抗牛支原体和巴氏杆菌混合蛋白喷雾剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明属生物技术领域，具体涉及抗牛支原体病和抗牛源荚膜血清A型多杀性巴 氏杆菌病的药物，抗牛支原体和巴氏杆菌混合蛋白喷雾剂。
【背景技术】
[0002] 近年来，牛呼吸系统疾病已成为危害我国畜牧养殖业的主要疾病，该病发病率高 达80%，单场死亡率高达60%。牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌 /??)和牛支原体（iKAoia's)是引起我国牛呼吸系统疾病的主要病原， 其引发的疾病已在我国多个省份流行，严重的制约了我国畜牧养殖业的健康发展。上述两 种疾病临床症状有相似之处，临床诊断需要细菌培养等措施，确诊需要一段时间，由而且常 常是并发感染。
[0003] 目前，国内外还没有有效的疫苗用于牛呼吸系统疾病的预防，兽医临床主要使用 药物对该病发生进行治疗，但随着抗生素广泛不合理的使用，使牛呼吸系统疾病主要病原 逐渐产生了耐药性，不但给该病的防治工作带来了困难，而且加剧了耐药性问题造成的经 济损失。治疗需要耐药性筛选。延误了治疗时间。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是为解决中治疗牛呼吸系统疾病过程中，牛支原体和抗牛源荚膜血 清A型多杀性巴氏杆菌具有耐药性、诊断时间长、不能早期用药的问题，而提供一种抗牛支 原体及巴氏杆菌混合蛋白喷雾剂。
[0005] 抗牛支原体和巴氏杆菌混合蛋白喷雾剂，它包括：每百克基质中，含抗牛支原体蛋 白3-5g，抗牛多杀性巴氏杆菌蛋白3-5g;所述的抗牛支原体蛋白其氨基序列如序列表SEQ IDNO. 3所示，抗牛多杀性巴氏杆菌蛋白其氨基序列如序列表SEQIDNO. 4所示； 所述的基质为凝胶基质； 所述的基质为去乙酰结冷胶； 所述的抗牛支原体蛋白是由如序列表SEQIDNO. 1所示的基因编码的，所述的抗牛多 杀性巴氏杆菌蛋白是由如序列表SEQIDNO. 2所不的基因编码的； 所述基因均来自于家蝇。
[0006] 本发明提供了抗牛支原体和巴氏杆菌混合蛋白喷雾剂，它包括：每百克基质中，含 抗牛支原体蛋白Md- UFl3-5g，抗牛多杀性巴氏杆菌蛋白Md- AP2 3-5g，其基质为凝胶基 质，本发明人将病原菌诱导家蝇幼虫后构建的抑制性消减文库中筛选到的分别能表达抗牛 支原体蛋白的基因UFl与表达抗牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌蛋白的基因 AP2构建成融合基因，表达了蛋白，实验结果证明，对牛支原体和牛多杀性巴氏杆菌具有抑 制作用。临床治疗牛支原体和巴氏杆菌混合感染引起的牛呼吸系统疾病，取得良好的效果。 可对牛呼吸系统疾病早期用药。
【附图说明】
[0007] 图I MUFl基因PCR扩增结果；其中，M: DL2000; I: MUFl基因PCR产物； 图2量MP2基因PCR扩增结果；其中，M: DL2000; I: IMPZ基因PCR产物； 图3,图4纯化的抗牛支原体、牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌蛋白UF1，#士 AP2, SDS-PAGE 分析结果。
【具体实施方式】
[0008] 实施例1 #士 UFl、#+ AP2的克隆 1、 用Promega公司生产的试剂盒（SV Total RNA Isolation)分别提取三日龄幼虫 用2、3日龄家幡（Jfesca Z.)幼虫（品种为绿头幡，幡卵购买自吉林省辽源生 态养殖厂，由吉林农业大学药理与毒理实验室孵育）总RNA，用TaKaRa公司生产的试剂盒 ft/igotor^-oTJ^XSupei^mRNA Purification Kit (From Total RNA)分离提纯 mRNA; 2、 反转录合成cDNA第一链 (1) 取两个EP管，分别加入以下试剂见表1 : 表1反应体系
【主权项】
1. 抗牛支原体和巴氏杆菌混合蛋白喷雾剂，它包括：每百克基质中，含抗牛支原体蛋 白3-5g，抗牛多杀性巴氏杆菌蛋白3-5g;所述的抗牛支原体蛋白其氨基序列如序列表SEQ IDNO. 3所示，抗牛多杀性巴氏杆菌蛋白其氨基序列如序列表SEQIDNO. 4所示。
2. 根据权利要求1所述的抗牛支原体和巴氏杆菌混合蛋白喷雾剂，其特征在于：所述 的基质为凝胶基质。
3. 根据权利要求2所述的抗牛支原体和巴氏杆菌混合蛋白喷雾剂，其特征在于：所述 的基质为去乙酰结冷胶。
4. 根据权利要求1所述的抗牛支原体和巴氏杆菌混合蛋白喷雾剂，其特征在于：所述 的抗牛支原体蛋白是由如序列表SEQIDNO. 1所示的基因编码的，所述的抗牛多杀性巴氏 杆菌蛋白是由如序列表SEQIDNO. 2所示的基因编码的。
5. 根据权利要求4所述的抗牛支原体和巴氏杆菌混合蛋白喷雾剂，其特征在于：所述 的基因均来自于家蝇。
【专利摘要】本发明公开了抗牛支原体和巴氏杆菌混合蛋白喷雾剂，它包括：每百克基质中，含抗牛支原体蛋白Md-UF1 3-5g，抗牛多杀性巴氏杆菌蛋白Md-AP2 3-5g，其基质为凝胶基质，本发明人将病原菌诱导家蝇幼虫后构建的抑制性消减文库中筛选到的分别能表达抗牛支原体蛋白的基因Md-UF1与表达抗牛源荚膜血清A型多杀性巴氏杆菌蛋白的基因Md-AP2构建成融合基因，表达了蛋白，实验结果证明，对牛支原体和牛多杀性巴氏杆菌具有抑制作用。临床治疗牛支原体和巴氏杆菌混合感染引起的牛呼吸系统疾病，取得良好的效果。可对牛呼吸系统疾病早期用药。
【IPC分类】A61K39-40, A61K9-12, A61P31-04, A61K48-00
【公开号】CN104771755
【申请号】CN201510029569
【发明人】孔令聪, 马红霞, 唐燕, 高铎, 刘树明
【申请人】吉林农业大学
【公开日】2015年7月15日
【申请日】2015年1月21日