疾病为前列腺癌或良性前列腺增生。
26．选自下列的化合物及其可药用盐、水合物或其混合物2-[[(2-吡啶基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-吡啶基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-吲哚基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(4-吲哚基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(2-噻吩基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸；和2-[[(4-噻吩基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸。
27．式Ⅲ化合物或其可药用盐、水合物或其混合物
其中R1为氢、C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基被羧酸取代，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基可任意地被下述基团取代C3-C8环烷基、C3或C5环烷基、C5-C7环烯基、C1-C4烷基、C1-C4链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基或Ar1；其中Ar1选自1-萘基、2-萘基、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、2-呋喃基、3-呋喃基、四氢呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、4-噻吩基、2-、3-、或4-吡啶基或苯基，它们可具有1至5个取代基，该取代基独立地选自氢、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基或C1-C4链烯氧基、苯氧基和苄氧基。
28．根据权利要求27的化合物，其中R2为被羧酸取代的C2-C8烷基或链烯基。
29．根据权利要求27的化合物，其中R2为被羧酸取代的C2烷基或链烯基。
30．一种药物组合物，该药物组合物包含(ⅰ)治疗有效量的权利要求27的化合物；和(ⅱ)可药用载体。
31．一种抑制动物NAALAD酶活性的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的权利要求27的化合物。
32．一种治疗动物前列腺疾病的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的权利要求27的化合物。
33．根据权利要求32的方法，所述前列腺疾病为前列腺癌或良性前列腺增生。
34．选自下列的化合物及其可药用盐、水合物或其混合物2-[[甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[乙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[丙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[丁基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[环己基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(环己基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[苯基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[苄基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[苯基乙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[苯基丙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[苯基丁基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-氟苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-氟苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(五氟苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(甲氧基苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-氟苯基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[((羟基)苯基甲基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-甲基苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[(二羟基氧膦基)氧基]戊二酸；2-[[(3-苯并三氟)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2,3,4-三甲氧基苯基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(1-萘基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-萘基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(1-萘基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-萘基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(1-萘基)乙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-萘基)乙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(1-萘基)丙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-萘基)丙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(1-萘基)丁基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-萘基)丁基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(苯基丙-2-烯基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氧基]己二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)氧基]己二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氧基]庚二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)氧基]庚二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氧基]辛二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)氧基]辛二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氧基]壬二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)氧基]壬二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氧基]癸二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)氧基]癸二酸；2-[[(2-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)乙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)丙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)乙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)丙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)乙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)丙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)乙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸；和2-[[(3-噻吩基)丙基羟基氧膦基]氧基]戊二酸。
35．选自下列的化合物及其可药用盐、水合物或其混合物2-[(苄基羟基氧膦基)氧基]戊二酸；2-[(苯基羟基氧膦基)氧基]戊二酸；2-[[((羟基)苯基甲基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[(丁基羟基氧膦基)氧基]戊二酸；2-[[(3-甲基苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[(3-苯基丙基羟基氧膦基)氧基]戊二酸；2-[[(4-氟苯基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氧基]戊二酸；2-[(苯基乙基羟基氧膦基)氧基]戊二酸；2-[[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-氟苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-甲氧基苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[(二羟基氧膦基)氧基]戊二酸；2-[[(3-苯并三氟)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-氟苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；和2-[[(五氟苄基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸。
36．式Ⅲ化合物或其可药用盐、水合物或其混合物
其中R1为Ar1；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基和芳基被羧酸取代，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基可任意地被下述基团取代C3-C8环烷基、C3或C5环烷基、C5-C7环烯基、C1-C4烷基、C1-C4链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基或Ar1；其中Ar1选自1-萘基、2-萘基、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、2-呋喃基、3-呋喃基、四氢呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、4-噻吩基、2-、3-、或4-吡啶基或苯基，它们可具有1至5个取代基，该取代基独立地选自氢、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基或C1-C4链烯氧基、苯氧基和苄氧基。
37．根据权利要求36的化合物，其中R2为被羧酸取代的C2-C8烷基或链烯基。
38．根据权利要求36的化合物，其中R2为被羧酸取代的C2烷基或链烯基。
39．一种药物组合物，该药物组合物包含(ⅰ)治疗有效量的权利要求36的化合物；和(ⅱ)可药用载体。
40．一种抑制动物NAALAD酶活性的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的权利要求36的化合物。
41．一种治疗动物前列腺疾病的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的权利要求36的化合物。
42．根据权利要求41的方法，所述前列腺疾病为前列腺癌或良性前列腺增生。
43．选自下列的化合物及其可药用盐、水合物或其混合物2-[[(2-吡啶基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-吡啶基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-吲哚基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(4-吲哚基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(2-噻吩基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)羟基氧膦基]氧基]戊二酸；和2-[[(4-噻吩基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸。
44．式Ⅳ化合物或其可药用盐、水合物或其混合物
其中R1为氢、C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基、1-萘基、2-萘基或苯基被羧酸取代，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基可任意地被下述基团取代C3-C8环烷基、C3或C5环烷基、C5-C7环烯基、C1-C4烷基、C1-C4链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基或Ar1；其中Ar1选自1-萘基、2-萘基、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、2-呋喃基、3-呋喃基、四氢呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、4-噻吩基、2-、3-、或4-吡啶基或苯基，它们可具有1至5个取代基，该取代基独立地选自氢、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基或C1-C4链烯氧基、苯氧基和苄氧基。
45．根据权利要求44的化合物，其中R2为被羧酸取代的C2-C8烷基或链烯基。
46．根据权利要求44的化合物，其中R2为被羧酸取代的C2烷基或链烯基。
47．一种药物组合物，该药物组合物包含(ⅰ)治疗有效量的权利要求44的化合物；和(ⅱ)可药用载体。
48．一种抑制动物NAALAD酶活性的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的权利要求44的化合物。
49．一种治疗动物前列腺疾病的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的权利要求44的化合物。
50．根据权利要求49的方法，所述前列腺疾病为前列腺癌或良性前列腺增生。
51．选自下列的化合物及其可药用盐、水合物或其混合物2-[[甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[乙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[丙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[丁基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[环己基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(环己基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[苯基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[苄基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[苯基乙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[苯基丙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[苯基丁基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-氟苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-氟苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(五氟苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(甲氨基苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-氟苯基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[((羟基)苯基甲基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-甲基苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[(二羟基氧膦基)氨基]戊二酸；2-[[(3-苯并三氟)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2,3,4-三甲氧基苯基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(1-萘基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-萘基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(1-萘基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-萘基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(1-萘基)乙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-萘基)乙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(1-萘基)丙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-萘基)丙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(1-萘基)丁基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-萘基)丁基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(苯基丙-2-烯基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]己二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]己二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]庚二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]庚二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]辛二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]辛二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]壬二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]壬二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]癸二酸；2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]癸二酸；2-[[(2-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-吡啶基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)乙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)丙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)乙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)丙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-吲哚基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)乙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)丙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-噻吩基)甲基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)乙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸；和2-[[(3-噻吩基)丙基羟基氧膦基]氨基]戊二酸。
52．选自下列的化合物及其可药用盐、水合物或其混合物2-[(苄基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；2-[(苯基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；2-[[((羟基)苯基甲基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[(丁基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；2-[[(3-甲基苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[(3-苯基丙基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；2-[[(4-氟苯基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[(甲基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；2-[(苯基乙基羟基氧膦基)氨基]戊二酸；2-[[(4-甲基苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-氟苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-甲氧基苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[(二羟基氧膦基)氨基]戊二酸；2-[[(3-苯并三氟)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-氟苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；和2-[[(五氟苄基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸。
53．式Ⅳ化合物或其可药用盐、水合物或其混合物
其中R1为Ar1；和R2为C1-C9直链或支链烷基、C2-C9直链或支链链烯基、C3-C8环烷基、C5-C7环烯基或Ar1，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基和芳基被羧酸取代，其中所述烷基、链烯基、环烷基、环烯基或芳基可任意地被下述基团取代C3-C8环烷基、C3或C5环烷基、C5-C7环烯基、C1-C4烷基、C1-C4链烯基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基、C1-C4链烯氧基、苯氧基、苄氧基或Ar1；其中Ar1选自1-萘基、2-萘基、2-吲哚基、3-吲哚基、4-吲哚基、2-呋喃基、3-呋喃基、四氢呋喃基、2-噻吩基、3-噻吩基、4-噻吩基、2-、3-、或4-吡啶基或苯基，它们可具有1至5个取代基，该取代基独立地选自氢、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、C1-C6直链或支链烷基或链烯基、C1-C4烷氧基或C1-C4链烯氧基、苯氧基和苄氧基。
54．根据权利要求53的化合物，其中R2为被羧酸取代的C2-C8烷基或链烯基。
55．根据权利要求53的化合物，其中R2为被羧酸取代的C2烷基或链烯基。
56．一种药物组合物，该药物组合物包含(ⅰ)治疗有效量的权利要求53的化合物；和(ⅱ)可药用载体。
57．一种抑制动物NAALAD酶活性的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的权利要求53的化合物。
58．一种治疗动物前列腺疾病的方法，该方法包括给予所述动物有效剂量的权利要求53的化合物。
59．根据权利要求58的方法，所述前列腺疾病为前列腺癌或良性前列腺增生。
60．选自下列的化合物及其可药用盐、水合物或其混合物2-[[(2-吡啶基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-吡啶基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-吡啶基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(四氢呋喃基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-吲哚基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-吲哚基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(4-吲哚基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(2-噻吩基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；2-[[(3-噻吩基)羟基氧膦基]氨基]戊二酸；和2-[[(4-噻吩基)羟基氧膦基]甲基]戊二酸。
全文摘要
本发明涉及二肽酶抑制剂,特别是涉及抑制N－乙酰化α－链接的酸性二肽酶(NAALAD酶)活性的新的膦酸盐衍生物、羟基氧膦基衍生物和氨基磷酸盐衍生物,含有这类衍生物的药物组合物,以及利用这类衍生物抑制NAALAD酶活性和治疗前列腺疾病的方法,特别是利用本发明化合物抑制前列腺癌细胞生长的方法。
文档编号A61K31/675GK1222078SQ97195578
公开日1999年7月7日 申请日期1997年6月16日 优先权日1997年6月16日
发明者保罗·F·杰克逊, 芭芭拉·S·斯卢舍, 凯文·L·泰勒, 凯斯·M·麦克林 申请人:吉尔福德医药公司