AQA, AM’或ATAC保护的红血细胞，和泳道4与泳道3是一样的，但采用C9蛋白质补充。结果表明，C6，C7，C8和C9在未经处理的血清中容易检测到。泳道2显示，在无保护的被补体攻击溶血的红细胞中，只有C5b-9，完全形成的膜攻击复合物，被检测。泳道3，其中的细胞得到ATA，AQA, AHA或ATAC的保护，膜攻击复合物不完全形成，而在CS阶段被停止。C6抗体检测C5b6, C5b67和C5b678。C7抗体检测C5b67和C5b678,而C8抗体检测C5b678。泳道4确认了，阻断仅发生在C9阶段。可以看出，现在通过采用C6，C7，C8和C9探查而检测C5b-9，从确定了，ATAC阻断在C9阶段。一个非常微弱的C9谱带在印迹中仍然是可见的，表明不是所有添加的C9在过程中被消耗。
[0082]图5.展示采用备解素，C3/C3b，因子B/Bb和因子D的抗体发展的膜的印迹，证明Cl抑制剂或C4b抗体抑制经典途径激活的效果，并显示ATA抑制C3转化酶。(a)正常血清显示可检测的备解素，C3，因子B和因子D的谱带(泳道I)。在Cl抑制剂存在下激活酵母聚糖后，对应PC3b，PC3bBb和PC3bBbC3b的谱带出现在采用备解素和C3b抗体发展的印迹，并且PC3bBb和PC3bBb和PC3bBbC3b的谱带出现在采用因子Bb抗体发展的印迹(泳道2)。这些数据表明，备解素是C3b结合所需的，以启动旁路途径，C3和C5转化酶被激活。ATA的加入导致谱带，其只针对PC3b和PC3bB而出现，指示在结合的因子B的因子D裂解阶段的阻断(泳道3)。泳道4，其中备解素被加入，和泳道5，其中因子D被加入，都会显示为PC3bBb和PC3bBbC3b弱谱带再现，指示旁路途径激活的部分恢复。在红细胞膜上没有检测到因子D的谱带，表明该蛋白酶没有被结合，而仍在溶液中。进行三个独立的实验，这些都是代表性的。(b)残留血清蛋白质印迹采用C5/C5a抗体发展。正常血清中容易检测到C5谱带(泳道I)。酵母聚糖和Cl抑制剂的处理导致C5谱带的消失和激活产物C5a的出现(泳道2)。ATA和Cl抑制剂的加入(泳道3)防止C5的裂解，这是被采用备解素的处理部分拮抗(lmicrogm/ml,泳道 4)和因子 D (0.lmicrogm/ml,泳道 5)。(c)米用 C5/C5b,C6,C7，C8和C9的抗体处理残留的膜。正常血清泳道I显示，正常血清中检测到每个补体蛋白。用酵母聚糖和Cl抑制剂血清处理后膜的泳道2导致的各个蛋白谱带消失和MAC形成成分C5b6，C5b67，C5b678，和完全形成的C5b_9的出现。在其中添加ATA的泳道3显示，完全阻断出现，没有激活谱带出现在膜上。泳道4和5，其中血清补充了备解素和因子D，表明补体系统的部分激活，伴有C5b6，C5b67，和C5b678的较弱谱带出现，但在C5b_9阶段仍然存在阻断，表明ATA也阻断C9附着至C5b-8。
[0083]图6.是ATA结合至因子D和C9的图，但ATA不被结合至备解素，因子B，C2，C3，C4，C5，C6，C7，*C8。这些蛋白以l_32ng/ml的浓度被应用于微孔板，随后以100微克/ml加入ΑΤΑ。
[0084]图7.是旁路补体途径示意图，说明在C3转化酶和ATA在C9附着至C5b_8阶段的阻断。
[0085]图8.显示在ATAC和ATAC甲基衍生物的人血清中CH50结果的比较。甲基衍生物具有比ATA低的有效性，伴有估计的2.52miroM的IC5tl。
[0086]图9.表明口服ATAC对小鼠血清补体活化的效果。六只喂正常饲料的B6SJL_Tg小鼠血清被合并，与六只喂ATAC补充饲料的B6SJL-Tg小鼠的血清相比较。血清进行1_16倍稀释。溶液(25微升)与100微升的抗体缀合的绵羊红细胞(5X 16细胞)孵育lh。对混合物进行离心，相对量的血红蛋白释放到100微升上清，其被在405纳米的吸光度记录。来自正常饮食喂养的小鼠的血清需要比ATAC喂养的小鼠更多的稀释，为了溶血的发生。IC5tl分别为6.89和1.92倍，分别对应于3.59倍的保护。
[0087]图10.显示ATAC喂养的B6SJL_Tg小鼠的记忆保留，与正常饲料喂养的B6SJL_Tg小鼠相比较，如通过在测试第6天去除隐藏的平台后在隐藏的平台附近搜索率所评估的。与饲喂正常饲料的小鼠相比，ATAC喂养的小鼠表现出在缺失平台的正确的区域显着更大的搜索时间，这表明更好的记忆保留。
[0088]表1.列出被用于在蛋白质印迹中检测补体的抗体。
[0089]实施本发明的最佳模式
[0090]最佳模式对有需要的人或动物递送ATA，AQA，AHA，其铵盐或其他盐，其甲基或其他衍生物，或它们的混合物的优选模式是通过口服途径。胶囊或丸剂与上述活性成分的任何组合可以采用可接受的常规药物载体配制，以延长活性成分的释放，提高活性成分的效率，减少活性成分的代谢。这些可能包括，但不限于，乳糖，硬脂酸，丙二醇，纤维素或其他成分，这是本领域技术人员众所周知的。活性成分的剂量可以从50毫克到10克/天进行变化，取决于每个特定主体的需要。
[0091]发明的模式
[0092]发明的模式:除了优选模式，递送的替代模式，包括静脉内，皮下，并直接注入关节或肌肉。这些模式会在以下情况下成为理想的:口服给药是不可能，或在一些局部的部位高浓度是必要的或期望的。
[0093]工业适用性
[0094]本发明应为脑和外周器官多种慢性退行性疾病开发了主要新治疗领域，对于所述疾病目前尚无满意的治疗。这些疾病包括，但不限于，阵发性夜间血红蛋白血症，类风湿关节炎，多发性硬化症，疟疾感染，阿尔茨海默病，老年性黄斑变性，与动脉粥样硬化。
[0095]不含序列列表的文本
[0096]序列列表的文本。
【主权项】
1.医疗方法，所述方法在有需要的人或其它哺乳动物物种中选择性抑制补体膜攻击复合物，所述方法通过口服或肠胃外施用有效量的分子量小于I千道尔顿的金精三羧酸复合物的成分。
2.权利要求1中所述的方法，其中膜攻击复合物的选择性抑制是剂金精三羧酸。
3.权利要求1中所述的方法，其中膜攻击复合物的选择性抑制剂是金精四羧酸。
4.权利要求1中所述的方法，其中膜攻击复合物的选择性抑制剂是金精六羧酸。
5.权利要求1中所述的方法，其中膜攻击复合物的选择性抑制剂是分子量小于I千道尔顿的金精三羧酸复合物的酯。
6.权利要求1中所述的方法，其中膜攻击复合物的选择性抑制剂是需要的病症是年龄相关性黄斑变性。
7.权利要求1中所述的方法，其中膜攻击复合物的选择性抑制剂是需要的病症是阿尔茨海默病。
8.权利要求1中所述的方法，其中膜攻击复合物的选择性抑制剂是需要的病症是动脉粥样硬化。
9.权利要求1中所述的方法，其中在所有疾病中，可以明确地确定的是，在所述疾病中，补体膜攻击复合物在宿主细胞组装，导致自我损害。
10.医疗方法，所述方法在有需要的人或其它哺乳动物物种中选择性抑制补体旁路途径的C3转化酶步骤，所述方法通过口服或肠胃外施用有效量的分子量小于I千道尔顿的金精三羧酸复合物的成分。
11.权利要求10中所述的方法，其中在C3转化酶的选择性抑制剂是金精三羧酸。
12.权利要求10中所述的方法，其中在C3转化酶的选择性抑制剂是金精四羧酸。
13.权利要求10中所述的方法，其中C3转化酶的选择性抑制剂是金精六羧酸。
14.权利要求10中所述的方法，其中C3转化酶的选择性抑制剂是需要的病症是类风湿性关节炎。
15.权利要求10中所述的方法，其中C3转化酶的选择性抑制剂是需要的病症是阵发性夜间血红蛋白血症。
16.权利要求10中所述的方法，其中C3转化酶的选择性抑制剂是需要的病症是疟疾感染。
17.权利要求10中所述的方法，其中C3转化酶的选择性抑制剂是需要的病症是多发性硬化症。
18.权利要求10中所述的方法，其中在所有疾病中，能明确地确定的是，在所述疾病中，C3转化酶在宿主细胞组装，导致自我损害。
【专利摘要】采用分子量小于1千道尔顿的金精三羧酸复合物成分，选择性抑制哺乳动物物种优选人中的补体膜攻击复合物。优选抑制剂是金精三羧酸，金精四羧酸，和金精六羧酸。通过选择性抑制补体膜攻击复合物而治疗的优选的病症是与年龄相关的黄斑变性，阿尔茨海默病，动脉粥样硬化，类风湿关节炎，阵发性夜间血红蛋白血症，疟疾感染，与多发性硬化。
【IPC分类】A61K31-194, A61P37-02, C12N9-64
【公开号】CN104661660
【申请号】CN201280075715
【发明人】P·麦克格尔, M·李, 郭建平, C·施瓦伯
【申请人】奥林生物技术股份有限公司
【公开日】2015年5月27日
【申请日】2012年7月13日
【公告号】CA2878734A1, EP2872130A1, WO2014009779A1