专利名称：：含一类生物碱的σ受体作用药的制作方法
技术领域：
：本发明是关于具有与σ受体特异结合活性的生物碱类化合物的医疗用途。抗精神病药物不仅用于治疗精神分裂病，而且也用于治疗脑血管障碍，老年痴呆所致问题(攻击行为、精神兴奋、徘徊、语言错乱等)。但是以前的抗精神分裂病药物非常容易引起帕金森疾病、acassisia、急性dystonia等脑垂体外路性副作用，而且由于长期投药，会引发难治性、后遗性的dyskinesia等问题。此外，还有很多以前的抗精神病药物所不能改善的病例。为了解决这个问题，近年来在抗精神病药物的开发中，多从与以前药效作用机制完全不同的侧面来进行研究。其中之一就是σ受体作用药。例如，正在进行开发的副作用少的抗精神分裂病药物rimcazole(特开昭55-64585号)和BMY-14802(英国专利第2155925)等都阐明对σ受体有亲和性。此外，在美国专利第4588728号说明书中记载cis-9-[3-(3，5-dimethylpiperazinyl)propyl]carbazol治疗精神病，在美国专利第4709094号说明书中公开了利用1，3-二取代胍guanidin和别的取代胍guanidin诊断和治疗与精神障碍和慢性精神抑郁症相关的幻觉，在美国专利第4929734号说明书中，公开了利用N-取代-1-(1，2，3，6-tetrahydro-3-pyridinyl)oxime治疗抑郁症和精神病，在美国专利第5061728号说明书中，记载了利用4-phenyl-(1，2，3，4-tetrahydro-1-naphthalenamide的衍生物治疗精神病。这些专利中请求保护的化合物都对σ受体有亲和性。另一方面，σ受体作用药的生物化学内容由B．L．Rajent等[Ear．J．Pharmacol．，145，345(1988)]和S．I．doitsche等[ClinicalNeuropharmacology，11，105(1989)]从药理学和临床方面加以了说明。但前述化合物的药效以及副作用方面还不是十分清楚。本项发明的目的是提供不产生脑垂体外路障碍、通过σ受体发生作用、对σ受体有亲和性的新型抗精神病药，它们是治疗与σ受体有关的精神障碍，主要是对精神病以及精神分裂症有潜在作用的生物碱类化合物以及包含该类化合物的σ受体作用药。本项发明的化合物可以从天然产物中分离，精制。亦即从中国四川省产的药用植物塞北黄董(Corydalisimpatiens(Pall)Fish的干燥植物的甲醇抽提物中通过柱层析分离，所得各组分进行一次σ受体结合抑制活性筛选，然后反复进行分离和活性评价跟踪分离得到活性成分，最后作为单一成分精制，分离。本项发明的化合物还可以使用已知的方法合成。该化合物对σ受体具有高度亲和性。本项发明提供了包含化学结构式(Ⅰ)所示的生物碱类化合物有效成分的σ受体作用药。(式中，R1～R10是氢原子、羟基、C1～C6的烷氧基，C1～C6的酰氧基，C1～C6的烷基、无取代或者取代苯基、或者R1～R10内部相邻两个取代以亚甲二氧基表示、或者R9和R10直接相连成环；n表示0～4的整数；实线和虚线构成的双线表示碳-碳单键或者双键；与N原子结合的实线和虚线所构成的双线表示碳-氮单键或者双键。)上述所表示的生物碱类化合物提供了σ受体作用药的有效成分。σ受体作用药是对σ受体具有亲和性，对治疗σ受体有关疾病有用的药物。本项发明的σ受体作用药特别对治疗紧张、不安、抑郁、精神病或者精神分裂症有用。在式(Ⅰ)中，理想的是R1是氢原子；R2是氢原子或者C1～C6的烷氧基；R3是羟基或者C1～C6的烷氧基；R4是氢原子、羟基或者C1～C6的烷氧基；R5是氢原子；R6是氢原子或者C1～C6的烷氧基；R7是羟基或者C1～C6的烷氧基、或者R6和R7一起构成-OCH2O-；R8是氢原子或者羟基；R9是氢原子、R10是氢原子、或者R9和R10直接连接成环；n是整数1或者2；实线和虚线构成的双线是碳-碳单键或者双键；与N原子结合的实线和虚线所构成的双线表示碳-氮单键或者双键；在式(Ⅰ)中，理想的是R1是氢原子；R2是氢原子或者甲氧基；R3是羟基或者甲氧基；R4是氢原子、羟基或者甲氧基；R5是氢原子；R6是氢原子或者甲氧基；R7是羟基或者甲氧基、或者R6和R7一起构成-OCH2O-；R8是氢原子或者羟基；R9是氢原子、R10是氢原子或者R9和R10直接连接成环；实线和虚线构成的双线是碳-碳单键或者双键；与N原子结合的实线和虚线所构成的双线表示碳-氮单键或者双键。在本项发明中，C1～C6烷氧基、C1～C6酰氧基以及C1～C6烷基的烷基部分是这样一些基团，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、直链或者支链的戊基(例如正戊基、异戊基、新戌基)、以及直链或者支链的己基。比较理想的烷基部分是C1～C4的烷基，最理想的是甲基。在式(Ⅰ)中，取代苯环的取代基是C1～C6烷基、C1～C6烷氧基、卤素、羟基，具体来说可以例举的是甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、氟、氯、溴、碘等。n理想的是1或者2。本项发明提供化学结构式(Ⅱ)所示的新化合物以及包含它的医药。此外本项发明是以化学结构式(Ⅰ)所示的生物碱类化合物作为有效成分，提供治疗紧张、不安、抑郁、精神病或者精神分裂症的σ受体作用药。在σ受体结合抑制活性化合物的分离、精制过程以及单一化合物的活性确认过程中，根据σ受体结合试验证明本项发明的化合物是对σ受体非常强力的配体。本项发明的化合物与以前技术专利的化合物在化学结构上完全不同，是对σ受体具有重要亲和性的配体。本项发明的化合物以这种活性作为起因，对治疗和预防与某种σ受体有关的精神障碍，主要是紧张、不安、抑郁、精神病或者精神分裂症有潜在的作用。本项发明化学结构式(Ⅰ)中的含氮化合物或者其无毒性盐对σ受体的亲和性可以按下述方法测定。以文献(Proc．Natl．Acad．Sci．，vol．83．8784-8788(1986)，E．Weberetal)记载的方法为准，按以下的顺序，测定本项发明化合物的σ受体结合能。Hartley系雄性土拨鼠(六周，日本SLC)除小脑以外摘除全脑，加入0．32M蔗糖，在匀浆器中均质化。将它在900×g、10分、2℃离心分离，上清液在11500×g、10分、2℃离心分离，向所得的沉淀中加入50mMTris／HCl缓冲溶液(PH=7．4)、在18400×g、20分、2℃离心分离，向所得的沉淀中再次加入50mMTris／HCl缓冲溶液(PH=7．4)，并在polytron中轻微均质化作为受体粗膜划分试剂。将按lowry法以BSA作为标准进行蛋白质定量，然后，分别注入试管，在-80℃下冷冻保存，这些在使用时解冻。所得受体粗膜划分试剂(蛋白浓度0．1-0．15mg／试管)和最终浓度10nM的3H-DTG([5-3H]-1，3-di-o-trilguanidindi-[p-ring-3H]-、[NEN])以及被检测药物在25℃反应90分钟之后，将这些反应液用预先浸过50mMTris／HCl缓冲溶液(PH=7．4)的玻璃过滤器(WhatmanGF／B30probe用)在selhavester(Brownder公司)中迅速吸引过滤，并用相同的50mMTris／HCl缓冲溶液(PH=7．4)洗三次。将此玻璃过滤器在闪烁玻璃瓶中打通，添加8ml放射性混合物后，室温下放置一昼夜，用液体闪烁计数器测定它们的放射活性(cpm)。计算总结合量是被检测物在熔剂中测定的，计算非特异结合量是在加入最终浓度为100μM的haloperidol中用同样的方法测定的。各自的特异结合量就是总结合量减去非特异结合量，由下式求得被检测药物的σ受体结合抑制率。σ受体结合抑制率(％)={[控制的特异结合量]-[被检测物的特异结合量]／[控制的特异结合量]}×100％以浓度的对数值作为纵轴、以抑制率对非抑制率的比例的对数值作为横轴做成Hillplot。由此算出各自的IC50值(对放射性配体的受体结合的50％抑制药物浓度)。于是根据下式求得Ki值(被检测药物对σ受体的亲和性)。Ki=IC50／(1+[L*]／Kd)[L*]放射性配体浓度Kd放射性配体的Kd值本项发明的化合物对σ受体有高度亲和性，显示对治疗与某种σ受体关连的中枢神经系统疾病，例如缺氧症、不安、抑郁、痉挛、精神分裂症、少氧症、大脑缺血、紧张及精神病等有效。与本项发明所得到的化学结构式(Ⅰ)表示的化合物相对应，可以制造医学上允许的无毒性盐。可以例举的这些盐是盐酸、硫酸、磷酸等无机酸盐和醋酸、戊酮酸、硝酸、乳酸、酒石酸、蚁酸、乙二醇酸、甘油酸、丁二酸、苹果酸、谷氨酸、天门冬酸、甲磺酸、咖啡酸、对甲苯磺酸、富马酸、马来酸、安息香酸等有机酸盐。本项发明的化合物或者其无毒性盐为了作为医药使用，在制剂化过程中，与一种或者几种药学上允许的赋形剂或者载体组合，于是化学结构式(Ⅰ)的生物碱类化合物或者一种药理学上允许的盐就构成医药组成物。本项发明的医药组成物不受这些限制，可以按通常情况下的口服方式以及鼻孔吸入或者包含点滴的注射等非口服方式投与药物，其投与量根据投与方式、患者年龄、体重、性别、症状等不同，一般而言，成人1日可以投与的量是0．1mg～500mg，理想的是1mg～100mg。上记制剂化的剂型可以例举的是锭剂、丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊等。为了达到制造目的，这些制剂相应的各种担体如赋形剂、结合剂、膨化剂、表面活性剂、润滑剂等适当的材料可以混合使用。与本项发明有关的化学结构式(Ⅰ)所示的生物碱类化合物对σ受体具有亲和性，因而对治疗与σ受体关连的疾病例如精神分裂病、抑郁病、不安症以及属于脑血管障碍、老年痴呆、神经变性疾病的阿尔茨海默病、帕金森病、huntington病等的认识功能障碍和运动功能障碍有用。而且对治疗药物滥用(麻药、兴奋剂、酒精、精神药、吗啡等)依赖性也有用。实施例1、tetrahydropalmatine(在化学结构式(Ⅰ)中，R3=R4=R6=R7=OMe、R1=R2=R5=R8=H、R9和R10直接相连、n=2、实线与虚线构成C-C双键、与N结合的实线与虚线构成C-N双键；化合物编号1)的分离中国药用植物塞北黄堇(Corydalisimpatiens(pall．)Fish)作为民间传统药物使用，产自中国四川省。其干燥植物在室温下用甲醇抽提两次，溶剂在50℃以下减压除去得到抽提物28g，将它加到MCIGEL(CHP20P37-75μ)100g上，并用甲醇-水混合两相溶剂(比例从6∶4、7∶3、8∶2直到甲醇100％)进行划分，然后对所得10个组分A～J进行σ受体结合抑制活性1次筛选实验，其中E组分(洗出溶剂组成甲醇／水=7／3)中被测物质浓度在3μg／ml具有57％的结合抑制活性。将E组分在硅胶柱上用CHCl3-丙酮混合溶剂体系分离得到A～J10个组分，其中组分C(洗出溶剂组成CHCl3／丙酮=8／1)得到无色结晶32．8mg(收率0．12％)。此结晶用薄层层析(TLC)、NMR等检测证明是单一物质。并显示了71％的抑制活性。根据以下所示数据，该化合物证明为结构已知的berberine型生物碱tetrahydropalmatine(在化学结构式(Ⅰ)中，R3=R4=R6=R7=OMe、R1=R2=R5=R8=H、R9和R10直接相连、n=2、实线与虚线构成C-C双键、与N结合的实线与虚线构成C-N双键)。由质量测定求得组成式C21H25NO4mp152-153℃[α]20D=-181．8(CHCl3c=0．43)IR(KBr，cm-1)3000，2940，1610，1520，1490，1350，1270，1100．1H-NMR(CHCl3)6．88(1H，d；J=8．5Hz)，6．78(1H，d，J=8．5Hz)，3．85(-OMe)，3．86(-OMe)，4．25，3．55(2H，d，J=15．5Hz)，3．20，2．64(2H，dt，J=11．0，4．0Hz)，3．14，2．68(2H，dt，J=11．0，4．0Hz)，6．62(1H，s)，3．87(-OMe)，3．89(-OMe)，6．74(1H，s)，3．57(1H，dd，J=16．0，4．0Hz)，3．27，2．84(2H，dd，J=16．0，4．0Hz)．13C-NMR(CDCl3)123．9，111．0，150．3，145．1，128．7，54．0，51．5，29．1，126．8，111．4，147．5，147．6，108．7，129．7，59．3，36．4，127．8，55．9，60．2，55．9，56．1．实施例2、sendaverine(在化学结构式(Ⅰ)中，R2=R7=OMe、R3=OH、R1=R4=R5=R6=R8=R9=R10=H、n=2、实线与虚线构成C-C双键、与N结合的实线与虚线构成C-N双键；化合物编号10)的分离中国药用植物塞北黄堇(Corydalisimpatiens(pall．)Fish)作为民间传统药物使用，产自中国四川省。其干燥植物在室温下用甲醇抽提两次，溶剂在50℃以下减压除去得到抽提物28g，将它加到MCIGEL(CHP20P37-75μ)100g上，并用甲醇-水混合两相溶剂(比例从6∶4、7∶3、8∶2直到甲醇100％)进行划分，然后对所得10个组分A～J进行σ受体结合抑制活性1次筛选实验，其中A组分(洗出溶剂组成甲醇／水=6／4)中被测物质浓度在3μg／ml具有40％的结合抑制活性。将A组分在硅胶柱上用CHCl3-CH3OH-H2O混合溶剂体系分离得到A～G7个组分，其中组分A具有σ受体结合抑制活性(抑制率45％，被测物质浓度在3μg／ml)。将此组分再次用正相柱进行分离，组分D具有70％的σ受体结合抑制活性。NMR判定该组分是两个化合物的混合物，继续用制备薄层层析(展开溶剂组成苯／异丙醇=3／1)分离得到无色固体9．0mg(收率0．03％)。此固体用TLC、NMR等检测证明是单一物质。该化合物显示了76％的抑制活性。根据以下的NMR、MS数据等，该化合物证明为结构已知的isoquinoline型生物碱sendaverine(在化学结构式(Ⅰ)中，R7=R7=OMe、R3=OH、R1=R4=R5=R6=R8=R9=R10=H、n=2、实线与虚线构成C-C双键、与N结合的实线与虚线构成C-N双键)。由质量测定求得组成式C18H21NO31H-NMR(CHCl3)7．29(2H，d，J=8．0Hz)，6．87(2H，d，J=8．0Hz)，6．56(1H，s)，6．53(1H，s)，3．83(-OMe)，3．81(-OMe)，3．60(2H，s)，3．51(2H，s)，3．47(-OH)，2．79(2H，t，J=6．0Hz)，2．69(2H，t，J=6．0Hz)．13C-NMR(CDCl3)158．8，145．2，143．6，130．3(3C)，127．5，125．6，113．6，112．3，110．7，62．0，56．0，55．5，55．2，50．5，28．7．实施例3、其它作为活性成分被分离的生物碱类化合物从与实施例1相同的药用植物中，经过反复类似的分离操作和相同的药理评价分离得到7个(化合物编号2及4～8)以及从穆坪紫堇(CorydalisflexuosaFranch．)中分离得到1个(化合物编号3)berberine型生物碱，它们对σ受体具有结合抑制活性。通过结构测定，这些化合物都是已知成分，如表1所示。此外从与实施例1相同的药用植物中，经过反复的与实施例2类似的分离操作和相同的药理评价分离得到1个(化合物编号11)isoquinoline型生物碱，它对σ受体具有结合抑制活性。通过结构测定，该化合物是新成分，如表1所示。表1、分离的化学结构式()表示的含氮化合物R9-，R10-表示R9和R10直接连接。实施例4、生物碱类化合物σ受体结合抑制活性在实施例1及2中所分到的全部生物碱类化合物按前述的测定方法测得对σ受体的亲和性，所得结果如表2所示。在表2中也换算为IC50(μM)。表2、含氮化合物的σ结合抑制<tablesid="table1"num="001"><table>化合物编号一般名IC50Ki1tetrohydropalmtine2．72．52dehydrocorydarine59．855．23isocorypalmine41．538．34kikemanine18．517．15capaurine2．12．06palmatine4．84．57scoulerine4．84．58capaurimine15．914．79berberine1．210sendaverine2．711新化合物20</table></tables>权利要求1.含一类生物碱的σ受体作用药，其特征是通式为的化合物，式中R1～R10是氢原子、羟基、C1～C6的烷氧基，C1～C6的酰氧基，C1～C6的烷基、无取代或者取代苯基、或者R1～R10内部相邻两个取代以亚甲二氧基表示、或者R9和R10直接相连成环；n表示0～4的整数；实线和虚线构成的双线表示碳-碳单键或者双键；与N原子结合的实线和虚线所构成的双线表示碳-氮单键或者双键。2.按权利要求1所述的含一类生物碱的σ受体作用药，其特征是R1是氢原子；R2是氢原子或者C1～C6的烷氧基；R3是羟基或者C1～C6的烷氧基；R4是氢原子、羟基或者C1～C6的烷氧基；R5是氢原子；R6是氢原子或者C1～C6的烷氧基；R7是羟基或者C1～C6的烷氧基、或者R6和R7一起构成-OCH2O-；R8是氢原子或者羟基；R9是氢原子、R10是氢原子、或者R9和R10直接连接成环；n是整数1或者2；实线和虚线构成的双线是碳-碳单键或者双键；与N原子结合的实线和虚线所构成的双线表示碳-氮单键或者双键。3.按权利要求2所述的含一类生物碱的σ受体作用药，其特征是R1是氢原子；R2是氢原子或者甲氧基；R3是羟基或者甲氧基；R4是氢原子、羟基或者甲氧基；R5是氢原子；R6是氢原子或者甲氧基；R7是羟基或者甲氧基、或者R6和R7一起构成-OCH2O-；R8是氢原子或者羟基；R9是氢原子、R10是氢原子或者R9和R10直接连接成环；实线和虚线构成的双线是碳-碳单键或者双键；与N原子结合的实线和虚线所构成的双线表示碳-氮单键或者双键。4.按权利要求3所述的含一类生物碱的σ受体作用药，其特征是结构式所表示的化合物。5.权利要求1或2或3或4中所记载的含一类生物碱的σ受体作用药用于治疗紧张、不安、抑郁、精神病或者精神分裂症。全文摘要本发明是关于具有与σ受体特异结合活性的生物碱类化合物的医疗用途。从药用植物中提取、纯化得到属于下列一般式的生物碱类物质:(式中,R文档编号A61K31/47GK1280827SQ9911741公开日2001年1月24日申请日期1999年12月3日优先权日1999年12月3日发明者田军,胡孝宏,丁立生,德田昌彦,川边纪雄,花村秀子,德田千寻申请人:中国科学院成都生物研究所,东丽株式会社