专利名称：抗放射性纤维化的药物的制作方法
技术领域：
本发明是关于抗放射性纤维化的药物，具体说是对因放射引起的组织纤维化具有预防和治疗作用的药物，属于中药领域。
近年来，对于治疗恶性肿瘤的方法、设备及药物方面有很多的改进，由于采用大量综合治疗手段，治疗效果明显。病人的生存率及生存时间均有很大程度的提高，在所有接受治疗的病人中有70％要接受不同程度的放射治疗，且更多的是进行综合治疗。在接受放射治疗时出现的早期反应(如白细胞低下等)，因解决方法较多而已不成为影响治疗的主要问题。随着病人治疗后生命时间的延长，治疗所致的晚期反应日益处于被重视地位。尤其一些治疗所引起的不同软组织或脏器的纤维化更是如此。如肺纤维化、头颈部软组织纤维化等，严重时明显的影响病人的生存质量，有的肿瘤虽已被控制，但症状依旧(如肺癌治疗后的肺纤维化，病人依旧有咳嗽、气喘等症状)。有的头颈部位肿瘤接受放射治疗后，肿瘤无复发也无转移，但进食和张嘴受阻，极不方便，颈部组织僵硬，严重影响头部活动，耳聋、口渴等现象明显。这些都给在治疗后康复期间的患者的生活带来极大的不适和不方便，生活质量不能得到改善，严重的甚至危及生命。而上述这些情况，长期以来都缺乏较好的解决办法。因为在治疗肿瘤期间，必须首先考虑解决危及生命的恶性肿瘤，只能在治疗中尽可能的调整，使晚期损伤减轻或减少发病率。但有些矛盾是不可能完全避免的。目前在全世界缺乏对此的预防和治疗良方。
本发明目的是提供一种对放射性组织纤维化具有预防和治疗作用的药物。
本发明人多年来致力于寻找能解决这种组织纤维化的药物，并进行了各种实验研究。选择以肺的放射损伤作为主要研究对象，经过多年的实验以及初步的临床观察，完成了本发明。
本发明药物的核心内容在于如下药物组合物，其中各组份配比为重量份黄芪25-35份丹参20-30份鸡血藤20-30份郁金5-15份 玄参10-20份牡蛎 25-35份生地5-15份 麦冬5-15份 肉苁蓉5-15份巴戟天5-15份 山茱萸5-15份本发明的药物组合物各组份优选重量配比为黄芪28-32份 丹参25-28份鸡血藤25-28份郁金7-12份玄参12-18份牡蛎 28-32份生地7-12份麦冬7-12份肉苁蓉7-12份巴戟天7-12份 山茱萸7-12份上述组合物中黄芪优选使用生黄芪，牡蛎优选使用生牡蛎。
上述药物组合物作为制备药物的原料药处方，在具体使用时，可以对各种组份分别采用不同的提取方法，也可以混合后制成药剂，但是只要是使用了上述组份的配合及配比关系，即属于本发明的构思内容。
可以使用本领域中常用的任何制剂技术将上述药物组合物制备常规剂型，所说的剂型可以是片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、口服液、膏剂等。
本发明药物口服液的制备方法是将各组份原料药按照所述配比混合加水煎煮两次，过滤，滤液浓缩至相当于原生药的5-15倍，优选10倍，灭菌，即得。
本发明药物颗粒剂的制备方法将各组份原料药按照所述配比混合，加水煎煮两次，每次加水量以没过药面为宜第一次煎煮30分钟，第二次煎煮25分钟，合并两次煎液，过滤，滤液浓缩成浸膏，干燥、粉碎、过筛，制得颗粒剂。
本发明药物既能减少有些主要脏器受照射后早期的多种病变，如因照射所升高的肺内表面活性物质和的前胶原被降低，用药后甚至可达接近正常水平。在组织形态方面，一些因照射引起的各种不正常的改变，也明显减少。
本发明药物更能减轻照射后的晚期损伤。实验证明本发明药物不仅在开始照射后，尚未形成纤维化时服用，能防止纤维化的形成。而且，一旦已形成纤维化，如及时开始服用，也能使纤维化进程受阻或起缓解的作用。因此具有预防和治疗两种功能。
鉴于射线在不同组织中所引起的晚期纤维化的病理变化有其共同的特点，因些，临床也曾将该药用于因放疗而引起的颈部或胸背部照射部位皮肤、皮下组织甚至肌肉等的纤维化的治疗。
在实验室，除证实本发明药物对纤维化的预防及治疗有作用外，还曾就其他作用做过相应的实验。目前至少可认为本发明药物对肿瘤的放疗效果不会有影响，还有一定加强作用。此外，还发现本发明药物有一定的降低肿瘤转移的作用。
一般晚期反应往往在治疗结束3-6个月后才发生组织的纤维化，尤其是肺的纤维化不仅在肺受到照射时会发生，更有好几种常用的化疗药物如平阳霉素、阿霉素和三苯氧胺(tamoxifen)等，也存在导致肺纤维化的可能。而在综合治疗中，如因肿瘤情况必需使用上述药物，则会使肺纤维化发生的时间大大的提前。为此，最好是在治疗开始时就服用此药。而到治疗结束后还必须继续服用至少半到一年甚至更长的时间。如已发生纤维化，则服药时间将会更长，至少两年甚至要长期服用。方能达到缓解及软化纤维化，改善症状，减轻病人痛苦的目的。
实验例 本发明药物抗正常组织放射性纤维化的实验研究一、肺放射性损伤的研究实验研究工作以肺作为正常组织的代表，从多方面观察肺受照射后出现的早期和晚期损伤的表现以及药物对所有观察指标的影响。在实验初期以大鼠为实验对象，而更多的实验则是以小鼠为实验对象。检测的指标有大鼠肺的组织形态学改变(含光学显微镜和电镜)，小鼠全肺照射后肺灌洗液内表面活性物质以及前胶原含量的变化，照射后肺胶元含量的测定。分别介绍如下(一)大鼠右全肺60Coγ射线一次照射30Gy后第20、60、90和150天，于麻醉下，腹主动脉放血活杀。服药组，于照射后第2天开始，每日经食道灌喂相当于每公斤体重15克生药的复方浓缩液，直至活杀之日。除取右肺中叶下缘做电镜外，做全右肺大切片H.E染色，于光学显微镜下观察。
光镜下各种改变照后20天，服药组(D组)均明显轻于单纯照射组(R组)。见表1照射60大后，单纯照射组的光镜下各种改变可见毛细血管周围组织内水肿、充血、支气管上皮明显增生，肺泡壁增厚并有胶无纤维形成。在较后的时间里，这些改变逐渐发展为明显的纤维化，表现为大量胶元纤维束增殖，包绕有时甚至侵入血管和支气管。随着时间的推移，纤维化的程度逐渐发展，最终导致大量的肺结构被破坏，以及局部的代偿性肺气肿。
服药组的鼠肺虽然药物未能完全阻止纤维化的进程，然而，在照后60到150天的各个时期内的改变都明显比单照组为轻。服药组在照后第150天仍可见一些肺的正常结构，而单照组在同样的时期已无法观察到。(
图1)透射电镜观察第照射后20、60及90天活杀所得肺标本。
单纯照射组可见27/30只动物有肺硬化，照后20天，透射电镜显示毛细血管腔狭窄有些内皮细胞被从基底膜分离，有水肿液侵入两者之间。肺Ⅱ型上皮细胞增殖并增大呈板层小体数增多，有一些板层小体进主肺泡内。肺泡内可见大量渗出液内含单核吞唑细胞、泡沫细胞、板层小体以及点阵结构(lattice structure)。由于成纤维细胞、平滑肌细胞、浆细胞、淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞的浸润以及胶元的沉积致使肺泡壁增厚。照射60天后在透射光镜下可见(1)毛细血管腔狭窄以及毛细血管数减少；(2)肺Ⅱ型上皮细胞的胞浆内可见巨大板层小体；(3)成纤维细胞样网状细胞、平滑肌细胞、肥大细胞、浆细胞、淋巴细胞、免疫母细胞以及单核巨噬细胞伴有弥散和束状胶元纤维，均明显增加。提示有明显的间质性纤维化；(4)肺泡腔主要为巨噬细胞和泡沫细胞所占据。大部分改变直至照射后90天前均在继续发展。到90天时，肺泡壁的主要细胞成分是胶元产生细胞、肥大细胞和浆细胞伴有大束胶元纤维弹性纤维则分散在其中。(图2)服药照射组半薄切片可见34/42只动物的肺仍保持正常。透射光镜观察的照后20、60和90天肺Ⅱ型上皮细胞体积小，并有较正常的板层小体数。在肺泡壁内的成纤维细胞不活跃。胶元纤维呈小束状。在肺泡腔内未见平滑肌细胞、肥大细胞、浆细胞和淋巴细胞的浸润或增殖，也未见渗出液。(图3)扫描电镜单纯照射组照射后90天单照组肺的松散的蜂窝样图型几乎已彻底被破坏。服药照射组肺呈蜂窝样。肺泡结构基本正常。毛细血管表现正常。(图4)(二)实验鼠肺照射后的早期改变肺泡腔表面活性物质的检测表面活性物质释放的增多，反映肺Ⅱ型上皮细胞受损，这是肺早期放射性损伤的主要表现之一。
1、离体培养的739小鼠和Wistar大鼠肺组织块单纯照射后，在15-30Gy均可测得培养液中表面活性物质释放增多。离体培养肺组织块在照射前给予药物，然后照射，可以明显降低照射所引起的肺Ⅱ型上皮细胞释放表面活性物质的含量。然而，该药对正常未照射肺组织无明显影响。(图5)2、小鼠全肺照射后7天(11-20Gy)至21天(8-20Gy)肺泡表面活性物质的含量都明显高于正常含量。照射后即开始给药直至活杀，可见在各个检测时间，表面活性物质的含量明显低于单纯照射组有些点基本接近或处于正常值范围。先后曾观察4种纯系小鼠，虽然，所需照射剂量各异，然本药物能抑制照射后肺泡表面活性物质含量增高的作用都一样。(图6)前胶元Ⅲ的检测有些小鼠品系的肺受照射后的早期会出现肺泡前胶元的增加。LAF、小鼠肺受照射后14天所增加的肺泡前胶元Ⅲ可为照射后服用的药物所抑制。
急性放射性肺炎所致死亡情况15Gy照射C3H小鼠全肺后，早在照后第7天就开始出现小鼠死亡，至照后第20周已有55％小鼠死亡。照射后即用药组小鼠直至照后第36天，才出现第一只小鼠死亡。到第20周时，死亡率仅为30％。(图8)(三)小鼠全肺照射后，肺晚期损伤的检测检测全肺羟脯氨酸含量以反映胶元含量及其纤维化程度。
药物对肺晚期损伤预防作用的实验研究KM小鼠全肺照射14Gy后即开始给药，定期观察全肺羟脯氨酸含量以反映胶元含量，直至照后6个月。服药组胶元含量明显低于单照组。C3H小鼠照射后开始服药连续观察40周。平行对照组全肺羟脯氨酸含量为5ug/50mg，单纯15Gy照射组小鼠已全部死亡，而15Gy加药组全肺羟脯氨酸含量仅为6ug/50mg，与正常肺差别不大。13Gy照射组全肺羟脯氨酸含量为12ug/50mg，13Gy照6ug/50mg，与正常肺差别不大。13Gy照射组全肺羟脯氨酸含量为12ug/50mg,13Gy照射加药组为4ug/50mg，仅为单照的1/3，与正常对照无差别。(图9)药物对肺晚期损伤治疗作用的实验研究KM小鼠全肺照射12Gy后45周(10.5个月)即已形成肺纤维化时开始给药。连续给药22周(5个月)后，即照射后15个月(67周)，处死小鼠，取全肺作羟脯氨酸含量测定。未经照射的同步饲养的小鼠全肺羟脯氨酸含量为6.802mg/g。与单纯照射12Gy的小鼠全肺羟脯氨酸含量为9.579mg/g，两者有明显差异。而照射12Gy并于45周后连续服药22周的小鼠全肺羟脯氨酸含量为6.834mg/g,基本和单纯对照的全肺相似，反而和受12Gy照射的肺有明显差别。(图10)二、药物对肿瘤放射治疗的影响在确认本发明药物对正常组织的作用后，还必须搞清其在肿瘤治疗的应用中，是否会对肿瘤产生不良的作用，如影响疗效或促进转移等。为此，又进行了如下的实验细胞系离体实验以HeLa-S3离体细胞系为对象。采用在有氧及乏氧条件下，离体照射HeLa-S3细胞，并以单靶多击数学模型拟合的细胞存活曲线分析比较药物与照射合用的作用。结果在有氧条件下，用有氧条件下的1/2ID50药物剂量，Dq之比SER=2.7，Do之比SER=1.07。在乏氧条件下Dq之比SER=1.76(乏氧条件下1/3ID50)或SER=3.23(乏氧条件下1/2ID50)；Do之比SER=1.2(乏氧条件下1/3ID50)或SER=1.27(乏氧条件下1/3ID50)。提示药物对离体肿瘤细胞可能有较微弱的放射增强作用。(图11)实验肿瘤整体实验研究津白Ⅱ号(TA-2)可移植性自发乳腺癌MA-737，接种于右后肢。在一次或分次照射后，定期用游标卡尺测肿瘤垂直三维直径，按R=长×宽×高计算得出肿瘤的几何平均值“R”从肿瘤生长曲线画出不同治疗条件下的剂量效应曲线。实验结果为在有氧及乏氧条件下，小鼠肿瘤MA-737分次照射的再生长延缓剂量效应曲线均显示药物有不同的放射增敏作用。其有氧条件下SER=1.25，乏氧条件下SER=1.30。(图12)药物对实验肿瘤放射增敏作用机制的初步研究(图13)对HeLa-S3离体细胞系照射后细胞周期各期分布的效应在乏氧条件下，如在一次照射细胞时合并有药物，经流式细胞仪测定细胞周期各期分布，药物对G1、S、M期细胞与单纯照射时无明显差别，但对G2期细胞的百分比有一定影响，G2期堆积明显升高，其SER为1.29。提示药物在乏氧条件下可提高X线对细胞的G2期阻断效应，在分次放疗中的作用尚有待进一步探讨。
对HeLa-S3离体细胞系照射后的微核形成效应在有氧和乏氧条件下，照射合并药物都能增加射后的微核形成率，但以在有氧照射下更为明显。SER可达约1.2。
药物对转移的实验研究药物对T-739小鼠接种其自发可移植性肺腺癌(LA-795)后即用药，其早期肺转移率和肺转移灶数均低于未用药对照组。在已出现肺转移后，则单纯用药、单纯照射和照射加药三者均能降低小鼠肺的转移灶数。虽然经统计尚无差异，但至少证明所用活血化淤药物不会促进转移。(图14)药物临床放疗效应的初步观察活血低于药物能增加鼻咽原发灶和颈部淋巴结转移灶的放射敏感性(鼻咽原发灶和颈部淋巴结转移灶的平均增敏比为1.10)，并且不会增加鼻咽癌的远地转移，还有可能提高鼻咽癌病人的长期生存率。本药物长期服用，除个别病人服药后短期间有些恶心或轻度腹泻外，无其他副作用。如在病人出现损伤的早期即开始服用，及较快地取得明显效果。
综上所述，本发明药物具有能预防和治疗放射所致的放射性肺早期和晚期损伤；也可用于其他组织的放射性纤维化改变。至于对肿瘤的放射治疗效果，不仅不会有什么不良影响，而且还有一定的促进作用，此外，也不会增加肿瘤的转移。
本说明书附图的说明如下图1是大鼠右肺一次照射后病理形态改变。图1(I)是单纯照射组，图1(Ⅱ)是服药照射组，其中a代表照射后20天的变化，b代表照射后60天的变化，c代表照射后90天的变化，d代表照射后150天的变化。
图2是大鼠右肺一次照射后90天，透射电镜所见。其中a代表毛细血管腔狭窄；b说明肺Ⅱ型上皮细胞内板层小体增多，并伴有巨大板层小体；c说明肺内各种类型细胞的浸润；d表明大量胶元纤维的沉积。
图3是指服药加照射组大鼠右肺照射后90天，透射电镜所见基本与正常肺组织相似。
图4是大鼠右肺一次照射后90天扫描电镜照片，其中a代表正常未照射肺，b代表单纯照射组，c代表服药照射组。
图5表明肺组织块离体培养条件下受不同剂量照射后，用药与不用药，对释放入培养液中的同位素标记过的表面活性物质的影响。*代表用药组与其单纯照射组之间有明显差异。图5(a)是用739小鼠进行的实际结果，图5(b)是以wistar大鼠进行的实际结果，图中c代表单纯照射组，d代表给药加照射组。横坐标为照射剂量，纵坐标为3H计数/20mg肺重。
图6表明小鼠全肺照射剂量和药物剂量对肺泡灌洗液内表面活性物质含量的影响。a代表不同照射剂量，b代表不同药物剂量。
图7代表LAF1小鼠13.5Gy一次全肺照射后14天，单照和照射加药，肺泡灌洗液的前胶元含量。其中纵坐标为无照射无药物对照组的百分数；横坐标为处理后14天每公斤小鼠体重每天IP给药本发明药物的剂量。
图8表明C3H小鼠一次全肺照射15Gy后，22周内急性放射性肺炎死亡情况。横坐标为照射后的周数，纵坐标为死亡百分数。
图9为小鼠一次全肺照射后，单照和照射加药组肺胶元含量的测定(预防作用)。其中图9(Ⅰ)横坐标代表照射处理后的月数，纵坐标代表ug/克肺重。*表明用药组与其单纯照射组之间有明显差异。
图9(Ⅱ)的横坐标为不同照射组，纵坐标为羟脯氨酸含量(ug/50mg肺重)。
*代表用药组与其单纯照射组之间有明显差异。
图10表明小鼠一次全肺照射12Gy后，常规饲养45周(10.5个月)后，开始口服给药连续22周15个月后的全肺胶元含量。(治疗作用)。
*代表用药组与其单纯照射组之间有明显差异。
图11是有氧及乏氧条件下，HeLa-S3离体细胞系单纯照射加药的细胞存活曲线。其中图11(Ⅰ)为富氧细胞照射及加药的细胞存活曲线，图11(Ⅱ)为乏氧细胞照射及加药的细胞存活曲线。图中横坐标为单剂量(cGy)，纵坐标为存活率。764-1代表本发明药物。
图12是TA-小鼠MA-737实验肿瘤，有氧及乏氧条件下分次照射(5次/5天)后，单纯照射与服药照射的剂量效应曲线。横坐标为总剂量(cGy)纵坐标为再生长至R+5mm的天数，764-1代表本发明药物。
图13表明不同条件照射HeLa-S3离体细胞后，细胞周期分布及微核形成情况。其中图13(Ⅰ)是微核形成率剂量效应曲线。图13(Ⅱ)是照射后24小时G2期细胞百分比剂量效应曲线，a有氧照射，b有氧照射合并药物，c乏氧照射，d乏氧照射合并药物。
图14表明药物对T-739小鼠自发可移植性实验肿瘤LA-795肺腺癌、肺转移的影响。其中图14Ⅰ为接种肿瘤后(肿瘤早期)即用药；图14Ⅱ为肿瘤较大已出现转移后(晚期肿瘤)处理。*代表与对照组比较0.1＞p＞0.05。
实施例1处方生黄芪25克 丹参 20克鸡血藤20克郁金 5克 玄参 10克牡蛎 25克生地 5克 麦冬 5克 肉苁蓉5克巴戟天5克 山茱萸5克以上药物加水煎煮两次，第一次加水量5倍煎煮1小时，第一次加水量3倍，煎煮半小时，合并两次煎液，过滤浓缩至600毫升。
实施例2处方生黄芪30克 丹参25克鸡血藤25克郁金 10克玄参 15克牡蛎 30克生地 10克麦冬 10克肉苁蓉10克巴戟天10克山茱萸10克将以上药物加水煎煮两次，每次加水量以没过药而为宜，第一次煎煮1小时，第2次煎煮半小时，合并两次滤液，过滤，浓缩至浸膏状，干燥，粉碎，制得颗粒剂。
实施例3处方生黄芪32份 丹参 28份鸡血藤28份郁金 7份 玄参 15份牡蛎 30份生地 10份 麦冬 10份肉苁蓉8份巴戟天8份 山茱萸10份以上药物加水煎煮两次，第一次加水4倍，煎煮1.5小时，第二次加水3倍，煎煮半小时，合并滤液，浓缩至浸膏状，加入药用淀粉适量，造粒，压片，制得片剂。
实施例4处方生黄芪35份 丹参 30份鸡血藤30份郁金 15份 玄参 20份牡蛎 35份生地 5份 麦冬 5份 肉苁蓉5份巴戟天5份 山茱萸5份制法同实施例权利要求
1.一种抗放射性纤维化的药物，其特征在于制备该药物的原料药配方组成按重量份计为黄芪25-35份丹参20-30份鸡血藤20-30份郁金5-15份 玄参10-20份牡蛎 25-35份生地5-15份 麦冬5-15份 肉苁蓉5-15份巴戟天5-15份 山茱萸5-15份。
2.根据权利要求1的药物，其特征在于所述各组份的配比为黄芪28-32份 丹参25-28份鸡血藤25-28份郁金7-12份玄参12-18份牡蛎 28-32份生地7-12份麦冬7-12份 肉苁蓉7-12份巴戟天7-12份 山茱萸7-12份。
3.根据权利要求2的药物，其特征在于所述各组份的配比为黄芪30份丹参25份鸡血藤25份郁金10份玄参15份牡蛎 30份生地10份麦冬10份肉苁蓉10份巴戟天10份 山茱萸10份。
4.根据权利要求1或2或3的药物，其中所说的黄芪为生黄芪。
5.根据权利要求1或2或3的药物，其中所说的牡蛎为生牡蛎。
全文摘要
本发明公开了一种对放射性组织纤维化具有预防和治疗作用的药物组合物,该组合物的组成为黄芪、丹参、鸡血藤、郁金、玄参、牡蛎、生地、麦冬、肉苁蓉、巴戟天、山茱萸,该药物组合物可以制备成常规药剂。
文档编号A61P35/00GK1212161SQ9810308
公开日1999年3月31日 申请日期1998年7月29日 优先权日1998年7月29日
发明者沈瑜 申请人:沈瑜