专利名称：新的2－烷基取代咪唑化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及一类新的2-位取代咪唑化合物，其制备方法，其在治疗CSBP介导的疾病中的应用和用于这种治疗的药物组合物。
背景技术：
细胞内信号传导是细胞对细胞外刺激反应的手段。细胞表面受体(例如蛋白酪氨酸激酶或7个跨膜G蛋白)、蛋白激酶和磷酸酶以及磷脂酶是信号在细胞内进一步传递的基本机制[Marshall,J.C.Cell,80,179-278(1995)]。蛋白激酶可分为5类，其中主要两类是酪氨酸激酶和丝氨酸/苏氨酸激酶，二者是根据酶是否将其底物在特异性酪氨酸或丝氨酸/苏氨酸残基上磷酰化来划分的[Hunter,T.,酶学方法(蛋白激酶分类)p.3,Hunter,T.；Sefton,B.M.；等.卷.200,Academic Press；San Diego,1991]。
对于大多数生物反应，多种细胞内激酶都参与其中，并且个别激酶可参与一种以上信号传递事件。这些激酶通常在胞质中，并可转移到细胞核或核糖体中，它们在细胞核和核糖体中可分别影响转录和翻译事件。目前，如通过对生长因子诱导的信号传导参与性MAP/ERK激酶进行的研究所示，人们对激酶参与转录控制的了解比对其影响翻译的了解要多[Marshall,C.J.Cell,80,179(1995)；Herskowitz,I.Cell,80,187(1995)；Hunter,T.Cell,80,225(1995)；Seger,R.,和Krebs,E.G.FASEBJ.,726-735(1995)]。
虽然有很多信号传导途径是细胞内环境稳定的一部分，但是大量细胞因子(例如IL-1和TNF)和炎症的一些其它介体(例如COX-2和iNOS)仅是作为对应激信号例如细菌脂多糖(LPS)的反应而产生的。Weinstein的研究首次提出，导致LPS-诱导的细胞因子生物合成的信号传导途径涉及蛋白激酶[Weinstein,等人,J.Immunol.151,3829(1993)]，但是没有鉴定出所涉及的特异性蛋白激酶。持有类似看法的Han[Han,等人，Science 265,808(1994)]通过研究确定鼠p38是在对LPS起反应的过程中被酪蛋白磷酰化的激酶。Lee[Lee等人，Nature,372,739(1944)]通过独自发现p38激酶是一类新抗炎剂的分子靶而提供了p38参与导致促炎细胞因子生物合成开始的LPS-刺激的信号传导途径的确定证据。p38(Lee将其称为CSBP1和2)的发现给一类抗炎化合物(SK&F 86002是其原型实例)提供了作用机制。这些化合物在低uM范围浓度下抑制人单核细胞中IL-1和TNF的合成[Lee等人，Int.J.Immunopharmac.10(7),835(1988)]，并在用环氧合酶抑制剂难以治疗的动物模型中表现出活性[Lee等人，Annals N.Y.Acad.Sci.,696,149(1993)]。
促分裂原和应激活化蛋白激酶级联
图1现在已强有力地确立，CSBP/p38是参与应激信号传导途径的几种激酶中的一种，其中所述应激信号传导途径与类似的促分裂原活化蛋白激酶(MAP)激酶级联平行，并且二者间有很强的独立性(图1)。包括LPS、促炎细胞因子、氧化剂、UV光和渗透压在内的应激信号活化CSBP/p38上游的激酶，该活化的激酶又将CSBP/p38在苏氨酸180和酪氨酸182上磷酰化，从而使CSBP/p38活化。MAPKAP激酶-2和MAPKAP激酶-3已被确定是CSBP/p38的下游物质，它们将热激蛋白Hsp 27磷酰化(图2)。现在仍然不知道MAPKAP-2、MAPKAP-3、Mnk1或Mk2是否参与细胞因子生物合成，或者CSBP/p38激酶抑制剂是否通过阻断尚未确定的CSBP/p38下游物质来调控细胞因子生物合成[Cohen,P.Trends Cell Biol.,353-361(1997)]。
图2然而，现在已知CSBP/p38激酶抑制剂(SK&F 86002和SB 203580)除了抑制IL-1和TNF之外，还降低包括IL-6、IL-8、GM-CSF和COX-2在内的多种促炎蛋白的合成。据表明CSBP/p38激酶抑制剂还能抑制TNF-诱导的VCAM-1在内皮细胞中的表达、TNF-诱导的磷酰化和胞质PLA2的活化以及IL-1刺激的胶原酶和溶基质素合成。这些和其它资料表明，CSBP/p38不仅参与细胞因子合成，还参与细胞因子信号传导[在Cohen,P.Trends Cell Biol.,353-361(1997)中总结回顾的CSBP/p38激酶]。
白细胞介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子(TNF)是由多种细胞例如单核细胞或巨噬细胞产生的生物物质。人们已证实IL-1介导被认为在免疫调控和其它生理状态例如发炎中很重要的多种生物活性[参见例如Dinarello等人，Rev.Infect.Disease,6,51(1984)]。IL-1的种种已知生物活性包括活化T辅助细胞、诱导发热、刺激前列腺素和胶原酶生成、嗜中性白细胞趋化性、诱导急性相蛋白、和抑制血浆铁水平。
有许多其中过量或失控的IL-1生成加剧和/或引起该疾病的病症。这些病症包括类风湿性关节炎、骨关节炎、内毒素血症和/或中毒性休克综合征，其它急性或慢性炎性疾病例如由内毒素引起的炎性反应或炎性肠病；结核、动脉粥样硬化、肌肉退化、恶病质、牛皮癣性关节炎、莱特尔氏综合征、类风湿性关节炎、痛风、外伤性关节炎、风疹性关节炎、和急性滑膜炎。最近的证据还将IL-1活性与糖尿病和胰β细胞联系在一起[归因于IL-1的生物活性的总结回顾,J.Clinical Immunology,5(5),287-297(1985)]。
过量或失控的TNF生成介导或加剧多种疾病，包括类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、骨关节炎、痛风性关节炎和其它关节炎性病症；脓毒症、脓毒性休克、内毒素性休克、革兰氏阴性脓毒症、中毒性休克综合征、成人呼吸窘迫综合征、脑疟疾、慢性肺炎性疾病、矽肺、肺肉状瘤病、骨吸收疾病、再灌注损伤、移植体对宿主的反应、同种移植物排斥反应、感染例如流感所致的发热和肌痛、感染或恶性肿瘤的继发性恶病质、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的继发性恶病质、AIDS、ARC(AIDS相关并发症)、瘢痕瘤形成、瘢痕组织形成、克罗恩氏病、溃疡性结膜炎、或热病(pyresis)。
白细胞介素-8(IL-8)是由包括单核细胞、成纤维细胞、内皮细胞、和角质形成细胞在内的几种细胞产生的趋化因子。其在内皮细胞中的生成是由IL-1、TNF、或脂多糖(LPS)诱导的。IL-8在体外刺激多种功能。据表明IL-8具有对嗜中性白细胞、T-淋巴细胞和嗜碱细胞的化学引诱特性。此外，IL-8还诱导正常和变应性个体的嗜碱细胞释放组胺以及嗜中性白细胞释放溶菌酶和呼吸破裂。据表明IL-8能增加Mac-1(CD11b/CD18)在嗜中性白细胞表面上的表达，同时没有蛋白的从头合成，这可导致嗜中性白细胞对血管内皮细胞的粘着性增加。有许多疾病的特征是大量嗜中性白细胞渗入。与IL-8生成增加(是导致嗜中性白细胞进入发炎位点的趋化性的原因)有关的病症可通过抑制IL-8生成的化合物治疗。
IL-1和TNF影响大量细胞和组织，这些细胞因子以及其它白细胞衍生细胞因子是多种疾病状态和病症的重要且关键的炎症介质。抑制这些细胞因子有益于控制、减轻和缓和这些疾病状态。
人们预计抑制通过除了上述IL-1、TNF和IL-8之外也是合成和/或活化几种其它促炎蛋白(即IL-6、GM-CSF、COX-2、胶原酶和溶基质素)所必需的CSBP/p38的信号传导是调节免疫系统的过量和破坏性活化的有效机制。文献中描述的CSBP/p38激酶抑制剂的不同有效抗炎活性[Badger等人，J.Pharm.Exp.Thera.279(3):1453-1461.(1996)]给这种预计提供了支持。
在本领域中，人们需要是细胞因子抑制性抗炎药物的化合物，即能抑制CSBP/p38/RK激酶的化合物来用于治疗。
发明简述本发明涉及式(Ⅰ)新化合物，和包含式(Ⅰ)化合物与可药用稀释剂或载体的药物组合物。
本发明涉及在需要治疗的哺乳动物中预防或治疗由CSBP/RK/p38介导的疾病的方法，所述方法包括将预防或治疗有效量的式(Ⅰ)化合物对所述哺乳动物给药。
本发明还涉及在需要治疗的哺乳动物中抑制细胞因子和治疗由细胞因子介导的疾病的方法，包括将有效量的式(Ⅰ)化合物对所述哺乳动物给药。
因此，本发明提供了下述结构式所代表的式(Ⅰ)新化合物或其可药用盐 其中X是氧、碳、硫或氮，或者X-R1部分是氢；V是CH或N；R1是氢、C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、杂环基、杂环基C1-6烷基、杂芳基、或杂芳基C1-6烷基，其中这些基团分别可任选被取代；X1是氢、XR1、NHRa、任选被取代的C1-4烷基、卤素、羟基、任选被取代的C1-4烷氧基、任选被取代的C1-4烷硫基、任选被取代的C1-4烷基亚磺酰基、CH2OR12、氨基、被一个C1-6烷基取代的氨基、被2个C1-6烷基取代的氨基、N(R10)C(O)Rb、N(R10)S(O)2Rd、或任选含有选自氧、硫或NR15的其它杂原子的5-7元N-杂环基；Rb是氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环基、或杂环基C1-4烷基；Rd是C1-6烷基、C3-7环烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环基、或杂环基C1-4烷基；R2独立地为任选被取代的C1-4烷基，其中这两个R2可一起形成任选被取代的C3-7环烷基或C5-7环烯基；Y是C2-4链烯基、羟基取代的C1-4烷基、杂环基、C(Z)OH、或N(R10)C(Z)R3；R3是C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、杂环基、杂环基C1-6烷基、杂芳基、或杂芳基C1-6烷基，其中这些基团分别可任选被取代；Ar是可任选被取代的芳基或杂芳基环；R10是氢或C1-4烷基；R12是氢、-C(Z)R13或任选被取代的C1-4烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基C1-4烷基、或S(O)2R25；Z是氧或硫；R13是氢、C1-10烷基、C3-7环烷基、杂环基、杂环基C1-10烷基、芳基、芳基C1-10烷基、杂芳基、或杂芳基C1-10烷基，其中所有这些基团都可任选被取代；R15是氢、氰基、C1-4烷基、C3-7环烷基或芳基；R25是C1-10烷基、C3-7环烷基、杂环基、芳基、芳烷基、杂环基、杂环基C1-10烷基、杂芳基或杂芳烷基。
发明详述式(Ⅰ)新化合物也可用于治疗需要抑制细胞因子或其产生的除人之外的哺乳动物。尤其是，用于在动物中进行治疗性或预防性处置的细胞因子介导的疾病包括病症例如在治疗方法部分提及的疾病，特别是病毒感染。所述病毒感染的实例包括但不限于慢病毒属病毒感染，例如马接触性贫血病毒、山羊关节炎病毒、visna病毒或maedi病毒感染，或逆转录病毒感染，例如但不限于猪免疫缺陷病毒(FIV)、牛免疫缺陷病毒、或犬免疫缺陷病毒或其它逆转录病毒感染。
在式(Ⅰ)化合物中，合适的X是氧、碳、硫或氮，或者X-R1部分是氢。X优选为氧或氮，更优选为氧。
合适的R1是氢、C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、杂环基、杂环基C1-6烷基、杂芳基、或杂芳基C1-6烷基，其中这些基团分别可任选被取代。优选的R1是C1-6烷基、芳基、或芳基C1-6烷基。当X是碳时，R1可以是氢，二者形成甲基。当X是氮时，R1可以是氢，二者形成未取代氨基。
适当地，当V是CH或N时，该5-位杂环是吡啶或嘧啶环。该环还可被X1取代，其中X1是氢、XR1、任选被取代的C1-4烷基、卤素、羟基、任选被取代的C1-4烷氧基、任选被取代的C1-4烷硫基、任选被取代的C1-4烷基亚磺酰基、CH2OR12、氨基、被一个C1-6烷基取代的氨基、被2个C1-6烷基取代的氨基、N(R10)C(O)Rb、N(R10)S(O)2Rd、或任选含有选自氧、硫或NR15的其它杂原子的5-7元N-杂环基。X1优选为氢。当X1是氢时，X-R1部分也可以是氢，从而形成未取代的嘧啶或吡啶环。
适当地，R10分别独立地选自氢或C1-4烷基。
适当地，R12是氢、C(Z)R13或任选被取代的C1-4烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基C1-4烷基、或S(O)2R25。
适当地，Z是氧或硫，优选为氧。
适当地，R13是氢、C1-10烷基、C3-7环烷基、杂环基、杂环基C1-10烷基、芳基、芳基C1-10烷基、杂芳基、或杂芳基C1-10烷基，其中所有这些基团都可任选被取代。
适当地，R25是C1-10烷基、C3-7环烷基、杂环基、芳基、芳烷基、杂环基、杂环基C1-10烷基、杂芳基或杂芳烷基。
适当地，Rb是氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环基、或杂环基C1-4烷基；其中这些基团分别可任选被取代。
适当地，Rd是C1-6烷基、C3-7环烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环基、或杂环基C1-4烷基；其中这些基团分别可任选被取代。
适当地，R2独立地为任选被取代的C1-4烷基，并且这两个R2可一起形成任选被取代的C3-7环烷基或C5-7环烯基。
适当地，Y是C2-4链烯基、羟基取代的C1-4烷基、杂环基、C(Z)OH、或N(R10)C(Z)R3。
适当地，当Y是杂环时，该杂环可任选如下所述被取代一次或多次。该杂环优选为吡咯烷、哌啶、哌嗪、吗啉、咪唑烷或吡唑烷。
适当地，R3是C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、杂环基、杂环基C1-6烷基、杂芳基、或杂芳基C1-6烷基，其中这些基团分别可任选被取代。
适当地，Ar是可任选被取代的芳基或杂芳基环。
当Ar是芳基时，其优选为4-苯基、4-萘-1-基、或5-萘-2-基，该芳基可被1-3个取代基独立地取代，所述取代基是卤素、S(O)mR8、OR8、(CR10R20)mNR10R20、NR10C(Z)R8或NR10S(O)mR11。
适当地，R8是氢、杂环基、杂环基烷基或R11。
适当地，R11是C1-10烷基、卤素取代的C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、C3-7环烷基、C5-7环烯基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基。
适当地，m是0、1或2。
在芳基环4-位上的优选取代基包括卤素，尤其是氟和氯，其中氟是特别优选的；和SR8以及SOR8，其中R8优选为C1-2烷基，更优选为甲基。在芳基环3-位上的优选取代基包括卤素，尤其是氯；OR8，尤其是C1-4烷氧基；氨基；NR10C(Z)R8，尤其是NHCO(C1-10烷基)；和NR10S(O)mR11、尤其是NHSO2(C1-10烷基)。该芳基优选为未取代或取代的苯基。当被取代时，Ar更优选在4-位被氟取代和/或在3-位被氟、氯、C1-4烷氧基、甲磺酰氨基或乙酰氨基取代。
当Ar是杂芳基时，其包括但不限于吡咯、喹啉、异喹啉、吡啶、嘧啶、噁唑、噻唑、噻二唑、三唑、咪唑、或苯并咪唑、或吲哚基，所述环可任选被一个或多个、优选1-3个取代基独立地取代(在任意环中)，所述取代基是卤素、S(O)mR8、OR8、(CR10R20)mNR10R20、NR10C(Z)R8或NR10S(O)mR11。
合适的可药用盐是本领域技术人员众所周知的，并包括与无机酸或有机酸成的盐，所述酸有例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、乙酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、乳酸、草酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、苯甲酸、水杨酸、苯乙酸、和扁桃酸。此外，例如当R3中的取代基Y1包含羧基时，式(Ⅰ)化合物的可药用盐还可以是与可药用阳离子形成的盐。合适的可药用阳离子是本领域技术人员众所周知的，并包括碱金属、碱土金属、铵和季铵阳离子。
本说明书中使用的下述术语是指·“卤素”-所有卤素，即氯、氟、溴和碘；·“C1-10烷基”或“烷基”-除非另外限定链长，否则是指具有1-10个碳原子的直链或支链烷基，包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基等；·本说明书中使用的“环烷基”是指优选具有3-8个碳原子的环状基团，包括但不限于环丙基、环戊基、环己基等；·本说明书中使用的“环烯基”是指优选具有5-8个碳原子的具有至少一个双键的环状基团，包括但不限于环戊烯基、环己烯基等；·“芳基”-苯基和萘基；·“杂芳基”(其自身或在任意组合中，例如“杂芳氧基”)-其中一个或多个环含有一个或多个选自N、O或S的杂原子的5-10元芳香环系，例如但不限于吡咯、喹啉、异喹啉、吡啶、嘧啶、噁唑、噻唑、噻二唑、三唑、咪唑、或苯并咪唑；·“杂环基”(其自身或在任意组合中，例如“杂环基烷基”)-其中一个或多个环含有一个或多个选自N、O或S的杂原子饱和或全不饱和或部分不饱和4-10元环系，例如但不限于吡咯烷、哌啶、哌嗪、吗啉、咪唑烷或吡唑烷；·“芳酰基”-C(O)Ar，其中Ar是苯基、萘基或芳烷基衍生物例如上述芳烷基，该芳烷基包括但不限于苄基和苯乙基。
·“链烷酰基”-C(O)C1-10烷基，其中所述烷基定义同上；·“亚磺酰基”一相应硫化物的氧化物S(O)，术语“硫代”是指硫化物；·本说明书所用术语“芳烷基”或“杂芳烷基”或“杂环基烷基”是指连在定义同上的C1-6烷基(除非另外限定)上的定义分别同上的芳基、杂芳基或杂环基。
在本说明书中，除非具体限定，否则“任选被取代的”是表示这样的基团，例如卤素如氟、氯、溴或碘；羟基；羟基取代的C1-10烷基；C1 -10烷氧基，例如甲氧基或乙氧基；卤素取代的C1-10烷氧基；S(O)m烷基，其中m是0、1或2，例如甲硫基、甲基亚磺酰基或甲基磺酰基；NR7R17，例如氨基或被一个C1-4烷基取代的氨基或被2个C1-4烷基取代的氨基，其中R7R17可与它们所连的氮原子一起环合形成任选含有选自O/N/S的其它杂原子的5-7元环；C1-10烷基、C3-7环烷基、或C3-7环烷基C1-10烷基，例如甲基、乙基、异丙基、叔丁基等、或环丙基甲基；卤素取代的C1-10烷基，例如CF2CF2H、或CF3；任选被取代的芳基例如苯基，或任选被取代的芳烷基例如苄基或苯乙基，其中这些芳基部分也可以被下述基团取代1次或2次卤素、羟基、羟基取代的烷基、C1-10烷氧基、S(O)m烷基、氨基、被一个C1-4烷基取代的氨基、被两个C1-4烷基取代的氨基、C1-4烷基或CF3。
适当地，R7和R17分别独立地选自氢或C1-4烷基，或者R7和R17与它们所连的氮原子一起形成任选含有选自氧、硫或氮的其它杂原子的5-7元杂环。
应当认识到，本发明化合物可以以立体异构体、区域异构体、或非对映异构体形式存在。本发明化合物可包含一个或多个不对称碳原子，并且可以以外消旋或旋光形式存在。所有这些化合物都包括在本发明范围内。
式(Ⅰ)化合物是咪唑衍生物，其可用市售原料或通过类似于众所周知方法的方法制得的原料按照本领域技术人员众所周知的方法容易地制得，例如在《综合杂环化学》，Katritzky和Rees编写，Pergamon Press,1984,5,457-497中描述的方法。在许多这种合成中，关键步骤是形成中心咪唑核以生成式(Ⅰ)化合物。特别是US 3707475和US 3940486中描述了合适的方法，这两篇专利文献全文引入本发明以作参考。这些专利描述了α-二酮和α-羟基酮(苯偶姻)的合成及其在制备咪唑和N-羟基咪唑中的应用。其后，更多的式(Ⅰ)化合物可通过用常规官能团互换法操纵R1、R2、R3和R4中任意基团上的取代基来获得。
通式(Ⅰ)化合物(V=N,X=O、N、S)可如上述反应方案所示制得。将4-甲基-2-(甲硫基)嘧啶的阴离子与芳香酸的Weinreb酰胺缩合以生成酮，用亚硝酸钠将该酮氧化以获得酮肟。将该产物与烷基醛和乙酸铵在乙酸中加热，以形成咪唑核。用亲核试剂置换该甲硫基(X=O、N、S)可如下所述来实现用3-氯过苯甲酸或过硫酸氢钾制剂将其氧化成甲基亚磺酰基衍生物，然后在加入或不加入碱例如氢化钠、有机锂或三烷基胺条件下用亲核制剂置换。对于胺(X=N)，可使用氨基化铝来影响该置换。
通式(Ⅰ)化合物(V=CH，X=O、N、S)可如实施例1所述制得，只是用4-甲基-2-氯吡啶来代替4-甲基吡啶(Gallagher等人，Bioorg.Med.Chem.5,49,1997)。所得2-氯吡啶基咪唑的亲核取代可通过US 5670527中描述的方法进行。
Adams等人的USSN 08/481671和Adams等人的PCT/US93/00674(现在是US 5686455)中描述了制备式(Ⅰ)化合物的其它合成方法。将文献全文引入本发明作为参考。
一旦已经建立了咪唑核，即可用标准官能团互换技术来制备另外的式(Ⅰ)化合物，例如使用或不使用催化剂金属氰化物例如NaCN，通过在甲醇中与HNR13R14一起加热而由-CO2CH3转化成-C(O)NR13R14；在吡啶中用例如ClC(O)R3由-OH转化成-OC(O)R3；用异硫氰酸烷基酯或硫氰酸由-NHR10转化成-NR10-C(S)NR13R14；用氯甲酸烷基酯由-NHR6转化成NR6C(O)OR6；通过用异氰酸酯例如HN=C=O或R10N=C=O处理由-NHR10转化成-NR10C(O)NR13R14；通过在吡啶中用例如ClC(O)R3处理由-NHR10转化成-NR10-C(O)R8；通过在醇中与H3NR3+OAc-加热由-C(NR13R14)SR3转化成-C(=NR10)NR13R14；在惰性溶剂例如丙酮中用R6-I由-C(S)R13R14转化成-C(NR13R14)SR3；用HNR13R14-C(=NCN)-NR13R14由-C(S)NH2转化成-C(S)NR13R14(其中R13和R14不是氢)，其中HNR13R14-C(=NCN)-NR13R14是通过在无水醇中与NH2CN加热而由-C(=NR13R14)-SR3转化来的，或者通过在乙醇中用BrCN和NaOE处理而由-C(=NH)-NR13R14转化来的；通过用(R8S)2C=NCN处理由-NHR10转化成-NR10-C(=NCN)SR8；通过在吡啶中与ClSO2R3加热由-NHR10转化成-NR10SO2R3；通过用Lawesson’s试剂[2,4-二(4-甲氧基苯基)-1,3,2,4-二硫杂二磷杂环戊烷-2,4-二硫化物]处理由-NR10C(O)R8转化成-NR10C(S)R3；用三氟甲磺酸酐和碱由-NHR6转化成-NR10SO2CF3，其中R3、R6、R10、R13和R14定义如下，或者采用在US5593991中描述的方法，该文献全文引入本发明以作参考。
其中R3是杂环基、杂环基C1-10烷基或R8。
其中R6是氢、可药用阳离子、C1-10烷基、C3-7环烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环基、芳酰基、或C1-10链烷酰基。
其中R8是C1-10烷基、卤素取代的C1-10烷基、C2-10链烯基、C2-10链炔基、C3-7环烷基、C5-7环烯基、芳基、芳基C1-10烷基、杂芳基、杂芳基C1-10烷基、(CR10R20)nOR11、(CR10R20)nS(O)mR18、(CR10R20)nNHS(O)2R18、(CR10R20)nNR13R14；其中所述芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳基烷基可任选被取代。适当地，n是1-10之间的整数。
其中R10和R20分别独立地选自氢或C1-4烷基。
其中R13和R14分别独立地选自氢或任选被取代的C1-4烷基、任选被取代的芳基、或任选被取代的芳基C1-4烷基，或者R13和R14与它们所连的氮原子一起形成任选含有选自氧、硫或氮的其它杂原子的5-7元杂环。
用于羟基和咪唑上氮的合适保护基是本领域众所周知的，并且描述在许多文献中，例如《有机合成中的保护基》，Greene T W,Wiley-Interscience,New York,1981。羟基保护基的适当实例包括甲硅烷基醚，例如叔丁基二甲基或叔丁基二苯基，和烷基醚，例如通过不定连结物(CR10R20)n的烷基链连接的甲基。咪唑氮保护基的适当实例包括四氢吡喃基。
应当理解，其中Ar被烷基亚磺酰基、芳基亚磺酰基或芳基磺酰基取代的式(Ⅰ)化合物是前药，其在体内被还原而转化成相应的烷硫基或芳硫基形式。
式(Ⅰ)化合物的可药用酸加成盐可通过已知方法制得，例如通过在适当溶剂存在下用适当量的酸处理式(Ⅰ)化合物来制得。
通过下述实施例来描述本发明，但这些实施例仅仅是举例说明，不应当将其理解为对本发明范围的限制。合成实施例实施例22-[2-(N-苯甲酰基-N-甲基氨基)-(1,1-二甲基)乙基]-4-(4-氟苯基)-5-(4-吡啶基)咪唑按照实施例1的方法，但是用3-(N-苯甲酰基-N-甲基氨基)-2,2-二甲基丙烯醛代替2,2-二甲基-4-戊烯醛，制得了本标题化合物。MS(ES+)m/e429[M+H]+。
实施例3(+/-)-2-[(3,4-二羟基)-1,1-二甲基丁基]-4-(4-氟苯基)-5-(4-吡啶基)咪唑向实施例1标题化合物(13.5mg,48umol)在8∶1丙酮∶水(0.5ml)内的溶液中加入4-甲基吗啉-N-氧化物(6.7mg,57umol)和一滴四氧化锇(2.5％在2-甲基-2-丙醇中的溶液)。将该溶液在室温(RT)搅拌过夜，并真空浓缩。把残余物通过快速色谱法(硅胶，5-9％甲醇/二氯甲烷)纯化，获得了本标题化合物(10mg)。MS(ES+)m/e 356[M+H]+。
实施例42-[(2-(2-羧基)-1,1-二甲基乙基]-4-(4-氟苯基)-5-(4-吡啶基)咪唑向实施例1标题化合物(52mg,186umol)在2∶2∶3四氯化碳∶乙腈∶水(1.3ml)内的溶液中加入高碘酸钠(163mg,762umol)和催化剂三氯化钌(2mg)。将该溶液在室温搅拌过夜。加入水(5ml)，用二氯甲烷萃取该混合物。将该有机萃取液干燥(MgSO4)，真空浓缩，把残余物通过快速色谱法(硅胶，2％甲醇/二氯甲烷，然后是在2-5％甲醇/二氯甲烷中的0.1％乙酸)纯化，获得了本标题化合物(4mg)。MS(ES+)m/e340[M+H]+。治疗方法式(Ⅰ)化合物或其可药用盐可用于制备在人或其它哺乳动物中预防或治疗下述类型疾病的药物，所述疾病由于哺乳动物细胞例如但不限于单核细胞和/或巨噬细胞过量或失控生成细胞因子而加剧或引起。
式(Ⅰ)化合物能抑制促炎细胞因子，例如IL-1、IL-6、IL-8和TNF，因此能用于治疗。IL-1、IL-6、IL-8和TNF影响多种细胞和组织，这些细胞因子以及其它白细胞衍生细胞因子是多种疾病状态和病症的重要且关键的炎症介质。抑制这些促炎细胞因子有益于控制、减轻和缓和多种这些疾病状态。
式(Ⅰ)化合物能抑制诱导促炎蛋白，例如COX-2，因此能用于治疗，其中COX-2还有许多其它名称，例如前列腺素内过氧化物合酶-2(PGHS-2)。环氧合酶(CO)途径的这些促炎脂质介质是由诱导COX-2酶产生的。COX-2导致生成这些衍生自花生四烯酸的产物例如前列腺素，这些产物影响多种细胞和组织，它们是多种疾病状态和病症的重要且关键的炎症介质。式(Ⅰ)化合物不影响COX-1。这种对COX-2的选择性抑制可减轻或排除由于COX-1被抑制所致的溃疡倾向，从而实现抑制前列腺素(细胞保护作用所必需的)。因此抑制这些促炎细胞介质有益于控制、减轻和缓和多种这些疾病状态。据证实大多数重要的炎症介质尤其是前列腺素参与疼痛，例如参与疼痛受体的致敏、或水肿。控制疼痛方面包括治疗神经肌肉疼痛、头痛、癌症疼痛和关节炎疼痛。式(Ⅰ)化合物或其可药用盐可在人或其它哺乳动物中通过抑制COX-2酶合成来用于预防或治疗。
因此，本发明提供了抑制COX-2合成的方法，包括给予有效量的式(Ⅰ)化合物或其可药用盐。本发明还提供了在人或其它哺乳动物中通过抑制COX-2酶合成来预防或治疗的方法。
因此，本发明提供了治疗细胞因子介导的疾病的方法，包括给予细胞因子干扰有效量的式(Ⅰ)化合物或其可药用盐。
尤其是式(Ⅰ)化合物或其可药用盐可用于在哺乳动物中预防或治疗下述类型疾病，所述疾病由于哺乳动物细胞例如但不限于单核细胞和/或巨噬细胞过量或失控生成IL-1、IL-6、IL-8和TNF而加剧或引起。
因此，另一方面，本发明涉及在哺乳动物抑制IL-1生成的方法，包括将有效量的式(Ⅰ)化合物或其可药用盐对所述哺乳动物给药。
有许多其中过量或失控的IL-1生成加剧和/或引起该疾病的病症。这些病症包括类风湿性关节炎、骨关节炎、内毒素血症和/或中毒性休克综合征，其它急性或慢性炎性疾病例如由内毒素引起的炎性反应或炎性肠病，结核、动脉粥样硬化、肌肉退化、多发性硬化、恶病质、骨吸收、牛皮癣性关节炎、莱特尔氏综合征、类风湿性关节炎、痛风、外伤性关节炎、风疹性关节炎、和急性滑膜炎。最近的证据还将IL-1活性与糖尿病和胰β细胞以及阿尔茨海默氏病联系在一起。
另一方面，本发明涉及在哺乳动物抑制TNF生成的方法，包括将有效量的式(Ⅰ)化合物或其可药用盐对所述哺乳动物给药。
过量或失控的TNF生成介导或加剧多种疾病，包括类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、骨关节炎、痛风性关节炎和其它关节炎性病症，脓毒症、脓毒性休克、内毒素性休克、革兰氏阴性脓毒症、中毒性休克综合征、成人呼吸窘迫综合征、脑疟疾、慢性肺炎性疾病、矽肺、肺肉状瘤病、骨吸收疾病例如骨质疏松、再灌注损伤、移植体对宿主的反应、同种移植物排斥反应、感染所致的发热和肌痛例如流感、感染或恶性肿瘤的继发性恶病质、获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的继发性恶病质、AIDS、ARC(AIDS相关并发症)、瘢痕瘤形成、瘢痕组织形成、克罗恩氏病、溃疡性结膜炎、和热病(pyresis)。
式(Ⅰ)化合物还可用于治疗病毒感染，其中所述病毒对通过TNF的上调敏感，或在体内引起TNF生成增加。可用本发明化合物治疗的病毒是其感染结果是生成TNF的病毒，或者对式(Ⅰ)TNF抑制性化合物直接或间接的抑制作用(例如通过降低复制而起的抑制作用)敏感的病毒。这些病毒包括但不限于HIV-1、HIV-2和HIV-3，巨细胞病毒(CMV)、流感病毒、腺病毒，和疱疹类病毒，包括但不限于带状疱疹病毒和单纯性疱疹病毒。因此，另一方面，本发明涉及治疗感染了人免疫缺陷病毒(HIV)的哺乳动物、优选人的方法，包括将TNF抑制有效量的式(Ⅰ)化合物或其可药用盐对所述哺乳动物给药。
人们还认识到，IL-6和IL-8都是在鼻病毒(HRV)感染期间产生的，并且是导致感冒的致病原因以及与HRV感染有关的哮喘加剧的原因(Turner等人(1998),Clin.Infec.Dis.,Vol 26,p 840；Teren等人(1997),AmJ Respir Crit Care Med vol 155,p 1362；Grunberg等人(1997),Am J RespirCrit Care Med 156:609和Zhu等人,J Clin Invest (1996),97:421)。人们还在体外证实,用HRV感染肺上皮细胞导致生成了IL-6和IL-8(Subauste等人,J.Clin.Invest.1995,96:549)。上皮细胞代表HRV感染的初始位点。因此，本发明另一方面是治疗以减轻由鼻病毒感染所致的炎症、同时无需直接作用于病毒本身的方法。
式(Ⅰ)化合物也可用于治疗需要抑制TNF产生的除人之外的哺乳动物。用于在动物中进行治疗性或预防性处置的TNF介导的疾病包括病症例如上述疾病，特别是病毒感染。所述病毒的实例包括但不限于慢病毒属病毒，例如马接触性贫血病毒、山羊关节炎病毒、visna病毒或maedi病毒，或逆转录病毒感染，例如猪免疫缺陷病毒(FIV)、牛免疫缺陷病毒、或犬免疫缺陷病毒。
式(Ⅰ)化合物也可局部使用来治疗或预防由细胞因子例如IL-1或TNF过量生成介导或加剧的局部疾病，例如发炎关节、湿疹、牛皮癣和其它炎性皮肤病症例如晒斑；炎性眼睛病症，包括结膜炎；热病(pyresis)、疼痛以及与炎症有关的其它病症。
我们已经证实式(Ⅰ)化合物还能抑制IL-8(白细胞介素-8,NAP)的生成。因此，另一方面，本发明涉及在哺乳动物中抑制IL-8生成的方法，包括将有效量的式(Ⅰ)化合物或其可药用盐对所述哺乳动物给药。
有许多其中过量或失控的IL-8生成参与加剧和/或引起该疾病的病症。这些疾病的特征是有大量嗜中性白细胞渗入，例如牛皮癣、炎性肠病、哮喘、心脏和肾脏再灌注损伤、成人呼吸窘迫综合征、血栓形成和肾小球性肾炎。所有这些疾病都与导致嗜中性白细胞趋化到炎症位点的IL-8生成增加有关。与其它炎性细胞因子(IL-1、TNF、和IL-6)相反，IL-8具有促进嗜中性白细胞趋化性和活化的独特性质。因此，抑制IL-8生成可直接降低嗜中性白细胞渗入。
将式(Ⅰ)化合物以足以抑制细胞因子、尤其是IL-1、IL-8或TNF生成的量给药，以将细胞因子下调到正常水平，或者在某些情况下下调到正常水平以下，从而改善或预防疾病。在本发明说明书中，异常水平的IL-1、IL-8或TNF包括(ⅰ)水平大于或等于1微微克/ml的游离(不是结合到细胞上的)IL-1、IL-8或TNF；(ⅱ)所有结合在细胞上的IL-1、IL-8或TNF；或(ⅲ)在分别产生IL-1、IL-8或TNF的细胞或组织中存在的基本水平之上的IL-1、IL-8或TNF。
式(Ⅰ)化合物是细胞因子抑制剂、具体来说是IL-1、IL-8和TNF抑制剂的发现是基于下述体外分析中式(Ⅰ)化合物对IL-1、IL-8和TNF生成的作用而完成的。
本说明书所用术语“抑制IL-1(IL-8或TNF)生成”是指a)通过抑制包括但不限于单核细胞和巨噬细胞在内的所有细胞在体内释放细胞因子，来将人体内过高的细胞因子(IL-1、IL-8或TNF)水平降低到正常水平或正常水平以下；b)将人体内过高的细胞因子(IL-1、IL-8或TNF)水平在基因水平上下调到正常水平或正常水平以下；c)通过抑制作为翻译后事件的细胞因子(IL-1、IL-8或TNF)的直接合成来下调；d)将人体内过高的细胞因子(IL-1、IL-8或TNF)水平在翻译水平上下调到正常水平或正常水平以下。
本说明书所用术语“TNF介导的疾病或疾病状态”是指其中TNF通过其自身生成或通过引起其它单核因子例如但不限于IL-1、IL-6或IL-8释放而起作用的所有疾病。例如其中IL-1是主要成分、并且IL-1的产生或活化被TNF加剧或其分泌与TNF有关的疾病可以认为是由TNF介导的疾病。
本说明书所用术语“细胞因子”是指影响细胞功能的所有分泌的多肽，并且是在免疫、炎症或造血反应中调节细胞间相互作用的分子。细胞因子包括但不限于单核因子和淋巴因子，无论它们是由什么细胞产生的都包括在内。例如，单核因子通常指由单核细胞例如巨噬细胞和/或单核细胞产生和分泌的细胞因子。然而，其它多种细胞也产生单核因子，例如天然杀伤细胞、成纤维细胞、嗜碱细胞、嗜中性白细胞、内皮细胞、脑星形细胞、骨髓基质细胞、表皮角质形成细胞和B-淋巴细胞。淋巴因子通常是指由淋巴细胞产生的细胞因子。细胞因子的实例包括但不限于白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和肿瘤坏死因子-β(TNF-β)。
本说明书所用术语“细胞因子干扰量”或“细胞因子抑制量”是指，当给予患者以预防或治疗被过量或失控的细胞因子生成加剧或引起的疾病时，能使体内细胞因子水平降至正常水平或正常水平以下的有效量的式(Ⅰ)化合物。
在本说明书中，在短语“抑制细胞因子以用于治疗HIV-感染患者”中提及的细胞因子是，(a)参与引发和/或维持T细胞活化和/或活化的T细胞介导的HIV基因表达和/或复制和/或(b)任意细胞因子介导的疾病所致的问题例如恶病质或肌肉退化的细胞因子。
因为TNF-β(也称为淋巴毒素)与TNF-α(也称为恶液质素)有接近的结构同源性，并且分别诱导类似生物反应和结合相同细胞受体，本发明化合物既抑制TNF-α又抑制TNF-β，所以在本说明书中，除非具体描述，否则TNF-α和TNF-β统称为“TNF”。
最近，有几个实验室独立地鉴定出了MAP激酶的一个新成员，或者称为CSBP、p38、或RK[参见Lee等人，Nature,Vol.300 n(72),739-746(1994)]。通过采用广谱刺激，例如物理化学应激，和用脂多糖或促炎细胞因子例如白细胞介素-1和肿瘤坏死因子处理，在不同细胞系统中观察到了这种新蛋白激酶经由双重磷酰化的活化。我们已经确定了本发明细胞因子生物合成抑制剂式(Ⅰ)化合物是CSBP/p38/RK激酶活性的有效选择性抑制剂。这些抑制剂有助于确定炎症反应中的信号传导途径。尤其是，这是第一次确定的信号传导途径可被指定活化巨噬细胞内细胞因子生成中的脂多糖。除了已经指出的疾病外，还包括治疗中风、神经创伤、心脏和肾脏再灌注损伤、血栓形成、肾小球性肾炎、糖尿病和胰β细胞、多发性硬化、肌肉退化、湿疹、牛皮癣、晒斑、和结膜炎。
在多个动物模型中测试细胞因子抑制剂的抗炎活性。选择对环氧合酶抑制剂相当敏感的模型系统以确定细胞因子抑制剂的独特活性。细胞因子抑制剂在很多体内实验中表现出显著活性。最引人注目的是在胶原诱导的关节炎模型中的有效性和在内毒素休克模型中抑制TNF生成。在后者的研究中，血浆中TNF水平的下降与存活以及免受内毒素休克致死的保护作用有关。同样非常重要的是，在大鼠胎儿长骨器官培养系统中化合物抑制骨吸收的有效性。Griswold等人，(1988)Arthritis Rheum.31:1406-1412；Badger等人，(1989)Circ.Shock 27,51-61；Votta等人，(1994)in vitro.Bone 15,533-538；Lee等人(1993),B Ann.N.Y.Acad.Sci.696,149-170。
为了在治疗中使用式(Ⅰ)化合物或其可药用盐，通常依据标准制药方法将其配制成药物组合物。因此本发明还涉及包含有效无毒量式(Ⅰ)化合物和可药用载体或稀释剂的药物组合物。
可通过任意常规给药途径将式(Ⅰ)化合物、其可药用盐和含有式(Ⅰ)化合物或其可药用盐的药物组合物方便地给药，例如口服给药、局部给药、非胃肠道给药或吸入给药。可将式(Ⅰ)化合物在通过常规方法把式(Ⅰ)化合物与标准药物载体合并在一起而制得的常规剂型中给药。还可将式(Ⅰ)化合物在与已知的另一种治疗活性化合物联合使用的常规剂型中给药。这些方法可包括混合、制粒和压制，或适当时将活性组分溶解，以获得所需制剂。应当理解，可药用载体或稀释剂的形式或特征是由与其一起混合的活性组分的量、给药途径以及其它众所周知的可变因素决定的。在与制剂其它组分配伍方面，载体必须是“可接受的”，并且对其接受者无害。
所用药物载体可以是例如固体或液体。固体载体的实例是乳糖、白土、蔗糖、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯胶、硬脂酸镁、硬脂酸等。液体载体的实例是糖浆、花生油、橄榄油、水等。同样，载体或稀释剂可包括本领域众所周知的缓释材料，例如甘油一硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯或它们与蜡的混合物。
可采用多种药物剂型。如果使用固体载体，可将制剂制片、以方面或小丸形式置于硬明胶胶囊中，或者制成锭剂或糖锭剂。固体载体的量可有很大不同，但是优选为约25mg-约1g。当使用液体载体时，可将制剂制成糖浆剂、乳剂、软明胶胶囊剂、无菌注射液体例如安瓿或非水液体悬浮剂。
式(Ⅰ)化合物可局部给药，即非系统给药。这包括将式(Ⅰ)化合物从外面施用在表皮口腔前庭上，和将式(Ⅰ)化合物滴注到耳朵、眼睛和鼻子中，这样式(Ⅰ)化合物没有显著地进入到血流中。与之相反，系统给药是指口服给药、静脉内给药、腹膜内给药和肌内给药。
适于局部给药的制剂包括适于穿过皮肤进入发炎位点的液体或半液体制剂，例如搽剂、洗剂、霜剂、软膏剂或糊剂，和适于给到眼睛、耳朵或鼻子中的滴剂。对于局部给药，活性组分的含量可以为占制剂重量的0.001％-10％w/w、例如1％-2％w/w。然而，其含量可以为占制剂重量的高达10％w/w，但是优选占制剂重量的5％w/w以下，更优选占制剂重量的0.1％-1％w/w。
本发明洗剂包括适于施用在皮肤或眼睛上的洗剂。眼用洗剂可包含任选含有杀菌剂的无菌水溶液，并且可通过与滴剂制备法相类似的方法制得。施用在皮肤上的洗剂或搽剂还可包含用于促进干燥和冷却皮肤的试剂，例如乙醇或丙酮，和/或湿润剂例如甘油或油例如蓖麻油或花生油。
本发明霜剂、软膏剂或糊剂是活性组分的外用半固体制剂。其可通过在适当机械辅助下、将细分散或粉末形式的活性组分单独或在水或非水液体的溶液或悬浮液中与含脂肪或不含脂肪基质混合而制得。所述基质可包括烃，例如硬石蜡、软石蜡、液体石蜡、甘油、蜂蜡、金属皂；胶浆；天然油，例如杏仁油、玉米油、花生油、蓖麻油或橄榄油；羊毛脂或其衍生物或脂肪酸例如硬脂酸或油酸以及醇例如丙二醇或大粒凝胶。这种制剂可包含任意合适的表面活性剂例如阴离子、阳离子或非离子表面活性剂例如脱水山梨醇酯或其聚氧乙烯衍生物。还可包含悬浮剂例如天然树胶、纤维素衍生物或无机材料例如含有硅的硅石、以及其它组分例如羊毛脂。
本发明滴剂可包含无菌水溶液或油溶液或悬浮液，并且可通过将活性组分溶于杀菌剂和/或杀真菌剂和/或任意其它适当防腐剂的水溶液中来制备，所述水溶液优选含有表面活性剂。然后可通过过滤使所得溶液变澄清，转移到适当容器中，然后密封，并通过高压灭菌法或在98-100℃维持半小时来灭菌。或者，可通过过滤将该水溶液灭菌，然后通过无菌技术转移到容器中。适于包含在滴剂中的杀菌剂和杀真菌剂的实例有硝酸苯汞或乙酸苯汞(0.002％)、苯扎氯铵(0.01％)和醋酸洗必太(0.01％)。适于制备油溶液的合适溶剂包括甘油、稀醇和丙二醇。
可将式(Ⅰ)化合物非胃肠道给药，即静脉内给药、肌内给药、皮下给药、鼻内给药、直肠内给药、阴道内给药或腹膜内给药。皮下和肌内形式的非胃肠道给药通常是优选的。用于这种给药的适当剂型可通过常规技术制得。式(Ⅰ)化合物还可通过吸入给药，即通过鼻内或口吸入给药。用于这种给药的适当剂型例如气雾剂或剂量计量吸入器可通过常规技术制得。
在本发明公开的所有使用方法中，对于口服给药，式(Ⅰ)化合物的日剂量优选为约0.1-约80mg/kg总体重，优选为约0.2-30mg/kg，更优选为约0.5-15mg/kg。对于非胃肠道给药，式(Ⅰ)化合物的日剂量一般为约0.1-约80mg/kg总体重，优选为约0.2-30mg/kg，更优选为约0.5-15mg/kg。对于局部给药，日剂量优选为0.1mg-150mg，每天给药1-4次、优选2次或3次。对于吸入给药，日剂量优选为约0.01mg/kg-约1mg/kg。本领域技术人员应当理解，式(Ⅰ)化合物或其可药用盐单次剂量的最佳量和间隔应当根据所治疗疾病的性质和严重程度、给药剂型、途径和位点、和所治疗的特定病人来确定，并且可通过常规技术确定这种最佳量和间隔。本领域技术人员还应当理解，治疗的最佳疗程，也就是说对于确定天数式(Ⅰ)化合物或其可药用盐每天给药的次数和给药天数，可由本领域技术人员使用常规疗程测试法来确定。生物学实施例在小鼠和大鼠中LPS-诱导的TNFα生成为了评价在啮齿动物中在体内对LPS-诱导的TNFα生成的抑制，给小鼠和大鼠都注射LPS。小鼠方法用化合物或载体预处理得自Charles River Laboratories的雄性Balb/c小鼠(30分钟)。预处理30分钟后，将LPS(大肠杆菌血清型055-85的脂多糖，Sigma Chemical Co.,St Louis,MO)以25ug/小鼠的量在25ul磷酸盐缓冲盐水(pH 7.0)中对小鼠腹膜内给药。2小时后，通过CO2吸入杀死小鼠，通过驱血法把血样采集到肝素化采血试管中，并在冰上贮存。将血样离心，收集血浆，并在-20℃贮存直至通过ELISA分析TNFα。大鼠方法用化合物或载体预处理得自Charles River Laboratories的雄性Lewis大鼠。确定的预处理时间后，将LPS(大肠杆菌血清型055-85的脂多糖，Sigma Chemical Co.,St Louis,MO)以3.0mg/kg的量腹膜内给药。注射LPS90分钟后，通过CO2吸入杀死大鼠，通过心脏穿刺从每只大鼠中采集肝素化全血。将血样离心，收集血浆，以通过ELISA分析TNFα水平。ELISA方法用如Olivera等人在Circ.Shock,37,301-306,(1992)中所描述的夹层ELISA测定TNFα水平，该文献全文引入本发明以作参考，用仓鼠单克隆抗鼠TNFα(Genzyme,Boston,MA)作为捕捉抗体，用多克隆兔子抗鼠TNFα(Genzyme)作为另一抗体。为了进行测定，加入缀合有过氧化物酶的山羊抗兔抗体(Pierce,Rockford,IL)，然后加入过氧化物酶底物(含有1％过氧化脲的1mg/ml邻苯二胺)。从用重组鼠TNFα(Genzyme)产生的标准曲线计算从每只动物采集的血样中的TNFα水平。细胞因子特异性结合蛋白分析开发放射竞争性结合分析以给结构-活性研究提供高再现性初级筛选。与使用分离的新鲜人单核细胞作为细胞因子来源和采用ELISA分析来定量测定它们的常规生物分析相比，这种放射竞争性结合分析有很多优点。除了更容易分析以外，据广泛验证该结合分析与生物分析结果高度相关。开发使用THP.1细胞的可溶性胞质部分和放射标记化合物的特异性及再现性细胞因子抑制剂结合分析。申请目为1993年9月的Lee等人的专利申请USSN 08/123175,USSN；申请日为1994年9月16目的Lee等人的PCT 94/10529；和Lee等人的Nature 300,n(72),739-746(1994年12月)描述了用于筛选药物以鉴定出与细胞因子特异性结合蛋白(下文中称为CSBP)相互作用并结合的化合物的上述方法，所述文献全文引入本发明以作参考。然而，为了实现本文目的，该结合蛋白可以呈在溶液中的分离形式，或固定形式，或者可进行基因工程处理以在重组宿主细胞例如噬菌体展示系统的表面上表达，或者作为融合蛋白。或者，可在筛选方案中使用包含CSBP的全细胞或胞质部分。无论结合蛋白的形式如何，在足以形成化合物/结合蛋白复合物的条件下将大量化合物与结合蛋白以及能形成、促进复合物或能与所述复合物相互作用的化合物接触，并进行检测。CSBP激酶分析用该分析测定CSBP-催化的32P从[a-32P]ATP到具有下述序列的表皮生长因子受体(EGFR)衍生肽中苏氨酸残基上的转移KRELVEPLTPSGEAPNQALLR(661-681个氨基酸残基)(参见Gallagher等人，“通过吡啶基咪唑来调控应激诱导的细胞因子生成抑制CSPB激酶”，BioOrganic&Medicinal Chemistry,1997,5,49-64)。
在园底96孔板(Coming出产)中以30μl体积进行反应。反应含有(终浓度)25mM Hepes、pH 7.5；8mM MgCl2；0.17mM ATP(Km[ATP]为p38(参见Lee等人，Nature 300,n72 pg.639-746(Dec.1994)))；2.5 uCi[γ-32P]ATP；0.2mM正钒酸钠；1mM DTT；0.1％BSA；10％甘油；0.67mMT669肽；和2-4nM酵母表达、活化和纯化的p38。加入[γ-32P]Mg/ATP来启动反应，在37℃培养25分钟。加入32P-ATP前，将抑制剂(溶于DMSO)与该反应混合物在冰上培养30分钟。DMSO终浓度为0.16％。加入10μl0.3M磷酸来中止反应，通过在p81磷酸纤维素滤器上捕捉来从该反应混合物中分离出磷酰化肽。用75mM磷酸洗涤该滤器，用β闪烁计数器定量测定所结合的32P。在这些条件下，p38的活性为400-450pmol/pmol酶，在高达2小时培养期间该活性与时间呈线性关系。减去不存在底物时所产生的值(为总值的10-15％)后，获得了激酶活性值。
在该结合分析中，代表性式(Ⅰ)化合物-实施例1-4化合物表现出IC50＜50 uM的正抑制活性。
在本说明书中引用的、包括但不限于专利和专利申请在内的所有出版物都引入本发明以作参考，每一单独出版物都是具体并且单独地被指出以全文引入以作参考。
上述描述充分地公开了包括优选实施方案在内的本发明。本发明具体公开的实施方案的修饰和改进在本发明权利要求书所定义的范围内。无需进一步详细说明，应当相信，通过前面对本发明的描述，本领域技术人员能最大限度地利用本发明。此外，本说明书中的实施例仅是举例说明性的，并不是以任何方式来限制本发明范围。其中独占特征或特权被要求保护的本发明实施方案定义如下。
权利要求
1．式(Ⅰ)化合物或其可药用盐 其中X是氧、碳、硫、或氮，或者X-R1部分是氢；V是CH或N；R1是氢、C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、杂环基、杂环基C1-6烷基、杂芳基、或杂芳基C1-6烷基，其中这些基团分别可任选被取代；X1是氢、XR1、任选被取代的C1-4烷基、卤素、羟基、任选被取代的C1 -4烷氧基、任选被取代的C1-4烷硫基、任选被取代的C1-4烷基亚磺酰基、CH2OR12、氨基、被一个C1-6烷基取代的氨基、被2个C1-6烷基取代的氨基、N(R10)C(O)Rb、N(R10)S(O)2Rd、或任选含有选自氧、硫或NR15的其它杂原子的5-7元N-杂环基；Rb是氢、C1-6烷基、C3-7环烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环基、或杂环基C1-4烷基；Rd是C1-6烷基、C3-7环烷基、芳基、芳基C1-4烷基、杂芳基、杂芳基C1-4烷基、杂环基、或杂环基C1-4烷基；R2独立地为任选被取代的C1-4烷基，其中这两个R2可一起形成任选被取代的C3-7环烷基或C5-7环烯基；Y是C2-4链烯基、羟基取代的C1-4烷基、杂环基、C(Z)OH、或N(R10)C(Z)R3；R3是C1-6烷基、芳基、芳基C1-6烷基、杂环基、杂环基C1-6烷基、杂芳基、或杂芳基C1-6烷基，其中这些基团分别可任选被取代；Ar是可任选被取代的芳基或杂芳基环；R10是氢或C1-4烷基；R12是氢、-C(Z)R13或任选被取代的C1-4烷基、任选被取代的芳基、任选被取代的芳基C1-4烷基、或S(O)2R25；Z是氧或硫；R13是氢、C1-10烷基、C3-7环烷基、杂环基、杂环基C1-10烷基、芳基、芳基C1-10烷基、杂芳基、或杂芳基C1-10烷基，其中所有这些基团都可任选被取代；R15是氢、氰基、C1-4烷基、C3-7环烷基或芳基；R25是C1-10烷基、C3-7环烷基、杂环基、芳基、芳烷基、杂环基、杂环基C1-10烷基、杂芳基或杂芳烷基。
2．权利要求1的化合物，其中X是氧。
3．权利要求1的化合物，其中X是氮。
4．权利要求1的化合物，其中X是碳。
5．权利要求1的化合物，其中X-R1是氢。
6．权利要求2的化合物，其中R1是C1-6烷基、芳基、或芳基C1-6烷基。
7．权利要求3的化合物，其中R1是氢、C1-6烷基、芳基、或芳基C1-6烷基。
8．权利要求4的化合物，其中R1是氢、C1-6烷基、芳基、或芳基C1-6烷基。
9．权利要求1的化合物，其中Ar是任选被取代的苯基。
10．权利要求9的化合物，其中所述苯基被卤素、S(O)mR8、OR8、或(CR10R20)mNR10R20取代一次或多次。
11．权利要求1的化合物，其中V是氮。
12．权利要求1的化合物，其中V是碳。
13．权利要求1-12任一项的化合物，其中Y是杂环。
14．权利要求1-12任一项的化合物，其中Y是C(Z)OH、或N(R10)C(Z)R3。
15．权利要求1的化合物，其中所述化合物是2-(1,1-二甲基-3-丁烯基)-4-(4-氟苯基)-5-(4-吡啶基)咪唑；2-[2-(N-苯甲酰基-N-甲基氨基)-(1,1-二甲基)乙基]-4-(4-氟苯基)-5-(4-吡啶基)咪唑；(+/-)-2-[(3,4-二-羟基)-1,1-二甲基丁基]-4-(4-氟苯基)-5-(4-吡啶基)咪唑；或2-[(2-(2-羧基)-1,1-二甲基乙基]-4-(4-氟苯基)-5-(4-吡啶基)咪唑；或它们的可药用盐。
16．含有权利要求1-12任一项的化合物和可药用载体或稀释剂的药物组合物。
17．在哺乳动物中治疗CSBP/RK/p38激酶介导的疾病的方法，所述方法包括将有效量的权利要求1的化合物对所述哺乳动物给药。
18．权利要求17的方法，其中所述CSBP/RK/p38激酶介导的疾病是牛皮癣性关节炎、菜特尔氏综合征、类风湿性关节炎、痛风、创伤性关节炎、风疹性关节炎、和急性滑膜炎，类风湿性关节炎、类风湿性脊椎炎、骨关节炎、痛风性关节炎和其它关节炎性病症，脓毒症、脓毒性休克、内毒素性休克、革兰式阴性脓毒症、中毒性休克综合征、阿尔茨海默氏病、中风、神经创伤、CNS损伤、哮喘、成人呼吸窘迫综合征、脑疟疾、慢性肺炎性疾病、矽肺、肺肉状瘤病、骨吸收疾病、骨质疏松、再狭窄、心脏和肾脏再灌注损伤、慢性肾衰竭、充血性心力衰竭、血管生成性疾病、血栓形成、肾小球性肾炎、糖尿病、移植体对宿主的反应、同种移植物排斥反应、炎性肠病、克罗恩氏病、溃疡性结膜炎、多发性硬化、肌肉退化、恶病质、接触性皮炎、牛皮癣、晒斑、或结膜炎。
18．治疗患有鼻病毒感染病的人的方法，所述方法包括将有效量的式(Ⅰ)化合物或其可药用盐对所述人给药。
全文摘要
本发明涉及用于治疗CSBP激酶介导的疾病的式(Ⅰ)新的2－烷基取代咪唑化合物。
文档编号A61P17/06GK1302296SQ99806499
公开日2001年7月4日 申请日期1999年5月20日 优先权日1998年5月22日
发明者J·L·亚当斯, D·李, S·B·狄伦, S·D·格列戈 申请人:史密丝克莱恩比彻姆公司